PERIPHERAL BLOOD SMEAR IN LEUKEMIA

Leucocyte Differential Count

Untuk dapat melakukan differential WBC count, kita harus mengetahui ciri-ciri dari masing-masing

jenis leukosit

1. Neutrofil

Tergolong dalam granulosit (karena memiliki granula di sitoplasma). Jumlahnya paling banyak

(50%-70% dari leukosit yang beredar), diameternya 12-15 m, inti terdiri atas 2-5 lobus yang

dihubungkan oleh bengang kromatin halus, pada wanita terdapat Barr body di salah satu

lobus inti karena kromosom X inaktif. Terdapat 2 jenis granul utama : 1) granul spesifik :

terlihat kecil, dekat ambang batas resolusi mikroskop cahaya, mengikat komponen netral,

basa, atau asam dari campuran pewarna. 2) granul azurofilik : merupakan lisosom

berdiameter 0, 5 m, terpulas ungu.

2. Eosinofil

Tergolong dalam granulosit. Jumlahnya 1-4% dari leukosit dalam darah normal. Ukuran

kurang lebih sama dengan neutrofil, inti bilobus, granul spesifik berukuran besar dan lonjong

yang terpulas dengan eosin (warna granulnya merah-orange gitu).

3. Basofil

Tergolong dalam granulosit. Jumlahnya < 1% leukosit darah (jadi susah ditemukan pada

apusan darah normal). Memiliki diameter 12-15 m. Intinya terbagi dalam lobuli yang tidak

teratur dan sering terhalangi granul-granul spesifik di atasnya. Granul spesifik terpulas secara

metakromatik akibat adanya heparin, jumlah granul spesifik lebih sedikit dan ukuran serta

bentuk granulnya lebih tak teratur dibandingkan granul dari granulosit lainnya. Granul

spesifik pada basofil mengandung heparin dan histamin.

4. Limfosit

Tidak termasuk dalam granulosit. Dalam peredaran darah terdapat limfosit kecil (diameter 6-

8 m), limfosit sedang dan besar dengan garis tengah mencapai 18 m. Inti sferis, kadang

berlekuk, kromatin padat dan tampak sebagai gumpalan kasar sehingga inti terlihat gelap

pada sediaan rutin. Sitoplasma limfosit bersifat basa lemah dan berwarna biru muda pada

sediaan yang terpulas. Sitoplasma limfosit juga mengandung, mitokondria, kompleks golgi

kecil, ribosom.

5. Monosit

Termasuk dalam agranulosit, diameter 12-20 m. Intinya lonjong, berbentuk ginjal / tapal

kuda, letaknya eksentris. Kromatinnya tidak sepadat inti limfosit, sehingga inti monosit

terpulas lebih terang daripada inti limfosit. Sitoplasma bersifat basofilik dan sering

mengandung granul azurofilik yang sangat halus (lisosom) yang tersebar dan memberikan

warna kelabu-kebiruan pada apusan. Setelah menerobos dinding kapiler dan memasuki

jaringan ikat, monosit berkembang menjadi makrofag.

Pembentukan WBC

Jumlah normal :

Polymorphonuclear : neutrofil (50-70%), bands (0-5%).

Limfosit : 18-42%

Monosit : 1-10%

Eosinofil : 1-4%

Basofil : 0-2%

Acute Leukemia

Trias leukemia akut : anemia, leukositosis (blast > 20%), thrombocytopenia

Acute Myeloblastic / Myelocytic Leukemia (AML)

Banyak pada dewasa usia 40 tahun. AML adalah leukemia tersering pada anak < 1 tahun. Jika tidak

diobati akan fatal.

Manifestasi klinis :

Anemia, granulocytopenia, thrombocytopenia + sel imatur (blast) di peripheral blood & bone

marrow.

Pucat, perdarahan membran mukosa & kulit, aphthous ulcer, gingivitis, pharyngitis, sterna

tenderness

Sindrom leukostasis (peningkatan blast pada pasien, > 100.000/L):

- Ischemia multiple organ

- Disfungsi CNS & paru-paru (Ball disease)

- Emergensi hematologi

- Perlu kombinasi chemotherapy & leukopheresis

Pengambilan sampel bisa berasal dari aspirasi sumsum tulang yang nantinya bisa diperiksa dengan

immunophenotyping, analisis kromosom, morphology & pengecatan cytochemical (peroxidase stain,

Sudan Black B/SBB, combined esterase stain, Periodic Acid-Schiff/PAS stain, leukocyte alkaline

phosphatase stain).

