Post on 27-Jan-2023
ISOLASI SENYAWA PENANGKAP RADIKAL BEBAS DARI FRAKSI
ETANOL DAUN MANGGA (Mangifera indica L.) VAR. GEDONG
DENGAN MENGGUNAKAN METODE KROMATOGRAFI KOLOM
SKRIPSI
Diajukan untuk memenuhi sebagian dari syarat untuk
memperpoleh gelar Sarjana Farmasi
DEWI ASTUTI
1408010105
PROGRAM STUDI FARMASI
FAKULTAS FARMASI
UNIVERSITAS MUHAMMADIYAH PURWOKERTO
2018
v
MOTTO
“Sometimes the best thing you can do is not think, not wonder,
not imagine, not obsess. Just breathe, and have faith that
everything will work out for the best”_ unknown
“Everything is temporary, emotions, thoughts, people and
scenery. Do not become attached, just flow with it”_unknown
Isolasi Senyawa Penangkap..., Dewi Astuti, Fakultas Farmasi UMP, 2018
vi
PERSEMBAHAN
Allah SWT
Bapak Haryono Mahirin dan Ibu Yonah
Kakakku Juniawati, S.SiT.,M.Kes, dan adik-adikku Tri Lestari, Amd.Kg
dan Rakhmat Widodo
Dan untuk para pejuang S. Farm
Isolasi Senyawa Penangkap..., Dewi Astuti, Fakultas Farmasi UMP, 2018
vii
KATA PENGANTAR
Alhamdulillahirobbil’alamin, segala puji dan syukur penulis panjatkan
kehadirat Allah SWT, karena atas berkat dan rahmat-Nya, sehaingga penulis dapat
menyelesaikan skripsi dengan judul “Isolasi Senyawa Penangkap Radikal Bebas
dari Fraksi Etanol Daun Mangga (Mangifera indica L.) Var. Gedong
Menggunakan Metode Kromatografi Kolom”. Penulisan skripsi ini dilakukan
dalam rangka memenuhi salah satu syarat untuk mencapai gelar Sarjana Farmasi
pada Program Studi S1 Farmasi Fakultas Farmasi Universitas Muhammadiyah
Purwokerto.
Penulis menyadari bahwa tanpa bantuan dan bimbingan dari berbagai pihak,
dari masa perkuliahan sampai pada penyusunan skripsi ini, sangatlah sulit untuk
menyelesaikan skripsi ini. Oleh karena itu, pada kesempatan ini penulis
mengucapkan terima kasih kepada yang terhormat :
(1) Dr. H. Syamsuhadi Irsyad, S.H., M.H selaku Rektor Universitas
Muhammadiyah Purwokerto;
(2) Dr. Agus Siswanto, M.Si., Apt selaku Dekan Farmasi yang telah
memberi berbagai informasi dan bimbingan tentang tata laksana
penyusunan skripsi;
(3) Wahyu Utaminingrum, M.Sc., Apt selaku Ketua Program Studi S1
Farmasi yang telah memberi berbagai informasi dan bimbingan tentang
tata laksana penyusunan skripsi;
(4) Dr. Asmiyenti Djaliasrin Djalil, M.Si dan Ika Nurzijah, M.Sc., Apt
selaku dosen pembimbing yang telah menyediakan waktu, tenaga, dan
pikiran untuk mengarahkan dalam penyusunan skripsi ini;
(5) Rojhmadi Budi Setiyanto, A.Md selaku laboran biologi farmasi dari
Fakultas Farmasi;
(6) Seluruh dosen dan karyawan Fakultas Farmasi Universitas
Muhammadiyah Purwokerto yang telah memberi bekal bagi kehidupan;
Isolasi Senyawa Penangkap..., Dewi Astuti, Fakultas Farmasi UMP, 2018
viii
(7) Haryono Mahirin dan Yonah selaku orang tua penulis berkat
bimbingannya dengan penuh kesabaran serta kasih sayang yang sangat
besar, juga dukungan yang disertai doa yang mengiringi setiap langkah;
(8) Juniawati, S.SiT.,M.Kes kakak tercinta, Tri Lestari, Amd. Kg dan
Rakhmat Widodo adik-adik tersayangku dan seluruh keluarga penulis
terima kasih atas dukungan dan doanya;
(9) Nisa Nurulmala yang telah berjuang bersama, terima kasih atas motivasi
dan kerja sama dalam menyelesaikan skripsi ini;
(10) Sahabat sepanjang masa Setia Utami, Amd dan Hani Marwanti, Amd.
