Galanin overexpressing transgenic mice

12
Galanin overexpressing transgenic mice Jacqueline N. Crawley, 1 Elliott J. Mufson, 2 John G. Hohmann, 3 Dawit Teklemichael, 3 Robert A. Steiner, 3 Kristina Holmberg, 4 Zhi-Qing D. Xu, 4 Karin Hygge Blakeman, 5 Xiao-Jun Xu, 5 Zsuzsanna Wiesenfeld-Hallin, 5 Tamas Bartfai, 6,7 Tomas Ho È kfelt 4 1 Section on Behavioral Genomics, National Institute of Mental Health, Bethesda, MD 20815 USA, 2 Department of Neurological Sciences and Rush Alzheimer's Disease Center, Rush Presbyterian-St. Luke's Medical Center, Chicago, IL 60612 USA, 3 Department of Obstetrics and Gynecology & Department of Physiology and Biophysics, University of Washington School of Medicine, Seattle, WA 98195-7290 USA, 4 Department of Neuroscience, Karolinska Institutet, S-171 77 Stockholm, Sweden, 5 Section of Clinical Neurophysiology, Karolinska Institutet, Huddinge University Hospital, S-141 86 Stockholm, Sweden, 6 Department of Biochemistry and Biophysics, Karolinska Institutet, S-171 77 Stockholm, Sweden, 7 The Harold L. Dorris Neurological Research Center, Department of Neuropharmacology, The Scripps Research Institute, La Jolla, CA 92037 USA Summary Galanin overexpressing transgenic mice GAL-tg) were generated on two different promoters. Both lines of GAL-tg displayed high levels of galanin in the hippocampus and reduced sensitivity to seizures, as compared to their respective wildtype littermate controls WT). Performance deficits on learning and memory tasks, impaired long-term potentiation, reduced hippocampal excitability, lower evoked glutamate release, and reduced numbers of choline acetyltransferase immunoreactive neurons in the horizontal limb of the diagonal band were detected in GAL-tg as compared to WT. Changes in sensitivity to nociceptive stimuli were demonstrated in one line. GAL-tg represent a new model for investigating the biological actions of endogenous galanin, and for testing novel therapeutics based on galanin receptor ligands. ß 2002 Elsevier Science Ltd. All rights reserved. INTRODUCTION Galanin was discovered almost 20 years ago in the laboratory of Viktor Mutt at Karolinska Institute in Stockholm, Sweden Tatemoto et al., 1983). The N- terminal sequence of this 29 amino acid neuropeptide 30 amino acids in humans) is highly conserved across species reviewed in Ho È kfelt et al., 1991; Bartfai et al., 1992; Crawley, 1995). More recently three galanin recep- tors have been cloned reviewed in Iismaa and Shine, 1999; Branchek et al., 2000). Immunocytochemical local- ization of galanin in the mammalian brain demonstrated a widespread distribution in the rodent peripheral and cen- tral nervous systems, with high concentrations of galanin in hypothalamic nuclei, ventral forebrain, amygdala, hippocampus, brainstem and spinal cord reviewed in Ho È kfelt et al., 1991, 1998; Merchenthaler et al., 1993; Pe  rez et al., 2001; Counts et al., 2001). Coexistence of galanin within the same neuron as a ``classical'' neuro- transmitter was detected, among others, in the rat nora- drenergic locus coeruleus, and to a lesser extent in neurons in the cholinergic basal forebrain, serotonergic dorsal raphe, dopaminergic arcuate nucleus, as well as coexistences of galanin with other neuropeptides includ- ing cholecystokinin in spinothalamic neurons and vaso- pressin in hypothalamic neurons reviewed in Ho È kfelt et al., 1991; Merchenthaler et al., 1993; Holmes and Crawley, 1995). Coexistences differ across species Benzing, 1993; Counts et al., 2001). Exogenously administered galanin has several major physiological and behavioral actions in laboratory animals reviewed in Ho È kfelt et al., 1991, 1998; Crawley, 1995; Wrenn and Crawley, 2001). In the spinal cord, gala- nin has complex actions on pain sensitivity, including attenuation of C-®ber pain transmission and neuropathic pain reviewed in Xu et al., 2000; Liu et al., 2001). In the rat hypothalamus, galanin induces feeding in satiated rats reviewed in Crawley, 1999). In the pituitary, galanin in- duces the release of growth hormone and prolactin reviewed in Merchenthaler et al., 1993; Wynick et al., 1998), and inhibits the evoked release of corticotropin Neuropeptides 2002) 362±3), 145±156 Special Issue on Transgenics and Knockouts with Mutations in Genes for Neuropeptides and their Receptors. ß 2002 Elsevier Science Ltd. All rights reserved. doi: 10.1054/npep.2002.0891, available online at http://www.idealibrary.com on 145 Correspondence to: Jacqueline N. Crawley, Ph.D. Chief, Section on Behavioral Genomics, National Institute of Mental Health, National Institutes of Health, Building 10 Room 4D11, Bethesda, MD, 20892-1375 USA. Tel.: 301 486 7855; Fax: 301 480 1164; E-mail: [email protected] Received 2 February 2002 Accepted 3 March 2002

Transcript of Galanin overexpressing transgenic mice

������� ���������� ���� ���� ����

��������� � � ������� ������� �� ������� ��� �� ������� ����� �� �����������

!�"� � #� $���� �� % ����� ����"� &�' (��)*�& �� +��' %� � ��&&� ,�� ����-

+���)�� +��- (��.��� /�������0)������- ����� ,� �����1�2 ����� ��3 ����'

�������� �� ����� �� ��������� �������� ��������� �� ������ ������ ������� �� ����� �� � ���!� ����� �� ��� ���"���� �������� ��� #�� �$���� %�

������� &���� � #�� ' ��()�� ���*��+ ,�-�%� ������� &���� � &���"�� �, .�.�� �� � /��!� ����� �� 0(���� ��� ��� �)������") 1 ��!� ����� �� ')�����")

��� ��!)����� ����� ���) �� 2����"��� ����� �� ��������� �������� 2 3��3�*4�3� �� � 5��!� ����� �� ��� ��������� 6� �����-� ����������� �*�4� 44

����-���� �7����� �������� �� &������� ��� �!)�����")� 6� �����-� ����������� ������"� ����� ���) ���!����� �*�5� �. ����-���� �7����� .��!� ����� ��

�������� ) ��� ��!)����� 6� �����-� ����������� �*�4� 44 ����-���� �7����� 48� �� ��� ,+ �� �� ��� ���"���� #���� � &���� � ��!� ����� ��

��� �!� ������")� 8� �� �!!� #���� � ���������� ,� 9����� & 3��/4 ��

������� ������� ��� �:! �����" � ���"���� ���� ;� ,*�"< 7� � "��� ���� �� �7� ����� ��� ! ����� �+ �� ����� ��

� ,*�" ���!��)�� �" ������ �� "������ �� �� �!!����!�� ��� ������ ����������) �� ���$� ��� �� ���!� �� �� ���

��!������ 7����)!� ����� ���� ���� ��� ;28<+ '� �� ����� �������� �� ��� ���" ��� ���� ) ���-�� ��!�� �� ���"*�� �

!������������ ������ �!!����!�� �:����(����)� ��7� ���-�� "�������� ������� ��� ������ ���(� � �� ������

����)�� ����� ��� ������ ������� ��� ��� �� �� � �$����� ���( �� �� ���"���� (��� 7� � �������� �� � ,*�" ��

���!� �� �� 28+ &��"�� �� ����������) �� ������!���� ������� 7� � ������� ���� �� ��� ����+ � ,*�" �! ����� � ��7

����� �� �������"����" �� (����"���� ������� �� ����"����� "������� ��� �� ������" ����� �� �!������ (���� ��

"������ ���!�� ��"����+ � ���� =������ ������� ,��+ �� �"�� ��� ���+

����������� ;����< ��;�>/<� �5�>��.

�!����� ����� �� 8 ���"����� ��� 6���-���� 7�� ��������� �� ����� �� ��� �!�!����� ��� ��� #���!�� �+

� ���� =������ ������� ,��+ �� �"�� ��� ���+

���? ��+���5@�!�!+����+��3�� ������(�� ������ �� ��!?@@777+������( � )+��� ��

������������

������� ��� ����� �� ����� �� ��� � �� �� ������ �� � � ���� ���� �� �� ������ ����������� ������� ������ � ����� �� ��!� "#$%&! �� '(�� ����� ��)���� � ���� �# ���� ��� ��� *�*�����%� ���� ���� �� ������& �� ������ ��� ��� � ���*���� � ������� �� +,����� �� ��!� "##"- .� ���� �� ��!�"##�- / ������ "##0&! � � ������ �� �� ������� ��*(� � ���� ���� ���� � ������� �� ������ ��� ������"###- . ����� �� ��!� ����&! ������������� ���(�1���� � ������� �� ������������ � ��� ������ ���� ������* ��� ���� ������ �� ��� ���� *� �*�� �� ��� ��(� �� �� ��� �������� ���� ���� ���� ����� � ��������� ��*������� ������ ���� �� � �� ���� �����������**��*��� � ������� ��� �*���� � � ������� ��+,����� �� ��!� "##"� "##$- �� �������� �� ��!� "##%-

