A domain in the N-terminal extension of class IIb eukaryotic aminoacyl-tRNA synthetases is important...

10
Magali Frugier, Luc Moulinier 1 and Richard Giege  2 De Âpartement `Me Âcanismes et Macromole Âcules de la Synthe Áse Prote Âique et Cristallogene Áse', UPR 9002, Institut de Biologie Mole Âculaire et Cellulaire du CNRS, 15 rue Rene  Descartes, 67084 Strasbourg Cedex and 1 UPR 9004, Institut de Ge Âne Âtique et de Biologie Mole Âculaire et Cellulaire, 1 rue Laurent Fries, 67404 Illkirch Cedex, France 2 Corresponding author e-mail: [email protected] Cytoplasmic aspartyl-tRNA synthetase (AspRS) from Saccharomyces cerevisiae is a homodimer of 64 kDa subunits. Previous studies have emphasized the high sensitivity of the N-terminal region to proteolytic cleavage, leading to truncated species that have lost the ®rst 20±70 residues but that retain enzymatic activity and dimeric structure. In this work, we dem- onstrate that the N-terminal extension in yeast AspRS participates in tRNA binding and we generalize this ®nding to eukaryotic class IIb aminoacyl-tRNA synthetases. By gel retardation studies and footprint- ing experiments on yeast tRNA Asp , we show that the extension, connected to the anticodon-binding module of the synthetase, contacts tRNA on the minor groove side of its anticodon stem. Sequence comparison of eukaryotic class IIb synthetases identi®es a lysine-rich 11 residue sequence ( 29 LSKKALKKLQK 39 in yeast AspRS with the consensus xSKxxLKKxxK in class IIb synthetases) that is important for this binding. Direct proof of the role of this sequence comes from a muta- genesis analysis and from binding studies using the isolated peptide. Keywords: aminoacyl-tRNA synthetase/aspartyl-tRNA synthetase/RNA-binding motif/synthetase extension Introduction The 20 aminoacyl-tRNA synthetases (aaRSs) have been classi®ed into two classes, based on the structural organization of their catalytic site (Eriani et al., 1990). In addition to the class-speci®c catalytic domains, they contain idiosyncratic modules involved in the recognition and binding of the homologous tRNA molecules (Delarue and Moras, 1993; Moras, 1993), this recognition being limited in most cases to the acceptor and/or the anti- codon branches (Schimmel, 1987; Giege  et al., 1993). Differences between prokaryotic and eukaryotic synthet- ases lie in the presence of eukaryote-speci®c extra- domains at the N- or the C-terminus of the protein, outside the structural consensus de®ning the two classes of synthetases. These extra-domains can be removed by controlled proteolysis and are not essential for amino- acylation activity (e.g. Lorber et al., 1988; Mirande, 1991; Agou et al., 1996). In higher eukaryotes, they are believed to participate in the multisynthetase complex formation composed of nine synthetases and three auxiliary proteins (Mirande, 1991). In lower eukaryotes, however, such complexes have not been found and no functional role could be ascribed explicitly to these appendices. N-terminal extensions are found in eukaryotic class IIb synthetases. In yeast aspartyl-tRNA synthetase (AspRS), a representative class IIb homodimeric protein of 128 kDa, the extension reaches a length of 70 amino acids and is localized next to the anticodon module of the synthetase (Figure 1). When AspRS is puri®ed from yeast cells, the extension is partly proteolyzed, leading to a heterogeneous mixture of molecules lacking their ®rst 13±32 amino acids (Lorber et al., 1987). This heterogeneity hampers crystal- lization of the free enzyme (Lorber et al., 1987; Sauter et al., 1999) but not that of the complex with tRNA (Giege  et al., 1980; Lorber et al., 1983). In the structure of the complex (Ruff et al., 1991), however, the extension is not visible, probably as the consequence of crystalline disorder due to the heterogeneous AspRS. Since absence of the complete 70 amino acid extension does not affect the in vitro aminoacylation ef®ciency of the enzyme (Lorber et al., 1988) and does not inhibit yeast growth (Eriani et al., 1991), it can be concluded that the structure of the enzyme in the complex (Ruff et al., 1991) and that recently solved for the free enzyme truncated of its ®rst 70 amino acids (Sauter et al., 2000) corresponds to the functional core of the AspRS molecule required in tRNA aminoacylation. This does not exclude, however, an ancillary role for the extension in the aminoacylation of tRNA Asp , a view supported by a wealth of indirect evidence. Indeed, the extra-domain is characterized by a large number of positively charged amino acids probably organized in helical domains (Figure 1). Circular dichro- ism and NMR experiments con®rmed a polyanion-induced helicity of peptides derived from the extension (Agou et al., 1995). Moreover, the amphiphilic nature of the helices, with the presentation of the charged residues on one side, explains the binding of yeast AspRS to heparin and the absence of binding of the truncated enzyme to this sulfonated polysugar (Lorber et al., 1988). Since nega- tively charged heparin is known to mimic nucleic acids, these data indicate a strong probability of at least some of these 70 amino acids being involved in nucleic acid recognition in general, and in tRNA Asp binding in particular. Here we demonstrate that the extension present at the N-terminus of yeast AspRS plays a role in tRNA Asp binding. The necessity to bind tRNA tightly explains conservation of the extension in eukaryotic AspRSs and in other class IIb synthetases. Our demonstration is supported by an extensive comparison between the native form and a A domain in the N-terminal extension of class IIb eukaryotic aminoacyl-tRNA synthetases is important for tRNA binding The EMBO Journal Vol. 19 No. 10 pp. 2371±2380, 2000 ã European Molecular Biology Organization 2371

Transcript of A domain in the N-terminal extension of class IIb eukaryotic aminoacyl-tRNA synthetases is important...

������ ������ ��� � ������� ���������� ���� �

����������� ����� ���� �� ��������������� �� �� �������������� ��� �� �� �������������� ��� � !� "�� ��� �� # ���� ���������� �� �� ������� �� �� �$��� %& ��� ���� ����������'( )* �����+���� ����, �� %��� � *� "�� ��� �� -����� ����� �� # ���� � ��������� �� �� ������� ��� % ��� .����� /� ���'(* * "��0 ��� ����,� /����

!��������� � �������1�� �2 �3- ���4 +��3�1�����+�35�

��������� �������� ���� ���������� ������� �������������� ������ � � ������ �� �� ����������� ��!��� ������ ��!� �����"�� ��� �#������!�� �� ��� � ������ ��#�� �� ��������������!�#�$ �����# �� ��������� ������ ���� ��!� ������� %��� &'()' ������� ��� ���� ����� ��"�������!�� ��� ���� ���������� *� ��� +���$ +� �� �������� ���� ��� � ������ �,������ � ����� ��������������� � ���� ����# ��� +� #������"� ���%���# �� ��������� ����� **� ������� ���������������� -� #�� ���������� ������ ��� �������� �# �,������� �� ����� �������$ +� ���+ ���� ����,������$ ��������� �� ��� �������� ����# ������� ��� ����������$ �������� ���� �� ��� ��� #���!���� �� �� �������� ���� ��.����� �������� ����������� ����� **� ����������� ����%�� � ����� ���// ������ ��.����� �&01�22�12213240 � ���������� +�� ��� ��������� ,�2,,122,,2 � ����� **������������� ���� � ������� ��� ��� ����#� ���������� �� ��� ���� �� ��� ��.����� ���� ��� � ��� #����� ������� ��� ��� ����# ������ ���# ���������� ���������������2 �� �����1��$6 ���������7��������1��$6���������7�$61+ � � ��� 57��������� �,��� �

���� ����� �

8�� ! �� �����1��$6 ���������� 9�����: ��;� +������� <�� �� �=� �������� +���� � ��� �������������� >�� � �5 ��� � ������� � � �� 9?� � � �3� %�� :3" ��� � � �� ��� �����1���� <� ������� � ���� �� �������� � ������� � ������� ;��;�� ��� ����� � ��� + � � �5 ��� ���������� ��$6 ��������� 9��������� ������ %��@A ������ %��@:� �� � ����� � � +� �� � ��� ���� ����� �� ��� �������� ��7�� ��� �� 1���� +������ 9��� ����� %�)(A - ���� � �3� %��@:3� 55������ +��=�� ���0����� � �� ��0����� � ������1���� � � ��� ������� �5 ��0������1���� <� �,���1���� � �� ��� $1 �� ��� �1���� �� �5 ��� ����� � ���� ����� ���������� ������� ��< � ��� �=� ������� �5����������3 8���� �,���1���� � �� +� ����;�� +���������� ��������� � �� ��� �� ����� �� 5�� �� �1

������ � ��� ; �� 9�3�3 .��+�� � �3� %�))A � ����� %��%A6��� � �3� %��':3 " � ���� ��0�������� ���� ��� +�� �;���� ���� � ���� ��� ���� ��������� ������, 5����� ��������� �5 � ���������� �� ����� ��, � ��� ����� �9� ����� %��%:3 " ��=�� ��0�������� ��=�;��� ����������,�� ��;� �� +�� 5��� �� � 5��� ��� ��������� +� ���� +�� �,�� � ��� �� ����� ����� ���3