Menurut FAB yang mengklasifikasikan AML berdasarkan morfologi ada 8 klasifikasi, yaitu :

1. Mo : undifferentiated

Karakteristik myeloid blast (-)

Usually resemble M1/L2

Auer Rods (-)

2. M1 : Myeloblast predominant (tanpa / dengan minimal maturasi)

Blast 90% NEC (Non Erythroid Cell)

Promyelocyt < 3%

Auer Rods (+)

3. M2 : dengan maturasi

Myeloblast + (30-89%) dari NEC

Granulosit matur (promyelocyte-PMN) > 10% dari NEC

Komponen monosit < 20%

Auer Rods (+)

4. M3 : Acute Hypergranular Promyelocytic / Acute Promyelocytic Leukemia

Blast < 30%

Faggots (++) multiple/bundle of Auer Rods

Nucleus polimorfis (reniform, folded, bilobed)

5. M4 : Acute Myelomonocytic Leukemia

Darah perifer : komponen granulosit & monosit: monosit > 5x10^9/L

Bone Marow : myeloblast & monoblast > 30%, 20% terdiri dari komponen monosit

6. M5 : Acute Monocytic Leukemia

Monocytic (monoblast,promonosit, & monosit) > 80% NEC

Monoblast > promonocyte & monocytemonoblast : sel besar dengan plentiful

cytoplasm

Kadang ada vakuola, Auer Rods jarang.

7. M6 : Erythroleukemia

Bone marrow & peripheral blood :

Erythroblast > 50%

Abnormalitas precursor erythroid

Erythroblast polinuklear

8. M7 : Leukemia Megakaryocyte

Pada bone marrow & peripheral blood terdapat megakaryocyte & megakaryoblast dengan

sitoplasma ireguler, >30% of BM nucleated cell.

Klasifikasi berdasarkan WHO :

Acute Lymphoblastic Leukemia (ALL)

Keganasan pada sumsum tulang dimana terjadi proliferasi prekursor limfoid awal dan menggantikan

sel normal hematopoietic pada sumsum tulang. Adanya ekspresi gen abnormal, biasanya karena

translokasi kromosom mengakibatkan terbentuknya sel maligna pada sel prekursor limfoid.

Lymphoblast mengganti elemen sumsum tulang normal menyebabkan produksi sel darah normal

berkurang. Akibatnya, terjadilah anemia, trombositopenia, dan neutropenia. Lymphoblast juga

berproliferasi di organ selain sumsum tulang, biasanya di limpa, hati, dan limfonodi.

Emergensi :

Leukostasis : karena kebanyakan lymphoblast di sirkulasi perifer. Manifestasi klinisnya :

respiratory distress, mencakup mental status. Tapi lebih sering di AML daripada ALL.

Jumlah neutrofil pada pasien ALL sering turun yang mengakibatkan rentan terkena infeksi.

Sering terkena infeksi jika jumlah neutrofil < 500/L, & parah jika < 100/L.

DIC, perdarahan karena trombositopenia, thrombosis

Pemeriksaan lab :

CBC : trombositopenia dengan berbagai derajat. Biasanya memiliki WBC yang normal, tinggi,

atau rendah, tetapi ada neutropenia.

Abnormalitas PT/APTT/fibrinogen/fibrin degradation product. Pada DIC terdapat peningkatan

PT, penurunan fibrinogen, dan adanya fibrin split product.

Adanya blast pada sirkulasi.

Peningkatan lactic dehidrogenase & asam urat.

Dilakukan kultur jika ada demam atau ada tanda2 infeksi selain demam.

Morfologi sumsum tulang : immunophenotyping, pengecatan preparat menggunakan cat

Wright atau Giemsa.

Diagnosis ALL ditegakkan jika :

Menurut klasifikasi FAB : minimal 30% lymphoblast

Menurut klasifikasi WHO : 20% lymphoblast

*di sumsum tulang / darah perifer

Klasifikasi ALL menurut FAB (French-American-British) :

1. L1 :

Homogen, sel blast berukuran kecil

Sitoplasma sedikit, rasio nucleo-cytoplasma tinggi

25-30% kasus pada dewasa

2. L2 :

Heterogen, blast berukuran besar

Ada celah pada nucleus (cleft or indentation nuclei)

Pleiomorphic

Nucleolus lebih menonjol

Rasio nucleocytoplasma lebih kecil daripada L1

70% kasus pada dewasa (paling sering)

3. L3 :

Homogeny

Sitoplasma basofilik dengan vakuolasi

Nucleus oval / bulat

Nucleolus menonjol

Mirip lymphoma Burkitt

1-2% kasus dewasa

Chronic Leukemia

Trias leukemia kronik : anemia, hyperleucocytosis, thrombocytosis/normal.