Kep, terima kasih atas dukungan, semangat dan motivasi;
(11) Sahabat seperjuangan mencari tambahan nama belakang Nila Zahrotul
Fitriyani, Rifqi Zuhriyatun Nisa, S.Kep, Nisa Aulia Muftiani, Amd.Keb.
(12) Teman-teman kuliah Elvina Farica Azalia, Fadhilah Zahra Nadia, Firda
Aulia Ikhsani, Desiana Nur Handayani, Ulfatunnisa Fauziyah, Nimas
Irjayanti, Ika Ryandita, Rima Anggita, Lina Yusrina Noor, Nanda Elfa
Amelia, dan lainnya yang tidak bisa penulis sebutkan satu-persatu, terima
kasih atas dukungan dan motivasi;
(13) Teman-teman Farmasi angkatan 2014 terima kasih atas dukungan,
motivasi, selalu tetap semangat;
(14) Semua pihak yang telah membantu penulis dalam menyelesaikan skripsi
ini.
Besar harapan penulis, skripsi ini dapat bermanfaat. Penulis menyadari
sepenuhnya bahwa tanpa bantuan dari berbagai pihak penyusunan skripsi ini tidak
akan berjalan dengan baik. Akhir kata, semoga Allah SWT memberikan balasan
atas segala kebaikan semua pihak yang telah membantu. Semoga skripsi ini
membawa manfaat bagi pengembangan ilmu. Aamiin.
Purwokerto, 04 Agustus 2018
Penulis
DEWI ASTUTI
1408010105
Isolasi Senyawa Penangkap..., Dewi Astuti, Fakultas Farmasi UMP, 2018
ix
RIWAYAT HIDUP
Nama : Dewi Astuti
NIM / Angkatan : 1408010105 / 2014
Tempat / Tanggal Lahir : Purbalingga / 03 Juli 1995
Jenis Kelamin : Perempuan
Agama : Islam
Alamat : Makam RT.02 RW.09 Kecamatan Rembang,
Kabupaten Purbalingga, Provinsi Jawa Tengah
Riwayat Pendidikan :
1. Perguruan Tinggi : Fakultas Farmasi Universitas Muhammadiyah
Purwokerto (Angkatan 2014)
2. SMA / Tahun Lulus : SMA Negeri 1 Bobotsari / 2014
3. SMP / Tahun Lulus : SMP Negeri 1 Karangmoncol / 2011
4. SD / Tahun Lulus : SD Negeri 4 Makam / 2008
Isolasi Senyawa Penangkap..., Dewi Astuti, Fakultas Farmasi UMP, 2018
xi
ISOLASI SENYAWA PENANGKAP RADIKAL BEBAS DARI FRAKSI ETANOL
DAUN MANGGA (Mangifera indica L.) VAR. GEDONG DENGAN MENGGUNAKAN
METODE KROMATOGRAFI KOLOM
Dewi Astuti1, Asmiyenti Djaliasrin Djalil1, Ika Nurzijah1
ABSTRAK
Radikal bebas adalah atom atau molekul yang memiliki elektron tidak
berpasangan (unpaired electron), sangat reaktiv dan dapat menyebabkan stres
oksidatif. Stres oksidatif di dalam tubuh menyebabkan beberapa penyakit akut
seperti kanker, aterosklerosis, penyakit koroner, serta penyakit autoimun. Stres
oksidatif dapat dihambat oleh suatu senyawa yang disebut sebagai antioksidan.
Daun Mangifera indica L. (mangga) varian gedong memiliki potensi sebagai
sumber antioksidan alami yang kuat. Tujuan dari penelitian ini adalah untuk
mengisolasi senyawa antioksidan yang terdapat dalam fraksi etanol daun mangga
gedong menggunakan kromatografi kolom dan menguji aktivitas antioksidan
isolat yang didapat menggunakan metode DPPH ((2,2-difenil-1-pikrilhidrazil).
Ekstraksi dan fraksinasi menggunakan pelarut n-heksana : etil asetat : etanol.
Fraksi etanol kemudian diisolasi menggunakan kromatografi kolom dengan fase
diam silika gel 60 dan fase gerak gradien kloroform : aseton : asam format.
