FITOKIMIA KCV

7/23/2019 FITOKIMIA KCV

1/16

KROMATOGRAFI KOLOM CAIR VAKUM

BAB I

PENDAHULUAN

A. Latar BelakangIndonesia memiliki kekayaan alam yang sangat melimpah, baik

kekayaan flora maupun kekayaan faunanya. Tidak salah lagi bahwa di

Indonesia terdapat banyak tumbuhan yang beraneka ragam lengkap

dengan ciri khasnya masing-masing. Hal ini disebabkan Indonesia

Indonesia terletak di garis khatulistiwa dengan iklim tropis, sehingga

tanahnya subur dan cocok untuk berbagai macam jenis tanaman.Sebagian besar senyawa kimia ditemukan di alam dalam keadaan

tidak murni. Biasanya, suatu senyawa kimia berada dalam keadaan

tercampur dengan senyawa lain. arena itu, diperlukan proses pemisahan

untuk mendapatkan senyawa murni atau untuk menghilangkan pengotor

yang dapat mengganggu dalam proses analisis.!da beberapa metode sederhana yang dapat dilakukan untuk

mengambil komponen berkhasiat ini, diantaranya dengan melakukan

isolasi komponen kimia pada suatu sampel tanaman. Isolasi adalah

pemisahan komponen kimia yang terdapat dalam suatu ekstrak.

"emisahan ini didasarkan pada sifat adsorsi dan partisi dari senyawa

yang dipisahkan terhadap adsorben dan cairan pengelusi yang digunakan."roses isolasi biasanya dilakukan dengan cara kromatografi.

romatografi adalah sebuah teknik analisis yang digunakan untuk

memisahkan sebuah campuran atau persenyawaan kimia. #enis

kromatografi yang digunakan pada praktikum ini adalah kromatografi cair

YAYU RAHMI RAMADANI SAPATIMUH. IKBAL150 2012 0020


2/16


$akum yang merupakan suatu metode kromatografi kolom yang

digunakan untuk memisahkan senyawa dalam jumlah yang lebih banyak.

"rinsipnya yaitu adsorpsi dan partisi yang dipercepat bantuan pompa

$akum.B. Maksud Percobaan

%aksud dari dilakukannya praktikum ini adalah untuk memahami

metode cara memisahkan campuran senyawa dari tanaman daun raja

dengan menggunakan metode kromatografi cair $akum &'().

C. Tujuan PercobaanTujuan dilakukannya praktikum ini adalah untuk memperoleh

senyawa dalam fraksi kasar dari tanaman daun raja dengan

menggunakan metode kromatografi cair $akum &'() berdasarkan

perbedaan eluen.D. Prinsi Percobaan

"rinsip dari kromatografi cair $akum &'() adalah adsorpsi atau

serapan, sedangkan pemisahannya didasarkan pada senyawa-senyawa

yang akan dipisahkan terdistribusi diantara fase diam dan fase gerak

dalam perbandingan berbeda-beda.

BAB IITIN!AUAN PU"TA#A

Teori U$u$

Istilah kromatografi mula-mula ditemukan oleh %ichael Tswett

&*+), seorang ahli botani usia. /ama kromatografi diambil dari bahasa



3/16


0unani &chromato1 penulisan dan grafe1 warna). romatografi berarti

penulisan dengan warna. romatografi adalah cara pemisahan campuran

yang didasarkan atas perbedaan distribusi dari komponen campuran

tersebut diantara dua fase, yaitu fase diam &stationary) dan fasa bergerak

&mobile). 2asa diam dapat berupa 3at padat atau 3at cair, sedangkan fasa

bergerak dapat berupa 3at cair atau gas &0a3id, 45).romatografi adalah proses melewatkan sampel melalui suatu

kolom, perbedaan kemampuan adsorpsi terhadap 3at-3at yang sangat

mirip mempengaruhi resolusi 3at terlarut dan menghasilkan apa yang

disebut kromatogram &hopkar, 4).romatografi Suction Column and Vacuum liquid chromatography