$1���� �� �,��� �� ��� 5��� ��0����� � ����� ""+����������3 " ����� ��������1��$6 ��������� 96����:� ����������� ;� ����� ""+ ����� ��� � ����� �5 %!) 0������ �,��� � ������� � ����� �5 ( �� � �� �� �� ������ >�� �,� �� ��� �� ���� ������ �5 ��� ���������9/ ���� %:3 B�� 6���� � ��� <�� 5��� ����� ������ ����,��� � � ������ ��������>��� ���� � �� � ������������� ,���� �5 ��������� ���0 � ��� � <��� %@C@! �� � �� ��9.��+�� � �3� %�)(:3 8� � ��������� �� ������� �������1� >�� � �5 ��� 5��� �>��� 9.��+�� � �3� %�)(A ������� �3� %���: +�� �� ���� �5 ��� ������, = �� ��$6 9- ����� �3� %�) A .��+�� � �3� %�)@:3 " ��� ��������� �5 ���������, 9��55 � �3� %��%:� ��=�;��� ��� �,��� � � ��; � +��� ���+�+�� �� ��� ��������� �5 �������� �� ������ ��� �� ��� ������������ 6����3 � �� �+�����5 ��� �������� ( �� � �� � �,��� � ���� �� �55������ � ���� �� ������� � �5<� ��� �5 ��� �>���9.��+�� � �3� %�)): �� ���� �� � + � ����� ���=��9?� � � �3� %��%:� � �� +� �������� ���� ��� ����������5 ��� �>��� ��� ������, 9��55 � �3� %��%: �� ����������� ���;�� 5�� ��� 5��� �>��� �������� �5 �� <���( �� � �� �� 9������ � �3� ! : ���������� �� ���5��� ��� ���� �5 ��� 6���� �������� ���� ��� ��$6�� ������� �3 8� � ���� �� �,������ ��=�;��� ��� ����� ���� 5�� ��� �,��� � ��� �� ������� � �5��$66��� � ; �= ��������� +� � =����� �5 � �����; ����3 "����� ��� �,���1���� � ��������� >�� +� ������ ��+�� �5 ��� � ;��� ������� �� � �� �� ���+�+������ >�� ��� ��� ���� � 9/ ���� %:3 � ������ � ����1 �� �� $�� �,��� ���� ��<���� � ����� �1 �������� � �� �5 ���� ��� ��� ;�� 5��� ��� �,��� � 96���� �3� %��&:3 �����;��� ��� ���� �� � � ����� �5 ������ ���� = �� ��� �������� � �5 ��� ������� ��� ���� ��� � ��� �,��� � ��� + � � �5 ����� 6���� �� ����� �� ��� �+���� �5 + � � �5 ��� �������� �>��� �� �� ����5����� ��������� 9.��+�� � �3� %�)):3 � �� ���1� ;��� ������� ����� � 0�= �� � � � ���� � �� �������� ���� � ���� � ����� ���+�+ � �� �5 �� ����� ���� �5����� ( �� � �� �� +� � ;��;�� ���� � �� ������ � � ������� �� ��$66�� + � � ���� �����3

D��� =� ���������� ���� ��� �,��� � ������ �� ���$1���� �� �5 ����� 6���� ����� � ���� ��$66��

+ � �3 8�� ����� �� �� + � ��$6 � ����� �,��� ������;�� � �5 ��� �,��� � ��0����� � 6����� �� ����� ����� ""+ ����������3 E�� ��������� � � ���������+� � �,��� ;� ������ �� +��=�� ��� �� ;� 5��� �� �

� � ���� �� �� ��������� ����� � � ����� ���� ��! ��� ���� ��!������ �!������� �� ��" ������ � ���� �������

#� $�%& ' ����� ���� �� ��� �� � ��� ���� ���

�������� ��������� ������� ������������ ���

��+�� �5 ������� 5���� �5 ����� 6����3 B� ���= �������� �� �5 � ( �� � �� � ���� �� �� + � �� ��$66��

= �� � ����� �5< �� �� � ���� <� �� ������� ����������� 5�������3 8�� ������� �5 �� � �,��� � ��1� ����+�� ������� ��� ���+ � �� �5 ��� ������, +��=��6���� �� �� ���������� ��$63 / ����� =� ������ ���� ��$6 ���� �� ��� 6���� ��� ���� ;��;�� �� ������ � � �� =� ��<� � �= �� � �� � ��� 5�����;�� ��� $1���� �� �,��� �� �5 ����� ""+���������� ��0������� ������ +�� 5�� �$6 + � �38�� + ���� ��� ��� ��� �� �5 ����� <� �� ���� �������3

������ ��� �������� �

��� �������� � ���� �� ����� ����� ������� ������� ������ ��� � ���; ��� =��0 ���� �� ��� � ��� $1���� ���,��� � �5 ����� 6����� =� ���0 �� ������ �������� �� �5 �� � ���� �� �� ��������� ����5 =�� + � � ������� �� 96��� � �3� %��&: �� ���� =� ;��� ����� �� ;��;���� ��$6 + � �3 B� ������ �� ��� � �1��� �� � ������� 9��: �5 ��$66�� 5�� +��� 5���� �56����� ����� ��� �� ;� �>��� 9%C&&(: �� �� �������;��� � 9(%C&&(: ���� ;�� �5 ��� $1���� �� �,��� �3"������ ���� ����� �=� ����� � � ;���� ������� ��� ���$61+ � � ����� � ��� �� ��� ����� +� +�� �� 5��,��� ���� 9/ ���� !6� ��5� �� � ����:� ��; � ���� 55�� � +� �=� ������ �5 ��� ���� 98�+�� ":3 8� � ������=�� ��<���� +� � � ���� ������ �� � �5 ��� ������� �������� 9���� �� ��: 5�� ��$66�� �� ������� �2 �� � ������� % � ��� =�� ��� $1���� �� �,��� � �5 �������� � � �� �� =� �� ��� ������� � ���� ������ ���� 5����$6 �� ������� � ���� � ��� ���� 5�� +��� �>����98�+�� ":3

E+; ��� ����� �� �� � � 5��� ����� �+���;�� �� ������ =�� =� �� ��� �,���1���� �5 6���� ����� >����$6 �� ��� ���� + � �� ���� ��� ������ ��$6 �5< ��5�� ��� 5���1����� �>��� �� ����� � ������ ���� <� ��3

������ ��� ��� ���� ���� ���� ��� �� ����������� � ���� �� ��������; ��� ����� � ���� �� �5 ��� ����� 6����C��$66��

������, ��;� �� ��� ��� ������ ��� �� +��=�� �������� �� ��� ��$6 ���� � � � ��� � �� �5 ��� ;�� �+����� � �5 ��� ��$6� ���� � ��� �� ���� ���� �� ����9�3�3 ���+� � �3� %�)&A -��� � � �3� %�� A ��� ���� �3� %��!:3 ��� �� �5 ��$66�� ����� ���, � �� ��6���� ����� �� ������ ��� �5 ��� �1���� 9% C%*:� ����� ���� ���� �� ���� 9!*C@�: �� ��� �������� ����9''C(':� �������� = �� ��� ������� �+���;�� � ���������� ��������� 9��55 � �3� %��%A ��;����� � �3� %��@:3

8� �� ��� ;�� �� �� ��� ������� � ������� ���$66�� �+�� �� ��� ������� �5 ��� �� ;� �����6���� 9%C&&(: �� �� ������� ;��� � 9(%C&&(:� �� �������� � ��� ��� � ����� >�� +� ��� �,��� � 9%C( :�=� �������0 �,��� ;� 5����� � � �,��� ����3 6 <������ �5 5����� �� = �� /�1?�86 �� ��� ���������� ���+�9.����� �� ����� %�)�A - ���� � �3� %���: ����=���������� � ��� � �5 ��� �$6 � +���� 5�� ��� � ���, �1 �� �� 6����3 ����� � 55������ ��� ������� � ���<���=��� 5��� 9/ ���� !#:3 B�� ��$66�� � ������,�� ����� ������� ����� � ������ ��� !!C!' ��� �1 ���� ���� ������ @%C@� ��� �� ���� ���� �� ')C( ��� �������� ���� ��� ���������3 " �������� ������ ��� *@ ��� �� ���� ����� *(C&( ��� ;�� �+�� ��� � �� ���81���� �� ����� �� '@C'( ��� 81 �� �������� �������� ���� ������ +�� �� ��� ���+�3 8�0� ��������� ������������ ���� �� � ������ � ������ =���� ������ ��� � �� ��� ��$6 .1������ ��������� ��� ����� ���, � ���� ��� ���� �5 ��� ���������� =������ ��� ����� � �� �5 �����$6 � ���� ������ +��� � ��� � � ��5����� �������� ��� � ������, 5����� � 9/ ���� @6:3 6 � � ��������� � =�� �+�� �� = �� ����� ���������� ���+��� ������ �� � 9��� ��� � �3� %��!:� �� ������ = �� ���������� ��������� �5 ��� ������,3 B� ������� ��=�;��� ������� ����� ���; ��� ������� =��� �+�� �� = �� ������1������ ����� 6���� ������� ���� ;�� �5 ���� �5 ���$1���� �� �,��� �3