���������� � ��� 9��A������ �+ & �7��)� '+�+ &���� ������� ��

����� �� ��������� �������� ��������� �� ������ ������

�������� ���������� �� ������ ������" �� #��� 5���� ������� ���

���3�*�/4� �� + 8��+? /�� 5�. 4���B C�:? /�� 5�� ��.5B

=*����? � �7��)DE��� �+���+��+"��

�� ���� � �������� ����

� ���� � ��� � ����

2�3 �1 �� ��!� ���"- /���� �� ��!� ���"&! /�4������ �������� ������ ��� ���� ��� � �� � 55�������66 ��� (� �������� ��� �������� ���� ��� �� �� ��� �� � �(� ��� �� ��� � ������ ��� � � ����� �4���� ����� �� �� ��� ����� �� ����� � �� ���� �� ��� ��� ��� �*��� �*����� �� � ���� ������� �� ���� ���4������� � ������� ���� ��� ��� *�*����� �����(��� ����������� �� �*��������� ��� �� ��� ���(* ����� �� ��*������� ��� �� � ������� �� +,������� ��!� "##"- �� �������� �� ��!� "##%- +���� ���/ ������ "##0&! /�4������� ����� � �� �*�����.��1���� "##%- /���� �� ��!� ���"&!74������� ��������� �� ������� ��� ���� �� ��8

*��������� ��� ������ �� ����� �� ��� �� �������� � ������� �� +,����� �� ��!� "##"� "##$- / ������"##0- 9 ��� ��� / ������ ���"&! �� ��� �*���� �� ����(��� ��� �*��4 ����� � *��� ������������ ������������������ � /(:�� *��� � ��������� ��� ��� *����*��� � ������� �� ;� �� ��!� ����- <�� �� ��!� ���"&! �� ��� ����*��������� ������� ������ ������� �� �������� ���� ������� �� / ������ "###&! �� ��� *������ �� ������� ��(���� ��� ������ � � ��� � ��� ��� * ������ ������� �� �� �������� �� ��!� "##%- 9���� �� ��!�"##$&� ��� �������� ��� ����� ������ � ��� *��

���

� ������� �� ���

��� ��� � *�� �+� �� ��!� "##�&! ����� ��� ���������������� ����� � �*���*� ��� ������ �� *������ ��� ����� ���*������ �� ��� ������ ��*���� � *����(����� �� ��� � ������ =�� �� �� ��!� "##0- /� ����� �� ��!�"##$&! ����� ��� ����� ���� ��� ������� ���� � ���(����� *��� * ��� ��� � � *���� �>��� �� �� ��!�"###&! ������� �**�� � � ������� ������ �� ��*����� �� ��� ��*���� ��� ��4���� �� ����� �.��� �� ��!�"##%- +���� �� ��!� "##0- ���� ��� ������ "##?-�, ��� �� ��!� "###- ���� �� �� ��!� ����&� ��� � �� ������* �����(���� ������ � �9���� �� ��!� "##$&! ��������@'A �4* ����� �� � ��������� �������� ���� ��� ��������� �� ���� �� �������� ���������� � *������� ��� (� *�� ���� � ������� � ������� �� +,����� �� ��!� "##B�����- +���� �� ��!� ����- ��� �� ��!� ���"&!�������(����� ������ :�� � ��� �� ������ �**�� �

��*� ���� ���� ��� �������� ����� �� ������ ������������� � ��� ����� �� A�1����� 6� ������� �/���(2�����"#$$� "##�- ����� �� ��!� "##%- .��� �� ��!� "##?&! /�(��� ����� � ������� � � �** 4������� ���� �� ���� ������� � �� ��� ���*��� � ���� ����� A�1����� 6� �� ������(������ �� ��� ����� ����� �� �� �� � � � �(���� ��� ��� ��� ��� *�*����� � � �������� �.����� ��!� "##�&! ������ ��� ������� ���� ����� � � ���������� ����� � ��� � �� �� ��4 ��� ��**��*�� ��A�1����� 6� �� ��� ���(������ �� �� ���� ��� �� ��!�"##B&! �� ���� ��� ������� �����:��� � ��������� �4* ����� �� A�1����� 6� ������� �� ���� �������������������!�� ���� ������� �**�� � � *��� �� ������� � ��� �(

����� � ��! ������� �������� ��� ����� ������ ����������� ��� ��������� �� �� ��**��*�� �������� �� ���� �� ��������� �C���� �� ��!� "#$?- D, � �� ����!� "##E- @����� �� ��!� "##E&! ������� ���������� ����������� � ��������� ����� ��� *��*������� ��������� ����� �� �� ��**��*�� ��� ��4 � ������� ���� ���� ��� <������ "##$- ������ ��� ������ "###&!������� ����� �4���� � ������� �� /A" ��� ��

�F��� �� ��!� "#$#& ��� ��*�� � ��� �����*���� � ���(�� � *��������� �� �� ��**��*�� ����� ����� � �� ��!�"##E- ��1� ��� �� ��!� ����&! ������� ��������� �� ������ ���� �� ���� ���� ��� ���� �� ��**��*�� ��*�� �*� � ���� � ��� ���� ��� ��� � ������ �������� (��1� ������� ���� ������ ������� ��������� � *�(����� � �� ���� ��1�� ��� �� �� ��1�� *������ ����(���� ��� �*������� ���� ����� � ������� �� / ������"##0- �F���� �� ��!� "##$�- D, � �� �� ��!� "##$- 9 ������ / ������ ���"&! F����� ��� ����� � ������� � �*� ����� �� ������� ���� ����� �� ��� � ����������� ����� �� � ������� ���� ��� ���� ��� ����������*������ �@����� �� ��� "##%& ������ ���� � �(���� �� ������4�� ��F���� �� ��!� "##$�&!A �� ���� ������ �� ������ � ����������� ��� ��(

����� ����� � �������� �������! ���� ������� ��

����������� ������ ���� ��! "#$ "$%

� ����� �4* ����� �� �� � �� ������ �� ���� �� ��������������� ��� ����� �� ����� � �� ��� ��� �� ���� ��� � �������� �� ������ �������� � �����*� � ���� ������� ���� ������������ �4* ��� ���� ������ �������� �� ��� �������! C �4��*��� �� ���� �� ���� ���(��� � ���� ��� �� �4* ����� � �������� ���������� ��� �� ��� ����� � �� ��� �� A�1����� 6� �������� �� ���� � ��� �� ���� *� �*�� �� �� �� ������� � �� (��� � ���� �������� � ��� �*��: �� � ������� ������� ������� ������! �� ���� � ������� ��� ���� �4� �*��� � ��� ������� ���� ��A<(��& ���� ������ ���������*��� ���� ��� ��� ���� ����! ���� �� ���������A<(�� ����� �� � ����*�������� ���� ����! �� ��� ����� �������� �A<(�� ��� ���� ���� �� @�� � ������ ��� � �� � �� ��� =���� ���� � 9�������� ��������� �=9&� ��� ������� ���� �� ������ � � �*������(��� 4����� * ��� ������� �� ��!� ���"&� * ���*���� ��� ����� �4* ����� � ��� �� �������� � �*���*�( ��� ��� �*���*� ���! ��� ���� ��� ��� ���� � ��������� ����� ���� �� ��� �/0?.<GEH ������ ���� ���! �� ���� � �������� �A<(�� ���� ���� �� ���+,����� ��� � �� � �� �� ������ ��������� ���& ��� ���� .� ���� ��� � �� � �� ������ =���� ���� �������� �4* ����� ��� ������� ���� � � *������� �� ����� ��� ��� . * ��� � �������� ���� ���� ������! ��� ���� ��� ���� ��� ���� � ��� ���� ����� ���� �� ��� � /0?.< ������ ���� ���! A ��� � ��������� �4* ������ � ������� ���� ��� ���� ���� �� H����+��� ��� � �� � �� ��� =���� ���� � ����������� ��� ��� ���� ������� ���� ��� ����� � ��� ��* ����� * ��� � ���� * ������ ���� ������ ��(� ����� � ��� �� � ������� �� ��� ���� � *������ ��/�� �� ��!� "###&! �� * ����� ����� ����� � ������ ������ � ������� �� �4* ����� ��� ��� ���(����� ���)����� �� ��� : �� �� ����� � �A<(�� �����A<(�� �=9& ��� �A<(�� ���&� �� *�������� �� ��� ���� ����� ����� ���1� ��� �� ��!� ����- +���� � �� ��!� ����-.������� �� ��!� ���"- ��� �� ��!� ���"- ������ �� ��!� ���"-����� �� ��!� ���"- +���� �� ��!� ����&!

�4�#� �54$� 6��5�76�$

58� �9: ����� ��8���

�� ���� ��� ���1���� ��� )���������� � ������� �@'A ����� �A<(�� �=9& ������� :�� ����� � � ������� �@'A�� ��� ��� � ����� � �A<(�� �� �*� �� � 9 ������� �� ��!� ���"&! 7�*� �4* ����� � ������� �@'A��� ������� �� ��� *� �� � ��� ��� ����� ��4 ������������ �� �*� �� � ����������� ������ � ��������@'A �� 9 �� �� ������� �� ��!� ���"&! �� ���� ��� ��������� *�*���� ��� �� ������� �� ����� ����� ����� � ��� /0?.<GE ���� � ��� �2�3 �1 �� ��!� ���"&!@������������� � ���� ������� *�*���� �����

� ���� &������ ' ��� � (�� ��� ��)�� �������

������� ���������� ���� ���� ���� �'2

������� �** 4������� ���� ����� ������� �� ��� � �(� ��� ������� �� ��!� ���"&! �� � ��*� ����� � �� �� ��������A<( �� �=9&� ������������� ������� �� ����� ����� ������� �� ��� ��**��*��� ��� ���� ������� ��� ������� �� ��� � �� �� ��4 �� �A<(�� ��

A

C

DG

MoI

LMI

DG MoI

;�&� � ������� ������ ��� �������� ��� ������� �� ������������ ������ ���� ��� �������� ���������� �� ������� �� �� � ����� ���� � ������ �� � ������� � � ��� � � �� �� ����������� �� $� %����� ��� �� ������� � �������� ������� ��� ��������� �� � �� ������ �� � ������������ ���� ��� �� �� ���� $��# ������ ������� �*&� �""���������+ &�, ����� ��� �- �.�, ����� ���� ��� ����� �

� ���� &������ ' ��� � (�� ��� ��)�� �������

�*� �� � 9 ���*�������� ����� �� � 9��� ��� <����� ���� =���� ���� � A �1��- H'/ ��� (� �� �&!������������� ������ ���� � ������� �� �4(* ����� �� ��� ��**��*�� � �A<(�� �=9& �� �*� ��� 9 �� ������ ���� �� C��� � "!