Aktivitas antioksidan kualitatif isolat dianalisis dengan metode KLT dan pereaksi
semprot DPPH. Isolat dikelompokan berdasarkan nilai Rf yang sama. Selanjutnya
dilakukan uji aktivitas antioksidan pada fraksi etanol, isolat A, isolat B, dan isolat
C dengan metode DPPH dan untuk menentukan nilai IC50. Nilai IC50 fraksi etanol
sebesar 18,972 ppm, sedangkan isolat A, isolat B, dan isolat C berturut-turut
sebesar 9,280 ppm, 27,753 ppm, dan 37,837 ppm dengan kontrol positif vitamin C
8,010 ppm. Analisis dengan kruskal-wallis (p≤0,05) yang menunjukan adanya
perbedaan yang signifikan pada masing-masing grup sampel. Uji Mann Whitney
menunjukan bahwa isolat A memiliki kemampuan antioksidan yang sebanding
dengan vitamin C.
Kata kunci: antioksidan, fraksi etanol daun mangga gedong, kromatografi
kolom, DPPH.
Isolasi Senyawa Penangkap..., Dewi Astuti, Fakultas Farmasi UMP, 2018
xii
ISOLATION OF FREE RADICAL SCAVENGER(S) FROM ETHANOL
FRACTION OF MANGO LEAVES (Mangifera indica L.) GEDONG
VARIETIES USING COLUMN CHROMATOGRAPHY METHOD
Dewi Astuti1, Asmiyenti Djaliasrin Djalil1, Ika Nurzijah1
ABSTRACT
Free radicalis atom or molecule that has unpaired electrons, very reactive and can
causes oxidative stress. Oxidative stress in the body leads to several diseases such
as cancer, atherosclerosis, coronary disease, and autoimmune diseases. Oxidative
stress can be inhibited by substances called antioxidants. Mango (Mangifera
indica L. ) leaves from Gedong varieties has a potential as a source of natural
antioxidants. This study aims to isolate the antioxidant compounds present in the
ethanol fraction of mango leaf (Gedong var.) using column chromatography and
test its antioxidant activity using DPPH (2,2-diphenyl-1-picrylhydrazyl) assay.
Extraction and fractination was carried out using n-hexane : ethyl acetate :
ethanol. Ethanol fraction was then isolated by column chromatography with silica
gel 60 as stationary phase and chloroform : acetone : formic acid as mobile phase.
Qualitative analysis to test the presence of antioxidant compounds was carried out
using thin layer chromatography, followed by DPPH spraying. The positive
isolates from DPPH spraying were classified into isolate A, B, and C based on
their Rf value. Further study was conducted on ethanol fraction, isolate A, isolate
B, and isolate C with DPPH assay to determine the IC50 value. The result showed
that IC50 value of ethanol fraction was 18.972 ppm, while isolate A, isolate B,
and isolate C were 9.280 ppm, 27.753 ppm and 37.837 ppm, respectively, in
comparison to vitamin C (8.010 ppm) as a positive control. Kruskal-wallis
(p≤0.05) indicated a significant difference in each sample group. Mann Whitney
test showed that isolate A has antioxidant ability that is comparable to vitamin C.
Keywords: antioxidant, ethanol fraction of mangoleaves (gedong var.), column
chromatography, DPPH assay.