5#� /� ������� � ���������� � �5 ��� ������� ��������� �5 ����� 6���� �� ���� >�� � �5 �� $1���� �� �,��� �3 8�� �� ���� ����� � ������� 9(%C! (: � � 0�� �� ��� ������� � ���� 9!*!C&&(: +� � ����� � �� ��� � 9! (C!*%:3 8�� $1���� �� �,��� � 9%C( :� ���� <� ����0����� � 6������ � � 0�� �� ��� �� ���� ����� � � ������3 "� ����� ��� ����� ����� ;� ��� ��� ���� � ���� ���� = �� � �� ���+�+ � ��� ��������� � 5����� ��� , �5 ��=�� ���+�+ � ��3 8�� ������� �5 ��� �,��� � 9������ � �3� %�)': �� ��� ��� , ���+�+ � �� ���� �������� ������ � ����� ��=��0 ��������� 9���� �� ������� %��@� %��*A ���� � �3� %��*: ��� ���=3 6�� ��+� ���� =��0 � 6���� �������� 5��� ����� ����� ������� ����� �������������� ����;�� ��� ��� � ���� �5 ��� �,��� � 9��� ��,� 5�� ���� ��:3

�(������ �(� ������ ��� �(����

��

8�� ������� � ���<�� �+�� �� = �� ��� �� ;� �>���9%C&&(: ����� ������ =��� � ��� ������ �+�� �� = ����� ������� 6���� 9(%C&&(: ��� ��$6 �������� ������ ������ ��� �� ���� ���� 9 3�3 �� ������ ��� !%C!� �� @&C* :� �������� ����� ;�� �� �� ��� ��� � ���5 ��� 5����� �� ��� �+���;�� 9/ ����� !# �� @6:3E��� �� ����� � ������ ��� ��� ��� ��$6 � ��� ������ �5��� � ��� ������� � ��� �� ��� ������� �5 ��� $1���� ���,��� �3 8� � ������ �� ��� � �� !(C!�� @&C@� �� *!C&@ ��� �� ���� ���� �� ��� ;�� �+�� ��� �3 "�������� ��� ���� @!� @@ �� @* ��� �� ���� ���� ���� ����� ���������� �� ��� � ���� �5 ��5����� ��������� 9����;��� ���������: �+���;�� = �� 6����9(%C&&(: ��� � �� � 9/ ���� @6:3

6�� � ��� 5����� �� �� � ��+�� ;��� �$��� F%� ����+� � ������ ��=��� ���+��1������� �$6 ��� ��9/�;���;� � �3� %�)%:� ��<�� ��� ������ �� 5���/�1?�86 ���� �3 "����� +��� ������ �5 ��� ��$66��

5#� &� 6������ ������ �5 ��� �������� � �� 5����� � �,��� ����3 9�: -�� �������� � �,��� ���� �+�� �� ��� ������� �5 @�1��1��+���� �� ;������ ��$66�� ������,�� �� �� ;� 6���� 9%C&&(: 9%3�&C!& �: 9��5�:� ������� 6���� 9(%C&&(: 9@%! � �� * ��: 9� ����: �� ��� $1���� ���,��� � �5 6���� 9%C( : 9� ���:3 $��� ��� ������� �5 �=� ����� �5 ��$6C6���� 9%C&&(: ������,��2 � 5��� � ���� � ������, 9� ���� +��:��������� � �� �=� ��$6 ��������� ��� � ��� � 6���� 9���+� � ��� ���� ;� ������� � ������� � ����� � ��� ���+�� ��������� =� ��� �5��� ������, +� %&G: �� � ���= ������, = �� �� ��$6 ��� �>���3 9-: /�1?�86 �� 9�: �$��� F% ���� � �5 @�1��1��+���� ��$66�� ����+���� 9 : �� ������� �5 �� ;� �� ������� 9C( : 6�����3 9�: �$��� F% ���� � �5 @�1��1��+���� ��$66�� ��� �+���� 9 : �� ������� �5 ����� � �������� �� �5 $1���� �� �,��� �3 .��� 8% �� 6D ��������� �� �$��� 8% �� ��0�� � �������� � �������� ������� ;���3 8�������� ��� � ���� � ��$6 = ����� ��������A ������� �5 ��+�� � = �� ����� � ��� �� ���=3 $��+�� � �5 +��� � ������ � �� - ��� ����3" 9#:� ��������� ��� �� ��� � ����� +� ��� � � �� �� ��� <��� �� +� ������ � ��3 " 9�: �� 9�:� ��� ��H�� ����;��� �� � �� ��� � � *! ����� ���� ���� � ������ >��3

6���� *� # � � �� ��$66�� �� ������� � ������� �� �5 5���1

����� �� �������� ����� 6����

6���� �� 9�: �� 9�: ���� 97�:

/���1����� 9%C&&(: @ &C% 3% C 3%&8������� 9(%C&&(: & & C% 3% C 3%&

#����� ���� ������� �! �!������� �� � ��! ��

���

�� ���� ���� ��� ������� �� ���� <����� ���� ���� ��� � ���� �� ��� � �5 ��� ����;��� � ���� �������� ��� !'C@ �� @! ��� &� ����� �������� �� *! ��� @� ����� �5 ��� �� ���� ����9/ ���� !�:3 "��+�� � = �� �� ;� 6���� 9%C&&(:������ ��� ������� � �+���;�� = �� 6���� 9(%C&&(:� ��� ���� !'C@ �� ����� � ���� <� ������� � ���� ��� *! ���� ���� �� �, �� = �� 6���� 9(%C&&(:9/ ���� @#:3 8�� ���������� �5 ������� � �� ��� � � *!��� �������� 8�+�� "" �� =��� ���� �� 5����= ��� ������+��=�� � 55���� 6���� ��������� �� ��$66�� 9���+���=:3 ����� � ��� �� ;� ����� 6���� ��������� ���������� � ���� ���� �� $1���� �� �,��� � ��0�� � ����������� ��� � �� ����;� �5 ��� ��$66�� �� �������� �� ����� �� � ������ ���, � �� +��=�� ��� ��H������;� �� ��� ���� �5 ��� ��������� 9/ ���� @:3 8�� �� ������� � ��� 5����� � �5 � ������� ������,�������� ����� ���� �5<� ��� �� ��I����� +� ��� �������� ���� �� �� ������� � �,��� ���� 98�+�� ":3

"������ ���� =�� � �� �������� �� �5 ����� ��$6��� ���� 9&C* ��:� ��� ���� �� ������� � �������� ���������� = �� +��� �� ;� �� �������� 6����� +�� ����� ������� � ���� � ������� �=� �� ����� � ��� = �� ����������� �>��� 9���� �� ���=:3 8� � ���� ���� �1������ ��$6� + � �� 6���� ���0 � ��� $1���� �� +����� �� 9�� ��� ���� ����: ������������3 8��� ����,��� � ���� � ����� ��� ���+�� �5<� ��� �5 ������������� � ������� +� � ��� � ��� ������� + � � �5�1������ ��$6�3

�������� �� ��� ������� ������ �������

�� ��� ����� � ������;���� ������ ��� �5 ��$66�� ������� ��� �� �������� =��� ���� 5����� � � �,��� ���� �� ���� ��� ��55��� � ��� ������� � ������ +� 5���1����� 6���� 9������ ���=:3 ����������� ��$66�� �5 ��� �=� +����� �� -!(C�*@ �� -!)C�*! +� �!(C-*@7�!)C-*!9;�� �� ���+�� +� �$��� F% �� /�1?�86:� �5 -@ C�* +� -@ C�* � �� �5 �@%C-@� +� -@%C�@� 9���+�� +��$��� F%: ��;� �������� � � � <��� ��� <��� � ��� ������� � �������3 8� � ��� �� ���� ��� ������� �5��� �� ���� ���� � �5 � �������� 5�� �� ����� � �+� ��� $1���� �� �,��� �3

" � ����� ��� �� �5 �,��� ����� =� ���������� ������� �,��� � ���� ���� �� ���� � ���� � � <����� ��� ���� <� ����� � � �5 ��� ���������� ��$63 8������ �� � ������ �� ����� ����� ��$6 =�� �� ���������� ���� +� ��� �� ;� 9%C&&(: �� ��� �������� 9(%C&&(:6����3 65��� ���� �� ������� � ����� �� ��� ���������$6 ��������� =��� ������� 5��� +��0 �$6 � � ?/18�1��+�� ����� �5< �� ����� =���� ��� �� �����������$6� ��� ���� �� 9��� >�� %��*A #��0�� � �3� %��(:3������ � �5 ��� �=� ������� 5�� � �� �5 ��$6� � � �������� �� �1��������� ��������3 8����5���� � � � <1��� ��$6 � ������ � ������ = �� �������� 6����� � ��� � ���� ��� ���� <� ����� ���� �5 ��$66�� +�6���� � �� 5���������� ������� � ��� ������� �5��� $1���� �� �,��� �3

