Mechanism of Sorting Proopiomelanocortin and Proenkephalin to the Regulated Secretory Pathway of...

10

Transcript of Mechanism of Sorting Proopiomelanocortin and Proenkephalin to the Regulated Secretory Pathway of...

���

�������������� ����������������������������������������������� � ����!�

"�#���!��� � ��$��%�&���'����(�����$���

����&������'#�(���$��$#��)�%*(�$��� ���$����

&�$#����� ���*�����������+�((!

�������������� ���������������������������������������������������

�������������� ���� ������������� ��� �������������������������

�����������������������������������������������������

����������������������������������������� ����� !"# ��$�%

�, -)�+-��&���'����(�����$����&."+������'������'#�(����&/������!��$#�0

!�1����$�$#������'(�!�����$�*(*������$���!'��$���$��$#��$���!02�(%����$�����-2����#����$#�������!��$�������'���%�����$�����!�0����%���*(�!�� �$#����%0

*(�$���!���$����'�$#�����) &���-#����#���!��� �!��$��%�&."+�����&/�$�

$#��) &� �����*������������((!���!� ��3�!$�%�$����+��!��!*!� !��$��%� !�%��(!��'��!��%�$����������!��*�!�����$���#����'#�4����!��*�!��5'�!������$#�

!*� ���� ��0&."+����������0&/��6�����������$� ��������!#����$��4��!* �0

���$��������!!���� ���$��%�$��%�&."+�����&/�$��$#��) &����&+��7���*����7

�����$-0����((!��-#���������!��*�!�� �$#�!��!��$��%�!�%��(!�4����!'�� ��((�$�� 4�!�� ��!��*�!� ��� $#�� !��$��%� ���'$��� ���4����7� ��4�5�'�'$���!�� /

�+&/�7� $�� � �$� !��$��%� $�� $#�� ) &�� ���(�!�!� � � &."+� ���� &/� !��$��%� ��

��*������((!���'(�$���� �+&/�4��+&/���$�!��!��)��7�����+'����8������*!��'�0$*�$�����((!�(����%�+&/�!#�������!!��$��%�� �4�$#�$#�!����(�*(�!�$��$#����0

!$�$*$�3��'�$#���� ���������-#*!7�&."+�����&/�����!��$���$��$#��) &��$�$#�

-2��4������#���!����3�(3��%�$#����$���$����� ���!'�� ��!��$��%�!�%��(���$#�!����(�*(�!���$#�$#��!��$��%����'$��7�+&/�

9������!�� '���'����(�����$��:� '������'#�(��:� ��4�5�'�'$���!�� /:� '��0#�������$�� ����%:�!��$��%�!�%��(!

;�-).<=+-;.�

������������� ��!���"���#��!$�����%��&���$������ '�(������&������)��$�*����"��#�����(+�!$�(�,�&���� $����--��� ���(����!'�!��+� ���(����&�!$����'����&� ���� ���(����!$��.�������$�(�����*���!���(�����(+�!$�(�,�&����!$����'/$���&����(�� ���!� *'�'��� !���(���!�&� !�� !$�� !���(*���/�� ��!0��)� "���#�0$���� !$�+� ���� (��!�&� �0�+-�����!$������!���(����&��� )�/�&���!������!'���(� ��!��+�/���'��(��-�!$����/'��!�&(� ��!��+� ��!$0�+� "12�#�� �$����/�����(� ��&� !$�� ��� �((��/� ��,+��(� ���� ��(�

�&&��((� -��� ����(���&�� �3�������/���$��2� !�����������'������'��.����/+����.���!��+��-��4�������!���5����/+����!������ ��(!�!'!���-��$��&����!$���&�'������4�������!����!�������(!�!'!�(��-����!$��67����4��!������1���8�9:��5�!$�(&������;<:7;��=�� �3�9<>*67?*9;97@�-�A39<>*67?*779:�

+��B �&�����$�/�4

���>.?������� .)-;�2�&."+7�&/�-.�)/2=>�-/<� /+)/-.)�&�-?@�

��� )�/�&���!��!$�(��/���'��(����!$���!$��/���'��(��������&�������� ���4�&�.+(�� �-� ���&����!��(�(��!������&�.�(� ���(�&'�(�>C9�-����0�&�.+�!$��� !�����-�����A*����!�&�(��� ��.�A+���!�&�(���%�6�8�!������4��!$��.�(� ���(�&'�(������&���!��+���&!$��� !�4�����!�&�(���$�(��/���'��(�'�&��/����!'��!�������&�!$��(!���&����!�&�(���������(�&�'����(!��'��!������$���� $���(���-�(��!��/����!���(���!��!$��12��$�(�.���(!'&��&�-������+�+���(����&�!0��0��)��/�$+��!$�(�(�$�4��.���������(�&������(�.+�//��/�!���������((�4��(��!��/��� $���(�����0$� $�12�����!���(�'��D'��+��//��/�!���&�����!$���-����(�/��/�!�&�-����!$���!$������*12�����!���(���$���//��/�!��!$��.��&(�!��!$�����.��������!$���!�������.��������!�������&��� !�+�!������&����&��(�!$���� )�/�&���!�� !$��.'&&��/�/���'���?�E��$��(� ��&��(����� !�4��(��!��/��� $���(�0$���.+�!$��12�����!����$�(���(�� �-� �(��!��/�(�/����!$�!�.��&(�!����(�� �-� ����*.�����(��!��/��� ��!��� �� �!�&��!� !$��������-!���.��&��/�� !$��12�����!�����(� !$���� )�/�&� ��!�� !$�� (� ��!��+� /���'���:� �4�&�� �� -��� !$�� � !�4�� $+��!$�(�(� �(� ��0-��!$ ����/�-����� ��((��-����$������(���&������'�����!�&�(���!��(� ������$�0�4���!$�!��//��/�!�����(���������!��!�(�/��/�!������&� �� ��!��!����(!���-���(��!��/�!��!$�12��7����!$�(���4��0��0�����(��!�&�!��($�0��/�!$���A�(!�� ���-��� ��(��('(*(��!��/(�/�������������&������$��(��!��/�(�/���(��-�!$�(������ '��(�.��&�!����(��!��/���* ��!�������.����� ��.�A+���!�&�(�����!���--� !�(��!��/�!��!$��(� ��!��+�/���'��(��-!$����/'��!�&���!$0�+�

;</�-;A;+�-;.��.A����) &� .)-;�2� ;2��>�A.)�&."+���<�&/

�� �

����+�(!'&��(��&��!�-��&���(��!��/�(�/����&�������!�!$���;*!�����'(��-����!$�!��(�('--� ���!���&��� �((��+�-���(��!��/�!$�(����� '�����!��!$����/'��!�&�(� ��!��+��!$0�+��-���'��;�� ���(������'����&� ����� ���������><���&��!�;<� ���(�>>�����'(���!'�!��+� ���� ������ ���(��-�0��&*!+���"��#�������&��'!��!�����0�!$� !$��;*!��������;C;?�������� �&(�"∆�*���;C;?#�&���!�&�"(��������>#�0���� !���(*

A;2=)/ �� 2 $���!� �&��/���(��-����� ��(!�' !(�����&*!+�������"������#��&� �� �'!��!� ���� �� )��/� ������ � �&(� ;C;?� "∆�*���;C;?#� 0���� !���(-� !�&� ��!���'��;�� ���(�����>C;?���&����>C><�0�����A���((�&�����!�;<� ���(��(�-'(�������!���(0�!$� $������$��� ���� �!+�!���(-���(��"���#���$����'!��.+�0$� $�!$�(�����!���(�0����(�* ��!�&�-����!$�(�� ���(�"��!$��� ��(!�!'!�4�������/'��!�&#�0�(�&�!������&���&��(���&� �!�&�

��B ����> ��/@�.)9��+�</"�.A� +;/�+/

-� !�&���!����'��;�� ���(���&�����(� ��!�������&��� ���,�!���(�0��������+,�&����������&��!(���� �((�&����&' !(�0����(� ��!�&��������/'��!�&��������.+�$�/$*F+

(!��'��!������&�($�0�&��'� !�!��(!�����/�.+����'�� +!� $���(!�+�"���#��!�!$��!��(��&�����/�!$����'��!�(�� $��� !���(!� ��-��� ���,�!�������(� ��!��+�/���'��(���0�4����'!��!� ∆�*���;C;?� 0�(� (� ��!�&� ��(!�!'!�4��+� 0�!$� $�/$� .�(��� �����(��� ���($�0�&�!$�!�!$�(��'!��!�����0�(��� ���,�&����!$�������' �������/����.'!�($�0�&����'� !�!��(!�����/����!$����'��!�(����!��(���$�(��&�!����&� �!������� )�/��/��-��'*!��!�������!��/���'��(��-� !$��12��� ����!$����A�������!(���� ���� ��(!�' !��-���>C;?�������>C><� -'(�&� !�� $������$��� ��� � �!+�� !���(-���(�� "���#�0�(!���(-� !�&���!���!�;<� ���(�"(��������>#���$�����>C;?C����-'(�������!����0�((� ��!�&��������/'��!�&����������&��� ���,�&�����'� !�!��/���'��(�����/�!$����� �((*�(���&����!$��!��(��0$����(�!$�����>C><C�������!����0�(�(� ��!�&������ ��(!�!'!�4�������� ��&� �� ���,�&� ���+� !�� �� �����' ����� ��/����� �$�(�� (!'&��(� ��&� �!�� !$�!�*���>C;?� ��!���(����� '���� ��-����!���� !$�!� �(� ('--� ���!� ��&� �� �((��+� -��(��!��/�����!��!$��12��

���-'�!$���&�!�������0$�!$���!$�����(���(�� �-� �(��!��/���!�-�0�!$����*���>C;?�!$�(����!�����-�!$���������� '���0�(�����+,�&�.+����� '������&����/�><�����1�

;��($�0(������� '������&����-��*���>C;?����(��!��/���!�-� ��(�(!��/��-� !0�� �&� ���&�!0��$+&���$�.� ���(�&'�(�"�(�><����'>>����'>6����'>:��&���!�&��(�����#�A��(�&����!$��('�-� ��0�(��&��!�-��&���0��&�('�-�&��.��&/�(�(!�.���,��!$��(!�' !'������ �����!��!� -��!'��� �-� !$�(���!�-� �(� !$�!� !$������ '���� &�(!�� �� .�!0���� !$��α* ��.��(��-�!$��� �&� ���(�&'�(��(�>9�G��0$� $��(� ��!� ���-���.��&��/�!��!$��(��!��/���* ��!�����$��$+&���$�.� ���(�&'�(���+�.��!$����!�����4�&��!$����4�������!�-���!$�� �&� ���(�&'�(�!��.�����������!��+� $��/�&�����!�(!�!$�������!�� ���-�!$���������(*�&'�(����!$����!�-�-���(��!��/�!��!$��12������������&��'!��!�����0�!$�����('.(!�!'!�&�.+��2�2�0����!���(-� !�&���!����>;� ���(������'����&� ����� ����������������($�0�&� ��0�.�(��� (� ��!�����0$����(��'!��!�����"�2�2#�($�0�&$�/$�.�(���(� ��!�����4�����;*$������&�!+�� ����-� ��(!�!'!�4��(� ��!����"�����;5#���'�*!$������������"�����;�#�($�0�&��� ���,�!�����-��'!��!��2�2����!$�������' �������*/������&���!����!$����'��!�(����!��(��0$����(��������($�0�&����'� !�!��(!�����/��!!�������!$��!��(���&�����/�!$����'��!�(� $��� !���(!� ��-�(� ��!��+�/���'����� ���,�*!������$�(��&�!��($�0�!$�!�!$����(�&'�(����������*����-����&�����((��!������!�--���(��!��/�����!��!$��12���2���������('�!(�0������(���.!����&������'��;�� ���(�($�0��/�!$�!�!$����!�-�-���(��!��/�����0�(���!� ����(�� �-� �>;

��

���� '���� ��&����/� �-� !$�� �;*!�������� �-� ��� 0�(� �����&� �'!� '(��/� !$��*���>C;?���&����(���!�����!����&�!$��)��0��&/���-�0$����!$��&�('�-�&��.��&/�(0���� �� �!�&�>9� �$����&��� �(� ($�0�� ��� ����1�� 9��� �0�� � �&� � ��(�&'�(� "�(�>:���';7#�0�!$������� '����αααα* ��.���&�(!�� ���-�7�G�!$�!�0�����A��(�&����!$��('�-� ���(�0�����(�!0��$+&���$�.� ���(�&'�(�"���>7����'9;#�0�������&� !�&�!��-����!$��(��!��/��!�-��.�(�&����!$������(��!��/���!�-��

���&�!�������0$�!$���!$�(��;*!��������&�������-���� ��!����&�(��!��/���-��*��!����!$�!� �'�&�&��� !���-����/�����!������!��!$��12����� ���� ��(!�' !��-���>C9;-'(�&�!������0�(�!���(-� !�&���!����'��;�� ���(������1��95�($�0(�!$�!�!$����>C9;C����-'(�������!����0�(�(� ��!�&������(!��'��!�&��������0�!$�$�/$�F+��0$����(�0$��!$�(�-'(�������!����$�&���('.(!�!'!��������+(;:�!����2���"�;:2#�!��&�(�'�!�!$��&�('�-�&�

���>.?������� .)-;�2�&."+7�&/�-.�)/2=>�-/<� /+)/-.)�&�-?@�

.��&/���!$����0�(����(!��'��!�&�(� ��!������$�(���('�!���&� �!�&�!$�!���>C9;�$�&�('-*-� ���!� ��-����!���� !�� &��� !����� ��!�� !$�� ��/'��!�&� ��!$0�+� �(� ���&� !�&� .+� !$���&�����'�!$��������!$��&�('�-�&��.��&/���+(?�!���+(;:�0�(��� �((��+�!������!���!$�� ��-����!�����-�!$��(��!��/���!�-���$����&���0�'�&���(�����&� !�!$�!�('.(!�!'!����-�!$��!0��� �&� ���(�&'�(�"�(�>:����';7#����!$����!�-�0�'�&�&�(�'�!�(��!��/��-����!�!$��12�������1��9��($�0(�!$���--� !��-�(!��'��!�����-�(� ��!�����-������&��'!��!��������>;� ���(�����0$� $��(�>:���&���';7�$�&�.�����'!�!�&�!�����>:���&����;7���(�� !�4��+���$����(!����.��!�($�0(�!$�!�0$����(�!$���������(�(!��'��!�&����(� ��*!����.+�$�/$�F+��!$���'!��!����($�0�&���(�/��-� ��!���&' !�������&� �!��/����--� ���!�� )�/��/���!��(� ��!��+�/���'��(��-�!$��12����$����('�!(��������1��9���&� �!��!$�!��� $�(� �� !$���*&����(������� ��-����!���*&����&��!� (��!��/� (�/���� �!� !$�� �;*!�����'(��(�������!��!$�!��-������!$�!��(�('--� ���!���&��� �((��+�-���(��!��/�!$�(���� '���!��!$��12��

A;2=)/ �� �������� '������&����-��*���>C;?�$�/$��/$!��/�!$��-�'�� ��(��4�&���(*�&'�(����!$������(��!��/�(�/������$�(��-�'����(�&'�(� �����(��!$��(��!��/�(�/������!�-����&!$�+������(�><�"�><#����'>>�"�>>#����'>6�"�>6#����&���'>:�"�>:#���,���&�+���$��-�'����(*�&'�(��-�!$������(��!��/�(�/������!�-�"�><�>>�>6�>:#�0�����'!�!�&�!���><2>>�>62>:@���&!$����('�!��/��'!��!�����0�(�!���(-� !�&���!����>;� ���(���$�����'�!��-�����(� ��!�&���;�$�'�&������(!��'��!��/� ��&�!���(�0�(�D'��!�-��&��,�����&�!$�� ���'������ ���,�!�����-!$���'!��!�����0�(�����+,�&�.+����'��-�'���( ��!��� ��( ��+��+�����$�/$���!���-�.�(��(� ��!������&��� ���(�&�(!�����/��-�!$���'!��!��������!$�����/�%�����-�!$����>;� ���(0�(��.(��4�&�� ��&� �!��/��� �� )��-� (��!��/��-� !$���'!��!� !�� !$��/���'��(��-� !$�� ��/'��!�&(� ��!��+���!$0�+�

��� ����> ��/@�.)9��+�</"�.A� +;/�+/

A;2=)/ 6� "������� '������&����-�!$�������*!�����'(��-������)��$�����"��#���(��/!$������(��!��/�(�/������!�-��(���!�����!���!$���;*!�����'(��-����0�(���&���&�������!$�(��&����-�'����(�&'�(�0�����&��!�-��&��(����'!�!�4��(��!��/�(�/������!�-�-��������$�+������(�>:"�>:#�����>7�"�>7#����';7�"�;7#����&���'9;�"�9;#���,�����&*!+�����>C9;��0$� $� ��!���(�!$����&� !�&�(��!��/� (�/�����0�(��A���((�&� �����'��;�� ���(��(��� -'(�������!����0�!$� $�����*�$��� ��� � �!+�!���(-���(�� "���#�����'!��!���>C9;�0�!$��+(;:� ('.(!�!'!�&�.+�2��� "�;:2#�0$� $�0�(����&� !�&� !��&�(�'�!� !$�� ��-����!�����-� !$��(��!��/�(�/������!�-��0�(���(�� ��*(!�' !�&���$�������>C9;C���� ��(!�' !�0�(�(��!�&�!��!$����/'��!�&�(� ��!��+���!$0�+�(�� ��!�0�(�(� ��!�&������(!��'��!�&���������0$����(�!$����>C9;"�;:2#C�����'!��!�($�0�&���(!��'��!�&�(� ��!������$�(���&� �!�&�!$�!�!$���;*!�����'(��-�����(���!���(-���.���(��!��/�(�/*����-���!$����/'��!�&�(� ��!��+���!$0�+�"12�#���&�!$�!�!$����!�/��!+��-��!(� ��-����!�����(���*���!��!�-���!$��(��!��/���+���$��!0��� �&� ���(�&'�(�0�!$���!$���'!�!�4��(��!��/�(�/������!�-"�>:���;7#�0�����'!�!�&�!���������������&�!$��&�'.���� �&� ��'!��!��-����0�����A���((�&�����>;� ���(���&�('.H� !�&�!����(!��'��!�����A�������!���������A$�.�!�&�����.'(!�(!��'��!�&(� ��!��+���(���(����&� �!��/��--� ���!�(��!��/�!��!$��12���0$����(�!$����(���(���A$�.�!�&�.+!$���'!��!�0�(���((����&� �!��/����--� ���!�(��!��/�!��!$��12����$�(�&����(!��!�&�!$�!�!$��!0�� �&� ���(�&'�(�0�!$���!$��(��!��/�(�/������!�-����+�����������!$��(��!��/��-����!��!$��12��

���>.?������� .)-;�2�&."+7�&/�-.�)/2=>�-/<� /+)/-.)�&�-?@�

+�),.C&/&-;<� /�/�;</�-;A;/<�� ��� .)-;�2�)/+/&-.)A.)�&."+���<�&/

5��&��/� (!'&��(� '(��/� ��!'�!��+� ��!����&��!�� ��.�� (� ��!��+� /���'��� ��&����/����.����(�($�0�&�(�� �-� �.��&��/��-�������&����!��!$�(�����.����(�!$�!�0�(&�(��� �&�.+��*���>C;?�.'!���!�.+���!*��)��$��������β*��&���$���>6�2'.(�D'��!�--���!+� $����!�/���$+�0�!$��*���>C;?� �'���&�!����2��$���(�� ��'����(���!�&�����!����-����!$����!����&��!����.��(� ��!��+�/���'������.����(�!$�!�0�(��&��!�-��&�(� ��.�A+���!�&�(����"���#�>6����&�!�������!$�!��������+(�����������(��!��/������&����!��!$��12�����'��;�� ���(�!$�!�0����&�0���/'��!�&���������A���((����0���'(�&���$�(�� ���(�0����/�����!�&�.+�!���(-� !����0�!$������(��&��A���((��/���!�(��(�����1����2!�.��� !���(-�����!(�!$�!�0����&����!�&��-�����0����!���(-� !�&�0�!$������������&��((�+�&�-���!$��(��!��/��-�!$�(������ '��(�!��!$��12��.+�(� ��!���(!'&��(���&������5�!$�������&����0������((��!�&�!��!$�� ��(!�!'!�4����!$0�+���(�4�&�� �&�.+��� )��-�(!��'��!�&�(� ��!������&��� )��-��� ���,�!�����-����'����� !�4*�!+�����'� !�!��/���'��(�>6�>8��$'(�������(��((��!����-���!��/�!��/�������&����!�!$��12��.+�� !��/��(���(��!��/��� ��!�����'�!$����4�&�� ��!$�!������ !(��(���(��!��/�� ��!���-��������������� ���(�-�����'��(!'&��(�0�!$�!$��������&������'(���0$� $(+�!$�(�,�(����'!��!�-�����-�����!$�!��(�&�/��&�&����!$����&����(�� ���!� '�'�����!$���!'�!��+�>?�>E�����0�(� ��(!�!'!�4��+�(� ��!�&�-����!$����!����&��!����.����&���!�*�������!'�!��+� ���(��-�!$�(��������(�!$�!�$�&���!!����������������!$������!'�!����(�>6�>:�

".>/+=>�)�".</>;�2�.A�+&/�;</�-;A;/<-?/� .)-;�2� ;2��>�,;�<;�2� ;-/

���� '������&����/��-�����0�(� �����&��'!�!�����&� !�!$��(��!��/�(�/����.��&��/(�!��������������1��6��($�0(���&�������-�!$����&����-��������(�&'�(�;86C;E9�0$� $�0�(����&� !�&�!��.��!$��(��!��/�(�/����.��&��/�&���������&��*���>C;?����*!���(��-� !$������ '������&����/���!$�&�0���� �����!�&���(�0$����>;����/����!��- ��.�A+���!�&�(�(����5�������������� ��&���0�(� �����&� �'!�� !�)��/� �(� ��-���� �����!(� !$�� ��(��4�&�,�� *.��&��/���&� �!��+!� ���(�&'�(��-� !$�(���������&����0����!$����(!�$�����/�'(�!�������2�D'�� �����/����!��-�����0�!$�������&�������&��+��&��!�-��&�����;86C;E9��(������(��!�&������!$�!�0�(�('�-� ���� �!�&���&�$�&!0��β*!'��(��!���(�!���(�;88���&�;?>�������4����!$�(�������(�&�(!�� !�-����!$��('.*(!��!��.��&��/���&� �!��+!� �&�������-�������$�(�����;86C;E9�&������0�(����&� !*�&�!��$�4��('�!�.���(�&�� $���(������/;88���&��+(;?<�!����!��� !�0�!$�!$��(�&�� $���(�-�!$��� �&� ���(�&'�(�"�(�><���&���'>6#����!$������(��!��/�(�/�����"������� 6���!$�!0��(!�' !'��(�����&��0��(��/$!�+�����!�!��.�!!���4��0�!$��(�&�� $���� ��������!���*!��(�.�!0����!$��(��!��/�(�/������!�-�����*������&�!$���� ��!���.��&��/�&������������#��$����!������ '����&�(!�� ��.�!0����!$��α* ��.��(��-�!$��!0��.�(� ���(�*&'�(�"��/;88���&��+(;?<#��-� !$��(��!��/��� ��!���&�������-������(�E�G���(�&�!��*����&�-����!$����&����5� �'(��!$��(�&�� $���(��-�!$��!0��.�(� ���(�&'�(�����-��A�.����&�!$������!������ '����&�(!�� �� ���4��+����(��'!�����$�0�4�����!��(����'(�.���!$�!!$�(����(�&'�(�������(�!����&�(���(�!����!��� !�-�4���.�+�0�!$�!$� � �&� ���(�&'�(��-!$��12��(��!��/�(�/������!�-�

�$���.���!+��-�!$��������� �&���(�&'�(���/;88���&��+(;?<��-�����!����!��� !�0�!$!$��� �&� ���(�&'�(��-�!$������(��!��/�(�/����0�(�!�(!�&��A�������!���+�'(��/�(�!�*

��� ����> ��/@�.)9��+�</"�.A� +;/�+/

&��� !�&��'!�/���(�(���&���������� ��.��&��/��((�+�>;����&*!+���"��#�������&��'*!��!����� ��(!�' !(� ���+��/����'!�!����!�����������!���(�&'�(���/;88��"�>#���+(;?<"�;#����/;87�"�9#����&�!$��� !�4��(�!�����>6?C��/>6EC���>6:�"�6#��0�����A���((�&���2-7���(� !� ���(�'(��/�!$��.� '��4��'(��A���((����(+(!�������.����(�-����'���*-� !�&� ���(�"�>#�� ���(���-� !�&�0�!$�������!+�4��'(�"�;#����&� ���(���-� !�&�0�!$�����&��'!��!����(�0����$��4�(!�&���&�'(�&������.��&��/��((�+�-����*���>C;?�����*�1��65�($�0(�!$��.��&��/��-���&���!�&��*���>C;?�!��!$��4����'(����.����(��A*���((��/��������'!��!����(��=��'�(�($�0�����!$��.���/���$(������A���((�&��(��

A;2=)/ �� ������&����-��*���>C;?���&� ��.�A+���!�&�(����"���#;86C;E9�($�0��/ ��������!���!+��-���/;88�"1;88#���&��+(;?<�"F;?<#����������&��(�><�"�><#���&���'>6"�>6#�����*���>C;?���,���'!��!(��-�����0����/�����!�&���&��A���((�&����2-7� ���(�.+.� '��4��'(���-� !�����5��&��/��A�������!(��'(��/���&���!�&��*���>C;?��0�������-����&������.������������!���(��-�!$��2-7� ���(�����.����(�0�����������&�-����!$��-����0��/2-7� ��-� !�&� ���(3� �>���� )@� �;�� ���!+� 4��'(@����� ���"��#@��>�� ���"1;88�#@��;����"F;?<�#@��9�����"1;87�#@��6�����"�>6?�@�1>6E�@��>6:�#�

��6>.?������� .)-;�2�&."+7�&/�-.�)/2=>�-/<� /+)/-.)�&�-?@�

��� ��!�/���-�.��&��/�����!�4��!�����������$����0�(���!!���.��&��/�!�����.����(0�!$��'!��!����(��>���&��;����&� �!��/�!$�!���/;88���&��+(;?<�0�����((��!����-��.��&��/�!��!$��(��!��/�(�/��������*���>C;?�����.����(��A���((��/������'!�!�&�!���/;87�"�9#�($�0�&�.��&��/��-��*���>C;?�(�������!��!$�!��-�����������&� �!*��/�!$��(�� �-� �!+�-�����(�� �-� �.�(� ���(�&'���������+���'!�!�����-�!$��� !�4��(�!���-����"�6#�$�&�����--� !�����*���>C;?�.��&��/�� ��(�(!��!�0�!$�!$����&������&� !*��/�!$�!�!$��(��!��/�(�/����.��&��/�&�������(���&����&��!��-�!$��('.(!��!�*.��&��/&�������-���������!�������.����(�"�>���&��;#�($�0�&����+�.� )/��'�&�.��&��/�-� �*����� ��� �� ��4��(�� �A�������!�� ('.(!�!'!��/� !$�� (��!��/� (�/���� ����� -���2�2�����*���>C;?���('�!�&�������.��&��/�!�����.����(��A���((��/��������>;

����&&�!����������(��&�&���!�.��&�!�������'!��!(��>���&��;����!$�'/$��!�.�'�&�������>;��$�(��&�!��('����!�!$����&������&� !��/�!$�!���/;88���&��+(;?<������������� �((��+�-���.��&��/�!$��(��!��/�(�/�����-�������&����!���--� !�(��!��/�!��!$����/*'��!�&�(� ��!��+���!$0�+�

<; += ;.����<�+.�+>= ;.�

��� $�4�� ���(��!�&� �4�&�� �� -��� �� �� ��!��*��&��!�&� �� $���(�� -��� (��!��/������&����!��!$��12���-���'����&� �������&���&� ����� ���(���� ��(��('(�12�(��!��/�(�/����$�(�.�����&��!�-��&����������&�����0$� $� ��(�(!(��-�!0���A��(�&� �&� �������� �&(���&�!0��$+&���$�.� �������� �&(����(�������(��!��/�(�/������!�-$�(���(��.�����&��!�-��&�-��������('����>7��$���� $���(����4��4�(�!$��.��&��/��-�!$�!0��� �&� ���(�&'�(����!$��12��(��!��/�(�/������!�-�!��!$��!0��.�(� ���(�&'�(��-�!$�(��!��/��� ��!���������!���--� !�(��!��/��!�!$��������$��(!�� $����!�+��-�!$���� ��!��!�� ��/��&�&��(���!�('����!���>3>���!��� !����7���&�!$���-��������//��/�!����(!����(�� �((��+�!�� �� ��!��!��!$�����$��������!����.�-����!$���������&��&�������&�����('����$�4��.����($�0��!��'�&��/��$�A�����,�!����������*��&����&��!����������&� -����!���� �-� �'�!����(� �-� $�A����(� $�(� .���� �����!�&� -��� .�!$� ���$��*����(�7�;<��!�$�(���(��.����($�0��-���� ��((*���)��/�(!'&��(�!$�!�$�A����(��-����*��('���� ��� .��&� ����� ��&� �!��/� !$�!� $�A�����,�!���� &��(� ��!� ��()� !$�� (��!��/(�/������!�-�;>���)�0�(����//��/�!�����-�������4��4�(�!$���*!�����'(����&!$���-����!$���;*!�����'(��0$� $� ��!���(�!$��(��!��/�(�/������!�-���(��4����.���!���!��� !�0�!$�!$��(��!��/��� ��!���7��$�����/�����,�!�����-����$�(���(��.�����.(��4�&"�� ����0��+��'��'.��($�&�&�!�#�������!(��-�$�(�!��.���� $���&�!��!$���������*.�������� $���(!����*(�$��/�����&*�� $��� ��&�����(�!��-'� !�����(���(��!��/��� ��*!��� -��� ���$������� ��/��;;� ��!$�'/$� !$�� 12�� (��!��/� (�/���� -��� !$�� !$������$������(�0��$�4��&�( ��.�&�$��������4��+�(��������(!'&��(���� $����/���������&�5���&� �!����&�--����!�(��!��/�(�/������!�-��A�(!(;9�!$�!���+�.��&�&��� !�+�!��!$�����&�.���+���

���('����+��(��!��/��-�������&����!��!$��12����4��4�(�������/�����,�!���(!������&�!$�(�����/����(�!$���.��&�!��!$��(��!��/��� ��!��������!� !$�������!���� �&� ������������/�0�!$��!(� ��/��!$�����!��(�!$��-�����/�����!'���/���'����(�!$��������.�����.'&(��--���$�����!��!�����-�!$��/���'���.��/���(�(���� �((�������(�!�.��'�&���!$�� ��!�����-� $����/�������;6�"(�����(��!$�� $��!���.+�F����������!$�(4��'��#�

��� ����> ��/@�.)9��+�</"�.A� +;/�+/

)/A/)/�+/

>� ���������� ������'�>77:���$���� $���(���-�(��!��/����*���������� ��!��� !��(� ��*!��+�/���'��(���&��!(���� �((��/�.+��(���!� ���&������,+��(��������!���+!� ���&����*�'���� �� $���(�(� ��� ���$������� ��� �((��/�� =����� ��)�� �&�3� ;7C6:�� ���&�(5��( ��� ���'.��($��(��2����/��*=����/����&��.��/�

;� F��=��������1��2�����1�I���=�����1�����>77?���$����� �((��/����!��(�(����*$�������!$�������!��(�����>%9���&���;����&�E<*)����(���!� ����!����(��($�0����-��*�� ������/������)��$�����������'�����!�&�������&�������������� ��!���('.(!��!�(��� $��5�� $����5���$+(��6�B��><EC>>6�

9� J��������F������'�>77:��2�� �-� �!+��-����$������� ��4��!�(��;���������)��$������&������)��$����*����!�&�('.(!��!�(��J��5������$������6��;;?E;C;;:<�

6� �1��F�1�������I�2���2����1��>7:9���'��-� �!������&� $��� !���,�!�����-���)��$���� ��4��!�(��� ��� ��)��$����*(+�!$�(�,��/� ��.�A+���!�&�(��� J�� 5����� �$���� ��B�><78<C><788�

8� F��=�����I���������>7:6�����.�A+���!�&�(��5*��)�� ��4��!��/���,+���� !�4�!+���(� ��!��+�/���'��(��-���!���!'�!��+����� ����!���� �&��2 ����2��B���;EE?C;E:<�

?� 1�����1����J��>77:�����.�A+���!�&�(������������$��������.��������!��������� �!�&���!$��!��/�!��/��-�$������(�!��(� ��!��+�/���'��(�� �*�//��/�!�(�0�!$�/���'��� ��!��!���!���(��!�� �&� ����J��5������$������6��9>>:<C9>>:8�

E� ����� 2����� ��J�� ��1���2� I���5�� �����1�� ;<<>�� 2� ��!��+� /���'��� .��/���(�(3��-!��/�!��!$��2��1�������&(������5���������>>?C>;;�

:� ���5�F�������I������1��2��;<<<��2�/���*��&��!�&�(��!��/��-���'�����!�&�(���&���$������(3�(� ��!��+�/���'���.��/���(�(���4�(�!�&��5�� $�����B���9>8C9;?�

7� ���������� ������'�;<<<����/�����,�!�����-����*���������� ��!����(���&����&��!��-��� �� �'����&�!$��(��!��/�(�/����-��� !$����/'��!�&�(� ��!��+���!$0�+����52���!!��B���9EC6>�

><� ������1������'�>778���&��!�-� �!�����-�!$��(��!��/�(�/������!�-�0�!$������*�������*��� ��!���-���!$����/'��!�&�(� ��!��+���!$0�+��J��5������$���������:E;9C:E;7�

>>� �����������F�������1��22��I���������>779���$�������*!��������(�D'�� ���-���*���������� ��!���&��� !(� ��!�� ���'���� !��/�!��/� !�� !$�� ��/'��!�&�(� ��!��+���!$*0�+���'���J�������5���������;76C9<?�

>;� ��������������1��2�����I���������>777���&��!�-� �!�����-�����4������$�������(��!*��/�(�/���*.��&��/�(�!����� ��.�A+���!�&�(���������/'��!�&�(� ��!��+���!$0�+*(��!��/�� ��!�����������&� ��������6��8;EC89?�

>9� ���������� ��� �'� >77E���$�� (!�' !'����-� (+���)��$����� "���*��)��$�����>CE9#� �(� &� *!�!�&�.+�!$����&�('�-�&��.��&/�(��5�� $����5���$+(��1�(������'����6���:<<C:<8�

>6� ������1������'�>77E�����.�A+���!�&�(�����(�����/'��!�&�(� ��!��+���!$0�+�(��!��/�� ��!��3�/���!� ��.��!���!���� ���&(� !����&� �����&�(��&��(� ������������ ��������BB�E9C:9�

>8� �1���������I���������>77:�������!�����-� ��.�A+���!�&�(���������/'��!�&�(� ��*!��+���!$0�+�(��!��/��� ��!���� �'(�(���(��'!��/���&� ��(!�!'!�4��(� ��!�����-������*('������&������)��$������.'!���!� $����/�����������&� ������/+��6���;>9EC;>68�

>?� �����1���J�F������'�>778��+��������('�������������.�(��-�!%-�!��� ���((� ��!�&�0�!$�� ��.�A+���!�&�(�����'!�!����0$� $���&' �(���,+���� !�4�!+����!������!������>98C>6;�

>E� =�1���=��������������1�I�����1��F�1��>77?����&' �&���&�(���!����'(��'!�!���(�!�2��;<;��-� ��.�A+���!�&�(������--� !������,+����A���((������ !�4�!+����&���!�� ��*�'������'!��/��J��5������$���������>97:>C>97:?�

>:� 2���� ��2�� I� ����� ��� >77E�� ��!�� ���'���� ��(��'!��/� ��&� �.������� (� ��!���� �-�&���� ��!� �!������ ��&� /��0!$� $������� ��� ��-�!��� �� �((� ��!�&�0�!$� �� ��.�A*+���!�&�(�����'!�!�������� ����!���� �&��2 ����2������89>6C89>7�

>7� 2������*2��I���������>77:���&��!�-� �!�����-����'!�!�4��(��!��/�(�/������!�-�-���!��*/�!��/� �����('���� !�� !$�� ��/'��!�&� (� ��!��+� ��!$0�+�� ����� 5����� ����� ��� 9;7�"�.(!�� !#�

;<� ��F�1������I�5����1��F��>7E;�����-����!�����-������('������� ������(����-���('*������&������('����(��-*�((� ��!�����!���'!�������5�� $���(!�+�����6<>9C6<>?�

;>� ������1��I��������� >77:�����.�A+���!�&�(���� �(� �� (��!��/� �� ��!��� -��� ���$��*����(3�.��&��/���&�)���!� �(!'&��(���������������&� ��������6���EC>9�

���>.?������� .)-;�2�&."+7�&/�-.�)/2=>�-/<� /+)/-.)�&�-?@�

;;� ���=����1��� 2��I��������� ;<<<������&� ��-!� �((� ��!���� �-� ��.�A+���!�&�(���� �(�� �((��+�-����!(�-'� !�����(�����/'��!�&�(� ��!��+���!$0�+�(��!��/��� ��!����J��5�����$���������;7::EC;7:79�

;9� ���5�F������� ����'�>777���$��&�('�-�&�*.��&�&� ������-� $����/������5���&��!�(���.����� .��&��/� ��&� &��� !(� (��!��/� -���� !$�� !���(*���/�� ��!0��)� !�� (� ��!��+/���'��(����5�J���B��><87C><E<�

;6� F�����������'�;<<>���$����/������������K��%�--L�(0�! $� ��!������/�&��(�* ����(� ��*!��+�/���'���.��/���(�(������������677C8<7