B

D

��������������������� �������� ��� ������ ��� ��� ���� ��� ��� ����� �� � ������� � �� ������ ! � "��# ������ �������� � ������ ������� ��� ��������� �� ���� ����� �� �������� � ���� �� � ����� � � ��� ��� � �� ������� ��� � ������ � ��� � � �� ����������� �� &� '��� "��� ()) ��� � ������� �- .��, � �� ���� ��� ����� �� � ������� ��

����������� ������ ���� ��! "#$ "$%

A

B

∗

;�&� � �, $� &��#����� ������ �"���/���� ��� ��� ��� ���� ������� �$� �������� � �� � ������ ������� � �� ����� �0�� ��� ���� �"����/���� �� ���"� ����������� � ��������� �1%� ��� �� ���� �� "���� �� ������ � � ������� �$�� ��� %�� ����� ������ "� �� � ��������� ��� ����� ������ ����� ���� ����� � ��(, ����� � ��2�, �� � � � ������ ��� "� ��#��� �� ��3 ����� ���� ����������� � ���� ��� ��� ����� � ��� � ����� ������ �"�� ����� ������ %�� ������� ���� �� ���� �4�� �$� ���� �� � ��� �� ��� ������ �� � ���� ��� ���� ��� ��"���� �"�� ����� ����� �� ���� �� ��� ��������, � ����� ��"���, �� ��� � � �� � �� ��2 �������� %�� � �� ����� � � �� ���� �"����/����, �� ���������� �� "� ���� �� ��( �� ��2, � �� � ������ ���� "� ����� �� � �������������� '��� "�� ������� 5) �� ��� � ��� $�

� ������� �� ���

�A<(�� ���& ���*����� ���� ������ � ������� �@'A ����������(���� ����� �������� ��� ���� ��� �� ���� ���� ��4� *� ����� ��4� *� �� � ��4� ��**��(*�� ������� � ����� ��� /A"I/A% ��� ���� � �C��� � �A�.&� ����� �� �C��� � %A&� ���*������ ��� � ��� ��������� ��� ����� ��*������ ����� ������ �C��� � %/& ���*� �� � 9 �� �� �C��� � %.� F& �+���� � �� ��!������ ����- .������� �� ��!� ���"- ����� �� ��!� ���"&!@������������� ������� BI# ��� �� ����� �� �������*�*���� ������ �� ����G��**��*�� ������ ��� +2</����� ���� ��� ����� ������ �*���� ������ ����� *����� � �������� ������� ������ �� ��!� ���"&! A*� ����� �� ���� �4* ����� ��� ���� �� ��� � ����� ���(���� :�� ������ � ��� ������� �� �� ������ �� ��!����"&!

�� �� ������� ������

+�**��*�� ����� � � �A<(�� ��� 9 �=9& �� � ���(��1�� � ��������� ������ ���1� ��� �� ��!� ����&! .����

����������� ������ ���� ��! "#$ "$%

��������� ���� ����� �� � ������ �� �A<(�� ���9 !F� ��� E� �� *�������(������ ��*�� �1����� 9 ���*����� ��� �4*���� �� ���� �� ��������� ������(��� �� ��� ����� ����� �A<(�� ��� �� ��� � �����:����� ���� �� ��������� ���������! ��� ����� ������������ �� �4* ����� ������� �� �A<(�� �� ������� �� ������ ��� ���������� ��� �������� ��� ������ � ����������� ��� ���� ��**��*�� ���1� ��� �� ��!� ����&! ������� ��! ����"& ���� ���� � ���� �� � ������ ������ ���� ��� � � ��� � ����� ���(���� :�� ������! ���� ������*���� ���� *��������� �4*� ������ �����1�������*�� � ��������� �� ���� :�� (/A% ��� ����*������ � ����� � �)���� ����������� ���� �� � � � ��� � �� � *�������� ��� � *������*�� ��*���� � ���������� �� ���� � �)���� ���������� ��� � ��( ����� * �������� � ��������� ������ � ����� :�� ��/ ��� �� ��!� "##$&! ��� � �)���� ���������� ��� ���� �A<(�� ���& ��� �� �*� �� � 9 �� ��� ��� ���*������� ������� ����������%0 �� ����� ���� ������������ �A<(�� ��� �� �� 9 � ���������� ���� �� �4* �����

� ���� &������ ' ��� � (�� ��� ��)�� �������

A B

C

D

vh

dh

e

sg

sg

e

;�&� � �*& ��� ���� ������� �������� � �� � ������ ��� ��, $� ��� �#�� �� ���� ����� ���� ��, &� �� ����� �0�� ��, �� �� �! �$, &���� ���� �� "���� �� ������ � � �������� ��, $� $� �� �������� ��� �! �� �� ��� �� � ����� ���������� �� ��"��� �� �� �������� ������ �� � ������ ��� �� �, � � ������ ���� �� ������ ������� ��� � �� $�� ���� �� � ��������� ���� ���� ��� �� �������� ��������� "����� � �� ��������� 6������, ��� ������� ��"���� ����� ���� ������ ����� ��� ������������ �� ������ "�� ����� ���� �� � ����� �� ������ �� �� �� � �������� �� �� ���, � � ���� "� ���� �� � �! �$�� %�� ���� �������"����� �� ������ ��� ������ ����� ��� �� �� ��� ����� ���������� ���� � � ������� � ���� ����� �� �� �� � �������� �� ��� ! ������ "� ���� �� � �! �$�� ��, &� % ���� � ��"��� �� � ���� ����� ����� ���������� �� � ����� �0�� �� �� ���, � ����� ���� ��������"��� �� "� ���� �� � �! �� �� �"�� ����� ��� �� &�� ! � ������� ��"��� �� � ���� ����� �� � �������� ��� �������� ����� ����"���� ! ��� ��� ���� ���� ���� ��������������� ��"��� ���� � � ��� ��� � �� � �������� ������ ����� ���� �� �� �� ������� � ��! �� �� ������ ����� ��� �� &�� ! ��� ��"��� ��� ���� ��"�� ������� ��"���� 7��� & ��� ����������� ����������� � ������ ��� �����"����������������� ��"���� '��� "��� ������ 5) �� ���$- ��&��

������� ���������� ���� ���� ���� �'<

������� ��������� ��������� ������ �� ���� �������������� �� ��!� ���"&! ' �*���*� ��� ��� �� ���� ������ � � "� ���� �� �A<(�� ��� 9 ���& ��������1�� ���� �� ���� �� �������� �� ��� ���� ��

� ���� &������ ' ��� � (�� ��� ��)�� �������

��**��*�� � ����� ��� ���� �� ��!� ���"&! .���������� �� � ������ ������� �����*��! ��� ����� ���� �������� ���� � �������� " ����� �� ����� � �*��(�*� ��� ������ � � � ���� �4���� �� 9 ���� �A<(��!

����������� ������ ���� ��! "#$ "$%

� ������� �� ���

��� :����� �� ���� * ���� �� � ����� �� ������ � �����(��� ��������� �� �A<(�� ���� �� ��!� ���"&! C ������ �� ����� � �*���*� ��� ��� �� ���� ������ � �� ���� �4���� �� ��� �A<(�� ���� �� ��� 9 ! ���� :��(���� � � ���� * ���� �� � ���� ����������� � �A<(�� ��� ���� ���������� �� ��4����� ���� � ������� ������� ������ ��� ���� �� ��!� ���"&! C� ��� ���� * ��(���� � ����� ���� ���� ��*��� � ��� ������ � ������������ � �A<(�� ��� �� ������ � ��� �������� ����* �������� � ������� ��*� �� ��� ��� � ������(�� � ��� ��*� �� ��� ���� ����� �� ������ � �����������������!

