Bagian Isi Fix

5/19/2018 Bagian Isi Fix

1/37

1

BAB I

PENDAHULUAN

1.1Latar Belakang

Radikal bebas merupakan molekul yang memiliki satu atau lebih elektron

yang tidak berpasangan. Elektron-elektron yang tidak berpasangan ini

menyebabkan radikal bebas menjadi senyawa yang sangat reaktif terhadap sel-

sel tubuh dengan cara mengikat elektron molekul sel1. Dalam keadaan normal

radikal bebas yang diproduksi didalam tubuh akan dinetralisir oleh

antioksidan yang ada didalam tubuh. Bila kadar radikal bebas terlalu tinggi

seperti saat melakukan aktivitas fisik berat, maka kemampuan dari antioksidan

endogen tidak memadai untuk menetralisir radikal bebas sehingga terjadi

keadaan yang tidak seimbang antara radikal bebas dengan antioksidan2.

Tingginya kadar radikal bebas dalam tubuh dapat memicu munculnya

berbagai penyakit degeneratif seperti penyakit jantung, arteriosclerosis,

kanker, serta gejala penuaan. Oleh sebab itu,tubuh kita memerlukan suatu

substansi penting, yakni antioksidan yang dapat membantu melindungi tubuh

dari serangan radikal bebas dan meredam dampak negatifnya3.

Antioksidan merupakan zat yang dapat menetralkan radikal bebas

sehingga dapat melindungi sistem biologi tubuh dari efek merugikan yang

timbul dari proses ataupun reaksi yang menyebabkan oksidasi yang

berlebihan4. Salah satu tanaman dari Indonesia yang telah terbukti memiliki

efek sebagai antioksidan adalah buah naga (Hylocereus polyrhizus Britton &


2/37

2

Rose). Senyawa kimia dari tanaman ini yang memiliki aktivitas sebagai

antioksidan adalah vitamin C, vitamin E, vitamin A dan senyawa polifenol 5.

Penelitian dengan menggunakan ekstrak metanol buah naga (Hylocereus

polyrhizus Britton & Rose) yang diformulasikan dalam bentuk lotio telah

membuktikan bahwa buah naga memiliki aktivitas sebagai antioksidan6.

Kulit merupakan salah satu organ tubuh yang rentan terhadap radikal

bebas. sehingga diperlukan suatu sediaan antioksidan alami untuk melindungi

kulit dari pengaruh radikal bebas yaitu dengan menggunakan sistem

nanoemulsi. Berdasarkan penelusuran literatur yang telah dilakukan, belum

ada hasil penelitian yang mengembangkan buah naga (Hylocereus polyrhizus

Britton & Rose) dalam bentuk nanoemulsi sebagai salah satu sistem

penghantaran obat (Drug Delivery System). Nanoemulsi adalah sistem emulsi

yang transparan, tembus cahaya dan merupakan dispersi minyak dan air yang

distabilkan oleh lapisan film dari surfaktan atau molekul surfaktan, yang

memiliki ukuran droplet 50 nm 500 nm7. Oleh sebab itu, formulasi sediaan

antioksidan dengan sistem nanoemulsi dipilih karena mempunyai kestabilan

secara kinetik sehingga mencegah terjadinya sedimentasi dan kriming selama

penyimpanan8

, jernih, dapat meningkatkan kelarutan zat aktif dan

meningkatkan bioavailabilitasnya10. Karakteristik tersebut membuat sediaan

topikal nanoemulsi mempunyai peranan penting sebagai dalam formula untuk

zat aktif yang tidak larut terutama zat aktif yang sifatnya hidrofil sehingga

sulit untuk menembus lapisan kulit yang sifatnya lipofil.


3/37

3

Sediaan nanoemulsi yang dibuat dalam penelitian ini menggunakan tipe

nanoemulsi air dalam minyak (A/M). Sehingga diperlukan adanya surfaktan

dengan nilai HLB rendah (3-6) untuk membantu terbentuknya nanoemulsi

A/M9. Surfaktan yang dipilih dalam formulasi ini adalah surfaktan nonionik

lipofilik Span 80 (Sorbitan monoleat) dengan nilai HLB 4,3 karena dapat

mempengaruhi sifat barrier kulit dan koefisien partisi pembawa-stratum

korneum, sehingga dapat meningkatkan laju penetrasi zat aktif 10.

Berdasarkan hal-hal yang telah dipaparkan tersebut maka dalam penelitian

ini akan dibuat suatu sediaan antioksidan topikal nanoemulsi tipe A/M

menggunakan span 80 sebagai surfaktan sehingga menghasilkan sediaan

antioksidan alami dengan konsentrasi optimum dari aktivitas antioksidan

ekstrak etanol Hylocereus polyrhizus Britton & Rose, dimana uji efektivitas

antioksidan sediaan nanoemulsi akan diuji melalui metode DPPH, serta uji

stabilitasnya akan dilakukan untuk menentukan formula terbaik.

1.2Rumusan Masalah

a. Apakah ekstrak etanol buah naga (Hylocereus polyrhizus Britton & Rose)

dapat dibuat dalam bentuk sediaan topikal nanoemulsi ?

b.

Berapakah nilai IC50 sediaan topikal nanoemulsi ekstrak etanol buah naga

(Hylocereus polyrhizus Britton & Rose) ?

c. Bagaimana pengaruh Span 80 terhadap stabilitas dari sediaan topikal

nanoemulsi ekstrak etanol buah naga (Hylocereus polyrhizus Britton &

Rose) ?


4/37

4

d.

Bagaimana sifat fisik, kimia dan stabilitas sediaan topikal nanoemulsi

ekstrak etanol buah naga (Hylocereus polyrhizus Britton & Rose) ?

1.3Tujuan

a. Mengetahui apakah ekstrak etanol buah naga (Hylocereus polyrhizus

Britton & Rose) dapat dibuat dalam bentuk sediaan topikal nanoemulsi.

b. Mengetahui nilai IC50 ekstrak etanol buah naga (Hylocereus polyrhizus

Britton & Rose) dalam sediaan topikal nanomulsi.

c.

Mengetahui pengaruh Span 80 terhadap stabilitas dari sediaan topikal

nanoemulsi ekstrak etanol mengembangkan buah naga (Hylocereus

polyrhizus Britton & Rose).

d. Mengetahui sifat fisik, kimia dan stabilitas sediaan topikal nanomulsi

ekstrak etanol buah naga (Hylocereus polyrhizus Britton & Rose).

1.4

Manfaat Penelitian

a.

Mengetahui manfaat dari ekstrak buah naga (Hylocereus polyrhizus

Britton & Rose) sebagai antioksidan alami.

b. Sebagai dasar penelitian lebih lanjut dalam usaha pengembangan obat

yang berasal dari alam dalam upaya peningkatan kesehatan masyarakat

dan pemanfaatan bahan alam.


