Nama :Firstiafina Tiffany

NIM :G0010081

Kelompok :A4

Resume Jurnal: Sintesis Protein dan Stress Retikulum Endoplasma dapat

Dimodulasi oleh Protein Virus Hepatitis C Protein E2 melalui eukariotik

Inisiasi Faktor 2 alfa Kinase PERK

Virus hepatitis C (HCV) merupakan masalah kesehatan masyarakat,

dengan sedikitnya 2,7 juta orang yang terinfeksi di Amerika Serikat

dan lebih dari 170 juta terinfeksi di seluruh dunia. Hepatitis C Virus protein

envelope, E2, adalah sebuah retikulum endoplasma (ER) terikat protein yang

mengandung daerah homologi urutan dengan RNA-diaktifkan kinase double-

stranded protein PKR dan substrat nya Kebanyakan HCV

menjadi infeksi persisten, yang sering menyebabkan hati kronis

penyakit, termasuk sirosis dan karsinoma hepatoseluler. Virus ketekunan mungkin

sebagian disebabkan kemampuan virus untuk menghindari respon imun host.

Viral varian yang melarikan diri bawaan atau kekebalan yang diperoleh

kemungkinan besar juga penting dalam membiarkan virus untuk mendirikan

ketekunan. Misalnya,banyak strain HCV yang resisten terhadap interferon alfa

(IFN) terapi dan juga mungkin resisten terhadap IFN endogen.

Hepatitis C Virus protein envelope, E2, adalah sebuah retikulum

endoplasma (ER) terikat protein yang mengandung daerah homologi urutan

dengan RNA-diaktifkan kinase double-stranded protein PKR dan substrat nya,

inisiasi translasi eukariotik faktor 2 (eIF2). Sebelumnya, telah diketahui bahwa E2

yang memodulasi terjemahan global melalui penghambatan dari PKR-protein

interferon diinduksi antivirus melalui-eIF2 fosforilasi PKR nya situs homologi

domain (PePHD).

E2 dan Perk dapat berasosiasi in vitro di dalam sel. Untuk menentukan

apakah protein E2 berinteraksi dengan Perk in vitro, kami melakukan sebuah in

vitro assay mengikat dengan protein fusi murni disajikan dalam Escherichia coli

yang mengandung C-terminal, kinase domain Perk fusi GST. GST-PKR dan

protein GST dimasukkan sebagai kontrol untuk spesifisitas pengikatan (Gbr. 1A).

radiolabeled protein E2 unglycosylated terikat secara khusus untuk tipe liar GST-

PKR dan GST-merembes in vitro, tetapi tidak untuk GST saja. Radiolabeled, in

vitro diterjemahkan full-length Perk atau hnRNPK diinkubasi dengan GST atau

protein fusi GST-E2, terikat untuk glutathione. Setelah menyelidik dengan

antibodi anti-c-Myc, Perk terdeteksi di suspensi yang berisi GST-E2 (Gambar

1C). Dalam sebuah coimmunoprecipitation assay (Gambar 1D), di mana Flag-tag

E2 dan c-Myc-tag Perk yang diekspresikan di HEK 293 sel, Perk

coimmunopurified dengan antibodi anti-Flag E2 (anti-Flag M2; Sigma) terikat

dengan protein E2. Perk divisualisasikan melalui Western blot analisis dengan

antibodi anti-c-Myc. E2 merembes menghambat aktivitas kinase.

E2 Perk menghambat aktivitas kinase. Untuk menilai pengaruh E2

aktivitas kinase Perk in vitro, kami melakukan tes kinase dengan Perk wild type

yang immunopurified dari PERK transfected HEK 293 sel. Uji kinase dilakukan

dengan immunoprecipitates.