=�� �& �0 ���� �

�A<(�� �=9& ���*����� *� � ���� ��:��� � �� �� ���(�� ��� ��*�� � ��� ���� ������ � ������ �� ����� �1���� ���� �! �A<(�� ���9 �� � ������ �� �E����� � ���� ���� � ��������� � �� * ��� ���� �� ���� ���� � ����! ��� ���� ������ ��� � � � J�� ���� ������� � �������� � ����* ��� ��� � ���� �� ���� ������� J�� �� �� ���� � ���� J�� �� ����� ��4� ���! 9 ����� ��� �4*���� * ��� ��� � ���������� J�� �� ��� �B �� � ���� ��� ������� �1�������� ����! �A<(�� ������ � ��� ��� �4*���� * ��� ���������� �� ��!� ���"&! �A<(�� ���9 �� � ������ �� ���� $�"E� ��� �B ����� �� ��� � �� ���� ����! ��������)��� ��� ��� � ��� ���*����� �� ��� 9 � ��� * ��� ���� �� �4*����! 9 ��� �*��� � � ���� �� ��� � �����)��� ��� ���� �� ��� ��� �� �� )��� ���� � ��� *����� ���� ��� � �� ����� � ��� ������ *���� �� � � �)������ ���� ��� ������� ������ �� ��� ��� �� �� )��� ����� �� ��� �� �� ����! �A<(�� ������ � ��� ��������� )��� ��� ��� � �� ��� �� �� ���� ������� �� ��!����"&! A���� �A<(�� ���9 �� � ������ � ��� ������ ���� � �� ��� ���������! .�� �A<(�� ��� 9 ���*����� ��� �4*���� � ��1��� � ��� ���� ����������4� ��� � ��� ����� � �� ���� ��� * ������� ����*�� �� ���� ����� �� ��� ������ � ����� �� ��� ���� ���������! +���� � �� ��� � �� �� ��� � ��� ���������� ���� ��� ����� �� ��*� ���� � � �������� � �� �� ���� �� ������ ��� �A<(�� ���*����������:����� ���� � ��1��� ���� ��� 9 ������� �� ��!� ��* ���&! �A<(�� �=9& �� � � ��� � ����� �� � ���� ��������� ��� ����� �J�4��� ���� � ��������� ��������������� ������ ��� ���� ��� ���*���� ��� �� ��������� �������� ����� ��� �������� � ��� ���(���� *���� � ������� �� ��!� ���"- +���� �� ��!� ����&! �� �� �� ��� *������ ��������� ������ � ���� ���* ��� �� � ��� ��� ���� ��� ��� � ����� �� � �����! ���� ���� ��** � ��� ���� * ������ ���� �� �4* ������������ ��*�� � ������� * ����� � �� � ���� � ������*� ����� �� � ��� � � ���:��� �*����� � ��� ������� ��� � �����! A�������� :������ ���� �A<(�� �=9&

����������� ������ ���� ��! "#$ "$%

��� ��*�� �� ���(�� � *��������� �� ��**��*������� ���1� ��� �� ��!� ����&� ��*����� �� ��������� ����� ������ � ��������� ���1� ��� �� ��!� ����&�������� ���� � ��������� ��� �������� �� ��� ��**(��*�� ��� ���� ��� ��� ������� ��:��� ��������� � ������� �� �4* ����� ������� �� ��!� ���"- 9 ������ / ������ ���"&!

�� ��� �� 8�8��

���� ������ ��� ������� ��:��� �� �A<(�� �������� �� �������� ���� *� �� ������ �� ����� � �� �������� �� �������� �� *� � ��� ���� � �����( ������ ����� ������ ����� ��� �/�A &(�������� ������ ��� � �1���� ���� � ��� ������� ���� �+F.&! A����� �� C��� � B/ �A<(�� �=9& ���*����� � ������ ������� ������ ����� ��� ����� ������ ���� �� �������� � �� ��� � �1���� ���� � ��� ������� ����� ���*� �� � 9 ������� �� ��!� ���"&! ' �����*� ����� (���� �� � ������� �� ����� ������ ����� ��� ��(��� ������ ��� �� �� ��� ������ ��*���� �� �������� � ��� ������� ����� ������ ������� � ����� �! ��� :����� �� �������� �� ����� � �� �* � �������������� �� ��� � �1���� ���� � ��� ������� ����� �������A<(@"������� ��*� �����*� �� �4* ��������� ������ �A<(@" ��� �A<(@� �����*�� � � �4* ����� �� ����� ���� ���� � ��� ������� ���� �D6F����� �� ��!� "###&! ���� ���� ������ ��� �**� ��� ��� � ������:����

/�A (�������� ��� �� �J���� ���� ����� �� � ������& ���*�� � ������ �� /�A ����� � ������� ������ � ������������ �� ������������� �� ��*� � ��� �� ���� ��� ���1���� � /�A �@'A �������� �� ��� ����� � ���� �4* ������ /�A �@'A���� ��� ��� ��� /�A �@'A ����� *� ���� �� ��� +F.!C��� � B. ������ ���� � ����� ������ �� /�A �@'A *� ��� �� �A<(�� ��� �� �*� �� � 9 ���!+���� � ��� � ��� � ��������� ����� ��� �� /�A �@'A(�������� ��� ���� ������� ��� �A<(�� ���9 �C��� � BA&! ���� ������ ������� ���� ������� �� (�4* ����� ����� ��� ����� �� *�����*� �� ��� ������ �� ���� ���� ��� �� ����� � ������� ��:��� ���A<(�� ���! +���� � ����� �� ����� � ����� ����� �� �� ��� +F. �**�� � � �� ��������� �� ��� �� (�4* ����� � ������� �� ��� �A<(�� �=9&!

#9����

�A<(�� ��� 9 �=9& ���*����� ������ � �� � �� ������� � ��4����( ������ ������ �� ��� �������� *�����1�� ����� � �� � �4*� ����� ��� *�� :��� ���� ���� �+���� �� ��!� ����&! .�� 9 ��� �A<(�� �������4����� ��*���� � �� ���1�*4��� � ��� ����� ��� � �4*� ���� ����! +���� � ��4����� ������ ��� � ������ �� 9 �� ��������� �� �� �� ��� ��

� ���� &������ ' ��� � (�� ��� ��)�� �������

������� ���������� ���� ���� ���� �-�

��*� ���������� ��� ��� �A<(�� ����� � ��*���� �������� � ����� � �� � �4*� ����! ���� ��������** � ��� ���� ���� ������� * ���� �� ��4��������� ���� ������� � ���� � �� ��� �� ���������+���� �� ��!� ����&!

��"�� � 7 ������ � ���� �� � �� ��� �� ������������� �������� �8� �, ��� ����1( ������� ������ ������� ��������� ����"���� �� ���/ �� ������ ���

$� �� �9: ����� :����

������� ��8��� ������� �������

������&�6" ���� 2*5 ���� ���������������� ������������ �� ��

������:&�7� �0�� �� � (; ���� �������������� ������� �%' ��� ������� ���� �� ����

���1 (1 ��8��� ������� 1 ��� � �������

�6����� � ��, 3)))�"'����� � ��, 3))(�6���"��� � ��, 3)))�������� � ��, 3))3�

��"�� � ����� ���� ��������� ������ �� � ���� ���#�� :��������� ��� ����������� �������� �� � .�������� ���� ���������, ��� ��� ���� ������������� ���� �������� ���� �� ������ �� ������������ �� ����� ���� �� ���� ��� �� ������� ��� , ����� ��������� ��� ����� �������� �� � �������"�� � ������� ��� �� � ����� ��� ��< ���� � ��� ������ ������ ���� �� ������ �� � ����� ����"���������� ��������� �� ����� � ������� ��#�

���

�� �� ���� ��� ������� ��������� �������� ��� ��:��"� ���� ����������6����� ������� �< ������=���"�� ������� �< ������

$����� � �������� �� ���0 : ��� ��� �������� �:�������� ��� �������� ����� ����'���� ���������>������ �"������

���0 �0 ����9���� ��� ��0�����& ��������� �!��� ���������� ����/��� � �!��� ����/��� � ����'������ ����/��� � �'������ ����/��� � ����

��� �� ����� �� �� &�� �� ������� ���� � �"�����$��� ���� 9�� "���# �������� �� ����� ������6� ���� ������1�� ��� ������>��� ����� ��������1����� ���� ���������� ��� "�����'��� �����

������� ���� '����� � ���, 3))( ��� 0����� � ��� ��

� ���� &������ ' ��� � (�� ��� ��)�� �������

$��.� ��

�A<(�� � ��� ��� =9 ��� �� ����� ���*����� ���������*�������� � ����� ���1� �� ���1� ��� �� ��!� ����-����� �� ��!� ���"&� �� ����� �1�� �� ���� "! �����

� ���� �������������� �������, ������� ������� ������� ����1�(1 �8��, � ���� � ������� � ��� ( ������� ������ � "���

��>� :�����:�

'������ �� ���� �9� ���� ��������� ����"����

��' �������� ��������� ����"������������ �����

�����

' �������� ��������� ����"����� ����� �� ���� ���������&������� �����������

9� ���� ��������� ����"����'������� � ���/ ��� �� ������ ���� �����

���� � �������� �� ��� �������� ��� ����������� ���"� ����, ������� ������ �� � �������� � �� � ����� �� ! ��� ��� ��#� ��������������� ��� ���� �������� %����� ����� ���������� �"������, ��� ���� � �����, ��� �� �� ��#�, �������� � ����� ��� ��� � ������� ��� ��#�� ! �������, � ������ �������� ������� 1� ��, ����� ���� ��������� � �� ��

6�����:�

�������������%�����%�����

��������������%�����%�����

��������������%�����%�����%�����

��� �0 ���� �������%�����%�����%�����%�����%�����%�����%�����%�����

������

����������� ������ ���� ��! "#$ "$%

180160140120100806040200

WT GAL-tg

ChAT immunoreactivity

ChAT mRNA

C

0

1000

WT GAL-tg

2000

3000

Num

ber

of c

ells

Cel

l cou

nt

NSA

908070605040302010

0WT GAL-tg

Gra

ins/

Cel

l

P < 0.05B

;�&� ' ������ �� ����� �������������� �� �!� �1%� �� � ���/���� ���" �� � �������� "��� �6&$� �� ������� ��!���� ������� �������� ������� ��� ����� ��� % �"�� �� �������������� � �! �1%�- �$� % �"�� �� ������ ������ ������ ������ � �! �1%������������ ���- �� % �"�� �� ���� ����������� �! ��� ��������� ������� ���� '����� � ���, 3))(�� &�� ������������ �� ���� ? ������� ����� �� � ���� �%� @ ������������

�� ������� �� ���

��� ������ � �� �� ����� � ����� 0 ���1� �� �� 9 ���� �� �A<(�� �=9&� ���� ���� �����:����� � ���� ����� � � ��8� �� ��� �� �� 9 ���� �A<(�����1� ��� �� ��!� ����&! 2����������� �1�� ������ ���( ������ ���1� �� ���� �� � �** 4������� �� (��� � ����� � �� 9 ���� �� �A<(�� �=9& ���1� ��� �� ��!� ����&!+�**��*�� �������� ������ ���1� �� �� 9 ���� ������ ���� � �� ���� �� �A<(�� ���&� ��� ���� ����� ������ ����� * ��������� ��� ��������� � �(������� �������� ��!� ���"&! ������ ������ � � ����� �� �� ���1� ������ * ����� �� �� � ����� ������� �����4��� ������� * ���� ������� ����� ���1� ��! ���������� ���� ����� ��� ������� � ������� � ������� ����� � ���� ���� ��� ���� � �� � ������ ���1� ���� *�������� � �� ��� ������� � ������� � ���� ������(��� ������ ���� ���� ������ � ��� ��� ���������.��(A � ��� <�1������� "#$#- ��1� ��� �� ��!� ����-����� �� ��!� ���"&!