5/37

5

BAB II

TINJAUAN PUSTAKA

II.1 Buah Naga (Hylocereus polyrh izusBritton & Rose)

II.1.1 Taksonomi Tanaman

Sistematika taksonomi tanaman H. polyrhizus (Gambar 1) adalah

sebagai berikut11:

Kingdom :Plantae

Sub kingdom : Tracheobionta(tanaman vaskular)

Super divisi : Spermathophyta(tumbuhan berbiji)

Divisi :Magnoliophyta(tanaman berbunga)

Kelas :Magnoliopsida(tanaman dikotil atau berkeping dua)

Ordo : Caryophyllales

Famili : Cactaceae(kaktus)

Genus :Hylocereus

Spesies :Hylocereus polyrhizusBritton & Rose

(A) (B)

Gambar 1. (A) Tanaman Buah Naga Merah (B) Buah Naga Merah


6/37

6

II.1.2 Penyebaran Tanaman Buah Naga

Tumbuhan buah naga berasal dari daerah beriklim tropis kering.

Habitat aslinya di Meksiko, Amerika Tengah dan Amerika Selatan bagian

Utara. Di daerah asalnya tersebut buah naga atau dragon fruit ini dinamai

pitahaya ataupitaya roja. Buah naga mulai dikembangkan di Indonesia sejak

tahun 2001 yang mana daerah yang mengembangkan tanaman buah naga ini,

antara lain Pasuruan, Jember, Mojokerto, dan Jobang11.

Adapun jenis dari tanaman buah naga yang diusahakan dan

memiliki prospek yang baik, antara lain11:

a. Buah naga berkulit merah dan berdaging putih (Hylocereus undatus).

b. Buah naga berkulit merah dan berdaging merah (Hylocereus polyrhizus).

c.

Buah naga berkulit merah dan berdaging super merah (Hylocereus

castaricensis).

d. Buah naga berkulit kuning halus dan berdaging putih (Selenicereus

megalanthus).

II.1.3 Morfologi Tanaman

Tanaman buah naga merupakan tanaman perennial, tumbuh cepat,

merambat dan tidak berdaun. Batang buah naga berwarna hijau tua,

bersegmen-segmen, tidak berkayu dan kebanyakan berduri. Buah naga

berbentuk lonjong agak mengerucut (oblong) atau secara umum disebut

bentuk berry. Buah tanaman ini memiliki banyak variasi warna, mulai dari

kuning, merah muda, sampai merah12. Ketebalan kulit buah 2-3 cm. Pada


7/37

7

permukaan kulit buah terdapat jumbai atau jambul berukuran 1-2 cm. Biji

berbentuk bulat berukuran kecil dengan warna hitam. Kulit biji sangat tipis,

tetapi keras dan terdapat sekitar 1.200-2.300 biji11.

II.1.4 Kandungan Kimia

H. polyrhizusmengandung senyawa flavonoid dan polifenol, dimana

senyawa ini mempunyai kandungan antioksidan untuk mengikat radikal

bebas dalam sistem biologis14. Selain itu, buah naga juga mengandung

berbagai macam kandungan gizi yang menyehatkan. Kandungan gizi H.

polyrhizus (Tabel 1) secara lengkap telah dilaporkan oleh Taiwan Food

Industry Development and Research Authorities13.

Tabel 1. Kandungan Gizi H. polyrhizusper 100 g13

Keterangan Komposisi

Kelembaban air (g) 82,5-83Protein (g) 0,159-0,229

Lemak (g) 0,21-0,61

Serat kasar (g) 0,7-0,9

Karotenoid (mg) 0,005-0,012

Kalsium (mg) 6,3-8,8

Fosfor (mg) 30,2-36,1

Besi (mg) 0,55-0,65

Vitamin B1 (mg) 0,28-0,043

Vitamin B2 (mg) 0,043-0,045

Vitamin C (mg) 8,0-9,0

Thiamin (mg) 0,28-0,30

Riboflavin (mg) 0,043-0,044

Niasin (mg) 1,297-1,300

Abu (g) 0,28

Lain-lain (g) 0,54-0,68

II.1.5 Manfaat H. polyrh izusSecara Biologis

H. polyrhizus memiliki khasiat untuk kesehatan manusia,

diantaranya ialah sebagai penyeimbang kadar gula darah, pencegah kanker


8/37

8

usus, pelindung kesehatan mulut, pencegah pendarahan dan obat keputihan11.

Pemberian ekstrak metanol H. polyrhizus secara oral pada mencit dapat

menurunkan total kolesterol hingga 49,14%15. Ekstrak metanolH. polyrhizus

dengan konsentrasi 1250, 2500 dan 5000 mg/kg BB tikus yang diberikan

secara oral dengan dosis tunggal tidak menunjukan adanya toksisitas akut

maupun kronis16.

II.2 Kulit

Kulit merupakan organ yang menutupi permukaan tubuh dan memiliki

fungsi utama sebagai pelindung dari berbagai gangguan dan rangsangan luar.

Kulit terbagi atas dua lapisan utama, yaitu epidermis (kulit ari) sebagai lapisan

paling luar dan dermis (korium, kutis, kulit jangat). Di bawah dermis terdapat

subkutis atau jaringan lemak bawah kulit17.

Gambar 2. Struktur dasar kulit manusia18

Epidermis adalah lapisan kulit yang paling luar. Epidermis memiliki

ketebalan yang berbeda, paling tebal berukuran 1 mm, misalnya pada telapak kaki


9/37

9

dan telapak tangan, dan paling tipis berukuran 0,1 mm terdapat pada kelopak

mata, pipi, dahi, dan perut. Sel epidermis disebut dengan keratinosit17.

Epidermis terbagi menjadi lima lapisan, yaitu:

a. Stratum corneum (lapisan tanduk)

Lapisan ini merupakan lapisan yang paling atas dan terdiri atas beberapa

lapis sel pipih, mati, tidak memiliki inti, tidak mengalami metabolisme, tidak

berwarna, dan sangat sedikit mengandung air. Lapisan ini sebagian besar terdiri

atas keratin (protein yang tidak larut dalam air) dan sangat resisten terhadap bahan

kimia. Secara alami, sel-sel yang mati di permukaan kulit akan melepaskan diri

untuk beregenerasi. Permukaan lapisan ini dilapisi oleh lapisan pelindung lembab

tipis bersifat asam disebut mantel asam kulit17.

b. Stratum lucidum (lapisan jernih)

Lapisan ini disebut juga lapisan barrier yang letaknya tepat di bawah

stratum corneum. Lapisan ini merupakan lapisan tipis, jernih, mengandung eleidin

yang terdapat antara stratum lucidum dan stratum granulosum terdapat lapisan

keratin tipis disebut reins barrier (Szakall) yang tidak dapat ditembus

(impermeable)17.

c.

Stratum granulosum (lapisan berbutir-butir)

Lapisan ini tersusun atas sel-sel keratinosit berbentuk poligonal, berbutir

kasar, berinti mengkerut. Dalam butir keratohyalin tersebut terdapat bahan logam,

khususnya tembaga, sebagai katalisator proses pertandukan kulit17.

d. Stratum spinosum (lapisan malphigi)

Lapisan ini memiliki sel berbentuk kubus dan seperti berduri, berinti besar


10/37

10

dan berbentuk oval. Setiap sel berisi filamen kecil terdiri atas serabut protein.