Chronic Myelocytic/Myelogenous Leukemia (CML) / Chronic Granulocytic Leukemia (CGL)

Leukemia ini berkaitan dengan kromosom Philadelphia (Ph). >80% pasien Ph+. Translokasi kromosom

9 dan 22 (t9;22)(q34;q11). Menyangkut 2 gen : BCR dan ABL yang berfusi menjadi BCR-ABL pada

kromosom 22. Onset pada pertengahan umur (50 tahun), laki-laki lebih banyak, faktor epidemiologi

yang diketahui baru iradiasi.

Sign & symptoms :

30% asimptomatis, diketahui setelah CBC rutin.

Lelah, letargi, penurunan berat badan, keringatan.

75% splenomegaly.

Gout, perdarahan, infark spleen, priapism

Leucostasis (sudah dijelaskan di AML dan ALL)

Klasifikasi CML berdasarkan pada :

Differential count darah tepi.

Gambaran sitologis di darah & sumsum tulang.

Cytogenetic

Genetic molekuler

Cytochemistry : jika cytogenetic & genetic molekuler tidak tersedia

Immunophenotyping

Pemeriksaan lab :

Peningkatan WBC: biasanya >25 x 10^9/L, sering 100 300x10^9/L.

Neutrofil & myelosit predominan, basophilia, kadang eosinophilia

Anemia, platelet normal / meningkat

LDH & urat meningkat

Evolusi CML :

1. Fase 1 : proliferasi / fase kronik :

Semua stage myeloid, maturasi myelocyte, metamyelocyte & neutrofil matur > blast &

promyelocyte.

Peningkatan basofil dan eosinofil

Blast < 10% pada darah tepi

Jumlah WBC : 100-200.000/mmc.

2. Fase 2 : full blown / accelerated

Myelosit dominan

Peningkatan basofil ( 20%) & blast

Jumlah WBC : 500-700.000/mmc.

Myeloblast: 10-19% of PB WBC or BM nucleated cells

Trombositopenia persisten, anemia

Pembesaran limpa

Dysplasia granulosit / proliferasi prominen dari megakaryosit displatik kecil.

3. Fase 3 : transformasi akut / krisis blast

Banyak blast, menandakan adanya leukemia akut (70-80%)

o 60% myeloid blast crisis

o 30% lymphoid blast crisis

o 10% tipe campuran

Fase ini lebih sering langsung muncul tanpa fase akselerasi. Transformasi bisa terjadi pada

sumsum tulang atau jaringan extramedula.

Gejala klinis : demam, berat badan turun, berkeringat, nyeri tulang, lymphadenopathy, perdarahan.

Darah tepi : micromegakarycytes , giant dysplastic platelets; < patient: hypogranular neutrophil or

Pelger-Huet; myeloblast/lymphoblast/mixed; lymphoid blast crisis: without dysplastic features of

myeloid cells, no striking basophilia; >> ALL L1 or L2.

Chronic Lymphocytic Leukemia (CLL)

Adalah kelainan monoclonal dengan karakteristik akumulasi limfosit yang secara fungsional

inkompeten, merupakan leukemia tersering pada dewasa di daerah Barat. Bisa berupa sel B, sel T, sel

NK. Lebih dari 90% dari sel B di darah perifer, sumsum tulang, limfonodi, limpa, hati, & organ.

Pemeriksaan lab didapatkan : anemia, leukositosis, 70-90% didominasi oleh limfosit, mature like

morphology dengan fungsi yang imatur, jumlah platelet normal (tapi ada juga trombositopenia

sebanyak 10%), limfositosis absolute (>5000 limfosit B/ L) selama lebih dari 3 bulan, smudge cell >>

(kerusakan limfosit selama preparasi preparat), prolimfosit 10%. Bisa pakai alat diagnosis lain

berupa cytometry.

LABORATORY EXAM OF ALLERGY

AND AUTOIMMUNE DISEASE

TEST FOR ALLERGY

1. Eosinophil Count Materi

Eosinophil Count dilakukan untuk menentukan jumlah total eosinofil/L dalam darah. Penghitungan

WBC dan differential white cell count hanya dapat mengetahui jumlah relative dan absolute

eosinophil dalam darah, namun tidak mampu mengetahui jumlah total eosinophil/L dalam darah.

Nilai normal jumlah eosinophil dalam darah adalah 50 350 X 106/L . Eosinopenia adalah jumlah

eosinophil yang lebih rendah daripada normal. Eosinopenia ditemukan pada hyperadrenalism

(Cushings syndrome), shock, dan pemakaian hormon adrenocorticotropin (ACTH). Sedangkan

eosinofilia adalah keadaan dimana jumlah eosinofil dalam darah lebih tinggi dari normal. Eosinofilia

ditemukan pada reaksi alergi, infestasi parasit, brucellosis, dan leukemia. Terdapat variasi jumlah

eosinofil selama 24 jam. Jumlah eosinofil paling tinggi ditemukan pada malam hari (mid night and

later) sedang jumlah paling rendah ditemukan pada pagi hari (late morning).

