Penilaian Saliva dan Status Antioksidan Serum pada Pasiendengan Recurrent Aphthous Stomatitis

Tujuan: Tujuan penelitian ini adalah untuk mengevaluasi tingkat oksidan/antioksidan dalam plasma dan saliva pasien Recurrent Apthous Stomatitis (RAS) dan pada pasien normal.Desain Penelitian: Penelitian ini terdiri dari 31 pasien dengan RAS dan 32 pasien yang normal sebagai kelompok kontrol, dari kelompok tersebut didapatkan sampel saliva dan darah.Superoksida dismutase (SOD), glutathione peroxidase (GSHPx) dan katalase (CAT) diukur dalam eritrosit dan status antioksidan total (TAS) diukur dalam plasma dan air liur.Hasil: Aktivitas SOD eritrosit secara signifikan lebih rendah pada pasien RAS dibandingkan dengan pasien kontrol yang normal (P = 0,012).Tidak ada perbedaan signifikan yang ditemukan dalam eritrosit GSHPx, kegiatan CAT, dan saliva dan plasma TAS antara pasien RAS dan pasien kontrol (p> 0,1).Kesimpulan: Perubahan aktivitas SOD yang dimungkinkan berperan penting dalam reaksi inflamasi yang diamati pada RAS, tapi CAT dan GSHPx, tampaknya tidak memainkan peran utama dalam etiopatogenesis dari RAS.Selain itu, sistem antioksidan dalam air liur dan plasma tidak begitu terpengaruh seperti dalam eritrosit pada pasien RAS, dan karena itu tidak dapat dianggap sebagai indikator yang tepat dari status antioksidan total tubuh.

Kata kunci:Antioksidan, stomatitis aphthous berulang, stres oksidatif, air liur, superoksida dismutase.

PendahuluanRecurrent Aphthous stomatitis (RAS) adalah penyakit yang sering ditemui, tetapi masyarakat kurang mengetahui gangguan mukosa rongga mulut yang menginfeksisebagian besar 20% dari populasi di seluruh dunia (1,2).Gambaran klinisRAS didefinisikan kecil, dangkal, bulat atau ulcer berbentuk oval, dengan batas jelas dan dibatasi eritema di sekitarnya.Ulserasimungkin satu atau multiple dan ada telah dijelaskan adatiga jenis ulserasi aphthous yaitu minor, mayor danherpetiform.RAS terjadi pada interval beberapa bulan ataubeberapa hari dan sembuh spontan.Tampaknya lebih banyak terjadi dominan pada perempuan, kulit putih lebih sering daripada orang kulit hitam, dan anak-anak lebih dengan status sosial ekonomi tinggi lebih sering terkena dibandingkan anak-anakkelompok sosial ekonomi rendah (2-4). Penyebab pastiRAS belum diungkapkan secara jelas.Namun, beberapa faktor-faktor etio-logi dan predisposisi seperti trauma, stres, genetic, hipersensitivitas, gizi, gangguan kekebalan tubuh,dan ketidakseimbangan hormonal (1-4).Semuakondisi yang disebutkan di atas dapat mengganggu keseimbangan oksidan /antioksidan dan dapat mempercepatpembentukan radikal bebas.Stres oksidatif terjadi ketikakonsentrasi intraseluler oksigen reaktif radikal (O2, H2O2 dan H2O2) Meningkat seiring proses fisiologis.Efek sitotoksik radikal bebas adalah untuk sel mamalia, dan menyebabkan kerusakan sel melalui efek peroksidase dari Asam lemak rantai ganda, protein dan DNA, serta,meningkatkan stres oksidatif (3,4).Dengan demikian, sel-sel mamalia telah mengembangkan sistem pertahanan antioksidan yang kompleks untuk mencegah bahaya oksidatif dan memungkinkan kelangsungan hidup dalam lingkungan aerob.Sistem ini mencakup aktivitas enzim tersebutseperti eritrosit superoxide dismutase (SOD), katalase(CAT), glutathione peroxidase (GSHPx), molekul antioksida dalam darah serta antioksidan non-enzimatik termasuk vitamin A, C, E melatonin, dan asam urat (UA) (5-8).Telah dilaporkan dalam beberapa studi tentang gangguan keseimbangan oksidan /Antioksidan merupakan penyebab atas kerusakan jaringanpada pasien RAS (7-9).Dari beberapa penelitian yangberkaitan dengan masalah ini, tujuan dari penelitian iniadalah untuk mengukur beberapa parameter dari stres oksidatiftermasuk eritrosit superoxide dismutase, katalase,glutation peroksidase, dan tingkat saliva danoksidan darah / status antioksidan pasien RAS danmembandingkannya dengan subyek yang sehat untuk menemukan informasi tentang etiopatologiRAS/Bahan dan MetodePasienKelembagaan dewan peninjau dan Komite EtikaUniversitas Teheran of Medical Sciences menyetujuiprotokol penelitian dan setiap subyek menandatangani persetujuan informed concent.Penelitian ini melibatkan 32 kasus RASyang dilakukan perawatan pada klinik Penyakit Mulut Universitas Tehran dan32 orang sehat yang usia dan jenis kelaminnya sama.pasien RAS terdapat ulser di rongga mulut, berulang setidaknya tiga kali dalam setahun dan memiliki lesi aktif selama penelitian (1,10).RAS didiagnosa secara klinis olehahli dalam penyakit mulut. Merekatidak berada di bawah rejimen terapi dalam masa 3 bulan.Tes laboratorium berikut dilakukan;laju endap darah, jumlah sel darah danindeks, elektrolit, glukosa, tes fungsi hati dan ginjal, UA, kalsium, fosfor, globulin, albumin, besi dalam darah, vitamin B12 dan asam folat.Pasien normal dengananalisis biokimia biasa yang disebutkan masuk dalam penelitian.Pasien dengan penyakit Behets,diare kronis, riwayat trauma, penyakit sistemik,riwayat merokok, minum alkohol, atau kecanduan tidak termasuk dalam kelompok penelitian . kelompok kontrol 32orang yang sehat mengakui bahwa mereka bukan mahasiswa kedokteran atau staf klinik, yang membantah memiliki RAS ataumenggunakan obat atau vitamin.PengukuranAnalisis dilakukan dalam air liur, plasma dan eryth-rocytes.Superoksida dismutase (SOD), katalase (CAT)dan glutation peroksidase (GSHPx) eritrosit,dan status antioksidan total (TAS) dari saliva dan plasma,diukur.Aktivitas dari SOD, CAT dan GSHPx dieritrosit dinyatakan dalam satuan internasional, danTAS dalam saliva dan plasma dinyatakan sebagai mmol / L masing-masing dariplasma dan saliva.Persiapan Plasmasampel darah vena (5 ml) dari 31 pasiendan 32 orang kontrol sehat yang puasa dimasukkan ke dalam va-cutainers dicampur dengan heparin sebagai antikoagulan.Sampeldisentrifugasi pada 3000 g selama 10 menit pada 4 C.Plasmadipisahkan dan lapisan buffer dibuang oleh aspirator.Eritrosit dicuci empat kali dengan garam fisiologis dan disimpan pada - 40 C sampai dilakukan analisisis.Persiapan SalivaSampel diperoleh di pagi hari setelah malam hari berpuasa. Pertama pasien diminta untuk berkumur menggunakan air suling.Setelah 5 menit, kami mulaiuntuk mendapatkan sampel air liur yang tidak terestimulasi.Kemudian pasiendiberitahu untuk duduk dengan nyaman dan untuk meludah ke dalam plastiktubes lima kali per menit selama 5 menit.Sampel kemudian dicentrifugal 4000 g selama 10 menit pada 4 C, bagian atas adalahditarik dan disimpan dalam aliquot kecil di - 40 C.