6���� **� # � � �5 ��$66�� �� ����� 6���� ��������� = ��

;�� �� �� ��� $1���� �� �,��� �� �� �,��� �5 ������� � �5

��$66�� +� ����� ��������� ;�� ��� ��� �� �������� � +� �$��� F%

�� ��� � � *! ��� �� ���� ���� �5 ��� ��$6

6���� ;�� ��� �� 9�: �$��� F%������� ��� ��� � � *!�5 ��$66�� 9G:

$�� ;� 6���� 9%C&&(: ! �!8������� 6�����C%( 9%)C&&(: ! �)C!& 9!'C&&(: ! �(C@@ 9@*C&&(: % &@C* 9*%C&&(: !& !&C*' 9*(C&&(: % !C( 9(%C&&(: & �

$1���� �� ���� 9%C( : & ()������� 6������

.!�6 ! '��@ 6 ! ( J@%6 ! )'J@!6 % '�.@*6 %& %%J@&6 & J@'6 % *@

�� ��� � 6�����+

���� 6���� K% & ���� 6���� K! & @%����� .���� K% & * ����� .���� K! ! ('����� 6��� K% ! ( ����� 6��� K! % &'

������ �� ��� ��� �������� C!& 5��� 9!'C&&(: �5 ����� 6����3+8�� $1���� �� �,��� �� ��� 5��� ���� 6���� �� 5��� �����.���� �� 6��� �� ��� ������� �� ��� ���� ��������� �5 �����6���� �� ������� >�� / ���� &#3 8�� �������� �5 ����������� �5�� ;����� �� �5 ��������� ������� � � L! G3

5#� 4� ��� ���� ��������� +� �� ;� �� ������� 6���� ��� ���������� � +� 9�: /�1?�86 �� 9-: �$��� F%3 ������� �� �� ��� <��� �� ��� � ������� � .1������ ���������� �5 ��$66��

9���� =��� ��0� 5��� / ���� !# �� �:� ��� � 55������ �������������� �� � � # �1 ������ ��� � ����� +� � 55���� ��� � �� �5+��� ���� 5�� ��������� ��� � �� 9=��0� ! C* GA ��������� * C' GA�� ������ ' C% G: �� �5 ����� ���� 5�� ��� <��� �� 9=��0�% C* GA ��������� * C' GA �� ������ M' G:3

�(������ �(� ������ ��� �(����

��

��� ����� � ���� ��� �� ��� ������ ������ �������

8�� ( �� � �� � ���� �� ��������� � �� ���$1���� �� �,��� � �5 ����� 6���� =�� ������ �;��1�,������� �� ��+H����� �� ��� �������� � �� 5����� � ��,��� ���� ����� �� ������ � �� �= ����� �� �� + ���$66��3 8�� ���� �� +� ����5 � �+�� �� �� 5� = �� ������� �5<� ��� � ���� ��$66�� 9/ ���� !6� � ���: �� �������$6 95��� ����� �� ���������� ����� ���� �� ���=:= �� � �� �5 & � 98�+�� "":3 8� � ��<��� ������ � ��� � ��$6 + � � �� ���=� ���� � � �� �+���� � �� �� �� ��$66�� 5��� ����� ��$6�3 " ��� � �� ���5����� �� � ���� ������� ����� �;� =�� �������� ������� �� �� �� + �� �� ��� @� ����� �5 ��� ��$6 �� ��������� ����� > � ��� ��� � �� ����;� �5 ��� ��� ,�;� �� � �� �������� �� 9/ ���� !�:3 8� � ����� ����� ������ ������ � ���� �;� 5 �� � ���� �� ��������� >� � � ;� �������� � + �� ������� ������ <����� �� ��� � �� ����;� �5 ���+��1������� �$6�3

8� ������ � ��� ��� � ��� �,��� � �������� ����� � ����� �$61+ � � ���� � �������� ;� ���������5 ��� 6���� $1���� �� �,���� �� =��� ��� ��� �������� + � � �� 5����� � � �,��� ����3 �������6����� ��������� �� ��� �� ;� �������� ���� ;�� �5 ��%(� !&� @@� * �� *' $1���� �� �� � �� �� 9������ C%(�C!&� C@@� C* �� C*' 6������ ������� ;���: 9/ ���� *6:3/����� � � 9/ ���� *#: �� ��� �������� � �,��� ����9�� ���=: � ���� � ���5��� �������� � +��=�� ��� �����5 ������ = �� ��� ��$66�� �� ���� ���� 9�� ��� � �*!: �� ��� �������� �5< ��3 N��� <��� � �5 ������������ �� � � ;� 8�+�� ""3 8�� ������ = �� ��$6��� ��� *! � �������� �+������ =�� �� � �� �� +��=����� � �� !& �� * ��� ����;�� 9/ ���� *#:� = �� ��������� �������� �5< �� �� ��I����� +� �L% 15��� ������ �5 ��� �� �5 ��� ������, 98�+�� "":38���� ��� ���� � � ��� � !&C* ���� � ��� 5����� �5�� ����;�� ��$6 + � �3

����� � ���� ����� � ��� ����� ������ +��=�� ����� ���� ���� �� ��� $1���� �� �,��� � �5 ��� ����� ���� ���������� = �� � ������ ���, � �� �5 ��� �� �5 ����������� ���� �� ��� ������� � ���� �5 ��� �>���3"����� ������ ��� '�C(@ +����� ��������� 5����$��� F% �������� � 9/ ���� *#:� ���� � ��� �, ������5 � �������� � �55��� +��=�� ��� �=� �,���� � �� �5��� .1������ ��$6 �������� ��� � ������, 5����� �38���� =�� ��� �� ���� �,���� �� � ������� ��������� 5���1����� 6����� ��� � ��� ������� �� ��� ��;�� �5 ����������� ���� �� �� ���� �������� �� � ���� ��� ��6 ����������� ��� ��� ;� � ��� =������ ����� ������� +��������� ������� =�� ��� �� ���� ���� � �� � �����+��� �� ��� ���������� �� � ��� ���� = �� ��� ��������6����3

� ������ ���� ��������� ��� ������ �������������� �� ����� �5 6����� = �� $1���� �� �,���1���� � ����=�� ��� ��� <��� � ��� �������������������� �5 ��� ��� 5 !�.�JJ,.JJ,,J@� ������������;�� ��� �>���� 5��� ��=�� ��0�������9� ��� ���� � �� ����������������� �����: ������ ���� �����;�� ����� 5��� � ���� ��0�������9��������� ��� ������ ���������� ��� ���������� �������� �� �� �������� ���� �:

9/ ���� &6:3 8� � ��� 5 � ; ������� �+��� ��� ������,��� �� �5 ���� �� ��� 6������ = �� ��� ��� �=���� � ��� ���� ���������� �� J@! �� J@' �����;��9O���+�1��� � � �3� %�)�A � ���� �� B������ %�)�:3

?��� �5 ��� �����;�� �� � �� �� +��=�� ��� � �� !��� @' =�� ��+�� ����� � ; ������ +� ��� � 9����� ��=��� ���5����� � 6����1!&:� �� ��� ��������� �������� 6����� =��� ������ 5�� ��� � ����� �� �� ��������� � �� ����;� �5 ��� ��$66�� �� ���� ����9/ ���� *�:3 6�� �5 ��� �����;�� �� � �� �� =���5��� �� +� ;��;�� ��$6 + � �� � �� ���� ����� ������ �� ��������� ������� � �5 ��� � � *!� ��� ���������55���� +� � �+���;�� 5�� ��� ���� .@* �� J@&9/ ���� *� �� 8�+�� "":3 " ���; ��� ���� ��� ����������������� ���� �� �� 9.��+�� � �3� %�))A 6��� � �3�%��&: ��������� ���� ��� ���� �� �������� � ���������� ��� 5 ������ � ��� ��� 5���� = �� ��� 5��� ��� ���� ���� 9J@%� J@!� J@& �� J@': ������� � ��� ����� �� �5 ��� ��� ,3 8� � ��0�� ���� ���� ��� ����� 5���1���� <� ������ �� = �� ��� �� ���� ���� �5 �����$63 8�� ����� ����� �� � �� �� �5 ��� ��� 5 9.@�� �@!�� .@*:� �� ����� ���� ��� ��������+ � ���� ��� ������+�+�� ������� 5�� ��� ���+ � �� �5 ��� ��� , �� ���������� �������� � �5 ��� ��� � ��� ���� ��=���� �$63

