LAPORAN KASUS

PATOLOGI/BIOLOGI

María de Lourdes Chávez-Briones,1,2 M.D.; Raquel Hernández-Cortés,2 B.S.; Porfirio Díaz-

Torres,2 B.S.; Alberto Niderhauser-García,1 M.D.; Jesús Ancer-Rodríguez,1 M.D.; Gilberto

Jaramillo-Rangel,1 Ph.D.; and Marta Ortega-Martínez,1 Ph.D.

Identifikasi Sisa-Sisa Pada Manusia dengan Analisis DNA Isi Gastrointestinal dari Larva

Lalat

ABSTRAK: Larva lalat Dipterous (belatung) sering dikumpulkan dari mayat selama investigasi

kasus kriminal. Studi sebelumnya menunjukkan bahwa analisis DNA dari isi gastrointestinal

belatung dapat digunakan untuk menunjukkan identitas korban. Namun, pendekatan ini belum

digunakan hingga saat ini dalam penyelidikan hukum, dan dengan demikian kemudahannya

dalam penggunaan masih tidak diketahui. Sebuah badan yang terbakar parah ditemukan dengan

wajah dan leher dikerumuni oleh larva lalat. Mengingat kondisi tubuh, identifikasi tersebut tidak

memungkinkan. Pencetakan Short Tandem Repeat (STR) dilakukan dengan menggunakan

kandungan saluran gastrointestinal belatung yang dikumpulkan dari korban dan dibandingkan

dengan profil STR diperoleh dari seorang yang diduga ayah korban. Probabilitas paternitas

adalah 99,685%. Tes DNA komparatif ini memungkinkan identifikasi yang meyakinkan dari

sisa-sisa. Ini adalah kasus pertama yang dilaporkan dari analisis DNA manusia diisolasi dari

saluran pencernaan pada belatung yang digunakan untuk mengidentifikasi korban dalam kasus

pidana.

KATA KUNCI: ilmu forensik, entomologi forensik, pencetakan DNA, sisa-sisa manusia, larva

lalat, identifikasi korban.

Entomologi forensik adalah analisis pada serangga untuk kepentingan forensik dan tujuan

peradilan (1). Aplikasi yang paling umum berdasarkan entomologi dalam penyelidikan tindak

kriminal adalah untuk menjelaskan jarak postmortem, yaitu waktu antara kematian dan

penemuan mayat (2). Selain itu, studi entomotoksikologi menganalisis penerapan analisis

toksikologi serangga hadir pada sisa-sisa manusia dalam ketiadaan jaringan dan cairan yang

biasanya diambil untuk tujuan tersebut (3). Pada akhirnya, penyelidikan forensic dengan

entomologi mendapatkan keuntungan dari berbagai metode genotip molekul dipraktekkan secara

luas. Yang paling umum digunakan adalah identifikasi spesimen berbasis DNA. Aplikasi lain

termasuk karakterisasi struktur genetik populasi spesies serangga yang penting bagi forensik

penting identifikasi isi usus serangga (4). Analisis genetik forensik isi usus serangga memiliki

beberapa kegunaan potensial (5). Larva lalat Dipterous (juga disebut belatung) dapat menjadi

sumber yang cocok dari DNA manusia. Wells et al. (6) urutan mitokondria DNA manusia dari isi

usus belatung meningkat jaringan manusia. Juga, Zehner et al. (7) analisis nuklir Short Tandem

Repeat (STR) lokus DNA manusia berasal dari belatung pada tubuh yang membusuk. Dengan

demikian, secara teoritis, mencetak DNA manusia berasal dari saluran pencernaan belatung dan

perbandingan dengan profil genetik yang ada dapat membantu mengungkap identitas korban.

Namun, studi sebelumnya yang dilakukan di bawah kondisi terkontrol; pendekatan ini belum

digunakan hingga saat ini dalam penyelidikan hukum, dan dengan demikian kemudahannya

belum diketahui. Di sini, kami melaporkan kasus pertama analisis DNA manusia diisolasi dari

saluran pencernaan belatung yang digunakan untuk mengidentifikasi korban dalam kasus pidana.

Juga, ini adalah kasus pertama yang dilaporkan dari penerapan entomologi forensik di Meksiko.

Laporan kasus.

