Identifikasi Secara Cross-Reactions dan menetralkan Antibodi monoklonal Manusia terhadap Hepatitis C Protein E2 Virus

Mario Perotti, Nicasio Mancini, Roberta A. Diotti, Alexander W. Tarr, Jonathan K. Ball, Ania Owsianka, Adair, Arvind H. Patel, Clementi Massimo , dan Roberto Burioni1Laboratorio di Microbiologia e Virologia, Universita Vita-Saluteâ San Raffaele, Milan, Italia; Institut Infeksi,Imunitas dan Peradangan dan Divisi Mikrobiologi, University of Nottingham, Queen Medical Centre, Nottingham NG7 2UH, Amerika Kingdom2, dan Unit Virologi MRC, Institut Virologi,Universitas Glasgow, Jalan Gereja, Glasgow G11 5JR, Amerika Kingdom3Diterima 10 September 2007/Accepted 29 Oktober 2007

Sudah diterima secara luas bahwa antibodi memainkan peran penting dalam pencegahan dan pengobatan infeksi virus dari manusia, termasuk virus RSV (16), virus rabies (34), dan virus hepatitis B (35) infeksi. Sebaliknya, peran pelindung antibodi selama infeksi oleh beberapa virus RNA persisten belum diterima secara luas. Namun, baru-baru ini telah ditunjukkan bahwa anti-repertoar antibodi HCV dapat menetralkan dan cross-reaktif klon yang tersebar dalam mayoritas antibodi molekul yang memiliki manfaat yang minimal untuk tubuh (8, 9, 25, 39,36). Paralel analisis baru-baru ini menunjukkan bahwa antibodi memainkan peran penting dalam fase yang berbeda dari sejarah alam Infeksi HCV (3, 14, 15, 19, 30, 31).Dalam studi ini, anti-HCV E2 monoklonal antibodi (MAb) e137, yang kloning sebagai sebuah fragmen Fab tampilan fag dari immunoglobulin G1(IgG1) cahaya-rantai repertoar dari pasien yang terinfeksi (7, 11).Kegiatan E2-pengikatan Fab e137 dihambat oleh pasien yang terinfeksi dengan HCV genotipe yang berbeda (, 9 25, 26), menunjukkan bahwa MAb manusia dapat mengenali protein E2 dari berbagai genotipe HCV dan subtipe.Dalam rangka untuk lebih menentukan luasnya e137 reaktivitas silang,kami menggunakan ginjal epitel manusia (HEK) 293T sel mengekspresikanE1-E2 dari genotipe yang berbeda (23) HCV). Oleh karena itu, sebagai alternatif strategi untuk pemetaan epitop yang diakui oleh e137, kita digunakan sebuah uji kompetisi ELISA dengan panel mouse dan MAbs tikus diarahkan terhadap epitop yang dikenal sebagai 1a genotipe HCV E2 .

Identifikasi anti-virus hepatitis C (anti-HCV) klon antibodi manusia dengan aktivitas luas menetralkan adalah penting untuk lebih memahami interaksi antara virus dan tubuh dan untuk rancangan suatu efektif pasif immunotherapy dan vaksin yang efektif.Identifikasi monoklonal manusia Fab (e137) mampu mengikat HCV E2 glikoprotein dari semua genotipe HCV tetapi genotipe 5. Hasil dari antibodi persaingan pengujian dan pengujian reaktivitas untuk alanin E2 protein mutan menegaskan bahwa epitop e137 termasuk residu (T416, W420, W529, G530, dan D535) yang sangat banyak di seluruh genotipe HCV. Fab e137 Dinetralkan oleh HCV genotipe pseudoparticles bantalan 1a, 1b, dan 4 protein E1-

E2 dan pada tingkat lebih rendah, genotipe 2b. Fab e137 juga mampu menghambat sel kultur HCV-tumbuh (genotipe 2a).

Menariknya, di antara genotipe yang diturunkan 2a E2 urutan belajar di tulisan ini (UKN2A1.2, UKN2A2.4,dan JFH-1), mutasi dari treonin untuk serin pada posisi 416 hadir hanya pada isolat tidak terikat dalam uji mengikat dianalisis dengan pemilahan sel fluoresensi-diaktifkan (UKN2A2.4), sehingga menegaskan bahwa mutasi ini memainkan peran penting dalam kurangnya mengikat untuk jenis virus ini e137. Memang, T416 cukup kekal antara genotipe E2 yang berbeda, yang selalu hadir dalam genotipe 1a, 1b, 2b, 3, 5, dan 6. Namun, penggantian T416S telah dilaporkan pada 59% urutan E2 berasal dari genotipe 2a dan di 40% dari urutan E2 berasal dari genotipe 4 (37).