Cairan limfe ditemukan mengitari sel-sel dalam lapisan ini17.

e. Stratum germinativum (lapisan basal atau membran basalis)

Lapisan ini merupakan lapisan terbawah epidermis. Di dalamnya terdapat

sel-sel melanosit, yaitu sel yang tidak mengalami keratinisasi dan fungsinya hanya

membentuk pigmen melanin dan melalui dendrit-dendrit diberikan kepada sel-sel

keratinosit. Satu sel melanin untuk sekitar 36 sel keratinosit dan disebut dengan

unit melanin epidermal17.

Dermis terdiri dari serabut kolagen dan elastin, yang berada dalam

substansi dasar yang bersifat koloid dan terbuat dari gelatin mukopolisakarida.

Serabut kolagen mencapai 72% dari keseluruhan berat kulit manusia tanpa lemak.

Di dalam dermis terdapat folikel rambut, papila rambut, kelenjar keringat, saluran

keringat, kelenjar sebasea, otot penegak rambut, ujung pembuluh darah dan ujung

saraf, juga sebagian serabut lemak yang terdapat pada lapisan lemak bawah

kulit19.

II.2.1 Keratinisasi

Sel keratinosit pada lapisan basal atau lapisan tanduk akan

memperbanyak diri, berdiferensiasi, terdesak menuju ke permukaan kulit

sehingga menjadi sel-sel yang mati, kering, dan pipih dalam stratum

corneum. Kandungan lemak pada stratum germinativum sekitar 13-14%,

sedangkan dalam stratum granulosum turun menjadi 10%, dan hanya bersisa

7% atau kurang dalam stratum corneum. Kandungan air dalam stratum


11/37

11

corneum hanya sekitar 25%, sedangkan pada lapisan lainnya dapat mencapai

70%19.

Keratinisasi adalah proses pendewasaan dari stratum germinativum

sampai menjadi sel tanduk dalam stratum corneum yang berlangsung selama

1421 hari dan sering disebut Cell Turn Over Time19.

II.2.2 Fungsi Biologik Kulit

II.2.2.1 Proteksi

Serabut elastis pada dermis serta jaringan lemak subkutan

berfungsi mencegah trauma mekanik langsung terhadap tubuh bagian

dalam. Lapisan tanduk dan mantel lemak kulit menjaga kadar air

dengan mencegah masuknya air dari luar tubuh dan mencegah

penguapan air, serta sebagai barrier terhadap racun dari luar. Mantel

asam kulit dapat mencegah pertumbuhan bakteri di kulit20.

II.2.2.2 Termoregulasi

Temperatur tubuh diatur dengan mekanisme dilatasi dan

konstriksi pembuluh kapiler dan melalui perspirasi. Saat temperatur

badan menurun terjadi vasokonstriksi, sedangkan saat temperatur

meningkat terjadi vasodilatasi sehingga penguapan akan menjadi lebih

banyak dan tubuh menjadi dingin kembali20.

II.2.2.3 Persepsi sensoris

Kulit bertanggung jawab sebagai indera terhadap adanya

rangsangan dari luar. Rangsangan tersebut kemudian diterima oleh

reseptor-reseptor dan diteruskan ke sistem saraf pusat yang selanjutnya


12/37

12

diinterpretasi oleh korteks serebri. Reseptor-reseptor yang bertanggung

jawab terhadap adanya rangsangan tersebut, antara lain Meissner

sebagai reseptor raba, Pacini sebagai reseptor tekanan, Ruffini dan

Krauss sebagai reseptor suhu, dan Nervus End Plate sebagai

reseptor nyeri20.

II.2.2.4 Absorbsi

Absorbsi melalui kulit terdiri dari dua jalur, yaitu melalui

epidermis dan melalui kelenjar sebasea. Bahan-bahan yang mudah larut

dalam lemak akan lebih mudah diabsorbsi dibandingkan dengan air

ataupun bahan yang dapat larut dalam air. Obat dapat terpenetrasi pada

kulit melalui dinding saluran folikel rambut, kelenjar keringat atau

kelenjar sebasea. Dapat pula lewat antara sel-sel stratum corneum atau

menembus sel-sel stratum corneum, cara ini disebut transepidermal17,20.

II.3 Antioksidan

Radikal bebas adalah molekul atau atom yang memiliki satu atau lebih

elektron yang tidak berpasangan. Elektron tersebut sangat reaktif dan cepat

bereaksi dengan molekul lain sehingga terbentuk radikal bebas baru dalam jumlah

besar secara terus-menerus. Radikal bebas dapat menimbulkan kerusakan di

berbagai bagian sel dan menyebabkan berbagai penyakit seperti tumor, kanker,

arterosklerosis, katarak, keriput, penuaan dan lainnya, sehingga diperlukan

antioksidan untuk menghambat oksidasi radikal bebas21,22.

Antioksidan adalah senyawa kimia yang dapat menyumbangkan satu atau


13/37

13

lebih elektron kepada radikal bebas, sehingga radikal bebas tersebut dapat

diredam. Antioksidan bersifat sebagai free radical scavenging yang mampu

menghambat oksidasi radikal bebas. Antioksidan digunakan untuk melindungi

kulit dari kerusakan akibat oksidasi dan mencegah penuaan dini. Tubuh manusia

tidak mempunyai cadangan antioksidan dalam jumlah berlebih, sehingga jika

terjadi paparan radikal berlebih maka tubuh membutuhkan antioksidan eksogen

yang dapat berupa pemberian oral dan topikal. Pemberian antioksidan secara

topikal dapat melindungi kulit dari pengaruh buruk sinar UV. Antioksidan pada

penggunaanya, dapat berfungsi sebagai bahan tambahan dan sebagai bahan aktif.

Berdasarkan kelarutanya antioksidan dibagi menjadi 2 yaitu antioksidan larut air

(sodium metabisulfit, asam sitrat dan vitamin C) dan antioksidan larut lemak

(BHT, BHA dan vitamin E). Pada sediaan gel digunakan antioksidan yang larut

dalam air23.

II.4 Nanoemulsi

II.4.1 Deskripsi Nanoemulsi

Nanoemulsi dapat didefinisikan sebagai emulsi dengan ukuran

globul yang sangat kecil. Nanoemulsi dibagi menjadi 2 tipe yaitu sistem

stabil termodinamika dan metastabil. Namun, perbedaan antara nanoemulsi

dengan sistem stabil termodinamika dan metastabil masih kurang begitu

jelas. Berbeda dengan sistem stabil termodinamika, kestabilan sistem

metastabil bergantung pada metode pembuatan. Nanoemlsi dapat memiliki

stabilitas kinetik yang tinggi dan transparan seperti sistem stabil

termodinamika (mikroemulsi). Walaupun metastabil, nanoemulsi dapat


14/37

14

memiliki stabilitas lebih dari beberapa bulan atau bahkan lebih dari beberapa

tahun karena adanya misel surfaktan sebagai penstabil24.

Ukuran globul nanoemulsi lebih kecil daripada gelombang cahaya

tampak sehingga terlihat transparan. Ukuran rata-rata nanoemulsi memiliki

kisaran 1-100 nm25.Karena transparan danbiasanya encer, sedikit tanpa

ketidakstabilan dapat dengan mudah terlihat24.