Sebuah badan terbakar parah ditemukan di daerah hutan daerah jalanan terpencil. Mayat

tersebut dalam posisi seperti bertinju, dengan kaki dan tangan hilang. Wajah dan leher secara

luas dikerumuni oleh larva lalat. Mengingat kondisi fisik tubuh, investigasi tidak dapat

menentukan baik jenis kelamin atau perkiraan usia korban.

Di tempat kejadian, terdapat bagian yang dibakar di dalam tanah dan di sekitar tubuh.

Tidak ada bukti fisik yang ditemukan di dekat sisa-sisa mayat, kecuali sebuah cincin kelulusan

sekolah. Jenazah itu dibawa ke kantor untuk diautopsi, yang menunjukkan cedera kepala terbuka.

Karena keadaan mayat, jaringan lunak yang tidak tersedia untuk analisa lebih lanjut, dengan

pengecualian dari sebuah fragmen kecil hati yang sedikit terbakar. Tiga belatung dikumpulkan

dari korban dan diidentifikasi dengan pengamatan morfologis sebagai spesimen dari lalat

(Diptera: Calliphoridae) dan lalat daging (Diptera: Sarcophagidae) (8). Semua belatung

dipisahkan masing-masing pada tabung steril microcentrifuge 1,5 mL dan diawetkan dalam

etanol 70% pada suhu 4 °C.

Seorang wanita dilaporkan hilang oleh ayahnya, yang mengklaim bahwa putrinya diculik

oleh beberapa pelaku 10 hari sebelum sisa-sisa yang ditemukan. Pria ini mengakui cincin

kelulusan sekolah yang didapatkan di tempat kejadian adalah milik putrinya. Namun, tubuh itu

begitu parah terbakar dan ia tidak dapat mengidentifikasi dengan ciri-ciri fisik wajah atau

lainnya. Beberapa upaya untuk mendapatkan profil genetik dari fragmen hati yang didapatkan

pada otopsi tidak berhasil. Kami menduga bahwa akan ada kemungkinan untuk mengidentifikasi

tubuh dengan analisis genetik dari isi usus belatung.

Setiap belatung diproses secara terpisah. Setiap larva dicuci dan dibedah dengan

menggunakan metode dijelaskan sebelumnya (9) untuk menghilangkan crop, divertikulum dari

akhir cephalic dari usus. Ekstraksi DNA dari crop dilakukan dengan menggunakan ekstraksi

fenol-kloroform standar dan presipitasi etanol (10). DNA dari yang diduga ayah korban

diekstraksi dari sampel bukal menggunakan protokol Chelex (11).

Polymerase chain reaction dilakukan dengan ekstrak DNA dari isi crop dan sampel bukal

menggunakan multipleks kit AmpF'STR® Identifiler (Applied Biosystems, Foster City, CA)

sesuai dengan protokol pabrik yang direkomendasikan. Elektroforesis kapiler dilakukan dengan

ABI PRISM® 310 analiser genetik (Applied Biosystems). Sampel dijalankan pada kapiler yang

berisi POP-4 polimer, standar GeneScan ™ -500 LIZ® digunakan untuk ukuran alel, dan data

dianalisis dengan perangkat lunak analisis GeneMapper® ID ver-sion 3.2 (Applied Biosystems).

Probabilitas paternitas dihitung menggunakan data Meksiko populasi pada STR alel frekuensi

(12,13) dan perangkat lunak PATPCR versi 2.0.2 (14,15).

Profil genetik yang dihasilkan dari sampel disajikan pada Tabel 1. Hasil yang sama

diperoleh dari tiga belatung yang berbeda. Lokus amelogenin pada belatung menunjukkan

peningkatan pada sisa-sisa seorang perempuan. Selanjutnya, sampel ini memunculkan 12 lokus,

yang masing-masing memiliki setidaknya satu alel dengan lokus STR yang sesuai dihasilkan dari

terduga ayah korban. Probabilitas paternitas adalah 99,685%. Paternitas diakui ketika tes genetik

menghasilkan probabilitas 99% atau lebih (16). Dengan demikian, tes DNA pembanding yang

digunakan memungkinkan identifikasi yang meyakinkan dari sisa tersebut. Hasilnya kemudian

diverifikasi oleh analisis DNA dari tulang yang berasal dari sisa-sisa. Prosedur ini hanya

mungkin setelah banyak usaha yang dilakukan.