&(6') atau kromatografi cair $akum &'() adalah bentuk kromatografi

kolom yang khususnya berguna untuk fraksinasi kasar yang cepat

terhadap suatu ekstrak. ondisi $akum adalah alternatif untuk

mempercepat aliran fase gerak dari atas ke bawah. %etode ini sering

digunakan untuk fraksinasi awal dari suatu ekstrak non-polar atau ekstrak

semipolar &aymond, 47).Suction coloumn merupakan alat kromatografi yang merupakan

modifikasi kromatografi kolom serapan. "rinsip pemisahan komponen

kimia berdasarkan adsorpsi dan partisi serta dipercepat dengan isapan

pompa $akum. Seperti halnya kromatografi kolom serapan, senyawa yang

akan dipisahkan dilarutkan dengan pelarut yang cocok kemudian

dimasukkan dalam kolom isap, selanjutnya ditambahkan eluen, eluen

yang mengalir turun yang disebabkan oleh isapan pompa $akum. Hasil



4/16


pemisahan ditampung dalam setiap fraksi. (olume penampungan 45

ml8fraksi dan untuk berat sampel 9 * - : gram $olume penampungan 5

ml8fraksi. !dsorben yang digunakan sedikit lebih berbeda yaitu :5 gram

silica gel ;;:: dan * gram silika gel ;;:* &


5/16


romatografi (akum 'air mempunyai keuntungan yang utama

dibandingkan dengan kolom kon$ensional yaitu &

*. onsumsi fase gerak '( hanya ? atau lebih kecil disbanding

dengan kolom kon$ensional karena pada kolom mikrobor kecepatan

alir fase gerak lebih lambat &*-* @l8menit).4. !danya aliran fase gerak lebih lambat membuat kolom mikrobor lebih

ideal jika digabung dengan spectrometer massa.:. Sensiti$itas kolom mikrobor ditingkatkan karena solute lebih pekat

karenanya jenis kolom ini sangat bermanfaat jika jumlah sampel

terbatas misal sampel klinis.

2ase diam yang digunakan dikemas dalam kolom yang digunakan

dalam '(. "roses penyiapan fase diam dalam kolom terbagi menjadi

dua macam, yaitu &Sarker, 47)>

a. 'ara Basah"reparasi fase diam dengan cara basah dilakukan dengan

melarutkan fase diam dalam fase gerak yang akan digunakan.

'ampuran kemudian dimasukkan ke dalam kolom dan dibuat merata.

2ase gerak dibiarkan mengalir hingga terbentuk lapisan fase diam

yang tetap dan rata, kemudian aliran dihentikan."reparasi sampel cara basah dilakukan dengan melarutkan

sampel dalam pelarut yang akan digunakan sebagai fasa gerak dalam

'(. 6arutan dimasukkan dalam kolom kromatografi yang telah terisi

fasa diam. Bagian atas dari sampel ditutupi kembali dengan fasa diam

yang sama.



6/16


b. 'ara kering"reparasi fase diam dengan cara kering dilakukan dengan cara

memasukkan fase diam yang digunakan ke dalam kolom kromatografi.

2ase diam tersebut selanjutnya dibasahi dengan pelarut yang akan

digunakan."reparasi cara kering dilakukan dengan mencampurkan sampel

dengan sebagian kecil fase diam yang akan digunakan hingga

terbentuk serbuk. 'ampuran tersebut diletakkan dalam kolom yang

telah terisi dengan fasa diam dan ditutup kembali dengan fase diam

yang sama.

BAB III

MET%DE #E&!A

A. Alat dan Ba'an(. Alat

!lat-alat yang digunakan dalam praktikum ini, yaitu batang

pengaduk, botol cokelat, cawan porselin, chamber, corong kaca, gelas

kimia, gelas ukur, gunting, kolom kaca, sendok tanduk besi, statif dan

klem, timbangan analitik, dan $ial.). Ba'an

Bahan-bahan yang digunakan dalam praktikum ini adalah air

suling, aluminium foil, n-heksan , eluen, etil asetat, kapas, karet,

kertas label, kertas saring, metanol, sampel daun raja, silika gel kasar

dan halus, dan tissue.