Ukuran globul yang sangat kecil menyebabkan penurun gaya gravitasi

yang besar dan gerak Brown yang dapat mencegah terjadinya sedimentasi

atau creamin sehingga dapat meningkatan stabilitas fisik. Nanoemulsi dapat

stabil secara kinetik karena ukuran globul yang sangat kecil sehingga stabil

dari sedimentasi dan creaming. Ukuran globul yang kecil pun dapat

mencegah flokulasi. Nanoemulsi dapat menghasilkan tegangan permukaan

yang sangat rendah dan luas permukaan yang besar antara fase minyak dan

air24.

Nanoemulsi terbagi menjadi 3 tipe sejak pembuatan nanoemulsi

pertama tahun 1940-an, yaitu nanoemulsi minyak dalam air (O/W), air dalam

minyak (W/O) dan bikontinu. Perubahan antara ketiga tipe tersebut dapat

diperoleh dengan menvariasikan komponen dari nanoemulsi26

.

II.4.2 Kelebihan dan Kekurangan Nanoemulsi

Nanoemulsi memiliki kelebihan sebagai berikut24,26,27:

a.

Ukuran globul yang sangat kecil menyebabkan penurunan gaya gravitasi

dan gerak Brown sehingga dapat mencegah terjadinya flokulasi


15/37

15

b.

Nanoemulsi memiliki luas permukaan yang besar dari sistem emulsi

memungkinkan penetrasi yang cepat dari bahan aktif

c. Ukuran globul yang kecil dapat mencegah terjadinya flokulasi

d. Tidak merusak sel normal dari manusia dan hewan sehingga baik untuk

tujuan terapetik pada manusia dan hewan.

e. Dapat diberikan secara oral jika dalam formula mengandung surfaktan

yang biokompatibel.

f.

Merupakan cara yang paling efektif untuk meningkatkan bioavailabilitas

dari nutrasetika.

Disisi lain, seperti halnya mikroemulsi, karena sistem penghantaran

obat sebaiknya biokompatibel, pemilihan eksipien untuk pembuatan

nanoemulsi menjadi terbatas. Penggunaan surfaktan dalam jumlah besar yang

dibutuhkan untuk pembuatan nanoemulsi pun menjadi hal yang tidak

diinginkan. Oleh karena itu, pemilihan yang tepat dari komponen nanoemulsi

dan konsentrasinya menjadi sangat penting28.

II.4.3 Formulasi dan Komposisi Nanoemulsi

Komponen nanoemulsi terdiri dari minyak, air dan surfaktan atau

sering ditambahkan kosurfaktan.

II.4.3.1 Fase Minyak

Komponen minyak yang digunakan memiliki kemampuan

berpenetrasi berbeda yang natinya akan mengembang di daerah grup

ekor dari lapisan surfaktan sehingga mempengaruhi HLB. Minyak

rantai pendek dapat berpenetrasi pada area grup ekor lebih baik


16/37

16

daripada rantai panjang alkana sehingga dapat menurunkan HLB. Asam

lemak jenuh seperti asam laurat, miristat, dan kaprat dan asam lemak

tidak jenuh seperti asam oleat, linoleat dan linolenat elah banyak

dipelajari sejak lama dan ditemukan memiliki sifat peningkat penetrasi

masing-masing. Ester asam lemak seperti ester dari etil atau metil asam

laurat, miristat, dan oleat pun dapat digunakan sebagai fase minyak.

Jika fase minyak akan ditambahkan obat, disarankan menggunakan obat

yang lipofilik atau yang memiliki kelarutan tinggi di dalam fase minyak

tersebut agar dapat meminimalkan volume dalam formulasi28.

A. Deskripsi HLB

Konsep HLB (Hidrophile-Lipophile-Balance) ditemukan oleh

Griffin untuk surfaktan non-ionik. Griffin menyusun setiap surfaktan

ke dalam harga bilangan tanpa dimensi yang dihitung dari

perbandingan stoikiometri bagian lipofil dan hidrofil surfaktan

sehingga harga HLB berisi informasi keseimbangan hidrofil-lipofil

yang dihasilkan dari ukuran dan kekuatan gugus hidrofil dan lipofil.

Dengan adanya HLB, identifikasi surfaktan menurut sifatnya

amfifilnya dan klasifikasi tujuan penggunaan yang sesuai menjadi

mungkin dilakukan29.

Berdasarkan tujuan pemakaian, sistem HLB mengikuti skala

angka skala 1 sampai 20 berdasarkan Tabel 2. Harga batas dominasi

antara senyawa lipofil dan hidrofil adalah 10. Secara umum, surfaktan

dengan HLB rendah (3-6) digunakan pada pembuatan W/O sedangkan


17/37

17

surfaktan dengan HLB tinggi (8-18) lebih sesuai digunakan dalam

pembuatan O/W29.

Tabel 2. HLB29

Rentang HLB Aplikasi

1-3

3-6

7-9

8-18

13-15

15-18

Bahan anti busa

Emulgator W/O

Bahan pembasah

Emulgator O/W

Zat-zat aktif pencuci

Mediator larutan

Untuk surfaktan jenis tertentu seperti turunan polioksietilen

dari alkohol lemak dan ester asam lemak dari alkohol bervalensi

banyak, harga HLB-nya pun dapat ditentukan dengan rumus :

HLB = 20 ( 1- VZ )

SZ

Harga HLB juga dapat dihitung langsung dari formula

kimianya dimana sifat hidrofil dan lipofil dari setiap gugus yang

ditentukan melalui pengukuran koalensi lalu disusun sehingga

menghasilkan harga tertentu yaitu :

HLB = harga gugus hidrofil + n (harga gugus dari -CH2)+7


18/37

18

Dimana harga n merupakan jumlah gugus dalam molekul.

Harga positif dihasilkan oleh gugus hidrofil sedangkan harga negatif

dihasilkan oleh gugus hidrofob. Formula diatas tidak dapat digunakan

untuk senyawa tidak jenuh stereoisomer atau posisi isomer29.

II.5 Surfaktan

Surfaktan atau zat aktif permukaan adalah suatu zat yang dapat

menurunkan tegangan antarmuka30

.Molekul surfaktan terdiri dari dua bagian

berbeda yaitu bagian polar pada kepala dan non polar pada ekor. Dalam

farmasetik, surfaktan digunakan khususnya sebagai emulgator, solubiliter, dan

agen pembasah31.

Apabila surfaktan dimasukkan dalam sistem yang terdiri dari air dan

minyak, maka gugus polar akan mengarah ke fase air sedangkan gugus non polar

akan mengarah ke fase minyak. Surfaktan yang memiliki gugus polar lebih kuat

cenderung membentuk tipe emulsi dalam air (m/a), sedangkan apabila gugus non

polar yang lebih kuat cenderung membentuk tipe air dalam minyak

(a/m)30.Surfaktan yang dipilih harus32:

a. Dapat menurunkan tegangan antarmuka untuk membantu proses

penyebaran selama proses pembentukan system.

b.