������� �������� �� �������� � ����� ������������ ���� ����� ���6 ��� �1� �� �� � �� � ��� 5 � ���� ������ ���$1���� �� �,��� �� �5 .����� �� 6���� 5�����0������� 9/ ���� &6:3 B�� �������� = �� ��� ��� 5 ��� <�� 6����� 9!�.�JJ,.JJ,,J@�:� � ������������� ������� ,�J,,.JJ,,J ������� 5�� ��� �����5�� � �� �5 ��0����� � ����� ""+ ����������3 8� � ����1���� �������� ���� �����;�� ��0����� � .������ ���� ���� ���� ���������� �� �@ � J@%� .@*� J@&� J@' �� J@� ����� 6����3 ��������� � ������� 6���� =������� ��� ����� ���� �5 ��� ��� 5 9.@*� J@&� J@' �� J@�: � ������3

8�� �+ � �� �5 ��� $1���� �� �,��� �� �5 ����� .������ 6��� �� 5��� ������� = �� ��� �� ���� ���� �5����� ��$66�� =�� ������ +� 5�� � ���� �� ��� ���� �5����� 6����3 6� � ���� ;� ������� =� ���� 5���� �������� �,��� � �5 ���� 6���� 9O���+�1��� � � �3�%�)�:� =� �� ���=� ��� � ���� �� �� � �� � ��1���;�� � = �� ��� ����� ��� 53 8=� ���� �5 ��������� =������ ��� 5�� ���� �� ����3 " ��� <��� ��� 9�� ���� K%:� ����,���1���� =�� 5���� � ������ �� ��� �� ���� ���� �5 6����� =������� ��� ����� �� 9�� ���� K!:� ���5�� �� =��� ��� ����� �� �������� ��� � �����+��=�� ��� 6���� �� ���� ���� �� ��� �����;������ � � ��� 5 9/ ���� &#:3 6�� ��������� =��� ������ 5����� � � �,��� ���� �� ; ���� >� ��� ������� � �5 ���@� ����� �5 ��� ��$66�� �� ���� ���� 9/ ���� *� ��8�+�� "":3

B �� ��� ��� �� ��� � ����� �� ��� ������� � �� �� ��������� ����� ����;���� �� ��� � � *!� �;� ��� ���� �5 ������� �,��� �3 D�=�;��� ��� �,��� �5 ������� � �������� ������� ��� ��� � ����� +��=�� ��� �$61+ � � ��� 5 �� �� ����� � �� ��� �� ����1+ � ������� �5 6����3 E�� 5 �� � � ����� � ��� ���� �� ����5��� ��� ����� 6���� 9@ ��� ����: � ��� ������ +� ���5��� � �,��� � ��� ���3 " ����� =����� ��� ��� + � ��5 ��� ���� � � ��� 5 �� �� ��$66�� ������ ������ = ��

#����� ���� ������� �! �!������� �� � ��! ��

��!

����� .���� �� ���� K! �� ����� 6��� �� ���� K%3 "��� ���� �5 ���� 6���� �� ���� K!� ��� ��� 5 � ������������� �� ����;�� ���� ������� � �5 ������ �� *!3 "5�� � � ����� �5 @ �� � �� �� � �� �� �� ��� �� ���� 6���� �� ���� K%� �� ����� .���� �� ���� K%�� ����� 6��� �� ���� K! 9/ ���� &#:� ��� + � � ����$6 � ������� �55����� �� ��� ������� � � ������������ �;� �+�� ���� ��� ���� �5 ���� 6���� �� ���� K%98�+�� "":3

����� �������� �� �����������#���� � � �,�� � � ��������� � = �� ����� 6����� �� �=��0 ���=� ���� � ����� ��� �1� �� ���� �� ������� ���$1���� �� �,��� � �5 �� � ����� ""+ ��������� � ;��;�� ��$66�� + � � +� �������1 ��������������3 " / ���� '� =� ��;� ������� ��� ����� ��� ������� ���� �� � �,��� � � ��� �������������� � �����1���� �5 ��� 6����C��$66�� ������,3 B� �� ��� �,�������� � �5 ��� ��� % �� @ � ������ ������ ��<�������� ���� ���� �5 ��� , @� =� ��� ��<��� �+��� �������� � �5 ��� , ! ���� � ��� �$61+ � � ��� 5 ����� �� ��� � �� ����;� �5 ��� ��$6 �� ���� ����3 8� �

������� � � ��������� +�� ������ ����� �; ����� �������� ������ � �5 ��� ������� $1���� �� 9%C( :���� �� ��� � �� ����;� �5 ��$66��3 8�0� ������������ �������� ����� ������� =��� 5�� ��� ����;������� � �5 ��$66�� � ��� �� ;� ���������� ����� ����5�� �� �� ���� ���� 3 6� � ���������� ��� ���+ � ���5 ��� ������, � �������� = �� ��� �� ������ ������������� ��� �� � ���+���� +����� �,������� ��� �� ;��>��� 9��� ������� � �5<� ��� ����7�� � % 15��� � �������� 8�+�� ":3 $�� ���+��� ��� ��� � ��� ������� ���� ����,��� � ��0�� = �� ��� �� ���� ���� ��� ������� ��+� � ���1� ����� ������� � +��=�� ��� �������� ������ ��� ������� � � �� �5 ��� �>���3

" ��� ���� �5 ����� ��0����� � 6������ �� =��� �� ��� �=� ����� ���������� ;�� �5 ��0����� � ����� ""+����������� 6���� �� .������ �� � ���� � � ������� ����� ������ � ���� �� ���� �����;�� ;��� �9,�J,,.JJ,,J:� +�� � ������� �� � 55���� � ������5��� ��� +���� � �� � = �� ��� �� ���� + � �������� �5 ����� ����� � 9��� / ���� &:3 "� � � 0��� ������ � ;�� �+ � �� ��I���� 5� � ���� �������� � 55������ ����� ""+ ���������� �� ����� = �� ��� � �= ���������

5#� �� 9�: 6� � �� � ������� �5 ��� ����� 6���� $1���� �� �,��� �3 9#C�: /����� � � ������� �+�� �� = �� 9-: �������� ;��� �������6������ 9�: ������� 6����� �� 9�: �� ��� � ����������3 " 96:� ��� ����=� � ���� ��� � ��� ����� 5�� �������� ;� ����� �� ���5����� �5������ ���� C%(� C!&� C@@� C* � C*' �� C( � ������� ;���3 E ������� ������ 9#C�:� � � ����� ������� �� 8% �� 6D � ���� �$��� 8% �� ��0�� ��������� � �������A ��+�� � ������� = �� ����� � ��� �� ���=3

�(������ �(� ������ ��� �(����

��"

����,�� �� � ��� 5 =���� ���� + � �� ��$6 �� � ���� ��� ����,� �5 ����� 6����3 E���� ��� �1� �� ��������=��� ��� <�� �,��� �� �5 ����� ��0����� � �����1������ 3�3 D ���� "����� ������ -���� ������ 8������ F���� 5��� ����� 9.��+�� � �3� %�))A � �����%��%:3 E�� ��� ���� �5 ����� ����� �� -��� =�������� �,��� �� ���= �� ������ ��� �5< �� �5 ������������ 5�� ��� ������ ��$6 9-���5��� �� ��� �����

%��(A B��� �� �� ��� ����� %��(A B�� ����� ����� %���:3 8���� � ������� ���� ��� �������� ����+� ����� 5�� ��� ����� � � �5 ��$6 +� ��������� �����0����� � =���� ���+ �� +��� ���� <� 9 ��� �� ����1���: �� �1���� <� 9���������� 5�������: ��������� ��� +���� � �� �� ��$6 �� ����� ���� �3"������ ���� ��� �������� �5 + � � ��$6 �1���� <�1���� �� +� �������� = �� =��� ��� +�� ���= 5��

5#� 7� 96: ������� �� ����� �5 ��� $1���� �� �,��� � �5 ��0����� � �� �����1��$6 ���������� 5��� ��+����� ""+ �� 9#: ��� � �5 ���� 55���� �� ��� � ����������3 9�: �������� �5 6���� ��� � ���� �5 6����� ��� � ���� �� �5 .����� � ��� +�����3 8�� $1���� ���,��� �� ��� 5����=�� +� ���� �5 ��� ���� ��������� 9�5��� ��� � � %'%:3 8�� �����;�� �$61+ � � ��� 5 ��� $1���� �� �,��� �� �� ��� ����� ���� �� � 0 5�� ��� ���� �����;�� ��� ����3 6� � �� �� �����;�� 5�� � �� �5 ���������� �5 ��� ���� ��� �� ��� � ����� ��� 5�� 6����� ������ 5�� 6����� �� �����= 5�� .�����3 $��� ��� �����;�� � �� ��� � � %' �� ��� H��� � �5 ��� �,��� � = �� ����� ����1+ � � ������ �5 ��� ����������3 9-: 8�� �� ����� =��� �+�� �� +� 5�� � ��� ���� �5 ����� 6���� = �� ��� $1���� �� �,��� �� �5���� 6����� �� ����� .���� �� 6���3 �������� �� � �� � 5��� ����� 6���� ��� ���������� �����= 5�� ��� ��� ;� ���� �5 ��� ����������� +��� 5�� ��� �,��� �3 8���� 5��� ����� .����� 6��� �� ���� 6���� ��� ����3 8�� �����;�� �$61+ � � ��� 5 � � 03 " ����� ����� ��� $1���� �� �������� 5��� �1���������� ���������� =��� � ����� �� ��� ��� 6'& ����� 6���� 9��� ���� ��� ���� �� ������� '&C'�+����� �� ��� �,��� � �5 ����� 6����:3 8��� ��������� �� �������� ��� %C&% 5��� ����� .����� %C�' 5��� ����� 6��� �� %C%) 5��� ����6����3 " ����� 6����� @ �� � �� �� �������� ��� �����;�� ��� 5 �� ��� �� ����1+ � � ���� 3 " �� ��� � ����� � K%� �� � � ����� �%& �� � �� �� 5�� .����� @ �� � �� �� 5�� 6��� �� � , �� � �� �� 5�� ���� 6����3 F�� �� �� =��� �������� �� ��� � ����� � K! +�5�� � ��� $1���� �� ���� � 5��� ����� .����� ����� 6��� �� ���� 6���� �� ����� 6���� ��� ���� .&!� 6&% �� J*@� ������� ;���3 " �� ���� @ � *& �� @ �� � �� � � 0��� 9+��=�� ��� �����;�� ��� 5 �� ��� �� ����1+ � � ���� : =��� �+�� ��3 �������� �5 ����� 6�����.���� �� 6��� ��� ������ � �� ������ � �3 9%�)':� ���� �> � �3 9%��%: �� O����� � �3 9%��*:� ������� ;���A ���� �5 ���� 6���� ������� � �� O���+�1��� � � �3 9%�)�:3

#����� ���� ������� �! �!������� �� � ��! ��

���

6��1%�3 "����� �� � ����� � =�� ����� ���� = �� ����������� ����� �� ������� �5< �� �5 ��� ��$6 5�� �����9� ��� � �3� %��':3

.�� �1� �� �������� ������� ������� �� ��� �������������� �5 ��� �$61+ � � ��� 5 ������ ����� ""+��0����� � ���������� =��� ���� 5��� � ��� �� �5���+��1������� �$61����� > � ����� � 9J��;�� ��O������ %��':� �� ��� � ��� ��� ����� =�� ; ���� >�� ��� ������� ��������� �5 ���� � ����� 5��� � ���� �����������,�� �� ���+��1������� �$6 9����� �� ������>�%��):3

" ������ �� �� � =��0 ����������� ��� ���� � ��� ��5 ��� $1���� �� �,��� �� �5 ����� ""+ ���������� ��� � > � ���� <� ��$6 ����� � � +� ����������3 6��� � ������ =� ���� �,����� ��� � ��� ���� ���� ���5��� �� �5 ����� �,��� ��� �� ���� �������� �5 ����,���1���� � �5 ��0����� � ����������3 " � ���� ��0���1����� ��� � ���� � ��� � ���� ��������� ������, 5��1��� � ��� �,��� ����� ������� 9N��; ��� � �3� %���A��� � �3� %���:3 " ��=�� ��0�������� ��=�;��� =�������� ������,�� ��;� �� +�� ��������� ����� ��������;� �� +� ;�0�� �� ������ 5�� ��� � �����;�� �� ������ ��+�������� ����� >�� � �� ���5<�0 � �5 ����������9���0 � �3� %��%A ��� ���� �� B��� %���: ��7����������� ������� �3 B� ��� �,���� � ����� ���� + � � ��3

�������� ��� ��� ��

!�������� �� �������� �� ����" ��������" ��������� ���� ������6�� �$6 �������� =��� ����� �� �N?1( 9N ���: +��=�� ���" ��!��"" ����� �� � � ��� �� ����� ����� � ��� ;�� 5��� ����� 6���� = ��� �1���� �� D �' ��� ������� ���� ��� ������ �5 � ��� +�� 8&��������3 $�� ;� �� $1���� �� �������� ����� � =��� ���� <�� +���� 5��� ���@%*16���� 9?� � � �3� %��%:3 ��� �������� � =������ �� ������� ��� �� � ����� �� � ��� C!& �������� 5��� �5 6����3$1���� �� ���� � 5��� ����� 6��� �� .���� =��� ��� ���� <��5��� ����� ����� �$6 �� ���� �� �� ��� � ����� ��� ���� <��� ������ � � 6���� �$6 5�� � ������������ ���� � �� ��� ���� �56���� 9�� � �� �� (%C&&(:3 ?��� �������� =�� ����0�� +� ������ �+��� �,���� � ��38�� D �'1������ ����� ;�� ��� =��� ��� <�� +� �0�� �5< ��

��������������� �� ����� +�� +� N ���� �� �����;�� �� C! ��

& �� ��������� +�55�� �D (3!� %& �� J��� & G ��������� % ��?�86 �� % �� � �� ����� ��� 9�88:3 6 ��� � ��� ��� <��� � ���� �� ��� ����� 9# �1���: =�� �������� 5�� �� �1������� 6��������� � ��������� � �� �� ��� � $1���� �5��� ��� <��� ��� <��� �����3 ����� � =��� ���� <�� +� #���5��� ������ 9# �1���:3

���� # � �� ������P���� ��$66�� �� ������ 968���8�:2��$6 ������ �������5����� ������� =��� � 0 � � 5� 5��� 638����+���1� ��� �� �� =��� ��� <�������� � �� ��55 � �3 9%�)): �� ���� �� ��������� 9%�)':�������� ;���3 8�� @� �� ��+�� � �5 ����� ��$66�� =�� ��� �;�� +�Q�1@!�R68� �,����� ��� ������� �5 ����� 9-3J� ��� ������������ ��� �:3 .�+���� ��$6=�� ��� <�� +� ������������� � � � %!G����������� �� ��� 5����=�� +� ���� ;� ���� � 3& �$D*E6� �D '3 � 3% �� ?�86� 3%G ���� % �� ��9E6�:!� �� ������ ���� � �����38�� ������� =��� ��� ��� ����;�� =���� �� �������� +� ���� � 5��! � �� '&�� �� ���� � ��= 5�� % � �� ���� �����������3

�� ��������� � �������/�� ���� ������, 5����� �� L% ����0�; ����� �5 ��$6 =��� ��+���� = �� ;�� �+�� ����� �������� �� 95��� ! � �� * ��: ������ ;����� �5 ! �� ���� � !& �� ��������� +�55�� �D (3!� (& ��J��� % �� ����! �� !&G �������� 5�� %& � � �� �� ������ ��� ;� 'G 9!�2%: ������� ��2+ �������� �� ���� 9! � ! � %3& ��@�%* F 5�� *& � : 8#? �� *�� =�� ���5����� = �� 5���1���������������� �� � % G 9!�2%: ������� ��2+ �������� �� ���� =�����5����� = �� ��� $1���� �� ���� ���� �� ����3

�������� ����� �� ��������� ���� �� = �� ������� F% =��� ��� !& �� ��������� +�55���D (3!� (& �� J��� % G �������� �� % �� ����! 5�� % � � ��3?��� ����� � =�� ���5����� � ����� ;����� �5 !& �� ��� ������� �5% �7�� �$6� @�1��1��+���� ��$6 9L& ����0�; �����: ��%3! � % C! � �5 �$��� F%3 ��$6 �� % �� 6���� =��� ��+���� 5��& � � �� �� �� �� �>���� � � ���� �3 ����� �� =��� ������� +���� � � �5 % ;��3 �5 ���� � ,� 9 3' � $�E6�� * �� ?�86� 3% ��7������� ��$6:� 5����=�� +� � �����7������5��� �,����� � �� ���������� � ��� �3 6 ��0�� � ������ =�� �+�� �� +� ��+�� � �5 ! �� �5��$6 & �� $�D�E@ �D �3 �� �&�� 5�� & � �� � ��� � ������+� ������ � �$��� 8% � ���� �2 ! �� �5 �$6 =��� <��� �������� +����� � 5�� & � �� &&�� 5����=�� +� ��� � ���� � � ��� �� � ������ ( � ����� % �� ?�86� % �� ��� �� � ����� �D *3& ��� ��������5 % � �5 �$��� 8% 5�� % � �� &&��3��� ���� ;� ������� =��� =����� = �� ( G ������� �� �� ��

���� <�� 9����0�;: +�5��� +� � ����+ � >�� ���� � +�55�� 9� G ;7;5����� ��� ! �� ?�86 �� 3&G =7; ����:� ������ 5�� @ � �� )&���� ��������������� � %&G ����������� �� ����3 � ��� ����� � ������ <��� � =��� ��� � � /�O"S # �1"��� � 6������ #6� ! = �� B��0 ���� � ��5�=��� 9;%3%:3