Ada 2 cara menghitung jumlah eosinofil absolute yaitu cara indirect dengan cara WBC

dikalikan persentase eosinofil dalam differential white blood count dan metode direct ( pada

praktikum).

Praktikum

Reagen

Eosin solution 2%

Sampel

1 ml whole blood yang menggunakan EDTA/Heparin, darah kapiler

Alat dan bahan

1. mikropipet

2. bilik hitung (improved Neubauer)

3. mikroskop

4. Cover glass

5. tabung reaksi

Prinsip

Whole blood di larutkan dengan larutan pewarna. Eosin yang terdapat di dalam darah akan terwarnai

merah.

Prosedur

1. Pelarutan darah

Pipet darah dengan pipet leukosit hingga pada tanda 0,5. Jika berlebih, letakkan pipet pada benda

yang non absorban seperti kuku dan plastik hingga menurun ke angka 5. Bersihkan bagian luar

pipet dengan tisu atau kapas. Ambil eosin 5% melelui pipet tersebut. Kocok selama 3 menit hingga

eritrosit mengalami hemolisis

2. Bersihkan bilik hitung/improve neubauer dan cover glass dengan ethanol 95%. Letakkan

coverglass diatas bilik hitung.

3. Isi bilik hitung :

Tutup bagian ujung bawah pipet dengan jari telunjuk, buang 4 tetes pertama dan letakkan ujung

pipet disudut bilik hitung. Isi bilik hitung dengan 5 tetes larutan tersebut dan biarkan selama 3

menit. Penghitungan ilakukan da;am 30 menit. Eosinofil akan mengalami disintergrasi jika terlalu

lama dibiarkan.

4. Penghitungan

Letakkan bilik hitung dibawah mikroskop dengan menggunakan perbesaran lemah (objective 10

x). hitung sel pada 4 kotak besar, dimana setiap kotak terbagi menjadi 16 kotak kecil. Prinsip

penghitungan adalah hanya menghitung sel yang menempel dibagian kiri dan atas garis atau

kanan dan bawah garis saja, serta bagian tengah garis.

Eosinophil count/mL = jumlah sel di 4 kotak besar x dilusi

Volum 4 kotak besar = 4 (1 x 1 x 1) mL = 0.4 mL

Eosinophil count/L =Jumlah eosinofil / volum X dilusi X 106

= jumlah eosinofil / 0,4 X 20 X 106

5. Pengecekan ulang direct eosinophil count :

a. buat 2 apusan darah lalu warnai dengan wright stain atau giemsa stain.

b. lakukan penghitungan differential white blood cell hingga 200 sel

c. hitung jumlah eosinofil indirect dengan cara :

Eosinofil/L = persen eosinofil pada diferensial x WBC/L

d. hasil yang diharapkan seharusnya tidak berbeda jauh dengan direct eosinophil count. Jika

variasinya terlalu besar, maka penghitungan direct dan indirect harus diulang.

2. IgE Measurement Materi

Imunoglobulin E berperan dalam imunitas untuk melawan infeksi parasit dan alergi (hipersensitifitas

tipe 1). Hipersensitifitas tipe 1 dicirikan dengan reaksi alergi yang yang dimediasi oleh kontak dengan

alergen. Penempelan alergen ke membran sel akan menginisiasi degranulasi sel dan pelepasan

histamin yang menghasilkan gejala hipersensitifitas tipe 1. Konsentrasi IgE dalam serum normal

adalah

TEST FOR AUTOIMMUNITY

1. Rheumatoid Factors (RF) Materi

Latex agglutination slide test digunakan untuk menetukan keberadaan Rheumatoid Factor dalam

serum secara kualitatif dan semikuantitatif. Rheumatoid factor adalah molekul heterogen dengan

IgM berat molekul tinggi yang melawan imunoglobulin. Sekitar 60-80 % penderita rheumatoid

arthritis memilki rheumatoid factor didalam darah dan jaringan sendi.

Praktikum

Prinsip

Reagen RF berisi partikel latex yang dilapisi human gamma globulin. Ketika reagen tercampur dengan

serum yang berisi RF pada lever > 8 IU/ml maka akan terjadi aglutinasi. Maka interpretasi hasilnya

adalah positif. Reagen juga dapat digunakan untuk menentukan RF secara semi-kuantitatif. Level RF

ditentukan berasarkandilusi terakhir yang menimbulkan aglutinasi.