Menghasilakan film yang fleksibel yang dapat marusak bentuk tetesan

pada kedua fase sehingga dapat bercampur.

c. Memiliki sifat hirdofil-lipofil untu memberikan lengkungan yang tepat

pada daerah antarmuka agar dapat terlihat tipe sistem yang diinginkan,

m/a, a/m, atau bicontinuous.


19/37

19

Ada empat jenis surfaktan berdasarkan ionisasinya dalam larutan air yaitu

anionik, kationik, nonionik, dan amfoterik33.

a. Surfaktan Anionik

Surfaktan ini membawa muatan negatif pada bagian hidrofilik. Golongan

utama yang terkandung di dalam surfaktan anionik adalah ion karboksilat, sulfat,

dan sulfonat. Secara luas, surfaktan ini banyak digunakan karena harganya yang

murah. Namun, surfaktan ini dapat menyebabkan iritasi dan toksik sehingga

hanya digunakan untuk sediaan luar. Surfaktan ini hanya menghasilkan emulsi

A/M. Contoh surfaktan ionik yaitu: Garam Na, K, atau ammonium dari asam

lemak rantai panjang seperti sodium stearat; Sodium lauril sulfat;

Triethanolamine; Sodium dioctylsulphosuccinate; dan sebagainya33.

b. Surfaktan Kationik

Surfaktan ini mengandung muatan positif pada bagian hidrofilik. Gugus

terpenting pada surfaktan ini terdiri atas senyawa quartenary ammonium.

Surfaktan ini memiliki sifat toksik sehingga cenderung digunakan untuk formula

krim antiseptik. Surfaktan kationik tidak dapat bercampur dengan surfaktan

anionik dan anion polivalen, serta tidak stabil di pH tinggi. Contoh surfaktan

kationik yaitu: Cetrimide; Cetrimonium bromida; Benzalkonium chlorida; dan

Cetylpyridinium chlorida33.

c. Surfaktan Amfoterik

Surfaktan ini memiliki dua sifat pada bagian hidrofiliknya, tergantung pH

sistem. Surfaktan ini bersifat kationik jika pH rendah dan bersifat anionik jika pH

tinggi. Contoh surfaktan amfoterik yaitu: Lecithin33.


20/37

20

d.

Surfaktan Nonionik

Surfaktan nonionik tidak memiliki muatan pada bagian hidrofiliknya.

Surfaktan nonionik mempunyai kemampuan melarutkan senyawa yang kurang

larut dan memiliki toksisitas rendah. Contoh surfaktan nonionik yaitu: Glikol dan

gliserol ester; Sorbitan ester; Polisorbat; PEG; dan Poloxalkol33.

Untuk mensistematisasi pendekatan hidrofilik/lipofilik pada pemilihan

pengemulsi, Griffin pada tahun 1947 mengembangkan sistem Hydrophile-

Lipophile Balance (HLB) dari surfaktan34.Dengan metode ini tiap zat mempunyai

harga HLB atau angka yang menunjukkan polaritas dari zat tersebut. Makin tinggi

harga HLB suatu zat maka zat tersebut bersifat hidrofilik. Sebaliknya, makin kecil

harga HLB maka makin bersifat lipofilik zat tersebut. Nilai HLB suatu surfaktan

dapat menentukan tipe nanoemulsi. Surfaktan dengan nilai HLB 3-6 akan

membentuk tipe air dalam minyak (A/M atau W/O), sedangkan surfaktan dengan

nilai HLB 8-18 akan membentuk tipe minyak dalam air (M/A atau O/W)35.

Bila air dan minyak dicampur dan dikocok akan terbentuk bermacam-

macam ukuran butiran tetesan. Terjadi tegangan pada antar muka, sebab dua fase

yang tak tercampur mempunyai kekuatan tarik menarik yang berbeda bagi

molekul pada antar muka. Molekul fase A akan ditarik ke dalam fase A dan

ditolak oleh fase B. Umumnya makin besar derajat ketidakcampuran maka makin

besar tegangan antar muka. Untuk membentuk dispersi dan menjaga integritasnya,

yaitu denagan menurunkan tegangan antar muka atau mencegah terjadinya

koalesen30.


21/37

21

Surfaktan membantu pembentukan emulsi dengan mengabsorpsi pada

antar muka, dengan menurunkan tegangan interfasial dan bekerja sebagai

pelindung agar butir-butir tetesan tidak bersatu. Emulgator membantu

terbentuknya emulsi dengan 3 jalan yaitu36:

1. Penurunan tegangan antar muka (stabilisasi termodinamik),

2. Terbentuknya film antar muka yang kaku (pelindung mekanik terhadap

koalesen),

3. Terbentuknya lapisan ganda listrik, merupakan pelindung listrik dari

partikel.

II.6 Kosurfaktan

Dalam kebanyakan kasus, surfaktan dalam keadaan sendiri tidak dapat

menurunkan tegangan antarmuka air-minyak secara cukup untuk menghasilkan

sebuah nanoemulsi. Dibutuhkan penambahan sebuah molekul amfifilik rantai

pendek atau kosurfaktan untuk membawa tegangan antarmuka mendekati nol.

Kosurfaktan merupakan molekul kecil bersifat amfifilik, sebuah alkohol rantai

pendek hingga medium (C2-C10). Secara luas molekul yang dapat berfungsi

sebagai kosurfaktan meliputi surfaktan nonionik, alkohol, asam alkanoat,

alkanediol dan alkil amina37

.

Sebagian besar surfaktan tidak cukup untuk menurunkan tegangan

antarmuka antara minyak dengan air. Fungsi kosurfaktan adalah untuk membantu

menurunkan tegangan antarmuka antara fase air dan fase minyak. Penambahan

kosurfaktan berperan dalam meningkatkan solubilisasi gugus non polar dan


22/37

22

meningkatkan mobilitas ekor hidrokarbon sehingga penetrasi minyak pada bagian

ekor menjadi lebih besar32.

II.7 Cara Pembuatan Nanoemulsi

Pada beberapa kasus, pembuatan nanoemulsi membutuhkan aplikasi

teknik khusus. Nanoemulsi ini dapat dibuat dengan teknik energi tinggi seperti

ultrasonikasi, mikrofluidisasi dan homogenizer bertekanan tinggi. Pembuatan

nanoemulsi dengan energi tinggi ini bergantung pada pembentukan ukuran globul

yang kecil dengan adanya surfaktan atau campuran surfaktan dengan masukan

energi tinggi. Selama pembuatan, beberapa parameter seperti tekanan

homoginezer, jumlah siklus homogenisasi dan suhu homogenisasi dapat berubah

yang nantinya akan mempengaruhi ukuran globul nanoemulsi yang sangat penting

dalam stabilitas fisik sistem tersebut24.

Metode pembuatan dengan energi tinggi tidak dapat digunakan pada

beberapa kasus terutama untuk molekul yang labil. Pada kasus tersebut,

digunakan teknik emulsifikasi dengan menggunakan energi rendah seperti

emulsifikasi spontan atau suhu inversi fase24.Metode emulsifikasi spontan sering

dugunakan karena mudah dibuat dalam skala laboratorium, tidak membutuhkan

peralatan yang rumit atau temperatur yang tinggi, dan secara umum dapat

menghasilkan ukuran globul yang kecil38.