$��%&�� ������������ � = �� /�1?�86 =�� ���5����� � ! �� ����� � ;����� � ������ � ��� ���1 ��+��� ������,�� +��=�� ��$66�� 9 3& ��: ����� � 55���� ���������� 9% ��: !& �� ��������� +�55�� �D (3!�(& �� J��� % ������!3 6 % �� �� ���� �5 ���� �5 ��� 5����= � � ��������� �� =�� �����2 * ��7�� ���� �� �� 9"": ���5��� ��,��������96��� �� ���� ����:� !& �� ?�86� % �� �88 �� 3&G 9;7;:������� ����, ��3 8�� ����� � =�� �� 5�� % � � ��� ������� ������>�� �� ����� +�� �+�;�3 � �� ��� ��� ������� � ������� =����+�� �� ��� ������� �5 % �� ! ��6���� 9(%C&&(:� =� ��� ��� �������� ��� �,��� ���� = �� ��� ��=��� 9% ��: ��������� �������1� �3 ���� ���� ��� � ��� ��� ������� � ������� �� �� ��I��� � ���� ��� ���� �� � �5 ��� ������,��3

&�������� �� �������� �������6� ������� � �5 ����� ��$66�� =�� ���5����� �� @ �� % ��D?�?�CJED �D (3&� % �� ����!� & �� 68�� @ �� J��� & ���88 �� !& �� @D1��+���� .1������ � �� �3 ������� =��� ������� ��������� ��� ��;�� ��� =�� ����� +�� +� ������ � �3 9%�� :3 ��$6�������� �� ;�� �� +��=�� & �� & � ��� ������� �5 % ��� ;� 6����� �� %!& �� % � ���� �5 ! � $1���� �� �������6���� 9(%C&&(:3 J �� � ������� =��� ��� ;�� 5��� . �=��;��C#��0����� �� �������� � �;����� �5 �� ����� �=� ������� �,��� ����3

%$��� �������6 %! �� �� ���� �5 ����� ����� ��$6 � ����� ����� � ;����� �5 & ��=�� �� ��������� = �� % �� �� ;� 6���� �� 6���� 9(%C&&(:� �� �

5#� �� 8����1� ��� ��� ��������� �5 � 5��� ������ �5 ��� 6����C��$66�� ������, �5 �����3 8�� ��������� �5 ��� ���� �>��� 9 �����=: ������,�� �� ��� ��$6 � ���� ������ �� +� ���������������9��55 � �3� %��%:A ���� �5 ��� $1���� �� �,��� � 9 +���: =��������� ��0 � �� ������ ��� ���� 5��� �� � =��03 $��� ��� ����� ��5 ��� ����� ��� ��� ���, � �� �� ��� ��$6� �� ���� ������� ���� �5��� , ! 9= �� ��� �$61+ � � ��� 5 � 0: �� � ��� � �� ����;��5 ��� �� ���� ���� ��� ,3 8�� <���� =�� �������� �� � ���������� �?8E� 9?;��� %��@:3

�(������ �(� ������ ��� �(����

���

��� ���� +�55�� ��� � �� �� � ���� �+�;�� 5�� ! � �� @ ��36� ��������� ��$6� =��� ��� <�� � � ?/18� �5< �� ����� ������� +�� +� #��0�� � �3 9%��(:3 65��� �������� �� ������ ��$6� =���@�1�� ��+����� ��� <�� � ����������� �� ��� �� ���� +�� =���������� �>���� ����� 9�� �1J����� � �3� %�((:3

������� ������� �� ������?,��� �� �5 ���������� <��� =��� �� ��� ��������� �� � �������S98������ � �3� %��(:� ��� ������� �������� �� ��H����� �������3����� � �5 ��� $1���� �� �,��� � =�� +���� � ��� �������������� ���������� �5 ��� ����� 6����C��$66�� ������, 9��# "� ���� %6�T:38�� <��� '' ��� ���� =��� ����� �� ��� ��� ��� +� �� �� � E 9O��� � �3�%��%:3 8�� <�� ����� =�� ��<�� �� ����� ���� ���������� �����������3

�� � )�������

B� ���0 O3-����55� E3���� �� �3������ 5�� ��; �� �� �� ����� �� ����� ��3 B� ��� ���� ��+��� �� �3� ���� 5�� ��� � ����� �� ���0����� � ����������3 8� � =��0 =�� ��������� +� ����� 5��� �������� $�� ��� �� �� ��������� �� �� <��� 9�$��:� ��� � ������ ����?����� � $�� ����� �� �� ��������� �� �� �� 8������� � 9�?$�8:�� ;��� ��� .�� � �������� �����+���� �� ��� ?������ ����� ��9#"E* �8�) %)�:3

������

6����/3� P���P3� -���� �����O31�3� B������O31�3 �� -� �����?3 9%��&:����� �1 ����� �1��� ��� ��������� �5 � ������ � !@1��� ������� �� �������� � ��� ��� �1� �� ������ �5 ��� $1���� ���,��� � �5 ����� ��������� � ��������1��$6 ���������3!����������� 4�� &'�C&('3

6����/3� B������O31�3 �� � ������3 9%��': ?,����� � �5 ��� ��������1��$6 ��������� ����������� ���������3 ���� �5 ��� $D!1���� �� �������� �� �,��� � � �>��� ��� ; �� �� ���+ � ��3"� !���� ������ &)/� !�!�&C!�@ @3

#��0���D3�3� �� +����O3� J����>����3� - ������3 �� J����3 9%��(:?, ����� �5 �=� � �� �� ��������1��$6 ���������� #�����������������3 ���������� �� + ����� ��� ������� �� �5 ��� �=��>����3 !����������� 4�� )()&C)(�(3

��;����� �O3� �����#3� ��55��3� 8� �����O31�3 �� �������3 9%��@: P������$66�� ����� � � +� �� ������ ����� "" �� �����1��$6���������3 $���� 4�&� %)%C%)*3

�����D3 �� �����������3�3 9%�)': D ��1��;�� �;���,����� �� ��� ���� <��� �� �� ������� �� �5 ���������� ���� ��$6 �����1� �������5�����3 "� !���� ������ &�/� '*& C'*&@3

���������3 �� �������3 9%��@: 8�� �� �����1��$6 ����������5�� ��2 ������� �� =��03 !�������� /7� '(&C')(3

�� �1J������D3� ��,���63�3 �� - �+����B3 9%�((: ���� � ��� ������ �� �� ��� � � �� �$63 $������ ����� %���� �� !&!(C!&@)3

?� � �-3� ���������3� �����E3� -����55�O3 �� �������3 9%�� :���� � � �5 ��$6 ���������� �� �=� ������� +���� � ���������,���� ;� ���� �5 ������� ��� 5�3 $���� 4�)� ! @C! '3

?� � �-3� ���;����-3� J����3� F ������3� � ��� ����-3 ��-����55�O3 9%��%: ��������� � ��������1��$6 ��������� 5�������������� ���������3 ����� �5 �� 5��� ��� ���� >�� � +������ � ����� �3 ���� "� !�������� &''� @@(C@*@3

?;����3 9%��@: �?8E�2 ����=��� � ����� �����1� ��� ��� ��������������� �� �5 ��������������3 "� &��� '����� //� %@*C%@)3

/�;���;��E3E3� /�� ����/3� J� ���-3� F��� ��0���3J3 �� ?+���O31�39%�)%: ���� �� � ���� � �5 ��$61�� �����1��$6 ���������������,�� = �� ��+�� ;��� � +��������3 !����������� &'� % 'C% %%3

-��� ��63� - ������3 �� #����O31�3 9%�� : $�= �������� ;���+������������ �� �5< �� ���+�� �5 �$62 ���� <� 5������� ������ ��� �� 5�� ���� � �5 ����� � + � � � ��� ����� ��$66��

�� ������ � �5 �� � ��$6 = �� ����� ��������1��$6 ���������3$������ ����� %���� /8� )�C�&3

- ������3� .��+���#3� ?+���O31�3� �������3 �� 8� �����O31�3 9%�) :�� ����� ��� � �� ������,� 5����� ���� �����������1��$6 �� ��;����� �� �� �����1��$6 ���������� ����� <���3 ��%� ���� ���� �����()� &0/� @�@C@�'3

- ������3� ���� � �O3�3 �� /�����>��3 9%��@: ��$6 ��������� ���� ������� � �5<� ���3 ����� $������ ���� %��� &��� !����� �7�%!�C! '3

- ������3� D�����3 �� /�����>��3 9%���: ���� ��� �� �>���� ����+ � �5 �$6 ���������3 " #������3D3�3 �� $�0� �� �J3 9���:��������� ���� $��� ������ ��������3 �������� E,5���� �J�F��3 '� ��3 '@C) 3

-���5����?3 �� ��� ������3 9%��(: T �1������� ��$6 + � � +� ����� �� ������ = �� � ��$6 ���������3 !����������� 4�� '(@�C'(**3