Sample

Sample yang direkomendasikan adalah serum segar atau yang dibekukan (-20 C) untuk

penyimpanan 48 jam setelah pengambilan, serum harus disimpan pada suhu 2-8 C. hindari

kontaminasi, lipaemic atau hemolysed sera. Jangan menggunakan plasma karena fibrinogen dapat

menyebabkan aglutinasi non-spesifik.

Reagen

R1. Reagen Latex (blue dropper)

Suspensi aqueous partikel latex kuning yang dilapisi human gamma globulin

R2. Diluent (white droper)

Glycine buffered saline pH 8,2

Positive Control (red dropper)

Cairan berisi RF pada konsentrasi >8.0 IU/ ml

Negative Control (white dropper)

Cairan berisi RF pada konsentrasi < 8.0 IU/ml

Stability and preparation of reagents

Semua reagen harus disimpan pada suhu 2-8 C dan dapat digunakan sebelum tanggal kadaluarsa.

Reagen harus berada disuhu ruangan sesaat sebelum digunakan. Reagen tidak boleh dibekukan.

Kocok reagen 1 sebelum digunakan. Seteah digunakan, slide tes harus dicuci dengan bersih dan di

keringkan dengan tisu, jika tidak maka akan mempengaruhi hasil percobaan berikutnya.

Prosedur

Kualitatif

Sample/control Sample Positive control Negative control

50 l 50 l 50 l

1. Teteskan 50 l reagen latex pada setiap sample/kontrol

2. Campur dengan menggunakan stik. Lalu lakukan gerakan rotasi pada slide tes agar reagen

tercampur dengan sampel/ kontrol selama 2 menit

3. Jangan lakukan pengamatan lebih dari 3 menit, karena reagen yang kering akan

menunjukkan tampakan false agglutination

Evaluasi

Tampakan agregasi reagen latex dengan dengan background yang jernih/bersih mengindikasikan

konsentrasi RF > 8.0 IU/ml. sedangkan suspensi seperti susu homogeny dan lembut mengindikasikan

konsentrasi RF < 8.0 IU/ml

Interpretasi Hasil

RF yang terdeteksi oleh pemeriksaan serologis spesifik digunakan untuk diagnosis RA. Hasil positif

dikonfirmasi dengan tes paralel dan konsultasi riwayat pasien. False positive didapatkan jika pasien

menderita syphilis, cirrhosis hepatis, hepatitis, lymphoma, dan lupus erythematosus scleroderma.

2. ANA TEST Tes antinuclear antibodies (ANA test) adalah tes yang dilakukan bagi orang yang menderita penyakit

autoimun atau penyakit jaringan ikat. Antibodi adalah protein yang dikeluarkan sebagai respon imun

tubuh. Secara normal, sistem imun berespon terhadap infeksi dengan mengeluarkan sejumlah

antibody untuk melawan bakteri atau virus. Ketka seseorang menderita penyakit autoimun, terjadi

malfungsi sistem imun dimana tubuh penderita memproduksi subtansi berbahaya yang disebut

autoantibody.

ANA test digunakan untuk mendeteksi autoantibody yang terdeteksi melawan berbagai antigen yang

kebanyakan berada di dalam nucleus. Autoantibody tersebut terdapat pada penyakit seperti

rheumatoid disease, systemic lupus erythematous, progressive systemic sclerosis, Sjorgens syndrome

dan mixed connective tissue disease.

Autoantibody berbeda dengan antibodi pada biasanya. Antibodi melawan bakteri, virus, parasit dan

jamur. Namun autoantibody melawan jaringan dan sel tubuh. Autoantibody memediasi inflamasi dan

destruksi sel yang berefek pada sel darah, kulit, sendi, ginjal, paru, sistem saraf, dan organ lainnya

ditubuh.

Gejala penyakit autoimun dan jaringan ikat bervariasi tiap pasien sehingga sulit untuk didiagnosis.

Tes ANA dikatakan positif namun tidak menjamin diagnosis pasti. Sehingga diperlukan kombinasi

pemerikasaan fisik, dan pemeriksaan lab lainnya.

Prinsip

EIAgen ANA screen assay mendeteksi autoantibody dengan prinsip solid phase immunosorbent assay

(ELISA) yang ditandai dengan reaksi warna dari enzim dan substrat. EIAgen dilapisi oleh antigen.

Limitasi

Tes ini tidak spesifik untuk collagen vascular disease.