II.8 Stabilitas Nanoemulsi

Stabilitas didefinisikan sebagai kemampuan suatu produk obat atau

kosmetik untuk bertahan dalam spesifikasi yang diterapkan sepanjang periode


23/37

23

penyimpanan dan penggunaan untuk menjamin identitas, kekuatan, kuaitas, dan

kemurnian produk39.

Ketidakstabilan fisika dari sediaan ditandai dengan adanya pemucatan

wara atau munculnya warna, timbul bau, perubahan dan pemisahan fase, pecahnya

emulsi, pengendapan suspensi atau caking, perubahan konsistensi, pertumbuhan

kristal, terbentuknya gas, dan perubahan fisik lainnya. Kestabilan dari suatu

emulsi ditandai dengan tidak adanya penggabungan fase dalam, tidak adanya

creaming, dan memberikan penampilan bau, warna, dan sifat-sifat fisik lainnya

yang baik30. Kestabilan fisik suatu emulsi atau suspensi dapat dipengaruhi oleh

faktor-faktor yang mempengaruhi kestabilan kimia dari bahan pengemulsi

(emulgator), agen pensuspensi (suspending agent), antioksidan, pengawet dan

bahan aktif39.

II.9 Uji Antioksidan dengan Metode DPPH (2,2-difenil-1-pikrilhidrazil)

Salah satu metode pengujian antioksidan yang populer adalah metode

DPPH40. Metode DPPH merupakan metode yang simpel, cepat dan nyaman

digunakan dalam skrining banyak sampel untuk mengetahui aktivitas

penangkapan radikal bebas (radical scavenging41.DPPH merupakan radikal bebas

yang stabil yang elektronnya dapat terdelokalisasi sehingga menghasilkan warna

ungu mantap yang dapat dikarakterisasi pada 520 nm. Saat larutan DPPH

dicampur dengan senyawa yang dapat mendonorkan atom hidrogen, terjadi bentuk

reduksi yang ditandai dengan penurunan intensitas warna ungu. Reaksi utama

yang terjadi40 :

Z* + AH = ZH + A*


24/37

24

Keterangan :

Z* = radikal DPPH

AH = senyawa pendonor atom hidrogen

ZH = bentuk tereduksi dari DPPH

A* = hasil radikal bebas yang terbentuk


25/37

25

BAB III

METODOLOGI PENELITIAN

III.1 Alat dan Bahan

III.1.1 Alat

Alat-alat yang dipakai pada penelitian ini, antara lain

spektrofotometer Visibel (Shimadzu tipe 2450),vortex, timbangan digital

(Precisa tipe XB 4200C dan BEL tipe M254Ai),freeze drying, homogenizer,

zetasizer nano ver. 6.20,alat-alat gelas (Pyrex), hot plate (Schott tipe D-

55122), tabung reaksi (Pyrex), bejana maserasi, blender (Cosmos tipe 289-

G), rotary evaporator (Heldolph tipe Hei-VAP), beban 50, 100, 150, 200 g,

gelas objek, kaca arloji, viskometer Brookfield, pH meter (Horiba tipe

B212), mortir dan stamper, lemari pendingin, , lemari asam (ESCO model

EFH-4A1), sentrifugator, kain saring, krusibel porselen (Pyrex), cawan

penguap (Iwaki Pyrex), desikator (Pyrex), oven (Modena tipe BO 3633).

III.1.2 Bahan

Bahan-bahan yang dipakai pada penelitian ini, antara lain buah naga

merah (H. polyrhizus), etanolp.a, akuades, kalium iodida, bismuth subnitrat,

asam asetat glasial, iodin, garam merkuri (HgCl2), HCl 2 N, HCl pekat,

larutan FeCl3 1%, larutan NaCl 10%, garam gelatin, serbuk seng atau

magnesium, H2SO4 pekat, kloroform, NaOH 2M, HCl 2M, larutan DPPH

(Sigma-Aldrich kode bahan No.SA D9132-1G), etanol 95%, minyak zaitun,

span 80,akuades.


26/37

26

III.2 Cara Penelitian

III.2.1 Rancangan Penelitian

Penelitian ini terdiri dari 5 tahap yaitu : 1) ekstraksi H. polyrhizus

dengan etanol memakai cara maserasi, 2) uji pendahuluan ekstrak etanol H.

polyrhizus, 3) formulasi nanoemulsi ekstrak etanolH. polyrhizus,4) evaluasi

sediaan, 5) uji efektivitas antioksidan dengan metode DPPH.

III.2.2 Variabel Penelitian

III.2.2.1. Variabel bebas

Variabel bebas, yaitu variabel yang mempunyai pengaruh

terhadap penelitian, dalam hal ini adalah variasi konsentrasi ekstrak

etanolH. polyrhizussebesar 0,04%; 0,08%; 0,16%; 0,32% dan 0,64%

dalam sediaan nanoemulsi.

III.2.2.2. Variabel terikat

Variabel terikat, yaitu variabel yang dipengaruhi atau yang

menjadi akibat adanya variabel bebas, dalam hal ini adalah persen

peredaman radikal bebas DPPH.

III.2.3. Determinasi Tanaman

Determinasi H. polyrhizusyang digunakan dilakukan di Fakultas

Matematika dan Ilmu Pengetahuan Universitas Tanjungpura Pontianak

III.2.4. Pengekstraksian Sampel

Metode ekstraksi yang digunakan dalam penelitian ini adalah

ekstraksi secara maserasi dengan cara buah segar dilumatkan kemudian

dicampurkan dengan etanol sambil diaduk selama 24 jam dalam 3 hari.


27/37

27

Ekstrak etanol buah segar disaring dengan kain saring, kemudian ekstrak

etanol dipekatkan menggunakan alat evaporator. Setelah itu ekstrak

dipekatkan menggunakanfreeze dryingsampai menghasilkan ekstrak kental.

III.2.5. Uji Parameter Non-Spesifik

III.2.5.1. Penetapan kadar Abu Total

Ekstrak ditimbang seksama seberat 1,617 g, lalu dimasukkan

ke dalam cawan penguap yang telah dipijarkan dan ditara. Ekstrak

dipijarkan perlahan-lahan hingga habis, didinginkan dan ditimbang.

Jika dengan cara ini arang tidak dapat dihilangkan, ditambah air panas,

disaring melalui kertas saring bebas abu. Sisa dan kertas saring

dipijarkan dalam krus yang sama. Filtrat dimasukkan ke dalam krus,

diuapkan, dipijarkan hingga bobot tetap dan ditimbang. Kadar abu

terhadap bahan yang telah dikeringkan di udara dihitung42.

III.2.5.2. Penetapan Susut Pengeringan

Ekstrak ditimbang seksama seberat 0,988; 0,9991; dan 1,0473

g zat dalam cawan penguap yang sebelumnya telah dipanaskan pada

suhu penetapan selama 30 menit dan ditara. Ekstrak diratakan dalam

cawan penguap lalu dimasukkan ke dalam ruang pengering,

dikeringkan pada suhu 105 C hingga bobot tetap. Sebelum setiap

penimbangan, ekstrak dibiarkan dalam keadaan tertutup mendingin

dalam eksikator hingga suhu kamar42.