#��&����

�A<(�� ���& ���*����� �����:����� ����� �������� ��� ����� �� � *��� *� �*���� ���� J�� ��� *�� ����(� ���� � � ������ ���� ����������� �� �*� �� � 9 �� �� �+���� .������� �� ��!� ���"&! @��*���� �

����������� ������ ���� ��! "#$ "$%

�������� ���������� �� ����� �� ���� �� C ����� �� ��� � �� ���������� �� ����� � *� �� � �������:����� ����� ��� ������� �A<(�� ��� 9 ! �%0� �*�*���� ����� � ������� ���� ��������� ����� �� ����*���� �� ��� ��� ��� �������� ���� J�� ������ �� �A<(��! ���� ���� ��** � ��� �� �� ���� ��� � ��� ����� ��(����� � ����� � �4������� ��������� �� ������� �*��� � ��������� �� ��� �*���� � �9���������(+����� ����!� "##�- ;� �� ��!� ����&! �� � ���� �� ��� � �4*� �����������A<(�� ���&� �� ������� *��� ������ ��� ��� ����� ��� � ����� ���� �+���� � �� ��!� ����&� ���� � ������ �*��4��� � ��� �� � ������� �� *��� �� �!+���� � ����� �(������ *����� �4� �������� ��� ��(�������� �� ��� � ������� �� �*� �� � ���9 �������** ���� * ����� ���� � ��� ������� � ����� � ����(��� �� ��� *� �*�� �� �� ������ � * ��� � ���� ���� �;��� ��!� "##"&!�A<(�� �=9& �� � �� �����:����� ����� ��� ���� 9

����� ���� �� �� � ��� �� *���� ���� J�� ������������ �� ��!� ���"- +���� �� ��!� ����&! +���� � ���� ������ �� +���� .������� �� ��! ����"& ����� � ��������� �����:���� �� ���� �� ���� *��� �� ����� �� ��� �A<(�� �=9&���! �� �4*������� � ��� ��� �*��� �� :��(���� ������� ��� �� ��� ���=9�A<(����� ��� ������������ ��� ��� �� ��� ������ �� � ��������� ������ ��� ���� ������ ��� ��� �� ��� � ����� ���� �� ��� ������ ������ �� �4* ����� �� ����� ��� ����� � ����+���� � �� ��!� ����&� ����� ��� ������ � ���*������������ ��� ��� ��� ���� ��� ����� ��� ��� �� +����.������� �� ��! �� ��� �A<(�� ���& ��� �A<(�� �=9& ����� �� �����! ��* ������� ����� +���� .��������� ��! �����& ���� ������ ���� ���� ��� �����*����� ��� *���� *���(���� ������ � ��� �����:����� �(���� �� �A<(�� �=9& �*� �� � 9 ! ��� ���� ��*(* � ��� ��*������ ���� ������� �� �������*���� ���� �� �� ��8� � �9���������(+����� �� ��!� "##�&!

���������� ����� � �!

����� �� � ���� �� ������� ��� ��� ������ �� ��� (����� �J�4��� ���� � ���������� ��� �� ���������� � � ��� �� �A<(�� �=9& ������� �� ��!� ���"���**������� � ���� ��� �(����- +���� �� ��!� ����&!. ������ ��� � ��� � ����� �� � * ��������� ����� ��1�� ��� *�* �� �����! ' �����*� ����� ���� �� �������� � � �� ����� �� � ��� ��� ������� ���� �* ����*��� *���� ��� �**�� ��� � �� ��� ������ �� ������� �J�4� ��� ����� �J�4� �� ����� �J�4� ������ ����� �J�4� ��� *��� � ����! 74*� �� � ��(��� ��� �� �����:����� ����� ��� ���� 9 �� �� ���� F������ *�� :��� ����� �� � � �1���� ���������� �� ���� �������! <����� � ���� � � ��� �� � ����� �����:����� ����� ��� ������� �����*��! A������� ��� ��� * �*���� ��������� �� � �� �����:�����

� ���� &������ ' ��� � (�� ��� ��)�� �������

������� ���������� ���� ���� ���� �-�

����� ��� ������� �����*��! .�� ������� �� � �������:����� ����� ��� ������� �A<(�� ��� 9 �� ���� ����� �� �* � B� ����� � ���! .�� ���*� ��� ���� � ������ �� ��� �� �����*��! �� �A<(�� ���& ��� ��� �� ���� ������������ � � ������ �4�������� ��� �� ���� � ����� *� ����� �� ��� ���� �� ������ �**�� � � ������� � ����� ���� �� ��� ������ ������� � ����������� 9 !

������!���!

�� ������� ������ � ���� � �� ����� � ��������� �4* ������ � ������� ��� ������� ���� �A<(�������� ��� � � ������� ��� � ��� � � �� ���� �*��������� ��� ������ �� ����� ��! �*��: *���(��*� ����� ���� �� �A<(�� �� �*� �� � 9 �� ���� � ����� �� �� ��� �����! �A<(�� ���*����� ��� ������ � ������ ���1� ��� ����� ��**��*�� ������(��� ������� ��� ����� ��4����( ������ ��*���� � ����4����� � �� ���1� ��� �� ��!� ����- ����� �� ��!� ���"-+���� �� ��!� ����&� �������� ���� * ������� �* �������� � �4������� ��������� �� ������� � ���1� �����1� ��� �� ��!� "##$& ��� ��4���� �.��� �� ��!� "##%&!@�*������ � ��� ���1� � �������� �� ��� �� ����*���(��� ����� � �A<(�� �: �� ��� ���������� � ���� *���(��*�� ��� �������� � *������� ��� �*���� �������� � ������� ������� ���G ���� � ����� �� ��� � ������� ��*���*�� ������ �� ��!� ���"- ��1� ��� �� ��!� ���"&!�������� ��:��� �� �A<(�� � ��� ���� ��� ��� �

����� � � �������� ���� ��� *�� ������� ���� ��� ������� ������� � ����� � �4������� ��������� ��������� �� ��� ��F���� �� ��!� "##$�- 9 ��� ���/ ������ ���"&! ������� �� �4* ������ ��� ����������� ��:��� �* ����� � ��� ���� ������ � ������*������ ���� ��� �� � �� �4* ����� ������� ����� ��� � ��� �������� ���� A�1����� 6� �������!<���� � ������� �� �4* ������ ��� ��� * �� ������� ���������� ������� ��*� ���������� � ���� *(������� ��� �*���� ��:�� �� � ������ ��� ����������*��� � A�1����� 6� �������! A���� ������ ������ ���� ��� � �� ��� �?"?C �(������ * �� � * ����� ������� ����� ���� ���*���� � ���� ����� � ��������� �4* ����� �� ��� ���� ����� � ����� ����� ��������� ������ �(������� ���� � � ��� ��**��*���F��1 �� ��!� ����&!9����� A�1����� 6� *�������� ������ *��� � �� ��

��� ������� � ��� �� �4* ����� � ������� �� �� ��� �(����� )������! +���� ��� *�������� ������� �������� ���� ��� ��� *��)��� ����� ������� ������ ���.���� "#$#&� ����� ��� :� ���� � ������� � � �� �����(*������ � ������� ���*�������� ��� ������� 7H� ���� �� �&! +���� � ������� ����� ��� � ������� ���� ���� ��� ������� �(KC �� *����� ?"? � ��� ����������� * �� � * ���� ���� �F��1 �� ��!� ����& * ����

� ���� &������ ' ��� � (�� ��� ��)�� �������

��** � � ��� * *����� ���� ������ *��)��� ���� ���� �� ����� ������� �4* �����! �� ���� ������ �E���� �� � ������� ��� ���� �4������� �� ����� ����(��( �������� *��)��� ���*����� � �� ����� �* ��������� �������� �� :�� � �� ��� ��**��*�� ��� ��� ����� ��4 � ��� ���� � � : �� ������� �� A�1����� 6� ��������. ��� ��� . ���� "##"&! �� �������� ���� � ��� ������*��)��� ������� ���� *�� �������(�������� ��� �������� � �������� ���� *�*����(*������ ��� ����� �� ��� * ���� �� �������������� �F��1 �� ��!� ����&! ������� ��**��*�� �*��4 ������ �4������� ��������*����� �. ��� ��� ������ "##"&� �� �� *������ ���������� ��� ������� ������� �� �4* ����� ����� �� ���� �4� � ��� � *�� �����! �� ���� �� ��� ������� ��� ���� �� �� ��8� � �� ���� �� ��� �� ������������ �� �*( �������� � ������� ��������� � ������� ��+,����� �� ��!� "##B� ����- 2�������� "##0&! �� ��� ��� �� ��*������ ���� �� ����� �� �������� �� ������� ���� ����� ��� 2FA22 ��� ��� �� ������ ���� A�1����� 6�������� �* ����� � ��*��� � ��� ��� ������ �������� �� ����� A� ������! �� ���� ��� �� ���� �� ������� ������� ������� ������ ��� �* ����� �� �����*� ����� �� �*�� ! �� ���� ��� �� �� ���� ��������� ���� ��� �� �������� �� �������� �� ������� �� ���� ����� AF ��� �� ���� ��� ��� ����� *�������� ��*��� �/���� �� ��!����"&! ���� �4���� ������� �� �4* ����� ��A�1����� 6� ������� �J��� � ����:��� ���� � ��� ���( ������ ����� * ���� ��� � ���� �4���� ������� �� (�4* ����� ����� � � ������ � ������� ���*���� ������ � �� ���� �����!�� �� ���� ������ � �*� � ��� ������� *�����*� �

��� �A<(�� �=9& � ��� ������� *�����*� � � ������������ ����� ��� ���� �� ���� ����� �9���� �����& ��� * ������� �D6��� � �� ��!� ����&! ����������� ������� �� � �* ��� � ��� ���(��*������ ���(���� � ��� � �� ���� ����� �����:��� � �����*� ����� "������ ��� �� �� ��� B�����! ��� ���� � ������������� ���*����� ��*�� ����� �� ��**��*�� ���(�� �*���������� ������� ��� � ���������������� ������ �� ��� ��**��*��! ���� ��� ��**��*�� ���������� *�����*� �� ����� ������� ��:���� ����**�� � � �� �� ��� ���� �� ���� �� �� ��� ������� �� (�4* ��������� ��A<(�� =9&! +���� � ��� ������� ���(������ ������(��*������ �� ����A<(������ ���� �� ���������� �� �� �� �� ��� $����� ������� �� ��!� ���"&!������� ���� ������� ���*����� � ��� � ����� �����(

� ����� ��� ����� ������ �/�A & ���� �� ��� ����� � �(� ��� ������ ��*��� ��� �� ���� ���� � ��� ����������� �D6��� � �� ��!� ����&! ���� ���� � /�A (����� (������ ����� � �� ��� ����� �� � � ��� �� ��� �A<(���=9&� ��� ��� ��� �A<(�� �=9& ����� ��� ����� � �/�A (����� ������ ��� �� �� ��� � �1���� ���� ���� ������� ���� ������� �� ��!� ���"&! �� �*������� ������ � � ��� ������� ���� ������� ��� �A<(�� �������

����������� ������ ���� ��! "#$ "$%

� ������� �� ���

���� ��� � �� �� *����� ���� ���� � ������� ������ �� ���� ������� ��������� ��� �� ����� � ����� � �� �������� �� ��� ��! 7���� � ��� ������� � ������������� �**�� � � �� ��� ������� � ������ �*������ ��� ����� �� ����� � �� ��� �� ���� �� ��**��*��������!�� �� ���� ������ � ��� ���� ��� �� ���� �� ����� �

/�A (����� ������ ��� �� �� ��� ������� ����������� �� �� ��� � ��� ��� � ����� ��� �� ��� ��������� ��� ����� � � *�����*� ��� �������� � �*��:����� �� �� �� �! ���� ��������� ��� ������� � ���������� ���� ������ �� � ������ �� ��� ����� �/�A ��� � �A ����� ������ ��� �� �� ��� ������ �� ��� �D6��� � �� ��!� ����&� ��� �� ����� � �� ������ �� �������� ��� �� ��:���� *?0 ��� � *��� ��*� �' @& ��� �� ��!� "###&! ���� �� ������ ��� ����� (�� ����� � �� ��� ��� �� ����� /�A �� ���� �� ������� � �A ��� �� ��:���� *?0�' @& ��*� � ��� ������ ����!� "##B- ����� ��� 2����� "##B&� ����� ��� ������ ���(���� ���� ������� *���� � �� �� ��� *�����*� ��������� ����� * ����� �� ��� ��� �����*���� � ����� ������� � �� ��� ��� ��! @������� � ��� ��*������ �������������� ������� �������*�� ������ ��� �4* ����� ��*��: * ����� �� ��� ��� �� � ��� :����� ���� ���������� ��� �� �� ��*� � � � ���� � ����� ����� � ��������)���� �4* ����� �� *�� �*���� ��� ��� ���� ���� ���*� �� � *� ������ ����� �������� ����� ���� �����A������ �� ��!� ����&! �� ������ �� *��� ����������� �� �A<(�� ���& �� �(

������� ���� ��� �������� ����� � �4������� �������(�� �� ������� �� ��� �*���� � �9���������(+����� �� ��!�"##�- ;� �� ��!� ����- 9���������(+����� ��� ;�� ���"&!=���� � �A<(@� �����*� �������� ������� A@(�"$#E�<�� ��� � �� � ����"& * ����� ������� ���� ���������� ���*���� ����� �� ��� �*���� � �� ��� � �A<(@� ��*� �����*�� �� �� ��� � ����������� ������ ��� *���� *��� �� ����� ���� �� ��� � �A<(@" ��*� �����*�! ��� ��*������ �� �� ������ �� ������� � ���� ��� ��� � �A<(@" ��:���� ���! �A<(����� * ���� � ������ ���� ������ � �� ��� ���� ������� ��*� �����*�(�������� �*���� � ������������� �� ����� � ������ ��� *������! �� �A<(�� ���� ������ ��������� ��� �4*� ������!

/ ������� ������� ����� � �� �4* ����� ��� ��� ��� *�����*� ��� �� ��������! @���� � ��� ���� ��*�����*�� �� � ����������� � ������� ��*� ������(���� � ������ ���(��� � ������ � �A<(�� ����������� ���� �������� �� � ����� ���� � ��� �����*������� ��� ��� ��� *�����*�� � � ����� �� ���� �� �4� �*��� � ��� ������� ����! F'A �� � ��� � � ��� ����� � � �A<(�� ��� 9 �� �� ��� ����� ��* ���� ����� ���� � � �������� ��** ����� ����������� �� �� �4* ����� �� ����� �����*����!F���� ��� ����� ��� �* ����� ��������� �� ���

����������� ������ ���� ��! "#$ "$%

���� ������� �� �4* ����� ������ �� *�����*�������! /�*����� � ����� ��� �� ��*������ � ������� �4*���� *�����*�� �� ������ ��� �� ����(���! �������� ��������� � �� ���� ������� �� �4* ��(��� �� ��� � ��� ���� ���� *� ��� ���� ���� �� � ���� � �*��: )������� ���� ��� ���)����� � �4����������� �������� �!�! � � ��� � ��:��� � ���� ���� ������� �� �� �4* ����� ��� �� ��� ����!/�*� ��� � *�����*�� � ��� �� * ��� �� ������� ���� � �A<(�� ����� ��� ������� * ��� �� �������* � �: � ��� �*��:��� � ��� *�����*� � ����(��� �� �4* �����! ������� �� �4* ������ � ���������� ���*������ * ������ *�����*�� �* ����� � ������ ���� � �� � �������� ��� ��*�*����� �����������������*�(�������� ������� ��*� ����������� � �� ��� � ���� �������� � ��� �� � ��� ������� ��*� �����*� �� ��� ������ ��� *���������� ��� ��� ���(��� ����� � ���� ���� ������ ��� *�*����!

��"��#� ��� ��!

@���� ��� ���� � � ���� ������ ������� ��** ����� ��� '������ ��������� � ������ +����� ��� ��� ��@��� � 2 � �� � H'/&� '�+ A�"�EE$ �7H�&� '�/+F�//2@ =0B +F"�E�# �@A�&� '�/+F @D" +F�?"B��@A�&� '�CG�.' �""�E$E �@A�&� ��� ������� ������@���� � /���� ��$$?- +&� �� ����� ��� �� ��9������� �6� C������� � +&� ��� �� =� ��� ����. ����(��� � �)���� '�� ����� � ��� � +&!

� $ � �� !

A������ ��� � ��� ��� ������ F� ��� � �F� 9��� A��.���� �@ �����& �A�7 ������������ � ���� � ��� �*�� ����* ����� ���)�� � *�� �*���� ���� @" ��� ��� ���� ����!������ ?#L "E#I"?E!

.� ���� � C���� �� <����� =, �"##�& ������� ��� ������� ����������L������ ��� �������� *� �*������! ���� 2�� ��� ��"%L %"�I%"?!

.��� �C� ���� ��� =� ��� �1 �H �"##�& ������� ����� ���������� �� ����� �� ��� ������ ������� � ����� � �� A�1����� 6��������! A�� '�� � �$L "0?I"E"!

.��(A � M� <�1������ � �"#$#& ������� * ���� ��**��*����� �� � � ��� �������� ������ � ��4��! 7� H 2�� ���"E0L %%"I%%�!

.��1��� 9/� � ��� H+� ����� 7H �"##%& ������������ �������� ������ ��� * ����� ����� � �� ���L�������� � ����� ������� ������ ��� �*��! H /�*'�� � %%EL %"I%#!