3. LE CELL Tes ini digunakan untuk evaluasi penyakit autoimun, khususnya SLE ( systemic lupus erythematosus)

Limitasi

Tes ini adalah metode indirect untuk mendeteksi antinuclear antibody. Tes ini kurang sensitive

daripada tes ANA dan tidak spesifik untuk lupus erythematosus. Hasil tes positif juga didapatkan

pada keadaan dimana pasien mengkonsumsi obat-obatan yang menginduksi sindrom lupus, penyakit

rheumatoid arthritis, hepatitis aktif dan kronis, hipersensitifitas obat, dan penyakit kolagen. Hasil

negative tidak mengeksklusi SLE secara langsung. Darah yang mengandung anticoagulant EDTA dapat

menyebabkan reaksi false negative.

Preparasi

Material nukleus akan berinteraksi dengan antibodi. Inkubasi selama 1 jam pada suhu 37 C

memberikan waktu interaksi material nukleus dan antibodi dan memberikan waktu fagositosis

material nukleus. Lakukan apusan cairan buffy coat, lakukan pewarnaan . Jika didapatkan material

berwarna lavender homogeny maka hasilnya positif. Keberadaan material LE extraceluler atau

adanya tampakan rosette tidak dapat mendiagnosis secara langsung SLE, tapi perlu dilakukan

pemeriksaan fisik, anamnesis riwayat pasien dan pemeriksaan penunjang lainnya.

TRANSUDATE AND EXUDATE ANALYSIS

PENDAHULUAN Rongga serosa dalam tubuh mengandung sejumlah kecil cairan yang mengalir diantara ruang

intravascular dan ruangan ekstra selular. Cairan ini dipelihara dalam keadaan seimbang oleh tekanan

osmosis dalam kapiler membran serosa tersebut. Cairan tersebut berfungsi sebagai pelumas agar

membrane yang dilapisi mesothel dapat bergerak tanpa gesekan.

Jumlah cairan tersebut dalam keadaan normal tidak dapat diukur karena sangat sedikit jumlahnya.

Pada keadaan tertentu jumlah cairan tersebut dapat bertambah jumlahnya dan dapat berupa

transudat atau eksudat.

Transudat Transudat merupakan kumpulan cairan dalam suatu rongga tubuh yang bukan berasal dari proses

peradangan dan berkait dengan gangguan keseimbangan cairan tubuh.

Kelainan yang dapat menimbulkan transudat :

Penurunan tekanan osmotik plasma karena hipoalbuminemia

Peningkatan tekanan hidrostatik

Biasanya berasosasi dengan Congestive Heart Failure, Sindroma nefrotik, Cirrhosis Hepatis

Menurut lokasinya transudat disebut dengan istilah : hidrothoraks, hidroperikardium,

hidroperitoneum, dll

Ciri-ciri transudat spesifik :

- Warna agak kekuningan

- Kejernihan : jernih

- Berat jenis

banyak fibrin sehingga melekat pada permukaan pleura, merupakan lapisan kelabu/kuning yang

ditemukan pada pneumonia. Eksudat fibrinosa terjadi bila permeabilitas kapiler bertambah banyak,

yaitu karena molekul molekul fibrin besar dapat keluar dari kapiler dan menjadi bagian daripada

eksudat. Eksudat purulen ialah eksudat yang terjadi dari pus. Pus ini terjadi pada radang akut yang

mengandung banyak sel polinukleus yang kemudian musnah dan mencair karena lisis. Sisa jaringan

nekrotik yang mengalami lisis bersama dengan sel polinukleus yang musnah dan limfe radang

menjadi cairan yang disebut nanah. Eksudat hemoragik ialah eksudat radang yang berwarna

kemerahmerahan karena mengandung banyak eritrosit.

Perbedaan Transudat dan Eksudat:

Keterangan Transudat Eksudat

Rivalta - +

Berat jenis < 1,016 > 1,016

Kadar protein < 3 gr / 100 cc > 3 gr / 100 cc

Protein plasma < 0,5 > 0,5

LDH < 200 IU > 200 IU

LDH plasma < 0,6 > 0,6

Lekosit

Hitung jenis leukosit

< 1000 / mm3

< 50% limfosit

> 1000 / mm3

> 50% limfosit

PH >7,3 < 7,3

Glukosa plasma < plasma

Amilase = plasma >plasma

Alkali fosfatase >75 u > 75 u

*PRAKTIKUM*

TUJUAN

Mengetahui pengertian transudat dan eksudat

Mengetahui cara pemeriksaan transudat dan eksudat

Dapat membedakan transudat dan eksudat

Mengetahui cara diagnosa laboratorium

PEMERIKSAAN

1. Physical Examination

Volume

Volume transudat dan eksudat diukur dengan gelas ukur dan hasilnya dibaca setinggi

miniskus bawah

Prosedur

1. Masukkan cairan dalam becker glass

2. Tuang cairan ke dalam gelas ukur

3. Lihat volume cairan yang ada pada gelas ukur

Interpretasi

Jumlah cairan tersebut dalam keadaan normal tidak dapat diukur karena sangat sedikit

jumlahnya.