Tabel 1. Perbandingan hasil short tander report yang didapatkan dari larva dan yang diduga ayah

korban

Lokus Korban Terduga Ayah Korban

Amelogenin

D8S1179

D21S11

D7S820

CSF1PO

D3S1358

TH01

D13S317

D16S539

D2S1338

D19S433

vWA

TPOX

XX

13/15

29/30.2

10/10

n/r†

14/17

7/7

12/13

10/11

24/25

15/16

16/18

8/8

XY

13/15

30.2/33.2

10/11

10/11

16/17

7/9.3

9/13

11/12

17/25

13/15

15/16

8/8

D18S51

D5S818

FGA

n/r

12/12

n/r

14/15

11/12

18/26

* hasil yang sesuai ditandai dengan cetak tebal

† tidak ada hasil yang keluar

Diskusi

Mengingat akurasi dan reliabilitas teknik, DNA genotip secara luas digunakan dalam

bidang forensik untuk mengidentifikasi sisa-sisa manusia. Sumber yang ideal untuk genotip tidak

hanya harus banyak dan mudah untuk mengumpulkan, tetapi juga memungkinkan ekstraksi DNA

dengan kualitas yang baik. Namun, dalam korban yang tubuhnya mengalami trauma yang

signifikan atau terbakar kadang-kadang sulit untuk mendapatkan bahan biologis yang cocok

untuk analisis genetik. Pada artikel ini, kami melaporkan identifikasi dari tubuh terbakar parah

dengan cara analisis genetik dari isi gastrointestinal belatung yang meningkat dan perbandingan

dengan profil genetik dari seorang yang diduga berhubungan.

Profil STR diperoleh dari belatung tidak lengkap. Namun, jumlah lokus berhasil

diamplifikasi adalah cukup untuk melakukan tes DNA pembanding terhadap terduga ayah

korban, yang cukup memadai untuk meyimpulkan identifikasi sisa-sisa. Ada banyak faktor yang

dapat mempengaruhi keberhasilan hasil cetak DNA. Faktor utama yang terlibat dalam analisis

DNA manusia berasal dari belatung sebelumnya telah dieksplorasi, dan telah dikembangkan

panduan untuk aplikasi yang tepat dari prosedur tersebut (1,2,4-7,9,17). Kami mengikuti

panduan ini sedekat mungkin, meskipun menurut Linville et al. (17) metode terbaik untuk

menyiapkan belatung sebelum dianalisis adalah menyimpannya tanpa cairan apapun pada suhu

70°C, sedangkan kami menyimpan belatung dalam etanol 70% pada suhu 4°C. Namun, profil

STR lengkap dapat diperoleh dari belatung bahkan setelah 2 bulan penyimpanan dalam etanol

70% (7) membenarkan fakta bahwa etanol adalah bahan pengawet yang berguna untuk

menyiapkan jaringan yang ingin dianalisis DNA (7,18,19).

Dengan demikian, memungkinkan bahwa kualitas ekstraksi DNA dari belatung dalam

fungsinya pada keadaan sisa-sia yang muai terurai. Asumsi ini didasarkan pada kenyataan bahwa

setiap belatung diproses secara terpisah, dan hasil yang sama diperoleh dari masing-masing.

Selanjutnya, takson dari belatung, yang dianalisis untuk pencetakkan STR, tampaknya tidak

memiliki pengaruh pada hasil. Profil STR lengkap dapat diperoleh tanpa keluarga Diptera (7).

Dalam aplikasi masa depan metode ini, kami sarankan mengikuti pedoman yang

ditetapkan dan mengakui bahwa degradasi parah pada tubuh tidak memungkinkan diidentifikasi

menggunakan metode ini. Di sisi lain, hingga saat ini, belum ada laporan tentang penerapan

entomologi forensik dalam penyelidikan hukum di Meksiko. Hal ini diperlukan bahwa hakim,

jaksa, dan agen penegak hukum dapat mengakui data dengan serangga sebagai dasar dalam

memecahkan kasus kriminal.

Kesimpulannya, ini adalah kasus pertama yang dilaporkan dari analisis DNA manusia

diisolasi dari saluran pencernaan larva lalat dipterous (belatung) yang digunakan untuk

mengidentifikasi korban dalam kasus pidana. Jika belatung ditemui dalam hubungan dengan

sisa-sisa manusia, peneliti dapat memanfaatkan pendekatan ini jika ekstraksi DNA dari sumber

lain bukanlah hal yang mustahil.