28/37

28

III.2.6. Skrining Fitokimia

Uji fitokimia dilakukan untuk menentukan komponen bioaktif yang

terdapat pada ekstrak metanol H. polyrhizus. Uji fitokimia yang dilakukan

terdiri dari uji alkaloid, fenol, flavonoid, tannin, steroid/triterpenoid, saponin,

serta identifikasi betasianin.

III.2.6.1. Pembuatan Pereaksi

a. Pereaksi Dragendroff

Senyawa KI sebanyak 8 g dilarutkan dalam 20 mL air suling,

sedangkan pada bagian lain 1 g bismuth subnitrat dilarutkan dalam 10

mL asam asetat glasial dan 40 mL air suling. Kedua larutan

dicampurkan kemudian diencerkan dengan akuades sampai volume

100 mL. Larutan ini disimpan dalam botol berwarna coklat43.

b.

Pereaksi Wagner

Senyawa KI sebanyak 2 g dan iodine sebanyak 1,3 g

dilarutkan dengan akuades sampai volume 100 mL kemudian disaring.

Larutan disimpan dalam botol berwarna coklat43.

c. Pereaksi Meyer

Senyawa HgCl2 sebanyak 1,5 g dilarutkan dengan 60 mL

akuades. Di tempat lain dilarutkan KI sebanyak 5 g dalam 10 mL

akuades. Kedua larutan yang telah dibuat dicampur dan diencerkan

dengan akuades sampai volume 100 mL. Pereaksi Meyer yang

diperoleh disimpan dalam botol berwarna coklat43.


29/37

29

III.2.6.2. Alkaloid

Larutan ekstrak sebanyak 1 mL ditambah dengan 1 mL HCl 2

N dan 9 mL akuades. Kemudian dipanaskan di atas penangas air

selama 2 menit, didinginkan dan disaring. Filtrat sebanyak 3 tetes

dipindahkan pada 3 tabung reaksi, kemudian diperiksa adanya

senyawa alkaloid dengan menambahkan pereaksi Meyer, Wagnerdan

Dragendroff masing-masing sebanyak 2 tetes. Adanya alkaloid

ditandai dengan terbentuknya endapan putih pada pereaksi Meyerdan

endapan coklat/merah bata pada pereaksi Wagner dan Dragendorff

43,44.

III.2.6.3. Fenol

Sebanyak 1 g ekstrak ditambahkan dengan 3 tetes FeCl3 1%.

Terjadinya warna hijau, merah, ungu, biru, atau hitam kuat

menunjukkan adanya fenolat45.

III.2.6.4. Flavonoid

Larutan ekstrak sebanyak 1 mL ditambah dengan sedikit serbuk

seng atau magnesium dan 2 mL HCl pekat. Senyawa flavonoid akan

menimbulkan warna jingga sampai merah dalam waktu 3 menit44

.

III.2.6.5. Tanin

Sebanyak 1 g ekstrak diekstraksi dengan 10 mL NaCl 0,9% dan

disaring. Kemudian filtrat ditambah garam gelatin, diamati perubahan

yang terjadi. Pengendapan dengan reagen yang pertama (NaCl 0,9%)


30/37

30

atau dengan reagen kedua (garam gelatin) merupakan indikasi adanya

tanin44.

III.2.6.6. Triterpenoid dan Steroid

Ekstrak diekstraksi dengan kloroform atau n-heksan (pelarut

non polar), kemudian disaring. Filtrat yang diperoleh ditambahkan 1

mL CH3COOH glasial dan 1 mL larutan H2SO4 pekat. Jika warna

berubah menjadi biru atau ungu menandakan adanya kelompok

senyawa steroid. Jika warna berubah menjadi merah menunjukkan

adanya senyawa triterpenoid43.

III.2.6.7. Saponin

Larutan ekstrak sebanyak 1 mL ditambahkan 10 mL akuades

dan dikocok kuat selama 10 detik. Hasil dinyatakan positif apabila

buih yang terbentuk stabil selama tidak kurang dari 10 menit, setinggi

1 sampai 10 cm. Pada penambahan 1 tetes HCl 2 N, buih tidak

hilang42.

III.2.6.8. Identifikasi Betasianin

Identifikasi betasianin dilakukan sebanyak 2 cara. Cara pertama

yaitu larutan ekstrak sebanyak 1 mL dipanaskan dengan HCl 2 M

selama 5 menit pada suhu 100 C. Cara kedua yaitu larutan ekstrak

sebanyak 1 mL ditambah dengan NaOH 2 M tetes demi tetes.

Betasianin dalam ekstrak dikatakan positif apabila hilangnya warna

ekstrak semula (cara pertama) dan warna berubah menjadi kuning

(cara kedua)45.


31/37

31

III.2.7. Pembuatan Sediaan Topikal Nanoemulsi Ekstrak Etanol H.

Polyrhizus

Nanoemulsi dibuat menjadi 3 formula dengan fase minyak

menggunakan minyak zaitun dan akuades sebagai fase air dengan

perbandingan konsentrasi surfaktan span 80 dan kosurfaktan etanol 95%

(Tabel 3).

Tabel 3. Variasi Formula Nanoemulsi ekstrak Etanol Buah Naga (H.

Polyrhizus)

Bahan

Komposisi (% b/b)

A B C

EkstrakH. Polyrhizus 0,16 0,32 0,64

Minyak Zaitun 5 5 5

Span 80 40 40 40

Etanol 95% 6 6 6

Gliserin 5 5 5

Akuades Ad 100 Ad 100 Ad 100

Fase minyak nanoemulsi dibuat dengan mencampurkan Span 80 dan

Minyak zaitun kemudian diaduk konstan sampai homogen dengan

homogenizer dengan kecepatan 5000 rpm selama 1 menit dan ditambahkan

aquades sambil dihomogenkan dengan homogenizer hingga terbentuk sistem

nanoemulsi (tampilan = jernih). Ekstrak H. Polyrhizus dilarutkan dalam

campuran etanol 96%. Larutan ini kemudian dimasukkan ke dalam campuran


32/37

32

fase minyak dan fase air sedikit demi sedikit,diaduk dengan homogenizer

dengan kecepatan 5000 rpm sampai larut dan homogen selama 60 menit

hingga terbentuk sistem nanoemulsi yang jernih.

III.2.8 Evaluasi Sediaan Nanoemulsi

III.2.8.1 Organoleptis

Pengamatan secara organoleptis diamati dengan melihat adanya

perubahan bentuk,warna dan bau. Pemeriksaan dilakukan setiap 2

minggu selama 8 minggu

III.2.8.2 Uji Ph

Uji ph dapat dilakukan menggunakan Ph meter pada suhu

ruang. Pertama-tama elektroda dikalibrasi dengan dapar standar ph 4

dan ph 7. elektroda lalu dicelupkan kedalam sediaan higga ph muncul

di layar. Hasil ph di catat46.