7/16


B. Cara #erja(. Pen*iaan #olo$

a. =ibersihkan kolom dan dibilas dengan metanolb. =ipasang kolom tegak lurus pada statifc. =ikemas fase diam didalam kolom dengan keadaan $akum, agar

diperoleh kerapatan yang maksimumd. =imasukkan adsorben silika gel < 7 sebanyak * gram &atau

sesuai kapasitas kolom yang digunakan) ke dalam kolom dan

dimampatkan.e. =iratakan permukaan adsorben dengan batang pengaduk

+. =ialirkan n-heksan beberapa kali dalam keadaan $akum agar

diperoleh kerapatan kemasan yang maksimal.). Isoalasi "a$el

a. =itimbang fraksi sebanyak * gram &atau sesuai jumlah fase diam

berdasarkan perbandingan *>*)b. =imasukkan silika gel dengan perbandingan :>* &kasar > halus),

kemudian diratakan permukaannyac. =imasukkan kertas saring untuk mencegah pengotor dalam cairan

pengelusid. =imasukkan n-heksan untuk memampatkan silika yang ada

didalam kolome. =imasukkan fraksi yang telah disuspensikan dengan silika gel

kedalam kolomf. =itambahkan cairan pengelusi dari kepolaran terendah n-heksan >

etil asetat &*>) melalui dinding kolom dan pompa $akum

dijalankan hingga eluen turun dan mengelusi komponen kimia.g. =ilanjutkan dengan penyari yang kepolarannya lebih tinggi secara

berturut-turut &+>*, >4, ;>:, 7>A, 5>5, A>7, :>;, 4>, *>+, dan >*)'. =itampung cairan sebagai fraksi.



8/16


BAB I,

HA"IL DAN PEMBAHA"AN

A. Hasil Penga$atan

Tabel Penga$atan

Eluen -/ $L0n1'eksan 2 etil

asetat

3arna

5 > * * > uning

A5 > 5 + > * uning muda

A > * > 4 uning pucat

:5 > *5 ; > : uning pucat

: > 4 7 > A Hijau

45 > 45 5 > 5 Hijau

4 > : A > 7 Hijau

*5 > :5 : > ; Hijau

* > A 4 > Hijau pucat

5 > A5 * > + Hijau pucat

* > 5 > * Hijau hampir bening

B. Pe$ba'asankromatografi cair $akum &'() adalah bentuk kromatografi kolom

yang khususnya berguna untuk fraksinasi kasar yang cepat terhadap

suatu ekstrak. 0ang mana kondisi $akum adalah alternatif untuk

mempercepat aliran fase gerak dari atas ke bawah. %etode ini sering

digunakan untuk fraksinasi awal dari suatu ekstrak non-polar atau ekstrak

semipolar."ada kromatografi $akum cair &('), fase diamnya menggunakan

silika gel yang diletakkan di dalam kolom kromatografi. !da dua cara



9/16


melapisi kolom dengan silika gel yaitu proses basah dan proses kering.

"roses basah yaitu silika gel ditambahkan dengan n-heksana hingga

berbentuk seperti bubur, lalu dituangkan kedalam kolom, dan dihisap

pelarutnya dengan mesin $akum, dan dihentikan sampai panjang kolom

sesuai dengan yang diinginkan, maka diperoleh silika gel yang padat pada

kolom. 0ang kedua proses kering yaitu memasukkan silika gel yang dalam

bentuk padat langsung kekolom lalu dipadatkan.