Sebelumnya telah diketahui bahwa e137 mampu menetralkan infeksi pseudoparticles berasal dari vesikuler mengekspresikan stomatitis virus E2 dari 1a genotipe HCV (10).Namun, kekhawatiran tentang keandalan stomatitis vesikuler virus model sistem (6), bersama dengan reaktivitas E2 dilaporkan di sini, mendorong kita untuk mendefinisikan aktivitas menetralkan dari e137 menggunakan strategi alternatif. Pertama, Fab e137 Aktivitas diuji terhadap pseudoparticles berasal dari leukemia murine.virus menampilkan dimodifikasi dan fungsional full-length E1-E2 protein dari semua genotipe HCV. Netralisasi pseudoparticle Analisis dilakukan sebagaimana telah dijelaskan sebelumnya (4). Pendekatan ini menegaskan bahwa e137 adalah penetralisir kuat HCV genotipe 1a, dengan aktivitas netralisasi 50% (50% konsentrasi hambat [IC50]) pada konsentrasi 5 g / ml . Selanjutnya, saat diuji pada konsentrasi tunggal dari 15 g / ml, e137 mampu menetralisir infektivitas HCVpp bantalan E1-E2 genotipe 1b, 2b, dan 4 sebesar 25%, 20%, dan 75%, masing-masing . Meskipun e137 adalah kloning dari seorang pasien HCV genotipe 1b-terinfeksi, menetralkan kegiatan HCVpp menampilkan E1-E2 dari 1b adalah genotipe lebih rendah dari pseudoparticles menampilkan E1-E2 genotipe 1a. Ada kemungkinan bahwa perbedaan dalam hal kepadatan e137 epitop pada permukaan pseudoparticle mempengaruhi menetralkan kegiatan e137. clone cross-reaktif dan lintas-menetralkan antibodi manusia dihasilkan selama alami infeksi HCV. Antibodi ini diarahkan terhadap epitop konformasi berpusat pada daerah E2 HCV dilestarikan dari aa 412-420 dan aa 528-535 dan karena itu wilayah hipervariabel luar 1 (HVR1). Yang penting, daerah diakui oleh e137 menunjukkan variabilitas rendah tingkat dari HVR1 tidak, dan beberapa amino E2 asam residu penting untuk infeksi HCV juga penting untuk e137 mengikat. Secara khusus, mutasi ini menghasilkan residu dapat melarikan diri dari e137 mengikat varian, tapi secara paralel membatalkan infektivitas HCVpp (29). Data ini menunjukkanmutan virus yang dapat melarikan diri e137 bisa memiliki mengurangi kapasitas replikasi. Untuk saat ini, MAb hanya mampu bereaksi dengan semua genotipe HCV AP33, mouse MAb yang mampu netralisasi ampuh HCVpp mewakililuas berbagai genotipe HCV (28). Dua hal yang menarik adalah bahwa epitop diakui oleh e137 sebagian tumpang tindih dengan dari AP33 dan bahwa itu adalah luas antibodi penetral lintas di alat tes pseudovirus berbasis netralisasi. Memang,

e137 adalah mampu menetralisir HCVpp bantalan E1-E2 genotipe 1a, 1b, dan 4 dan pada tingkat lebih rendah, 2b genotipe. Selain itu, e137 adalah mampu menetralisir HCVcc pada konsentrasi lebih rendah dari AP33. Terutama, AP33 adalah imunoglobulin full-length, sementara e137 adalah fragmen Fab, dan aktivitas molekul Fab mungkin peningkatan dalam format imunoglobulin keseluruhan (22, 38).Jika kegiatan HCVcc penetral menjadi proyeksi di vivo menetralkan potensi dan peningkatan format IgG1 netralisasi Fab aktivitas dengan hanya 10 kali lipat, sebuah pasif administrasi MAb IgG-e137 diturunkan dengan mudah bisa mencapai tingkat serum berpotensi menguntungkan bagi pasien(2). Selain itu, dengan menggunakan e137 dalam kombinasi dengan menetralkan lain antibodi akan mengakibatkan peningkatan dari penetral kegiatan dan dalam memperluas panel HCV genotipe dinetralisir. Meskipun mAbs beberapa manusia terhadap HCV telah dijelaskan, bukti dari reaktivitas silang luas masih terbatas.Selain itu, uji klinis baru-baru ini mengevaluasi penggunaan MAb manusia diarahkan terhadap E2 HCV sebagai pendukung dalam mencegah infeksi ulang dari pasien dengan transplantasi hati untuk tahap akhir hati HCVpenyakit (32). Sidang menunjukkan kemanjuran terbatas pada pasien menerima dosis yang sangat tinggi, ini bisa disebabkan kenyataan E1-E2 dari 1a genotipe pada 20 G / ml (13), dosis sulit dijangkau di imunoterapi pasif, meninggalkan ruang untuk harapan bahwa antibodi yang kuat mungkin bisa menimbulkan efek yang menguntungkan dalam pengaturan klinis yang serupa. Secara keseluruhan, ketersediaan mAbs cross-reaktif dengan aktivitas penetralan kuat (i) memungkinkan pemahaman yang lebih baik dari interaksi virus-host, (ii) memberikan kesempatan baru untuk mengembangkan antigen berpotensi mampu mendatangkan luas menetralkan respon imun, dan (iii) dapat membantu dalam pengembangan sebuah imunoterapi pasif efektif untuk infeksi HCV.

Sumber : http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed

Tanggal :18-November-2010

Nama :Firstiafina Tiffany

NIM :G0010081