Photoperiodic modulation of adrenal gland function in the rhesus macaque: effect on 24-h plasma...

38
Page 1 of 38 Page 1 of 38 Accepted Preprint first posted on 17 February 2009 as Manuscript JOE-08-0437 Copyright © 2009 by the Society for Endocrinology.

Transcript of Photoperiodic modulation of adrenal gland function in the rhesus macaque: effect on 24-h plasma...

� ��

���������� ������������������������������ ������������������ �����

�� ������������������� ������������������ ���������������������

���!���������

������"#�$����%�&���$#���'��%�%(%�)�� ���*#�"�� �����%���������+�,#�

-�.��+��%�%(�

���/����������������� �0����������������������������1��� �2�/���� �0�����34556 ��������������������2��/�������������� �(��������������������������������������� �0������������������������/����� ��������� �0�����34��3������

7"������ ���� �������������.�����������������,�-�.���+�8��������.���+�9���#��:�

��

��������������������������)���������������������������

;��'���������������������%������������������%����������������%����������������%�������������

��

Page 1 of 38Page 1 of 38 Accepted Preprint first posted on 17 February 2009 as Manuscript JOE-08-0437

Copyright © 2009 by the Society for Endocrinology.

� ��

� ��� ����

<��=���������>��������� ������������������+��������������������%�����������������������������

��������������!�������������������������'�����������������������������#���'�!��%������� ������� �(�

�������!�����������!����.����������� .���!���� ��������������� ��� ����������%����� ��������������"�

��������������������������+��'�#�=��������������������'���������������� ����� ����������?�

������������� ��� �������� ������ ������� ��� �!���������>��� ������ ������������� 7#������$�

������:%�.�������������� ������������������������������������ ����������������#�=�����������%�

'������������������������������ ����'���������������������%�'�����'������������������������@�

������������� ����������� '���� '�����%� ������A����� ���� �����%� ��������!����� @$��$&� 7������'�

����:%� ��$���&� ���� �$$�@&� 7����� ����:#� "������ �"(���� ������� .����� ��������� ������ ����)�

��������� ���� � ���� � � ������������ ��� ����� ��� ���+� ������� ��!���� � � ��������� ������

������������������������� ����7&����:#���'�!��%�������'��������+��������(��!���������� ����

.����������������������������������%�'�����'����� �������������������������(��!���������� ������(�

������ ������ ����!���� ������#� B���� ����������� ��������� � � ���� �������� ������ ���������������"�

��!�����������������(��������� ��������������������������� ������������������'�����������������?�

�������%�������������!��������%�������������������������.�����%����������� ������#�=�+����$�

��������� ���� ������� ��������� ����� �����������%� .���� ���������� ������������������� ���� �����������%�

���������������������� �������.��������������������������������%�'�����������!����������������@�

����������(������������������������.���!���#��'�

Page 2 of 38Page 2 of 38

� (�

*����� �������

<�� �������%� ����� �������� � � ����������� ���� .���!���� ���� ����������� ��������%� ���'������

���������� ��� '���� ��� ���������� �������#� � C������� ���������� �������� �� ����� ���� ������(�

������>������ � � .���� �������%� ���������� �������� ���������� ��� ����������� ��� ���� ���������"�

!���������� ����� ����� ��� �� ������� ��!��������� ��������� ���� ����#� <�� ��� '���� ����.������� �����?�

�������������������������������������'����������� �.���� �������%�������������������('�+�������%�$�

����.�����%� ������ ��������� ���� ������������ 7��������� �� ��+� �))%:#� ,�� ���� ������ ����%�%�

��������������������!��.���� ��������� �������.�����%������������%����� ������ ������� �����@�

��.��� � ����������� �������� 7-��.�� �� ��+� �))�%� *�+��� �� ��+� �))@:#� <�� �����%� ���������'�

!������������!��.������������� ���.������������%���������������%�.���������������������������%��)�

��� '���� ��� ��� .���!������ ������� ����������� '���� ��������� � ����!�� ���������%� .������ ���!���%����

��������������������7-��������))":#�����

�������� ���� �������������������� ����� ��������� ���������� �������� ��� ������%� ������ ����(�

�!��������������������������������������������������������������������������#�<�����������%��"�

���������� ������������� ��� ���� � � ���� ��D��� �������������� ��������%� ���� �����������(�?�

��������(�������� 7���:�����%�����.���� ���������������������������������� �����������������%����$�

!��'����������.�� ������D��� ������������.������������������� ������������������.���!���#�=�����%�

����������������� �������� �����������������������������������������.����������������������+����@�

�������� ��� ���� ��������������� ������ 7�.*:� � � ���� �����������%� '����� ���!��� ���� ����������'�

����������� � �'����D����������� ��������%������������������������������������� �� ���� 7&����:��)�

7��������� �''�%� -�.���+�� �� ��+� �))"%�&�'��� �� ��+� �))@:#� ,���������%� ������ ����� � ������� �����

�����+�.��� � ���� ��� �������� ����������8� �������%� ������ �������� ��� ������ ������� .���� ��������

Page 3 of 38Page 3 of 38

� "�

������������������������������ ���������������%��������������'����������!��!��������.*�����������

���������������!����������7<����������+��))?:#���

������������������!������������!�������.���� ��������� ���������������������%� �����!����.���(�

��������������������������!�#�<������������ ���������%��������������������!��������������������"�

�� �������� 7E���.���������+��'@�%�$�!��������+��''"%�C��+�������+��''%%�;��������+��)))%�?�

�����������+��))�:%�'����������������!�� ����������������������!����������7��������������+��'@�%�$�

C��������+��''(%�E���&����������+�''@%�$���F�.�������))$:#����������%���������������!��%�

��������� ��������� �� �������� ���&����� ��!���� 7&��������� �� ��+� �'@(%� *������ �� ��+� �'@"%�@�

B���������+��))):%�'���������������� ������������������ �������7-D������������+��))$:#��'�

<�� ���� �������� ����� '�� ���� ���� ������������ ������������� ��� �������� � � �����������)�

�������� ������� ���������������� �������� �� �������������������� ������#������ ������%���� ��������

����'������������������� ����� ��� ���������������������������������������������������%�.�������

���������� ���������������������������������������!�����������#�,�������������'���������������(�

���������� �����������(������� ����� ����������� �������� '������ ���� �������� ������ ����� ������"�

����������#�=��� ����������'� ��������� �������� ���������� ��������������� � �����"(������������?�

��������� ����&����� �������� ��� '���� ��� ���������� ����!���(����� �����#�)����!��%� ��������(��+���$�

������������������������ ���������������������� ���������!��!��������!��������%������������������%�

��������.�����%�������������������#���@�

Page 4 of 38Page 4 of 38

� ?�

���������������������

����������

=�� �!���� ���� ��� ������� �� ������ � � ��������� ���(�������� ��������������� ������� ����(�

���������������������������� ������������������%� ������������� ������ ����(����� 7G(�������:�"�

�!���������>�������� �������������������7#������������8������������@#?�(�������������:#�?�

����� ������� '��� ������ '���� ��� ���'������� �.(���!���� !���� ��������%� ��� ���!������ ������.���$�

7&�'�������+��))@:%�'������������������������ ���������������� ���������#�=�����������'����%�

����������������������������(�������������!��������%�'���� ������������������������������������@�

������ � �������������� 7�#�#%� ��$���&:%�����'���������� ��� .�� ����,*�".�&�!������� ��������'�

"�������%� ��������������'���� ����*��������"��������.�����H��/��� ���� ���1��������������)�

0�����������������#�����

��������� ����������������������������������%�������������'����������������������������������

���� ����'���� ������ �������������� @$��$&8� ��$���&� ���� �$$�@&%� ��� �)� '��+�� ��� ����� ����#��(�

=����� �������������������'�������������.������ ����� ���������� ����'�����%�������������%������"�

�����%� ��������!���� ���,�����#� *���%� ��������� ��� ������ ���������� ���� ������������ ���������?�

.��'���� ���� ������������%� ���� ����� � � ������� ��� '��� ����� ��� )%))� �� ��� ����� �����������#��$�

�����������'�7������)�����<��#%���#�$���%�),%�-��:�'���������!����.�������������������'�����%�

�����%����)@))�����������������?))��#�=���������'���������������'���� ����� ��������!�����.���%��@�

'�����'�������!������������������ ������ ������������8�����+����'�����'����!����.���������������#����'�

,��� ����������������������������%�������!���������>�������� 7�����������@#?�(�������������:��)�

�������������������'�������#�=�����������7�����������������������:�'�����������������������

����������������� ��$���&%� @$��$&� ���� �$$�@&� ��� �)� '��+������ ���� ����� � �����������%� �������

��������'�������������>���'����+��������7�?(�?���A+���#�#:� ����'���.�������.��.������������(�

Page 5 of 38Page 5 of 38

� $�

7�?(()� ��A+�� �#!#:� ���� ������������#�� =���� ������� � � ���������� ��� ����������� '���� ������

����������������� �������������1��������#�����������������I���������� ��������#�<��������

�����%������������'������� ������'�������������'�'����'�� � ����� 7�)))���J��())��:#�E������(�

������������������'������������������������!����.��������������!����������������������,������"�

*�������� �������� ��������� .������ 7,*�".:� =�����&�����.����� �������#� =���� ��������� '���?�

�����!���.������!�������������������1����������1������+�$�

�%�

����/��������������������������@�

=��� ����!���(����� ������� � � ����!����� �������� '���� ��������������������� ����� ����'�����'�

����!��������������7)����)������.�������<��#%�-���%�,"%�-��:#�)������� �����������������!�����)�

.���������������������'���������������������������������!����.����� �?(�����������#����������� ����

��������!����.����'������ ����������������'������� �'����7)����)������.������� <��#:#�=��������

����������!����'�������������.������������������!��������.���� �.�����������%�����������%��!����(�

����#� =����� ����������� ���� ����������� ����!���� '���� ���������� .�� ��������� ���� �!�������"�

��.���� �.��������������%��������������������������������%���������!���#�.�������������������?�

'������������������������������ �����������!������������������������������#���$�

��%�

2�����"#������������������@�

� ���� K�)�'��+��� ��������� ��������� � ���� ������������������%� .����� ��������'���������������'�

��������� ���������D����������%�!����������'�������!�����������������������'�!��A������(.������)�

����������������7&�'�������+���))@:#�-������������)%))��%�������.�������������'�����������������

���� ���� ������.��� �������� ��� ��� ������� ���%� ��������� ������ ������ ������#� =��� .����� '������

Page 6 of 38Page 6 of 38

� %�

����������������� ������������&=�(�������.�������������������.��%������� �������"�L.%�����������

������������������'�������������J�)�L.�����������#����

�(�

��������������"�

������� ��������������� � � ��������� ���� &����� '���� ����������� ��� ���� ,*�".� ����������?�

���!����� $�.��������������!������������.��� 7&�'�������+��))@:#�-��� ��%���������� ��!����'����$�

�������� .�� ������������������������ ����� ��� �������� �)�)� ���� ���� 7"�����&����������%�%�

<�����������%�<*%�-��:#�&�������!����'���������������.������������������7"<�:%���������@�

����.���� ������� �������� &����(�%(70(���.���������:�����(-��%� ���� M(�N&����� 7���'�

.�A����:#�<����(���������������(��������� ��������� �!���������'���������������)O� �������������#��)�

�����������������������'����(���A��%� ���.����� �������������#�����

3��������������������������������������

=�������������������%������������������ ��������������������������������+���������� ��������(�(�

���+���������������!���#�"������������������%�����������������������������'����������������"�

.��.���������������#�=��������������������������������� ����������������!��������� �������������?�

������ �� ����� .�� ���� ��!���������%� ���� ��� ���� ��� ����� '����� ���� ��������������������8� ����$�

�������%���������������!�� ��������������������������������������H�����+#��=���������������������%�

���� ��D���������� � � �� ������� ������� ������ ��� ���� ����#� ������������ ������������ ����������@�

����!���%����'�����������(������."%�'������� �����������������������������*,E�� ����'����'�

.������-�� �����������#���)�

Page 7 of 38Page 7 of 38

� @�

24��$�������������/��#������������

&����� ��������%� ���� �������� ������� '���� ��+��� ��>��� ��� ����� *�� ���� ������ "*�� '�����

���������� ����� "*����� ������� 7P�����%� E�������%� .�%� -��:8� ���� ����� �������������� ����(�

������'��������������� .�������������������%����� ���� ����������'����������������������������"�

��))�-�������>���7��������=���������%����������%�.�%�-��:#�.��������������&*�����������%�?�

�"*�� ���������%� ��.����>������ ���� ������ ��������� '���� ��� ������ .�� ����,��-�� ��������$�

)���������� .���%� ��� ������.��� ��� ���� ��������$� /�1���� $�������� ��������� 3��������%�

#����#����������!�����������7&�������F�����������))?%�C��������+��))":%������ ���������@�

������BQ-�((���������������������� ����'������#�"*���������� ���� ����!�������������'�

�������'������.����>������������������������'��B���.����������#��)�

"�'��������� ������ �����'���������>�������� ����� ��������)���?#)��.��������������������

������������������� ��� ����B����� ������ �'���� 7E�R���.�%���%�-��:#�=��������������S������S�%����

'����������������������'����������.������������������������7�:%����������7):%������������.���7�:��(�

'�����������)#������)#�?���������!���#�.�����������'������� ��������������.����������%�'���������"�

�����������������!���������������!����������������� �(�?8����������'��� �������������������������� ��?�

��.����>������ !����� ���� ���� �� ������ ������#� ����('���� ������������ ������������ .��'�����$�

�������������'��������������������H���(����%�'������������������$���&��������������������#��%�

3�%����%��������/��/��#���������������12���@�

"�����(���������!�������������������'������ ����������������������&*���������%�������))�����'�

� �"*����������,����������+���7P�����:#�=�����!����������������������������'�������������))� ����)�

�."���������#�=����."�����������������������������?����� �=�����-��!�������."�)������)��%����

())��)������ ����������������������%�?)��)�������(�������������%��?)��)������ ������.����������

Page 8 of 38Page 8 of 38

� '�

������&*�%�������!������������.���7$���������+��))$:#������������!���'��������������!������

������������� ����������!����� ����� ������!��"*����������������� �������� ������%����� ���� ���������

'��������������������!������(�����%�������+�����������#�=������������������.���'�������������(�

.��������������������%���������������������� �'����7��������-���������:%��������������"�

����<�!������������������B�������7���$���%�),%�-��:���������!���#��?�

=�����������'�����*.;���(,%�������������������������8�*.;���("%�$�

���������������������%�*.;����T���.�%�?H($,�)(%�

��������������������������(=�)"�((H8�,�&��(,%��������������������8�@�

,�&��("%���������������������8�,�&������.�%�?H($,�)('�

��������������������(=�)"�((H8�<$��(,%����������������������8�<$��("%��)�

�������������������8�<$��(����.�%�?H($,�)(��������������������������(���

=�)"�((H8��.�$�(,%���������������������8��.�$�("%����������������������

������%��.�$�����.�%�?H($,�)(�����������������������(=�)"�((H8�U(�����(,%��(�

CGTGGACATCCGCAAAGAC;�U(�����("% GGGCGGTGATCTCCTTCTG; ��"�

U(���������.�%�?H(E<.(TGCTGTCTGGCGGCACCACC-=�)"�((H��?�

��������$�

�������������������������������������������� ��������������������������%��%�

)���� �"(���� ������� ��������� �������%� �.������� ����� ����� � � ���� ������ ������������%� �����@�

��������� ���,��#���#�*������� �������� ��������'������������� ���������� �����������������������'�

7=�.����:#�=�������������������.���� ������$���&����� �����$$�@&��������������'��������������)�

Page 9 of 38Page 9 of 38

� �)�

���������������'�������������������7�#�#%����)%))��:%�.��������� ��������������!���������'�����

���������� ����� @$��$&� 7�V)#)?� !�#� ��$���&8� �V)#)�� !�#� �$$�@&:8� ����.��%� ������� �����������

��!���� �������� �� ������� '����� ���� �������� '���� ������ ��� ���� ���+� ������ � � ������ ������(�

�������������� ������ 7,��#� ��%� =�.��� �:#��������� ���� ����������������� � �����"(�����������"�

��������� ������� �������� ��� .�� �������� ��� �$$�@&%� ����� ������� '��� ���� �������������� ����� ������?�

7=�.����:#�)�����"(�����������&������������%��.������������������ �����������������������%�$�

����������������,��#��-#�*������� �������� ��������'��������������������������������������������%�%�

��������.������������������'������������������������������������$$�@&�������������7=�.���@�

�:#�-�����.����������$���&����������$$�@&����������������������������� �����&������������'�

�������� �������������� (("������ � ���� ���� ������� �������� ��� �����������8� ��� ��������%�������)�

@$��$&� ��������������������������� ���������������� 7�V)#)?�!�#���$���&������$$�@&:%�'���������

�������� � ����.���������� � ���� ������������ 7,��#��-%�=�.����:#����'������������%� �����������������

������� ������"(�����������&������������������������.��������������$$�@&%�.���������������(�

'�������������������������� ������7=�.����:#���"�

��������������������������������/�����?�

����!���(����� ��� ����� ���� �� ������������!�� ������%� �.������� ����� ����� � � ���� �������$�

�������������� ��������%� ���� ��������� ��� ,��#� �#� ,��('��� �*,E�� ��������� � � ������ ����!�����%�

�������� ���� ���� �����������������'��� ����� ������'����������� �������� ������� ����!������ �������@�

����!���%� ��� �!������ �����(������ ����!���� .��'���� ���� �� ������ ������������� 7,��#� �-:#��'�

<������������%� ���� ������ ����!���� ������ ���� ������ �����%� �������� ���� ����� �������� �� �����%��)�

����������.��������������@$��$&��������$���&�����$$�@&�7������������'�:#�,����������������%����

�!���������+(����������!����'�����������������������@$��$&��������$���&�����$$�@&�7�V)#)?����

Page 10 of 38Page 10 of 38

� ���

!�#� ��$���&8��V)#)��!�#� �$$�@&:� 7,��#��-:#� <����������%��������� ��� ���� @$��$&���������������

'��������������'����������������!���������� 7,��#���:%�'������������� ����� �������+������%�'�������

�����������'����������� %����'�������������� ��������!���������� ���������!�������������%����������(�

��������$$�@&�������������7�V)#)?%�,��#��-:#�"�

��������������������������������������$��������?�

"�����������B����������������7� �������%�������.����%�.�%�-��:�'��������������������$�

� ����� �����������������������������������������#�B������������������ �����'�����.������� ����%�

����(����� �!���������>��� �������� ����� ���� .��������������� ��� �)� '��+�� ��� ������� @$��$&%�@�

��$���&� ��� �$$�@&� ������������%� '���� ������ �������� ���� ����#� .����������� '���� �����'�

.��'���� ��$���&� /�#� @$��$&%����� ��$���&� /�#� �$$�@&%�'���� ������������������� ����� �#@�����)�

��'��� ����� (�#@� .����� ����������� ����� �����#�������� ����������� �����'������� ����.�������������

�..��!�������� ���� ������������#� =��� ����� ��������� ��!������ ����������� ��������� ��������� �:����

��!��������%��:�������������������������.�����%�����(:������� ������#���(�

/���������������������������������$�����������$���������������������������"�

B����������'������ �����������������������@$��$&���������������$���&�����������������,��#(#��?�

=��� ���� � � ������ ����������� '���� ��!��������� �������� ������ ����� ����� ��������� ������ ����$�

�������������� 7�0W�55%� �0W�%� 643�:%� �����+������� ���������� 7417��5:%� ������� ���'����%�

7� #�62%�20205:������������������!���������74�3W5:#�=�������� ������������������'�����������@�

������������������.������ �������������� ���������� ��������� ������ �������!������� � ����(�������'�

����� ������ 7�1�05:� ���� ��� ���� ���������� � � ����������������������������� ������� ��� �����)�

������������ �������� 7�!/0:#� ,������%� ���� ���� � � ������ ����������� '���� ������ ������������

������������������������ ������������������������� �������������������71�85:%�������������� ����

Page 11 of 38Page 11 of 38

� ���

�������� ���������� .���� ��� ��D��� ������������.������ �������� 732�9:%� ����� ����(�����.�����

��������� ��� ��.��� ��������� "*�� 7�272:%� ������ ��������� ��!��������� 71�4� �������:� ������

����� �������� � � �������������� ����� ������ 7!055:#� =�� !�������� ���� B���.���� ��������%� '�� ����(�

��������!�� ����(����� ����������� ������ ��������� 7"=(�.":� ��� �����.������ �� �������� ��� ����"�

������������ ����������������������7417��5%�!0#55������1�05:�.��'��������������7@$��$&:�����?�

������7��$���&:��������������7,��#�?:#�$�

/���������������������������������$�����������$�������������������������%�

B����������'������ ������������������������$$�@&���������������$���&�����������������,��#�"#�@�

=��� ���� � � ������ ����������� '���� ��!��������� �������� ������ ����� ����� ��������� ������ ���'�

���!��� ������ �� ������������ 72#�4%����%�643�:%� ����� ����� �������� 7#�1�5:� ���� ����(������)�

�������� 7�1��25�:#� <������������%� ����� � � ���� ��!����������� ������ ����� ���'��� �� ������������

���������� .�� �����������'���� ����� ��������� .�� ���������� 7�#�#%�417��5%�#X2�1�%�20205%����

4�3W5%�� #�6%�1���55%��01�5%��0W�55%� 1385� ����0!#�5:#� =��� ����� ������� ������������(�

'���� ������ ���������� ��������.������ �������� ��!����� ������ ����� ������� ��>����� ��!��!��� ����"�

���������������%����� ������������������������78���5%�1���8��/1/%��012�:#�=�������� ��������?�

����������� '���� ������ ��������� �������� ������ ����� ������� �����+���� �������� 7W10�%��$�

1W105":%����������������������!��!������������������� ����������73�125:%�!�������������7!28"%��%�

!84�55:���������������!������� �=�������71�63:%�������������#�&� ��������������������������� ��@�

417��5%� !0#55�����8���5� .��'���� ���� ����� 7�$$�@&:����������� 7��$���&:���������������'�

'���������.������������7"=(�.":�7,��#�?:#��)�

Page 12 of 38Page 12 of 38

� �(�

��� ���������

&��A������ ������� ���� ������ �� ��� ���� � ���� ��� ����������� ���� .���!���%� ��� '���� ��� �������

����������� 7��������� �� ��+� �))(:#�,�� ���� ������ ����%� ��� ��� ������� ��'� ��������� �������� ���(�

��!�������������������������� �� ������ ����������������%������������ ���������������������"�

��������#� =�� �������� ����� ����%� '�� ��������� ���� ������� � � �������������� ������������ ���?�

���������� �������� ���� �������� ����� ����������� ��� �� ������� �������� �������%� ���� ������$�

�����#��%�

<�� ����������!����.����%� ���*�������� <����� ����.����%� ���������+���� ��������� ������ .��������@�

����!��������������������'�����#�=����.���������������������������������������� �����������.����'�

'������!������������������������������� �!���.��� �����!�!��%�����������������������������#��)�

=��� '���(�� ����� .�������� ������� � � ������������� ��� ����������� �!������ �������� �����������

��������� 7�#�#%�,������ ��� K"?L� *����:%� '����� ��������� ��+���� ���������� ������ 7-�+��� �'(@:����

���������>���� ��� ��� ���� ��!��������� ��� ���� ������ ������� ��� ������������ 7-�.���+�� �''?:#��(�

=����� ����� �.!���%� �� ��������� ���������!�� ������� ����� ������ ��� �����%� '���� ���������"�

����������� ������ ���+���� ������ ���� ����� � � ���� !������ ������ 7-������� �''?%� �))"8��?�

"�����.����F������ ��'')�%��'').:#� �.���������%�.��������������������������������$�

���'� ����� ��������� ��������� ��� ����������� ���(�������� ��������������%� '����� '���� .���%�

�������������+���.���������+�������������������������������������������������������������#�<���@�

������ �����������������'����� ������������������� ��� �����+�.����������%�'���������+�� ��'�

����������� ���������� ��������������� ��������� ������ ���� ����� ��������� ������ ���� �� ���+� � ��)�

������������� ��������������� ��������� ������ �������(������ ������ 7-�.���+�� �''?8�&�'��� F����

-�.���+�� �))$:#� <�� '��� ������� ��� �� '������� ��������� ���� �������� ��������� ���(�����������

��������������������� ������������������ ������� 7,�����������+��))�8����!��+������+��))(:%��(�

Page 13 of 38Page 13 of 38

� �"�

���� ��� ��� �!���� ����� ������������ ��� ������� ����� '�� ��� ������ ��� ����� ����� ����(�������

�!���������>���������������%�������!���#���

=�����������'�������������������������������������� �����������������������%�'�����'����(�

��������� .������ ����� �����.��� ������������������������ ���������� ���=��������� >�����������"�

����'�����%�������A��������������#�����%��������� ��������������������$$�@&�������������?�

���������������'������������������������������� �����������+(������������������������%������$�

�������� ���!���������������������7G�)������� ��������������:�7C����������+��))%:#���������%�

�������������������� �������������������������������������� �����������%�'�������� �����������@�

�.������������������ �����������#�=����������� ����� ������������������ ����)�'��+�� ������.���>��'�

������ �������������� �������� ��� ����� ��'� �����������#� ������ ���������%� .�� ��������� �����)�

�������� ��� ����� �)� '��+�%� '�� ������� ���� �������� � � ������� ������������ ��!�������#� =�������

���������� ��� ����������>��� .�� �� ����������� ��!������� ��� ����������� ��� ����� � � ���� ���!�������

�������������� ���������%� ���� ���� .���� �.���!��� ��� ������ �������%� ���� �����%� '���� ����� �����(�

��������������������������������� ��������������������7$�����������+��))?:#������������� �������"�

����������������������������������������������� �.������������%������������������������������������?�

�������������%����.�����������������������������������������.������������������������������#���$�

=�������������������������������������������������������������������� ������������������������%�

����.!��������������������������������������������!���������������#�,����������������%��������@�

�������������� ������������� ���� � ���� ����� ���������� �������� � � ���� ��������� ������%��'�

������������������������������������+�������#�����%����������������������� �������������������!�����)�

�������� ��� ��������� ������������ � ���� �����������#� =����� �������� ���� ��� ����������'���� �������

��������� �������� �C���������#%�'��������'���������!���������� ��� ���� �������� ����������'�������

������.D�����'�������������������������������������������������������������������7C�������(�

Page 14 of 38Page 14 of 38

� �?�

��+� �''(:#� =���� ����� ������� ���� ����� ����� ���� ������(����������� ���������� � � ���� �����������

���������� ���������� ��������� ��D�������� ��� ��������� ��� ������� � � ���%� ��� �������� � ���

����������#� <�� ������������ ����%� �� ����� �����������(��!���������� � ���������������#?������(�

'����!������ ����������������������������������������������%����������������������������������+�"�

�����#��?�

<����������%�'���.���!������������������� ���������������!�������������D���������������������$�

�������#������!����� ���.���� ����������� �����!�������� ��� ����������� � ��������!���� �������'����%�

�.���!������������������%����������������������!����� �����!������������������������#�����������@�

�����(��!�������������������������������������������� ���������!��������������������������������'�

����������.��'���� ���� �'���������#� <�������.�����������>��� ����%� ���!��'�� � �������������������)�

�������%���������������+�� �����������������������!�������������!����������� ��������������������������

���%� ���� ������������ ��� �������� �'�+������ ������!�� ��� ��'�#� <�� ������� ��!���������%� ���������

������������� ���� ���������� ����������� '���� ���� ������ � � � �!���.��� ��'� ������������ ���� ���(�

������� ���� �����#� <�� ����� �������%� ���� ��!��������� � � ���� ����!���� ������� ���� �������"�

�������������� �������� ��� ����'������'��������� ���������>�� �������� � �� �������� �����������#��?�

��������'���� � ������������� ����������� ��� ����� ��������������������>�� ����������������!�����������$�

������������ � �������%� ������������ ������������#�=���������� ����� ���������'��������������������%�

����������������!�����������������!����������.� ������'�#�*��������������������'��+������'���@�

����� ��������� �����������������%����%))��#�=��%������@$��$&�������������'�+�������K?))��%��'�

$������.� ���������������� ���������7�#�#������))��:#����������%��������$���&������'�+��������)�

K%))��%�������$������.� ���� ������������ � �������� 7�#�#%�����())��:#�-������$$�@&%���'�!��%����

�����'�+�������K%))��%�'�����'���@������.� ���������������� ���������7�#�#%�����?))��:#��C�������

!��'��� ������������������!�����������!��7�#�#%�������!��������(������������������'�:%�������+����(�

Page 15 of 38Page 15 of 38

� �$�

����!������������� ����������������������'���� ������� ������������#� 7�''�:%�'��������'��� �������

������'�+�(���������������������������'�����#���

����� ��� ���������� '���� ���!���� ����� ������� 7C���� �� ��+� �''(:%� '�� ���� ���� �.���!��(�

������������������!������������������������!���������������%������������������ �����������������#�"�

.���������%� � � ���� !���������� ��� ����� ����������%� ����� ���� ���+���� ��� .�� ���������� .��?�

�������������������������������#�������������� ����� ���������������� ������������������������%�$�

�����������������.���%�'��������'����������!�������������������������������%��������.���������#��%�

��������� � � ����&����� ������� ���� ���� ��!���� ��� � ���� � � ���� ������� ��� ������� �������@�

&���������� ��!���� ��� ��������%� �������� .���� !����� ������� ��� ��������� ��������� ������'�

�����������������������������8�������������!������������ ������������������'�����������������)�

�� ������� ��.��� � � �������%� ��� ������ ���� ������� � � ����� !����.������ .��'���� ����!�����#����

*�!���������%��������+�� �����.!������������������������������������������ ��������&��������

��!��������������'�����������+��������������� ������������&�����������������������������.�����(�

�.���!���������������7&�'����������))@:#��������������������%�������� ��������������!����������"�

� ����������������#?������'����.���!��� ���&����������������������������#�.����������������?�

���������� ������ �&�����'���������������������!���������%���������������������������������!���$�

����������.���!����������������#�������������������������.������������� ���&������������%��%�

������������������������������������������������'����������!����������!����7.������F���������@�

�'@"%� &���������� �� ��+� �''�:#� <�� ���� .���� ��������� ����� &����� ����� .���� ��� �� ������!���'�

�������������������� ��� B�-��� ���������� ���� ��� �� ������!����������� ��� ��������� *)&���)�

�������������!���#�<���������� ������!��'�������� ������������&�������������������������.������� ����

.�(� ������� ��� ���� ����������� 7-�������� �� ��+� �''$:%� ���������� ����� &����� ������ ������

�������� �� �������� ������� �����#� <�� ���������� '���� ���� �����(��� ��� �.���!��� ��� ���� ��������(�

Page 16 of 38Page 16 of 38

� �%�

�����������������!�����������%� ���������(��!��������� ���&����������������.�� �����������������

���������������������������������������������'����������%�����'���� ��������������������������������

�����A������������#�(�

=��� ���������������� ���� ����(����� �."� ����� ������������ ����� ������������ ���� �� ������"�

��������������������������������������������%���������������������������� ���������������'�����?�

��'����������� ���������������� �������#� =����������������������� ����������������� ��������$�

����������������������+���������������������������������%������������� ������������������� ������%�

'�����������������������������A����������������%����� ��������������������������������������#�@�

=��� ����������������� ������� ������ ���� 7�#�#%���!��������%� ������������������������.�����%�����'�

������ ��������:� ������� ����� ���� �������� ������ ��������� .���� ��������� ���� ����������)�

��������������������!������������������(����������������.�������������������������������#�=�������

�����������������������.������.���!����������������.������������������� ������������������������

���.������!���������������������#���(�

=���������������������������������������������������������������������������� �����������!���"�

����� ���������� ��������#�-��������������������� ��� �������������!��.���� ��������� ��� ��������� ����?�

��!��������������������� ������������� 7������������+��''':���������� 7;�+������+��))":#�)�����$�

�����������%� �����������������!��� �����������������%������ ����� ������������������������������%�

�������������������������!������.������������� ����������#�,����������%���.��� � ��������������@�

7"))���%�()����:�'������'������ ������������������������������������������� ������+����������'�

������������+����%��������������'����������!��!��������.*���������������������!�����������)�

7<����������+��))?:#�����������������.��;���.��+������#%��������� ���������.*�����������������������

����������� ������%� �������� ���� �������� ������%� ������� �� ����'��� ����� ��!��!��� !��������������

��������������!�������������������������� ���������!���������������%����������������������(�

Page 17 of 38Page 17 of 38

� �@�

��������������������������������7;���.��+�����+��))%:#�,���������%���������� ����������������

���������������� ���������������������+�����'��� ���� ������������ ���������������� ������� �������

������� �������������� .������������ ��>����� ��� ���� �������� ������ 7B������� �� ��+� �))":#� <��(�

+�������'�������������!�����������%�������������������������������������������.������!�����.��"�

��������������������������������7�#�#%�������������������������������:%������������������������?�

����'��������.����!��!��#�<���������������!��������%��������������������������������������.��$�

����!�������������������������7�#�#%���$���&:%�'��������������'������������ ����������������%�

�������.�������!����'������������#��@�

=��� ����� ����������� ����� ����� ������� ����� ���� �������� �������� ���������� .�� ����.��� � �'�

�������������������������������������.����������������������������#�=�����������������������)�

���������������� ������������������ ��������� �������������������8��������%��������+�����������������

�������� ������������ ����� ����'� ���� ������ ��� ��������� ������� ������� ����� ��!��������������

����������� ����������� '���� ����� ���� ������ ������������� 7�#�#%� ����� ���� ��'� �����������%��(�

��������!���%� ���� ��������� ���� �!����.�����:#� �� ���������� ���������� ����� ����� �������� �����"�

�.���!����������� ������������������� ��� ����������������������������#� <���������%������������?�

�������������!������������������ �� ��������� ��� ���� ������ � ����.���%� ��������.������������ �����$�

����������� ���������������#�<����������%������������������������!��������������������������������%�

�������������'����������!��!�����������+������.����������������������������(���������+����������@�

������7����>�����+��'''%�"���F�-��������))�:#������������� �)=�������������������������.�����'�

�������������������������������������%������������.������������������������������������������������)�

���������� �������� ����+(����� ����������� 7E����>���� �� ��+� �))@:#� =���� ���%� �������� �������

��������� ���!��� ������� ��� +��'�� ��� �������� �������� ������ ������%� ��� ��� �����.��� ����� �����

Page 18 of 38Page 18 of 38

� �'�

���������(�������������'�����������+����������������������������������� ����������������������

����������#���

<��������%��������������������������������� ���������(��!������������� ������������(�������(�

���������� ��� �� �������� �������%� ��!��!���� �"(���� ���������� ��� �����%� '����� �������"�

.���!�������.���!������%����'�������������������������������#��������� ���� ����������� � ������?�

������� ����������������������������������.����������������� ����� ������� ������%� ����$�

��������������>�������������������� �������� �����������������������������������7.��������%�

��+��))"8��..����F�-�����))@:%� �������>�� ���� �������������� ������������ ��������#� =��������@�

��������!��������'����������!����� ����� ������ ����������!���������� ��������������������������'�

.���!���%�������������������������������%�����������!�����������!���� ��� ������!���������� ��)�

���������� ��������������������������������%������������������ ����!������������7C��>(&���������

����+��'@":#����

��(�

� :��;����������"�

C��'�����������+�&�#�"�.�����"� ������� ���������������!�������� ������!������������ �'���������?�

���.����������������7�!����.�����������AA'''#���������#���A�� �'��#����:#�=���+������������������$�

&���������+����� ������������������������'�����������������#��%�

&��������@�

=����'��+�'������������.���������� ��������.�������)�������=������������ ����'����*���������'�

<���������� �����������������B)�("%%%��B)�$"%�%��B)�'$��%��&)�'�@$�����""))�$(#�=����)�

��������������������������'��������� ������ ���������������'�������D����������������������� ��������

�����������������#����

Page 19 of 38Page 19 of 38

� �)�

��� �����

�..����&�%�-����<)��))@�*�������������������������� ���������������������������

����������� �������������� ������#�"�!��'�������������������)���.�����&���������7���(�

����'��&,<��)#�))%A����?"())@(')''(@:#��"�

����������,%���������%�,�������"%�,�>>�����%�=���������.%�,�������&%�.������,��'@��?�

.������������������������ ������������!������������������������������ ����������.D����#�$�

1��������������(��)%(��"#�%�

-�+���&"��'(@�=����!�������� �.��������������#�<��� /�������7���������������������#�#�@�

B�������:%�B#"#����-����7��:���#�$�(�%%#�,� ����-��!������������%�$�����#�'�

-��������"%����)��������.%�&�.������B��''$��������������� ���������*)&������������)�

�������.��������������������������������������������.����������������� ��������������!������

���������������#�<���������4��������)*���'((��)�#����

-��.���&%�&��.����,�%�E��'��������;%������%�=�������)%�*������"&��))���������������������(�

������� ������(������� ��+������ ��� ��+���� ���� ������(������� ������������ � � �+����"�

������ ������#�����������������4������������������������((�")$%(")%�#��?�

-D���������%��������-%�,�����%�-��������B;��))$����������!���������� ����������%� ���������$�

������������������%������������������������������ �������'������������#�<����������%�

1�������� �������������������#���������()�(%'@((@)�#��@�

-�������,���''?����������!��������������������������������!����������� ������#�=����'�

P��������"�!��'�� �-�������+,��"�(�$"#��)�

-�������,���))"�����������������������������������Y�<���������2����������2�������)(��@)(���

�'�#����

Page 20 of 38Page 20 of 38

� ���

.�������-%�����������'@"������������� ����� �����������������������%�������������������������

��������������������%���������.���������������������������%����������������������������

�����(��������������� ��������������#�4��������0������>��)?(��)#�(�

.�������&%����������&.%�-����<)��))"�E����������������������������������������������"�

7�������:���������#������������2�������/�#���������(��((�$#�?�

&�����������%�)�D�'�+��)&%����!�+�.�%�$�������&��''��"��������.�����������$�

���������������������� ������ �������������������������� ���%���������������� �����B�-���%�

��������#�4���������>���%(�(?#�@�

&���������&�%����-������B%�E�����������'@(����������!���������� ��������'�

��������������������������������������������������������������������(����������'����#��)�

1�������� �������������)?��?(()#����

&�������&,%����������.���))?�.����������� ����(����������������������'�����.��������������

������������������� ����#�3�$�����������������?+�()$((�"#��(�

&�'���&$%�-�.���+���,��))$#�*�������������������������������������������!�������� � �������"�

�������������7#��������������:#�2����������2����������+>�?('(?"$#��?�

&�'���&$%�)��������&�%�<������&;%�-�.���+���,��))@�� ����� ���������������������������������$�

�������������������������������������������������#�4��������������������(��"��(�"��#��%�

,��������%�-������$%�E��Z>�>��%�RZ��������))�����������������������������������������@�

�.=�A������������������������� ���������������#�#��������-(�?%($�#��'�

B�������"E%�-����!����$%�����!��$$%���..����$��))"���!����������������������������������������)�

������������ �������������������.��������������>���������*�����������=���� ���������� �������

��������������!������������������������������#�2�����2������#�������2�����2���������

)����?�(�?@#��(�

Page 21 of 38Page 21 of 38

� ���

B�������%���������)%��+�!������$=%�.�����������&)��)))��������������.����������!�����������

� �.��������������������� ������������������%�������������������������� ���%��������.�����

�7��:%�<��%����������%����� ����������������������������'����#�1��������1���������+��@%%#�(�

��������)%�B�������%��+�!������$=%�.�����������&)��))���������������.����������!���������"�

� �������������������%���������������%�������������������������'����#�1�������1������������?�

-,(��?((?#�$�

���������)���''��*��������������������#������������������3���������>,�(?J%�#��%�

���������)%�,@*�����&�%�)��'��������))%�.�������������+�������������� ���������������@�

����.������������#�<��������� �������������)(>��@%(�'@#��'�

���������)�%�"������-%�)��'��������))(�������+'��+�'�.����������������������.����������)�

���������%����������������������#�4����2/�.��4����������$"'($$�#����

������;%��������%�;���+��)%�,+���*��''�������������������� ���������������������������

�������������#���������<��������������������2��������!�������/�1��������/��(�

�������������*��@@?(@'�#��"�

<�������%�)����=%�-������=%�-������%�)��.�����%�*�+������&%�=�D������B%�,+��������?�

�))?�$���������!�������������������������������� ������������������������������������������#��$�

1���#������������'%(()%#��%�

;����&�%�"�����).%�)��=%�"����B%�;�����=�%������+��&�(��%�,�+����<���)))�������������@�

���������� ������ �����!������������#�2��/������#�������*�$%(%(#��'�

;�+��E%�&D���D�!����&%�.!�D����B%�&�!���!����E��))"�� ����� ����������������������������������)�

����������������������������������������������#�<��������� $���������2��������,+�"��?(���

"�()#����

Page 22 of 38Page 22 of 38

� �(�

$���B%�.���������))$�&�������������������� �������������������������������� ����'������

!�����������������.���������!����Y����������� �������������*+�$)($(#���

$�����&"%�&�'���&$%�-�.���+���,��))$�='����( ��(������������������������������������(�

�������������������������#�#������� ��������������,���$"(��%$#�"�

$�!����)�%�)���������*%�& ��$;��''"�&���������������������������� ����������%����������?�

���������������������������������+�#��������#������2������>-��?(("#�$�

$�������B�%�&��������&&%������������%�C������B%���>�������&B��))?�������� ���������������%�

��������������������������������������� �����������������(.�������������������������#�@�

�������������)�*�(%@�((%')#�'�

*�+���*%�,����%�=�������=%�����+�=%�=�+����=%���������;%�=�����%�;����=%�;���������)�

�%�-���=%�;��+�'��=%�<����)%��������&%�<'���'���%��>+��=%��������%�*�����=%����

)�>�����)%�*���+�'��=%��.���������))@�=�������������������������.�������������������

����������������������#�4�����,�(�%(��#��(�

*������B=%�$�+����&%����+���($������$%��������'@"�.�������������������������������� ��"�

���������!����.�����������������������'����#�1�������������!������������)�()�((�'#��?�

�������)%��D����,��))?������������������� ������������������������������������ �����$�

7&���(�:���!����������������#� $���������/�����������,�?@�(?@%#��%�

"�����.����=%������ �&��'')���������������� �������������������<#�.������%����������%�����@�

.���Y�<���������2����������2�������>��'?(��$#��'�

"�����.����=%������ �&��'').��������������� �������������������<<#���!������������)�

������������#�<���������2����������2�������>���%(�('#����

"���&%�-�������&&��))��)����������������������!���������������B�"��������������������������

Page 23 of 38Page 23 of 38

� �"�

�������������������B=�(%�B�"��������#������������������������������#�<���������2������������

1���������++���?�(�?@#���

����>�")%�)����&.%�"������"&%���������<%�����.���))%�"������>�.��'''�)�������������������(�

������������������������������������'���������������������������������������#�8�� 2�<������)-�"�

�?"%(�??$#�?�

���������%�B����)%�$��>���%�*������B%�,������,%�������������%�"���������)�%��������������'''�$�

$���(�������������������������� ������������������������������������������������������%�

���������!���+�<�����������������������1����������������������-)�""�(""@#�@�

���!��+��".%�C�������$%���������)�%�)���+��-%�������)"%�;������&"��))(�<� ������� ��'�

������������������������������������������!���������>��������������������7#�������)�

�����������:#���������<���������������������*,��%(��#����

-�.���+���,��''?����������������������������������������� ����������.�������#��<��� $������������

�����������'�3����2������4����������8������%�&#C#�-�����F�E#-#�)������7���:%��(�

.�������'%���#�?((�%'%�.".������%�-����"����#��"�

-�.���+���,%�&�'��� &$%�B��� �����E=%�)�������� &�%� $����)�%�"����B�%� <������&;��))"��?�

� ����� �����������������������������"(�����������&��������������������� ������ �����������$�

���������������������#��������������4.�X��/�����������������),)(�""((""%#��%�

E����>����,&%�=�����(,�� ���.%�"��������B%�)����>�*%�.�������.%�=������.��,%�E����>������@�

B&%����[�(,���\�)��))@�.���+�����������������������������������������������������������'�

�����������������������������������������+���������!��������������Y� �������������)�(��"?"(�)�

�"$�#����

Page 24 of 38Page 24 of 38

� �?�

E���.������C%�E���������%�$�������"%�.���������B��'@����������%��������������������������

!����������� �����������������!��.���()��%��.=��������������#�!������������<�����������

�����������������2������)+�((�(#�(�

E���&��������%�;��+�� �B�%���!���D��&���''@��.������� ����������!����������������������� �"�

���������������������������������������#�1�������������!������������)>�$�(($(�#�?�

C��+���-"%�-����"%�*����&�%�C����B.%�C�..�&&��''%����������!��������������������������$�

� ����!������������������#�<���������1�������� �����������������#���������?��")�?(")�'#�%�

C������B.%�&��������&&%�.���+��<&%�$�������B�%���>�������&B��))%�"��� ������������������ �@�

�������������������!��������������������������#� �������������)�(�(�(('#�'�

C����R*%�$�'���)B%�*��)�%���������%�E�����)=��))"�<����� ����������������>������� ��)�

�����(��������������!���7<�.:����.���������� �������������B���.�������� ����� ����������

������>������� ����������������� ����������������������������������������7*��:��������#����

2#1�2��������������>��$?#��(�

C����=�%�)���&�%�-��.����B%�B��������%��������&�%�-��+���.%�-������.��''(�.�����!�������"�

� ������������(��������!���������������������#���������<���������������������*>�@"$(�?�

@?%#��$�

C��>(&�������%�C�!���"�%������ �&��'@"���������������� ����������������������������������#��%�

*���'��������� ����+)�(�$((�'#�@�

��

Page 25 of 38Page 25 of 38

� �$�

&������������

����������� �������������������������������� �� ������������ �������������������� ���!��"�������

��"���� ������� "� �#����� $���"�� ��"����� %���� ���� ���� ���"� ���� ��"�� ���"���� ������ �&�(�

%��'������(������������ �����������������������������)�����������(�����������"�����*� �+�"�

�,� -� .��� ,���/� ���� ����� ���� ���0��� �������� ��� ���� 1������2������ ��� �� ������ ����������������?�

���� ����� ������ ����� ������ ���� ���� ���� � ���������� 3������������ ���� ����� ����� ����$�

����������� ��������0�����������������������������3�������������� ����������������������������%�

��!����������/������ ��1��!��@�

������������ ��������������������"������ ��1��!�����1���� ��"�2�����"�����������"� �#���������'�

4���������5�6�����������1��� �����"�����"��������1���������"��������%����(��������#��������!��)�

���� �&� %��'�� ��� 7�5�8�/� ���5���� ���� �8�57�� ��������� ����"����� ,���/� ���� � ��1��!� ���� �������

���0��� �������� ��� ���� 1������2������ ��� �� ������ �������������� ����5� 6�����������1�� "�������

� ��1��!�� ����������&�%��'����������3������������� �����������1�� �"�������� ��1��!������/������(�

������������������ ���� ���� ���������0������������ ������ ������������3������������������������"�

������������� ������!����������/������ ��1��!������9�����������!����%��� ��������������"������?�

� ��1��!�1����0�����1����� ���&�%��'���������9�"���������%����"���� ��������������"��� �����$�

�,:)�������%���0!������������������)�� �����������������"�����*� �+����"��������������"������%�

;�<&�&=/�;;�<&�&����@�

������ ������ ����� ��������!�������������������������(����������3��������"� ������!��%�����'�

����!2��� ����� ������������"�+� �=�&�� ������������"����� ����� � � ������� � ������������������)�

�������������!� ��� ������ ������ �(��� ��� ��� ������ ������������� ���� 3�0��� ��� ������ ��1��1��� ������

��1����"���/��������!������������"���0����"����� �"" �����������/��������������!��(�������� ������

7�5�8��������5������<&�&=��� ������� ��� �"���������%����"����0!� � ���������������(�

Page 26 of 38Page 26 of 38

� �%�

������ �� ���� �� ��� ����� ��!�� ��� ��������������������(����������3��������"� ������!��%�����"�

����!2��� ����� ������������"�+� �=�&�� ������������"����� ����� � � ������� � ������������������?�

�������������!� ��� ������ ������ �(��� ��� ��� ������ ������������� ���� 3�0��� ��� ������ ��1��1��� ����$�

��1����"���/��������!������������"���0����"����� �"" �����������/��������������!��(�������� ����%�

�8�57��������5������<&�&=��� ������� ��� �"���������%����"����0!� � ���������������@�

������ �� �(��������� ��1���� ����� >������������ ?4���� ������4��� ���"���� 0!� 3�#"����'�

#63�$96�)�� �����(���������"����*� �+��,�-�.��� ������� ��� �"���������%��"���()�

0!����%�!��,:)�/������%��0!���������������;�<&�&=/�;;�<&�&����(��

Page 27 of 38Page 27 of 38

Page 28 of 38

Page 28 of 38

Page 29 of 38

Page 29 of 38

Page 30 of 38

Page 30 of 38

Page 31 of 38

Page 31 of 38

Page 32 of 38

Page 32 of 38

Page 33 of 38

Page 33 of 38

Page 34 of 38

Page 34 of 38

Page 35 of 38

Page 35 of 38

Page 36 of 38

Page 36 of 38

Page 37 of 38

Page 38 of 38