Uji kinase dilakukan dengan immunoprecipitates di hadapan dimurnikan

GST atau protein fusi GST-E2, menggunakan histon H2A sebagai substrat

Inkubasi dengan GST-E2, tetapi tidak GST, menghambat kedua

autophosphorylation dari Perk dan fosforilasi histon. Katalis tidak aktif Perk (Perk

K / A) tidak terfosforilasi signifikan. Fosforilasi dari eIF2 juga dihambat oleh

GST-E2

Kehadiran GST-E2 (Mr 66) tidak menghasilkan penampilan dari protein

terfosforilasi tambahan, yang menunjukkan bahwa GST-E2 tidak terfosforilasi

oleh Perk in vitro. Ini Hasilnya menunjukkan E2 yang berfungsi sebagai inhibitor

kinase Perk aktivitas in vitro.E2 membalikkan represi translasi Perk-dimediasi.

Untuk mempelajari pengaruh tekanan ER di hadapan E2,dibentuk HeLa

stabilcell line dengan ekspresi diinduksi E2 ditargetkan ke UGD. E2 adalah

glikosilasi pada membran ER , dan meningkatkan gel mobilitas setelah perlakuan

H endoglycosidase ,yang menghilangkan residu karbohidrat, menunjukkan E2

yang diungkapkan. Sedikit perbedaan dalam pertumbuhan sel diamati antara baris

sel yang berbeda, meskipun mengekspresikan E2-sel tumbuh ke nomor-nomor

yang lebih besar, menunjukkan perangkat tambahan sedikit sel

pertumbuhan. Untuk menguji pengaruh E2 selama stres ER,

garis-garis ini sel dirawat dengan PSA, penghambat-glukosidase.

Hasil ini gabungan menunjukkan bahwa protein E2 HCV genotipe 1

mengikat dan menghambat merembes in vitro dan in mamalia sel. Efek ini

membutuhkan daerah dalam protein E2 dikenakan homologi urutan ke eIF2 alfa

fosforilasi situs, walaupun tidak bisa mengesampingkan kemungkinan bahwa

urutan lain dalam E2 mungkin penting untuk berinteraksi. Secara keseluruhan,

hasil ini menunjukkan bahwa selain untuk menyediakan ketahanan genotipe HCV

1 sampai IFN, E2 dapat memberikan virus dengan kemampuan untuk melarikan

diri yang negatiftranslasi efek stres ER.E2 adalah lokal untuk wilayah perinuclear

dari sitoplasma dan berisi domain transmembran dalam 29 terakhir amino asam

dari terminus C yang yang menyimpan E2 pada membran ER .Peptida sinyal

urutan pemimpin juga diperlukan untuk tepat lipat, lokalisasi, dan pengolahan E2

protein.Menariknya, PKR juga melokalisasi ke wilayah perinuclear dari

sitoplasma dan daerah nucleolar , dan kedua colocalize protein dalam sel-sel . Hal

ini konsisten dengan Temuan PKR yang terkait erat dengan ribosom melalui

mengikat protein L18 , termasuk kemungkinan besar ERbound ribosom.. Oleh

karena itu, E2 dan menitis juga kemungkinan berinteraksi satu sama lain di sisi

sitoplasma dari ER sebagai domain kinase dari Perk adalah sitoplasma. Karena

BIP diaktifkan selama ekspresi E2, kelebihan beban ER tanggapan atau

membuka-protein respon mungkin diaktifkan. Misfolding E2 mungkin terjadi (2),

menyebabkan akumulasi unglycosylated E2 yang mendapat disimpan dalam

sitoplasma.Lebih lanjut dicatat bahwa hilangnya Perk pada tikus dan manusia

mengakibatkan kerusakan sel beta pankreas, dicirikan oleh diabetes melitus

tergantung insulin. Infeksi HCV telah dikaitkan dengan diabetes mellitus , dan

akan menarik untuk mengetahui apakah penghambatan Perk oleh E2 berperan

dalam etiologi tersebut. Temuan ini menunjukkan bahwa mungkin E2 berperan

dalam infeksi HCV persisten dengan mengatasi ER respon stres selular dan dapat

menunjuk ke arah baru untuk pengembangan terapi untuk pengobatan HCV.

Sumber : http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed

Tanggal :18-November-2010