Jumlah volume dari cairan yang didapatkan dapat memberikan informasi mengenai luasnya

kelainan.

Kejernihan

Kejernihan cairan diamati secara visual di dalam becker glass

Interpretasi

Transudate biasanya jernih yang mempunyai viskositas hampir sama dengan serum.

Exudate biasanya lebih keruh.

Warna

Warna cairan diamati secara visual dengan cahaya terang

Analisis

Transudate berwarna kuning pucat hingga kuning

Exudate warnanya bervariasi tergantung penyebab dan keparahannya, dari kuning, hijau,

pink hingga merah.

Cairan yang hanya terdiri dari serum/plasma berwarna kuning muda /tua tergantung dari

kadar bilirubin dalam plasma tersebut. Warna transudat biasanya kekuningan tergantung

kadar bilirubin plasma, warna eksudat tergantung causa dan beratnya radang.

Pus putih kuning

Chylous seperti susu

Darah merah cokelat

Bakteri pyogene biru kehijauan

Penjendalan Spontan

Perhatikan terjadinya bekuan, dan terangkan sifatnya (renggang, berkeping, berbutir, sangat

halus, dll). Bekuan itu tersusun dari fibrin dan hanya didapat pada eksudat. Kalau dikira

cairan yang dipungsi barsifat eksudat, campurlah sebagian dari cairan itu dengan

anticoagulant supaya tetap cair dan dapat dipakai untuk pemeriksaan lain-lain.

Bekuan yang terjadi sangat lambat pada transudat karena kadar fibrinogen yang rendah

disebut FIBRINOUS SWAB / PELICLE.

Transudate tidak mengandung fibrinogen, maka ia tidak menjendal spontan

Exudate seringnya mengandung fibrinogen, maka ia dapat membentuk jendalan oleh karena

itu memerlukan antikoagulan pada saat pengumpulan spesimennya.

2. Microscopic Examination

Total Leucocyte

Tujuan : menentukan jumlah total leukosit

Material : improved Neubauer counting chamber

Pipet Pasteur

Turk solution

Prosedur :

a) Tutup counting chamber dengan cover glass

b) Kocok pelan-pelan cairan serosanya, masukkan pada pipet leukosit sampai angka 0.5

setelah itu masukkan turk solution sampai angka 11 dengan pengenceran 20 kali.

Kocok pipet leukosit pelan-pelan sampai cairan dan reagen bercampur.

c) Buang 4 tetes pertama pada tissue kemudian isi counting chamber pelan-pelan.

d) Hitung leukosit dibawah mikroskop dengan perbesaran 10x. Pastikan jangan ada

distribusi sel yng bertumpukan apabila hal tersebut terjadi, buatlah yang baru mulai

dari awal.

e) Hitung leukosit pada 4 kotak besar, 1 kotak besar berisi 16 kotak kecil.

f) Kalkulasi

Cell counted x dilution factor x volume factor = cells/L (mm3)

Volume factor = 1/area x depth

Analisis :

Cairan yang berupa transudat biasanya mengandung kurang dari 500 sel/ul. semakin tinggi

angka itu semakin besar kemungkinan cairan tersebut bersifat eksudat.

Differential leucocyte count

Tujuan : untuk menghitung persentase dari variasi leukosit dari transudat dan

eksudat

Prinsip : membedakan leukosit berdasarkan morfologi dan kemampuan masing-

masing tipe leukosit untuk menyerap pewarnaan.

Material : microscope, object glass, cover glass, centrifuge, tube, pasteur pipette.

Sampel : transudat atau eksudat

Reagen : Giemsa

Prosedur :

a) Sentrifugasi exudate atau transudate pada 2500 rpm selama 10 menit.

b) Ambil sample dan teteskan ke object glass, buatlah darah apusan, biarkan kering

pada suhu ruangan

c) Warnai dengan pewarnaan giemsa

d) Hitung seperti menghitung pada WBC count.

Interpretasi :

Transudate biasanya ditemukan jumlah sel WBC < 500 sel dengan dominasi sel mononuclear

Exudate ditemukan > 1000 sel dengan dominasi sel polimorfonuklear

3. Chemical Examination

Qualitative Protein (Rivalta Test)

Tujuan : membedakan transudat dan eksudat

Prinsip : penambahan asam asetat ke dalam cairan akan menjadikan protein

berakumulasi sehingga kekeruhan dapat terlihat.