O���+�1��� ��63� ���������3 �� P����3�3D3 9%�)�: ��$6�������� ���� ���� �� ���� ���������� �� �;��; � ���� �� � ���� , �5 ���� ��������1��$6 ���������3 "� !���� ������ &��� %'' )C%''%!3

O�������3 � �3 9%��*: �������� ������ �� ������� �5����������� ��������� ���������� F"""3 ���� ��� &�7� ! ((C! )!3

O����8363� T���O3P3� ��=���3B3 �� JH����������3 9%��%: "����;��������� 5�� ��� +� �� � �5 ����� ������ ������� ��� �� ������ ��� ����� � �5 ������ ����� ������3 �� ���������� �� �)�%% C%%�3

J��;���#3�3 �� O�������3/3 9%��': �������� ;� ����� ��� ����� � �5��� ���+��1������� �$6 + � � ���� � �5 � ���� ����� �$61+ � � ����� 63 "� !���� ������ &)/� !)%%!C!)%%�3

.������O363 �� �����83�3 9%�)�: ��< � ��� � �� �� ���� �� �5 �������� � �$6 ��������3 ���� ��� &�7� !('C!)!3

.��+���#3� - ������3� ?+���O31�3� #��������3� 8� �����O31�3 �� �������39%�)@: �������� >�� � �5 � ��$6C�� �����1��$6 ���������������,3 ��������� >�� � �� <��� �������������� � ����3 "� !���������� &78� )*!�C)*@&3

.��+���#3� J����3� ��H���+�D3� #��������P3� �� +����O3 �� - ������39%�)(: 8�� � ������������ �� �5 ��� �������� >�+�� ����� ��������� ���������1��$6 ���������3 ���� "� !�������� /�7� * �C*%(3

.��+���#3� ��H���+�D3� �� +����O3� #��������P3 �� - ������3 9%�)):������� �� �5 $1���� �� �������� ����� ��������1��$6 ��������� ������������ ��������� �� �� �5 ��� ����;�� ���� 3 ���� "� !�������� /)��%&&C%'%3

���� �>��3� .���� �����383 �� � ������3 9%��%: 6 ���! ����������� = �� � ��� <�� �1���� �� � ������� ��=������ 5��� ����%�* ��� ���� � �����1��$6 ��������� ��������������������3 &��� '� � '� ��� &&)� %*�C%&*3

���0 ��3� J��H���3� B������O31�3� ���� ����31/3 �� ������ ��3 9%��%:"������ � �5 � �����+���1����� ���� ����� � = �� � �����+����2����� �����1 �� ;����1��$6 ���������� �� ��� !%)C!@& ������ ����� �� �� ����� �������3 !����������� 4'� %%&@'C%%&*&3

� ������3 9%��%: 6� �����1��$6 ��������� 5�� �� 5������0������� �� ��0�������2 ���������� ���� � �� ��� � ��� ��� ��3 ����� $������ ���� %��� &��� !����� �'� �&C%*!3

� ������3 �� B������O31�3 9%�)�: ��������� ��� � �� �� ������������� �5 ��$6 ���� � ��� ������� � ���� �5 ��� � ;�� ��������1��$6 ���������3 "� !���� ������ &��� )*!C)*(3

�������3 9%��@: ���������� ������� �� �;���� ���� ��� ��� �� �5 �������� � � +��=�� ��$6� �� �� �����1��$6 ����������3!��������� )7� '&%C'&(3

�������F3� -��� ��63� -���H���D3� ?+���O31�3� /�����>��3 �� - ������39%�� : ����,�� � �5 ����5�� �$6 ���� <� �� +� ����;�� �5 ��� <�������� ���3 $���� 4��� ()(C()�3

N��; �����3� ��+ ���O31�3� #���������?3 � ����0���3 ��� ������3 9%���: �������������� �����+���� �5 �� �����1��$6����������2 ��� <��� � �5 ����� C����� ������ �� ����������� >�� � �5 � ���� ����� 3 "� &��� !����� &87� %)@C%�&3

�����3#3� J ���3O3� .���O3�3� �����B3� ����� �D3� J ���3 �� �� +��J39%���: -��� � � ����� � �5 ����� C����� ������ �� ���� 1��$6 ��������� ������,3 ����� $� ���� ���� +��� 0�� **))C**�@3

���+���3� �������3� #���������3� �������3� F�����;�F3F3� B�����5�?3�?+���O31�3 �� - ������3 9%�)&: P���� ��$66�� ���� ��� ��������� ����� � �� ����� �5 ������ � �5 ��� ��$6 = �� ��������1��$6���������3 6 �������� ;� ����� �5 ��� ����� �������� � ������ +���������� ��0���� � �,��� ���� = �� ����� ���������3 "� &��� !�����/8�� *&&C*(%3

�����#3 �� ��������3 9%��@: ���� �� � �5 ����� ��������� �� +�������� ( G ��������3 "� &��� !����� &4&� &)*C&��3

�����#3 �� ��������3 9%��*: ���+ � �;���� ���� 5����� � ������� ��=��0� �� ���� �� ����� �������� ���������3 ����� �� /0�&&C(!3

�����#3� ��������3 �� ���� �����3 9%��*: �D�U� ������� � �� ����;�� 5�� ����� �������� ��������� ���� �� �3 ������ �����!������� /'� &@C' 3

��� ����O3� ���� � �O3�3� ��V�>�O3� �����>��3� ?�0��� �/3� /�����>��3 ��- ������3 9%��!: ������ �� ������ ��� �5 ����� ��$66�� ������

#����� ���� ������� �! �!������� �� � ��! ��

���

� ������ = �� ��������1��$6 ���������3 ����� $� ���� ���� +���80� &))!C&))'3

��55��3� ��;����� �O3� � 0���F3� .��+���#3� � ��������63� - ������3�8� �����O31�3 �� �������3 9%�)): 6 � �� ������� � � 55���� �������� 5��� �5 ��� ������, +��=�� ����� ��$66�� �� ��������1��$6 ���������3 "� &��� !����� &'/� !@&C!@'3

��55��3� J� ����=�����3� #���� ��3� ������>���63� � ��������63����H����63� �����#3� 8� �����O31�3 �� �������3 9%��%: ����� ""�� ����� ����5�� �$6 ����������2 ������� ��������� �5 �������������1��$6 ��������� ������,�� = �� ��$66��3 ���� ��� &7&�%')!C%')�3

������O3�3 �� ������>��3�3 9%��): ��������� +�� � �5 ���+��1��������$6C����� ������ ��2 ��������� �5 � ���$61+ � � ���� ������,�� = �� ���$63 �&!, "�� /)� (& &C(&%@3

��������3� .��+���#3� J����3� ��;����� �O3� �������3 �� - ������39%���: ������������� � ���� �� � ��������1��$6 ���������2 ��� �5����� � ����� �� ����;� ������� ���� ��3 �� ���������� �� 77�%*�C%&'3

��� ������3 9%�)(: 6� �����1��$6 ����������2 ������ ������ �5���������C5��� � ����� ��� �� ��� �������� ��� �� ����� � � �5����5�� �$6�3 � �� %��� !�������� 7�� %!&C%&)3

��� ������3 �� B����3�3 9%���: -��� � ��$6 ���������� �� ���������3 #�� �� !������� ����� &�� %!(C%!)3

������ ��3� /�� ����/3� � ��� ����-3� ?+���O31�3 �� -����55�O3 9%�)':$������ �� ������� �5 ��� ��� ��� � 5�� ����� ��������� ���������1��$6 ��������� 96��:A ���� � �5 ��� &� �� @� ���� �5 6���� ��$63 $������ ����� %���� /�� %'&(C%'''3

� ����-3� �����5�63� /�� ����/3� D��������J3� ���;���0��63� ����3�� D����?3�3 9%��': 8�� ����� ����� 6�� %� + �� �� ��$6 ��5��� �� �� � ��5����� 5�� ��� ���� ���1 �� ��������1��$6����������3 �&!, "�� /7� &*@(C&**)3

��� >���3 9%��*: ?����� � 5����� 8�2 � ���������� -8���� = �� � �������� �55�����3 #�� �� !������� ����� /0� !*&C!& 3

8�������O3�3� - +���83O3� ���= �0�/3� O������ �/3 ��D �� ���3-3 9%��(: 8�� �������S = ��=� ���5���2 I�, +��������� �� 5�� ���� ��� ������� �� ���� � ��� +� ���� �� ����� ������3 $������ ����� %���� &7� *)('C*))!3

B����31�3 �� ��� ������3 9%���: ���� �� +��� �� �� ��$6����� � � �;������ = �� ����� <� �$6 + � � ���� �3"� !���� ������ &)�� %'& )C%'&%!3

B��� ���?3/3 �� ��� ������3 9%��(: ����� � � ����� �� �>���C�$6 ������, = �� � �1����� �� ������� ���� � �&!, "�� /��!�')C!�(*3

%������� -������ ./ )0001 ������� &��� 2/ )0001������ &��� 3/ )000

�(������ �(� ������ ��� �(����

���