.��� D� �, ��� /� 7���� HA� �,�� *��� .� +����� � �"##%& A�4�����(���� ���� � ��� ���� ��������� �� �������! '�� �� <��� "EBL"?I��!

.��� @� � ��� H+� ����� 7H �"##?& A ���� �� �*��������� � �������� �� ��*� ���� ����� � ����� �� ������ �� ��� ��� �� �� A�1����� 6� �������! . ��� 2���� �L?�%I?%�!

. ��� +� . ��� 7 �"##"& '�� *�������� �������� � A�1����� ( ������ ������! A�� '�� *���� $�L �%#I�0#!

� ���� &������ ' ��� � (�� ��� ��)�� �������

������� ���������� ���� ���� ���� �--

. ��� F@� ����� 7H �"##"& A�1(0� ����� ������ ��� *������� �������� ��**��*�� �*��4 ��������� �� A�1����� 6��������! H /�* '�� � %�0L B$#I0�?!

. ����� @A� ����� �7� �� ��� /� 9���� �9 �����& ������� ��*� �����*��! ���� 2�� ��� �� �"L "�#I""?!

/�� A� +���� HF� 2���� '� +��� HC �"###& � ����� �� �4* ����� �������� �� ���� *�� � � ���������� ��������*� * �����(���� ��� *������ � ��*� *�����! 7�� ��� "B�L B#00IB#EB!

/� ����� �� ���� A� C ���� �� ���� 7� 2� ������� �� F� @� �� �� ��"##$& 7����� � ������� ��� ��� ������� ��*� ������������������ � *����� ���������� ������ �� ��� � *��������� ��� �������� �� ���! '�� ��� ��� E?L E?I?�!

/���(2���� � �"#$$& ������� ��*� ���� ����� �� ������ ��� �� ���� ����� ����� ������ � ����� � �� ��������� �A�1����� 6� ��� 2� �����6� �������L A ��*������ � ��� �� �������� �� ���������� ����� �� ��������� �� ��������! H/�* '�� � �?%L 0B%I00?!

/���(2���� � �"##�& +�*� ���� ����� � �� ������ ��� �� � �������� ����� ������ � ����� � �� ������� �� ��������� �A�1����� 6� ��� 2� �����6� �������! A���� '�� � 0"L �0%I�00!

/���� �7� 2� �1 �7� ���� =� .� ���� � .��� @� F���� F/� ����F/� / ����� H'� ����� 7H ����"& '�� ����� � �������L��������� ��� ��� �*���� *������� � A�1����� 6� �������!/'� F �� @������ ?L BB0IB?�!

/ ����� H' �"##0& .������ ����� � �������! @����! 2�*����� 0#L"I"E!

/ ����� H' �"###& �� �� � ������� �� ������� ������ !'�� *�*����� %%L %E#I%?0!

/ ��� +� /��1�� �� /� ���� A� � ���� /� ������ HF� <��� 2��"##$& <��(�� � ��� �� �� �(�� � *�������� �� ���� ���� ����*��� �� ��*�� �� �� ��� �� ��� ������� ������(�����������! 2 '��� A�� �� =�A #0L "%�B�I"%�B?!

����� =�� �� 7/� @�� �� �� A�� �� @� .�������� �� ��� ��� ���� ����� A� ��������� A� @��� @� C ��������� 2 �"##0& +����������� ����� *����� � �*���*� ��� ������ �� ���! H /���7�� ��� ����� $�L "$#BI"$#$!

F��1 �� �������� H� ���� �� ����� F� +,����� �����&'�� *�*����� �� ��**��*�� ��� ��4 �� � ������� ����� �4* ������ �?"?C �(������ * �� � * ���� I ���������� ������! '�� ����� "��L �0#I�$E!

F��� 2� <��� M� '��� @A �"#$#& ������� ���� ��� �������� �� 72�2 �� /A" *� ������ ��� �� � � ���� ����**��*��! 7� H 2�� ��� "EBL %%0I%E�!

C���� �� 9� /C� /��� �� ' ��� ,� D� . ���� '� .� ���� �������� � +,����� �"#$?& ������� �������� ���������� ������ �� ��� ���� �� ��**��*�� � ��� ��L �������������� ���� �*��� �� ���� ��� �� ��� �������! 2 '��� A���� =�A $BL ?%%#I?%B%!

��� ��� ��� .�� � <�� F������ �� 2� ��� F2� 2� � F2� +� ������ �"##B& �������(���� ����� �������� �� �� ����� �� ���*��� ��� � �� �� ��4 � � *������� ���� A�1����� 6��������! H '�� ��� E�L "0"EI"0�%!

����� @.� 2���� F9 �"##B& �� ���� ��� ���1���� ������� � � �A�@'A �� � ���L F��� ������� ����1���� ���� *?0 '�C@ ����*( �������� �� �� �� � ��� ��� ! H /�* '�� � %B"L%�BI%%#!

+,����� � .� ���� � / ����� H� 7�� �"##$& ����� ��� ������������������ �� ���������� ������������ A�� 'M A�� �� $E%� �� '�� M � A����� � ������� '�� M �!

+,����� � .� ���� � H�����1 F� D���� F� 7�� �"##"& ����� ���� �������������� ������� �� ��� ��������������� � ����!�������� 2 ���� /��� ����� =�!

+,����� � . �� �� /� F��1 �� ;� >D� ��� � �** H� >���� ;�+���� � �� <��� � �� �������� H �"###& ������� ��� '2M�

� ���� &������ ' ��� � (�� ��� ��)�� �������

�� *�*����� ���� �����*�� *������� ��� �� ��� �� ��� ������!+ � ����� @�� %"L %%�I%%B!

+,����� � >���� ;� ��� (H� �� M(�� 9��� +C� ;� >N F� <��� � ��. �� �� /� F��1 �� H� �� � ��� �� ����� � �����& 2�����*������� �� *� �*�� �� ��� ��� �� ��� �� ������ �� �� ����8� �L ��� � ��� *�*�����! ��L +������� D �7�!& !�����"����� ������������ �� ��� #$�� !����� � H�*�� �������� �������2 ���� �� �� � E%I$?!

+,����� � >���� ;� 9���������(+����� > �"##B& �������� *���������� * ��� � ���� � ��� �� ������� �4��� ��� ����������� ��*�������! ���� �� '�� �� "?L ��I%�!

+���� � �� ���� =� �� ��� ,� +� <��� �� +���� �� ��� ��� 7�.� �� D(�� <������ =� .� ���� � +,����� �����& ���� ���� ����� ��� �1���� � � ������� �� (�4* ������ ����! C�� �*� �*�� �� ������� ��� �*���� �! ���������!

+���� � �� ���� =� <������ =� ����� >� '���������� A�<������� D� 7��� ,� 2� .� ���� � +,����� �����& / ����� ����� ��� �1���� � � ���� �� (�4* ������ �������!� '�� �� A��� �EL "$!0!

+���� A� M��� @H� / ����� H' �����& 7�������� � �� ��4����( ������ *�����*� �� ������� �� �4* ������ � ������� ���!H �� '�� �� "$L "0"I"E0!

+���� C7� ������ �� ���� �@� .�� A� �� '/+� 2����� ��/� ��� @� 2 ������� H�� 9���� F �����& � ����� ��� �*��� ���� ������� ���� ����� ��� ����� � ���� � ��� �� ������� ����� ����� �*����! 2 '��� A�� �� =�A #?L""0E%I""0E$!

+���� 2�� .����� � F/� .����� � @H� . ��� <�� / ����� H' �"##0&/� �� ���� �� ��� �� ����� ������ � * �* ������� �@'A�� ��� �� ��� � �����! 2�� ��� .���� .���� 0�LE00IEE�!

+���� 2�� / ����� H' �"##0& /�4������ ��� � �������� � ��� �� ��� �� ��� ��! �� �� �����������" � ��� %������������� �� ���"����� C!7! .��� ��� F!H! ��*�� � 7��� @����2 ���� '�� M �� **! %B?I%0%!

+� �/� ����� F�� �� ��� H.� ����� H� �"##�& �������� ����������� � � ������� �� ��� �������� � ��� *����� ��� � *�� �� ���� �� ��� ��! 7�� ����� "�?L��$"I��$#!

+���� .������� �� +� H(;� ;� ;(H� +,����� � / ����� H'� ������ �9���������(+����� > �����& @�� � ������� ��� ������� ��*� ��� ���*��� ��� �� �� ��8� �L ������� ����� ����������������� ���! A��� �� � ��� �A�2 "��� 9 �� /�� ��� �2���� ����!

+���� .������� �+� +���� � �� +� H;� ;� ;H� ���� =� <������ =�.� ���� � 9���������(+����� >� +,����� ����"& ��� �� (�4* ������ ������� ���� �������� ���� ���*���� �� �����!'�� @�* � "�L B�%IB�0!

������ 2� ����� H �"###& ������� ��� ������� ��*� �! ����"����� �������� �� !�"��� ���������� @���� F� 7�!��* ���� (�� ���� +������� �� �� ����� **! �0?I�#"!

H��� A�� +���� C7� + � MH� ����� H� ������ 2 �����& 2�����*��������� � ��� " ����� ��� ������ � �� � �A<@"������� ��*� �� ��������� ���1� � ������� ��� �� �� �� ����� ����! <��� 2�*� ��� �� * ���!

�� ���� 7� <����� =, �"##$& �������� �� ��������� ��� ��������������! '�� *�*����� %�L "#?I�"�!