"ada percobaan ini, pembuatan kolom dengan silika gel dilakukan

dengan cara proses kering. =an sebagai fase geraknya yaitu eluen yang

telah dibuat dengan berbagai perbandingan dengan tingkat kepolaran

tertentu."ada percobaan kali ini akan dilakukan penyiapan sampel yaitu

pertama-tama kolom dibersihkan dan dibilas dengan menggunakan

metanol. =imasukkan silika gel kasar dan halus ke dalam kolom dan

dimampatkan. Setelah itu, dipasang tegak lurus pada statif. emudian

dimasukkan n-heksan ke dalam kolom sampai tiga kali agar diperoleh

kerapatan yang maksimal. =an dimasukkan kertas saring dan

ditempatkan diatas silika.=an pada isolasi sampel yaitu ekstrak daun raja ditimbang

sebanyak * gram. emudian ditambah sedikit campuran silika kasar dan

halus dan dicampur hingga homogen. Setelah itu dimasukkan ke dalam

kolom, dan diletakkan di atas kertas saring. =imasukkan eluen *> ke

dalam kolom. emudian dinyalakan pompa $akum. =itampung fraksi di

dalam botol coklat. =imasukkan lagi eluen +>* sampai eluen >*, terakhir



10/16


dimasukkan metanol dan ditampung fraksi didalam botol coklat dan

diperoleh hasil, pada eluen n-heksan > etil asetat dengan perbandingan 7 >

A terkandung senyawa yang berpotensi sebagai antioksidan &fla$onoid).!dapun faktor kesalahan yang mungkin terjadi yaitu kurang

bersihnya alat yang digunakan, kurangnya ketelitian pada saat

pengambilan eluen, dan kurang teliti pada saat pengerjaan.



11/16


BAB ,

PENUTUP

A. #esi$ulanBerdasarkan hasil percobaan yang diperoleh, dapat ditarik

kesimpulan bahwa dari hasil penyemprotan =""H diperoleh hasil bahwa

pada eluen n-heksan > etil asetat dengan perbandingan 7 > A terkandung

senyawa yang berpotensi sebagai antioksidan &fla$onoid).B. "aran=iharapkan bagi semua pihak untuk selalu mengikuti prosedur

percobaan dengan baik, sehingga tidak terdapat kesalahan-kesalahan

yang berakibat pada hasil yang diperoleh.

DA4TA& PU"TA#A



12/16


Bandung.

Harborne, #.B. *+;. Metode Fitokimia. ITB> Bandung.

hopkar, S.%. 4. Konsep Dasar Kimia nalitik. #akarta> rlangga

aymond 0ogyakarta.

0a3id, stien. 45. Kimia Fisika Paramedis. 0ogyakarta> !ndi.

LAMPI&AN



13/16


"ke$a #erja

*. "enyiapan olom

=ibilas kolom dengan methanol

=ipasang kolom tegak lurus pada statif

=ikemas fase diam dalam kolom dengan keadaan $akum, agar diperoleh

kerapatan yang maksimum

=imasukkan silika gel sebanyak : gram ke dalam kolom dan

dimampatkan

=iratakan perbukaan adsorben dengan batang pengaduk

=ialirkan n-heksan beberapa kali dalam keadaan $akum

4. Isolasi Sampel



14/16


=itimbang fraksi sebanyak * gram

=imasukkan silika gel kasar &: gram) dan silika halus &* gram)

kemudian diratakan permukaannya

=imasukkan kertas saring

=imasukkan eluen n-heksan

=imasukkan fraksi yang telah disuspensikan dengan silika gel kedalam

kolom

=itambahkan cairan pengelusi dari kepolaran terendah n-heksan > etil

asetat &*>) melalui dinding kolom

=ijalankan pompa $akum hingga eluen turun dan mengelusi komponenkimia

=ilanjutkan dengan penyari yang kepolarannya lebih tinggi secara

berturut-turut &+>*, >4, ;>:, 7>A, 5>5, A>7, :>;, 4>, *>+, dan >*)

=itampung cairan sebagai fraksi

5a$bar Hasil Praktiku$



15/16




16/16



FITOKIMIA KCV

Documents

Transcript of FITOKIMIA KCV