Isolasi Senyawa Penangkap..., Dewi Astuti, Fakultas Farmasi UMP, 2018
xiii
DAFTAR ISI
Halaman
HALAMAN JUDUL i
HALAMAN PERSETUJUAN ii
HALAMAN PENGESAHAN iii
HALAMAN PERNYATAAN ORISINALITAS iv
MOTTO v
PERSEMBAHAN vi
KATA PENGANTAR vii
RIWAYAT HIDUP ix
HALAMAN PERSETUJUAN PUBLIKASI x
ABSTRAK xi
ABSTRACT xii
DAFTAR ISI xiii
DAFTAR TABEL xiv
DAFTAR GAMBAR xv
DAFTAR LAMPIRAN xvii
BAB 1. PENDAHULUAN
A. Latar Belakang 1
B. Perumusan Masalah 3
C. Tujuan Penelitian 3
D. Manfaat Penelitian 3
BAB 2. TINJAUAN PUSTAKA
A. Hasil Penelitian Terdahulu 4
B. Landasan Teori 5
1. Tumbuhan Mangga 5
2. Kandungan Kimia 7
3. Radikal Bebas 9
4. Antioksidan 11
5. Ekstraksi dan Isolasi 12
6. Kromatografi Kolom 15
7. Kromatografi Lapis Tipis 16
8. Metode Uji Antioksidan dengan Metode DPPH 18
Isolasi Senyawa Penangkap..., Dewi Astuti, Fakultas Farmasi UMP, 2018
xiv
9. Spektrofotometri UV-Vis 18
C. Kerangka Konsep 20
D. Hipotesis 21
BAB 3. METODE PENELITIAN
A. Jenis dan Rancangan Penelitian 22
B. Variabel Penelitian 22
C. Waktu dan Tempat Penelitian 22
D. Bahan dan Alat 22
E. Cara Penelitian 23
F. Analisis Data 25
BAB 4. HASIL DAN PEMBAHASAN
A. Determinasi Tanaman 26
B. Pengumpulan dan Pembuatan Simplisia 26
C. Pembuatan Fraksi Etanol Daun Mangga Gedong 27
D. Pemisahan dengan Kolom Kromatografi 28
E. Hasil Penentuan Panjang Gelombang Maksimum (λmaks) DPPH 30
F. Pembacaan Operating Time 30
G. Aktivitas Antioksidan Fraksi Etanol, Isolat A, Isolat B,
Isolat C dan Vitamin C 31
BAB 5. KESIMPULAN DAN SARAN
A. Kesimpulan 37
B. Saran 37
DAFTAR PUSTAKA 38
LAMPIRAN 41
Isolasi Senyawa Penangkap..., Dewi Astuti, Fakultas Farmasi UMP, 2018
xv
DAFTAR TABEL
Halaman
Tabel 2.1. Turunnya kepolaran pelarut ............................................................... 16
Tabel 4.1. Hasil pembacaan operating time .......................................................31
Tabel 4.2. Nilai IC50 fraksi etanol, isolat A, isolat B, isolat C dan vitamin C ......33
Tabel 4.3. % penghambatan fraksi etanol, isolat A, isolat B, isolat C dan vitamin
C......................................................................................................34
Isolasi Senyawa Penangkap..., Dewi Astuti, Fakultas Farmasi UMP, 2018
xvi
DAFTAR GAMBAR
Halaman
Gambar 2.1 Mangga Gedong ............................................................................. 5
Gambar 2.2 Struktur mangiferin ......................................................................... 8
Gambar 2.3 Reduksi DPPH dari senyawa antioksidan ........................................18
Gambar 4.1 Hasil DPPH semprot .......................................................................29
Gambar 4.2 Hasil panjang gelombang maksimum larutan DPPH .......................30
Gambar 4.3 Struktur vitamin C ..........................................................................32
Gambar 4.4 Grafik nilai IC50 vitamin C fraksi etanol, isolat A, isolat B, isolat C
dan vitamin C. ...............................................................................33
Isolasi Senyawa Penangkap..., Dewi Astuti, Fakultas Farmasi UMP, 2018
xvii
DAFTAR LAMPIRAN
Lampiran 1 Hasil determinasi daun mangga gedong (Mangifera indica L.) ........41
Lampiran 2 Perhitungan bobot kering terhadap bobot basah daun mangga
(Mangifera indica L.) var. gedong .....................................................................43
Lampiran 3 Perhitungan rendemen fraksi etanol dan isolat .................................44
Lampiran 4 Gambar profil kromatografi lapis tipis .............................................45
Lampiran 5 Perhitungan Rf dan hRf ...................................................................49
Lampiran 6 Perhitungan pembuatan larutan stok dan seri konsentrasi.................52
Lampiran 7 Perhitungan persen penghambatan dan IC50.....................................56
Lampiran 8 Hasil normalitas dan homogenitas fraksi etanol, isolat A, B, dan C
terhadap aktivitas penangkap radikal bebas DPPH .............................................62
Lampiran 9 Hasil kruskal-wallis test kelompok uji terhadap vitamin C ..............63
Lampiran 10 Hasil uji mann withney IC50...........................................................64
Isolasi Senyawa Penangkap..., Dewi Astuti, Fakultas Farmasi UMP, 2018