��� H� M������� � 9��� C+� 9���� F� +���� � �� <������ =�.� ���� � M������� �� +,����� � D, � �� �D ����"&�� �������� �� � ���� ����� ���L ���� ������� ������������ �� ���� ��� � �� ������� ������ �� �������� ������� ���! H '�� �� ������ "�#L ?"I$�!

������ H9� ��� ��� �� +���� A� 9 ��� //� M��� @H� +� �� A2�<�� �/� / ����� H'! F������ �� � �� ��� ��� ��������� ��

����������� ������ ���� ��! "#$ "$%

�� ������� �� ���

�������(� ����� ��� ��� �������(�� �4* ������ � ����������! <�� ���� ��� ��� �� �� * ���!

����� �� +���� � �� '����������� A� ;� >(NF� ����� >�<������ =� +���� �� ��� ��� 7� ���� =� .� ���� � <������� D�+,����� ����"& ��** ����� �������� �*���*�������� �� ������� ��*� �� �4* ����� � �������! 2 '��� A�� �� =�A#$L "B��EI"B�""!

����� '9� .��� �7 �"#$#& �������(���� ����� �������� �� * ������� ����� ���������� ��������� ��� �� ������ *��)��� ��A�1����� 6� �������! '�� �� <��� #$L ""$I"�%!

<�� +;� . ������ 2� ������ @� . �� 9� 2��1� �� +�1� <�2� /� ����� /� +,����� ����"& @��*� �����*�(�*����* ���*���� ��� �������� ����� � ������� �� ��� �*���� �L �������� ����� ��� ���@" ��� ���@� ��*� �! 2 '���A�� �� =�A #$L ##E�I##EB!

�� �M� 9���� F� ����� 7H �"###& F���� ������ ��� � /�A ���*?0' @(�������� ����� � �� ��� ��� �� �� ��� �������� ���������! � '�� �� A��� �0!

��1� ��� A�� +����� H�� .�� A� <�� +� ����� @� ������ @A�9���� F� 9���� ���� /� �����& �������� � ��**��*���4��������� ��� ���1� �� �� �������! H '�� �� ��L E�?EIE�$"!

��1� ��� A� <����� =, � .� ���� ����"& �������L �� ��������������������O '�� �������� ?L 0�EI0"?!

��1� ��� A�� <�� +� ����� =� ����� @� ���� F� ������ � +�<����� =, � 9���� ���� /� �"##$& ������� �������� � ���1� ����� ���1� � �������� � ��**��*�� ������� �� ����������� � ������ �*���*����! H '�� �� "$L "��?�I"��??!

�F���� �2� ������ /� @����� H�� / ����� H' �"##$�&������� �������� *� � ���� � ���� ��� � �����! A�� 'MA�� �� $E%L %�0I%��!

�F���� �2� 9���� � <.� 9��� �<� / ����� H' �"##$�&/�������� ���� � � ������� ��������� �B� ���� � ���� ����" ������ ��* ��� ������� ��������� � *����� ����� �� �� ��� ���� ����� �� ������! H '�� �� "$L0�?$I0�$0!

�� �������� �� <*�1 CH� ��� '�� (���� A �"##%& A�������� *������� � ��� �� �������(�������� *�������!2 � '�� ��� B�L ?""I?E#!

���� �� ����� C �"##?& 2����� ������� ����� �������� �� ��� �� ���� ��������! 2����� .���� E�L E#?I?��!

�, ��� /� ���� 9� � ���� A� +����� � �"###& A�4�����(�������� � ������� ���� ��� �(�������� �������� ���� �� ��� ��!'�� *���*�� ��� �"L 0�?I0"�!

����� 7H� /� �� 7� .��1��� 9/� � ��� H+ �"##%&�������� �� ���� ����� � ��� ����� �� �� ���� ���� � ���������� ���� �/��& ��� ��� ��� ������ � ��� �� �� �� ��������� ������ A�1����� 6� �������� ��� F��6� ���� ��! F�������BL �%?I�0�!

D6F����� F� A���� �� 9��������� /� 9���� 2 �"###& 74* ������ ��� ���� ������� ��*� �����*� �A<@� �� ��� ����� ��/'�L ������� ���� ������ � � �A<@"! H /�* '�� � B�#LBE#IB$"!

D, � �� �D� ��� H� ��, �� 2A �"##E& 7����� � ���� �� ��**��*��������� � �*����� ��� ���� ��� � �� ��� ���������� �������� ��� ��! '�� ����� ?0L ""�?I""B�!

D, � �� �D� ��, �� 2A� ��� H� M������� � ������ �� ������ ,� 2������� H �"##$& �������� � ���������� ��� �� ����� ��������� �� �������! A�� 'M A�� �� $E%L %B�I%E%!

D6��� � �� /���� =� �� �M� ��� H� ������ �� .�� A� A���� �H�+���� C� ���� =� 9��� C+� ��� �� �@� D� �� �D� F���� � F������ 7H� F����� /� F���� �� 9���� F �����& ������� �������� ��� *������� �� ����� � � ������ � ������ �� ��� ����� �� ��� ��! 2 '��� A�� �� =�A #?L""0E#I""0?B!

����������� ������ ���� ��! "#$ "$%

2������� � �"##0& '�� *�*���� �������� *�������� �� ��� /'���� �� ������� �4���! �� '�� ��� "�L #"I"�%!

2�3 �1 �7� 9���� F� ������ @A� ����� 7H ����"& F��� ������ ��������� �� ����� �������� �� ��� � ��� � ��� ����! H/�* '�� � B%BL "0$I"$0!

@����� H�� / ����� H' �"##%& ��� ���*��� ������� *����������*������ ��*�� ���� � ������� ��������� � ���*��!H '�� �� "%L 0""#I0"�0!

@����� H�� >�� A� 2� � A� / ����� H' �"##E& ��������� ��8���� ��� ��� ������ ��*��� �������� �*������(������ ���������� �� ��� �� ��� �� ���� �� ��**��*��!. ��� @�� ?�#L $"I$?!

���� � 7� ����� � ����� �� A����� A� ���� � �"##E& ��������������� ���(�� � *��������� �� ������ ����� ��(/A"����*��� �� ������(*�� ��**��*�� �����! '�� �� <��� �"�L�"I�B!

��� �� ��� �* � .� ���� 7� ;� >F� =������ .� +,����� ����"&7���� � *� �*�� �� �� �� ��8� � � � ��� � ������� ��� ���� ��� /0? .<GEH ����L �� ��� ������ ��� �� ��� ����� ���� ��� *�*���� �4* �����! '�� ����� �0L �B#I�E%!

�� ������ � /�� � FD� @���� �� <C� . ������ ��� � ��� H+������ 7H �"##B& �A ����� ������ * ����� �� ��� ��� ���� ��� ������L /����1���� ���� ��� �� �������� *?0�� �� � ��� ��� ��*� � ����� ������ ����� ��� ����� ����! H /�* '�� � %0�L 0$?IE""!

������ @A� +����� H�� +���� A� 9 ��� //� /��� �� H� �3�� A�/����� F�� <� �� �������� �� �� �M� ����� 7H� / ����� H'����"& ������� � ������� ��� ���*��� ������� ������ ������ ������� �� ��� ���� � A�1����� 6� �������!2 '��� A�� �� =�A #$L B"#BIB"$# ��� �������� �������**������� � ���� ����!

���� �� .9� H� �� .� <�� ��� AH �����& A��� ��� � �� ��� ���� �� ��� ������ � P"�0�Q(������� ������� ��� �������� ��� ��*� ������� �� � ���! . ��� @�� $?%L%"$I%�#!

����� �� @����� AR � H ����� +� �F���� H� ���� � �"#$%&������� I � ���� ��������� ����� *�*���� � � * ������������! C7.� <��� "EBL "�BI"�$!

9���� H�� .����� @9� F���� ��*��� ��� 7�� � ��� 9��� /+�"##$& �������L � ���������� �� �� ��* �����O A�� 'M A���� �"L %EBI%$�!

9���������(+����� >� .� ���� � +,����� �"##�& ������� �� ���� ���� �� �� ��� �*���� �! C �� '�� ��� ��� "%L %"#I%B%!

9���������(+����� >� ;� ;H ����"& '�� *�*����� �� ��� *���� ������������ � *��� ���� �*���� ��*����� � �������������� �������! 7� H 2�� ��� "#L B#I0#!

9 ��� //� H!'! / ����� H' ����"& 2�� ������� ���������** ���� � �� � ������� �� ������ ��� �����! 2 �'�� (2���*�� ��� S .�� 2������ �0L �$%I�##!

9���� F� ����� /H� .�� A� +���� C7� ' ��� �� D ����� /H����� 7� �� '/� ������ �� ��������� C� .�� �@� 2����� ��"##$& ������� �������� * ����� ������ ��� ���� *�* ���� ����! 2 '��� A�� �� =�A #0L "�E?"I"�E??!

;� ;H� +� H;� 9���������(+����� >� +�R����� @� C��� � �� +,����� �"##"& �*������ ��� � ���� ��������� ���������� ��� �������������� *����� �4� �������� ������ �� ����� �� /(���� ���������� �� �� ���� *��! '�� ����� B�L ?%"I?%?!

;� ;H� +,����� � .� ���� � 9���������(+����� > �����& ������� ����*���� ���*���� ���������L ���� ������� ������ �*���� ��*�������! '�� *�*����� %BL "%?I"B?!

>��� �� �� 2� ��� �� 2���� �@ �"###& /��� ���� ��������� ��������� ���� � *���� *��� * ��� ��� �� ��� ����! . ���@�� $%"L %%IB�!

� ���� &������ ' ��� � (�� ��� ��)�� �������