III.2.8.3 Penentuan Bobot Jenis

Bobot jenis diukur menggunakan piknometer pada suhu 29 C.

Piknometer yang bersih dan kering ditimbang (A g) lalu diisi dengan

air dan ditimbang (A1 g). Air dikeluarkan dari piknometer dan

piknometer dibersihkan. Sediaan nanoemulsi lalu diisikan ke dalam

piknometer dan ditimbang (A2 g). Bobot jenis sediaan diukur dengan

perhitungan sebagai berikut46:

Bobot jenis = A2-A x massa jenis air (29C)

A1-A


33/37

33

III.2.8.4 Penentuan Distribusi Ukuran Globul

Distribusi ukuran globul dari nanoemulsi diukur dengan

menggunakan zetasizer pada suhu 25C.

II.2.8.5 Pengukuran Viskositas

Pengukuran viskositas dilakukan menggunakan alat

viskometer bola jatuh Hoppler dengan bola jenis stainless steel.

Nanoemulsi dimasukkan ke dalam suatu tabung gelas yang hampir

vertikal dengan volume tertentu. Bola yang digunakan dimasukkan ke

dalam tabung dan salah satu sisi tabung ditutup rapat agar nanoemulsi

tidak keluar dan tabung tidak bocor,sedangkan sisi yang lainnya

ditutup sebelum nanoemulsi dimasukkan ke dalam tabung gelas.

Tabung gelas lalu dibalik sehingga bola akan mulai bergerak ke

bawah. Waktu yang diperlukan bola untuk jatuh diantara garis putih

awal dan garis putih akhir yang ada pada tabung gelas dihitung

dengan teliti. Percobaan ini dilakukan sebanyak 3 kali dan dihitung

rata-ratanya. Viskositas nanoemulsi diukur berdasarkan perhitungan

sebagai berikut :

Viskositas= B pb-pf.t

Keterangan : B= konstanta bola (mPa.s.cm3/g.s) ; pb = kerapatan

bola (g/cm3); pf = kerapatan cairan (g/cm3) ; t = waktu yang

diperlukan bola jatuh (detik)30


34/37

34

III.2.8.6 Uji Stabilitas Fisik

A.

Uji stabilitas pada suhu ruang

Sampel sediaan disimpan pada suhu kamar (27-30 C) selama

8 minggu, kemudian dilakukan pengamatan organoleptis (perubahan

warna, bau, dan sineresis), pengukuran pH, dengan pengamatan setiap

2 minggu sekali. Pengukuran viskositas dilakukan pada minggu ke-0

dan ke-8.

B. Uji stabilitas pada suhu tinggi

Sampel sediaan disimpan pada suhu tinggi (4020C) selama

8 minggu, kemudian dilakukan pengamatan organoleptis (perubahan

warna, bau, dan sineresis), pengukuran pH, dengan pengamatan setiap

2 minggu sekali.

C.

Cycling Test

Sediaan disimpan pada suhu 4C selama 24 jam, lalu

dipindahkan ke dalam oven yang bersuhu 4020C selama 24 jam.

Perlakuan ini adalah satu siklus. Percobaan diulang sebanyak 6 siklus

dan dilakukan evaluasi fisik (perubahan warna, bau, dan sineresis).

Kondisi fisik sediaan dibandingkan selama percobaan dengan sediaan

sebelumnya.

III.2.8.7 Uji Aktivitas Antioksidan dengan Metode DPPH (2,2

difenil-1-pikrihidrazil)

Pengukuran aktivitas antioksidan dilakukan terhadap 2

kelompok,yaitu :


35/37

35

a.

Kelompok ekstrak etanol H. Polyrhizus setelah penyimpanan

selama 8 minggu pada suhu kamar.

b. Kelompok sampel nanoemulsi yang telah diformulasikan dan

disimpan selama 8 minggu pada suhu kamar.

A. Pembuatan Larutan Sampel`

Formula A, B, dan C sebanyak 1 g masing-masing dilarutkan

dengan 10 mL metanol dalam labu ukur, kemudian disaring

menggunakan kertas saring. Hasil penyaringan kemudian ditampung

filtratnya.

B. Pembuatan Larutan DPPH 50 ppm

Sebanyak 25 mg DPPH dilarutkan dengan metanol dalam labu

ukur sampai 10 mL sehingga diperoleh larutan dengan konsentrasi

2500 ppm, kemudian diencerkan dengan metanol sampai diperoleh

larutan dengan konsentrasi 50 ppm40.

C. Penentuan Panjang Gelombang Serapan Maksimum DPPH

Sebanyak 4 mL larutan DPPH 50 ppm dibiarkan selama 30

menit ditempat gelap pada suhu kamar, serapan larutan diukur dengan

spektrofotometer Visibel pada panjang gelombang 380-780 nm40,42

.

D. Perlakuan Nanoemulsi untuk Uji Aktivitas Antioksidan

Sampel sediaan diambil sebanyak 1 gram kemudian

diekstraksi dengan penambahan ad. 100 mL metanol p.a. Kocok

dengan cepat kurang lebih 5 menit. Kemudian hasil pengocokan

disaring dengan kertas saring dan ditampung filtratnya. Dilakukan


36/37

36

pengenceran hingga 10.000 ppm dengan cara 1 mL dari filtrat yang

telah disaring diencerkan ad. 100 mL metanol p.a. Selanjutnya

dilakukan pengenceran kembali hingga 1000 ppm. Kemudian

disiapkan 5 buah labu ukur 10 mL, larutan sampel dipipet dengan

sejumlah volume tertentu yaitu 0,25 mL, 1,5 mL, 2,5 mL, 3 mL dan 5

mL, ditambahkan metanol p.a sampai dengan tanda batas sehingga

dihasilkan larutan sampel dengan beberapa konsentrasi yaitu 25 ppm,

150 ppm, 250 ppm, 300 ppm dan 500 ppm. Selanjutnya 1 mL dari

masing-masing larutan sampel ditambahkan 1 mL DPPH dan 3 mL

metanol p.a, dihomegenkan. Larutan uji dan larutan blanko diinkubasi

pada suhu 37C selama 30 menit.

E. Uji Aktivitas Antioksidan dengan Metode DPPH

Serapan larutan uji diukur dengan spektrofotometer UV-Vis

pada panjang gelombang maksimum. Perlakuan yang sama dilakukan

untuk pengujian aktivitas antioksidan ekstrak EtanolH. Polyrhizus

yang telah disimpan selama 8 minggu pada suhu kamar.


37/37

37

III.3 Rancangan Penelitian

Gambar 3. Skema Rancangan Penelitian

Fase minyak :

minyak zaitun

dan Span 80

Fase air :akuades

diaduk konstan sampai homogen dengan homogenizer dengan kecepatan

5000 rpm selama 1 menit

Campuran fase air

dan fase minyak

EkstrakH.

Polyrhizusdilarutkan

dalam campuran

etanol 96%

diaduk dengan homogenizer dengan kecepatan 5000 rpm sampai larut

dan homogen selama 60 menit

sistem nanooemulsi

yang jernih

Bagian Isi Fix

Documents

Transcript of Bagian Isi Fix