Material : pasteur pipette, 100 mL beaker, Glass Rod.

Reagen : asam asetat

Prosedur :

a) Tuangkan 100 mL distilled water ke dalam 100 mL beaker.

b) Tambahkan 1 tetes asam asetat, aduk dengan glass stirrer

c) Teteskan 1 tetes eksudat/transudat ke dalam beaker pada 1 cm diatas permukaan

d) Perhatikan ketika cairan mulai menggumpal dan berkabut.

e) Ketika tidak berkabut, ulangi. (konfirmasi)

Analisis :

Berkabut Eksudat

Tidak bekabut Transudat

- Sampel bercampur dengan as. Asetat tampa menimbulkan kekeruhan atau kabut sama

sekali; hasil negatif ulangi percobaannya, biasanya hasil negatif ini pada cairan rongga

kondisi normal.

- Timbul kekeruhan seperti kabut tipis positif lemah, biasanya pada transudat.

- Tampak kekeruhan yang jelas seperti kabut tebal atau bahkan presipitat putih ; positif,

secara teori disebabkan seromusinosa yang ada dalam eksudat maupun transudat yang

sudah beberapa kali dipungsi.

Sebaiknya tes ini tidak dilakukan sekali saja, untuk hasil yang dapat diandalkan.

Penyulit :

Penggunaan terlalu banyak tetesan (lebih dari 1 cm di permukaan)

*tambahan pengetahuan saja*

MEKANISME PENIMBUNAN CAIRAN PASIF

Penimbunan cairan (efusi) terjadi akibat peningkatan tekanan hidrostatik, yang memaksa cairan

menembus keluar kapiler untuk masuk ke jaringan. Tekanan hidrostatik cenderung mendorong

cairan keluar, dan hal ini dilawan oleh tekanan dalam sirkulasi. Albumin dan protein-protein di dalam

darah berperan menimbulkan tekanan onkotik. Tekan hidrostatik di ujung arterial biasanya sekitar 40

mmHg, dan tekanan onkotik 25 mmHg. Dengan demikian tekanan positive yang mendorong cairan

keluar ke dalam rongga serosa adalah 15 mmHg. Apabila tekanan onkotik plasma berkurang, semakin

banyak cairan yang didorong keluar, dan ini sering merupakan penyebab efusi serosa. Dalam

keadaan normal, di ujung venosa kapiler tekanan hidrostatik turun menjadi sekitar 10 mmHg, dan

tekanan osmotic koloid tetap 25 mmHg, yang melawan tekanan hidrostatik ini. Dengan demikian

terjadi tekanan negative sebesar 15 mmHg di ujung venosa, yang cenderung menarik cairan masuk

ke dalam pembuluh cairan. Setiap proses yang meningkatkan tekanan hidrostatik di ujung venosa

besar kemungkinannya menyebabkan penimbunan cairan secara pasif. selain itu, setiap penurunan

tekanan onkotik plasma akan mengurangi jumlah cairan yang tertarik masuk ke dalam kapiler

venosa.

Mekanisme lain yang mempermudah penimbunan pasif cairan, yang mungkin bersifat local atau

generalisata, adalah mekanisme alergi yang meningkatkan permeabilitas kapiler atau obstruksi limfe.

Hal ini pada gilirannya, mengurangi jumlah cairan ekstravaskuler yang dibersihkan oleh system

limfatik.

Eksudat terbentuk apabila lapisan kapiler atau membrane rusak oleh proses peradangan atau

neoplastik. Akibatnya protein berukuran besar dan konstituen darah lainnya bocor keluar untuk

masuk ke jaringan dan rongga tubuh. Pada peradangan aktif, kandungan protein pada cairan ini

meningkat.

CARA MEMPEROLEH BAHAN

Bahan (dari rongga perut, pleura, pericardium, sendi, kista, hidrocele,dsb.) didapat dengan

mengadakan pungsi. Karena tidak dapat diketahui terlebih dulu apakah cairan itu berupa transudat

atau eksudat, haruslah pertama-tama syarat bekerja steril diindahkan dan kedua untuk menyediakan

anticoagulant. Sediakanlah pada waktu melakukan pungsi selain penampung biasa juga penampung

steril (untuk biakan) dan penampung yang berisi larutan natrium citrat 20% atau heparin steril.

Cairan yang diperoleh ditampung dalam 3 botol penampung :

Botol I : Steril untuk pemeriksaan bakteriologi

Botol II : Di tambah anticoagulant untuk pemeriksaan rutin

Botol III : Tanpa anticoagulant untuk pemeriksaan kimia.