Aktivitas Superoksida dismutase (SOD) dan glutathione peroxi-Dase (GSHPx)Aktivitas SOD dan GSHPx dari eritrosit adalah es-timated untuk hemolyzsates dengan menggunakan komersialkit tersedia RADSOD dan RANSEL (Randox Labora-tory Ltd, Ardmore, UK).Eritrosit Hemolysis oleh dengan penambahan air deionisasi dingin dan Vig-orously vortexed.Estimasi SOD didasarkan pada gen-timbangkan radikal superoksida yang dihasilkan oleh xanthine danxantin oksidase, yang bereaksi dengan 2 - (4-iodophenyl) -3- (4-nitrofenol)-5-fenil tetrazoliu-klorida (INT) kemembentuk pewarna formazan merah.Aktivitas SOD Mea-sured oleh tingkat penghambatan reaksi ini.Eritrosit penentuan GSHPx didasarkan padaBerikut prinsip: GSHPx mengkatalisis oksidasiglutathione oleh kumena hidroperoksida.Dalam kehadiranglutathione reduktase dan mengurangi nicotinamide ade-sembilan dinukleotida, fosfat (NADPH) yang teroksidasiglutathione (GSSG) segera dikonversi ke re-bentuk diproduksi dengan oksidasi kontaminan dari NADPHke NADP +.Penurunan absorbansi pada 340 nm adalahdiukur dengan spektrofotometer (11,12).Aktivitas katalase eritrosit (CAT)Kegiatan CAT diukur dalam sampel dengan metodediterapkan oleh Cimen et al.(8).Dekomposisi darisubstrat H2O2dimonitor spektrofotometripada 240 nm.Aktivitas spesifik ditentukan sebagai mikro-substrat mol membusuk per menit per miligramprotein (yaitu protein U / mg).Plasma dan status antioksidan total saliva (TAS)Total status antioksidan plasma dan salivadiukur dengan menggunakan colorimetric otomatis menggunakanmetode pengukuran untuk TAS ang dikembangkan oleh Erel(13).Dalam metode ini radikal hidroksil, yang paling ampuh radikal biologis, yang dibuat oleh reaksi Fenton, danbereaksi dengan dasar odianisidine tidak berwarna untuk menghasilkanyang dianisyl radikal, yang berwarna terang kekuningan-coklat.Setelah penambahan sample plasma dan saliva, reaksi oksidatif yang diprakarsai oleh hidroksil yangradikal ada dalam campuran reaksi ditekan olehkomponen antioksi dari plasma dan saliva,menghambat perubahan warna dan sehingga memberikanukuran efektif dari total kapasitas antioksidan dariplasma dan saliva.Hasil analisis disajikansebagai mikromolar Trolox ekuivalen per liter (mmol Troloxeq. / L), dan ketepatan pengujian ini sangat baik, menjadilebih rendah dari 3% 9 (14).Analisis statistikSemua nilai dinyatakan sebagai mean SD.StatistikAnalisis dilakukan dengan menggunakan chi-square dan Levenstes untuk kesetaraan varians.Untuk analisis statistiksample t-test independen dan satu-sampel KolmogrovSmirnov juga digunakan.Signifikansi statistikditetapkan pada P