ISOLASI SENYAWA PENANGKAP RADIKAL BEBAS DARI ...

ISOLASI SENYAWA PENANGKAP RADIKAL BEBAS DARI FRAKSI

ETANOL DAUN MANGGA (Mangifera indica L.) VAR. GEDONG

DENGAN MENGGUNAKAN METODE KROMATOGRAFI KOLOM

SKRIPSI

Diajukan untuk memenuhi sebagian dari syarat untuk

memperpoleh gelar Sarjana Farmasi

DEWI ASTUTI

1408010105

PROGRAM STUDI FARMASI

FAKULTAS FARMASI

UNIVERSITAS MUHAMMADIYAH PURWOKERTO

2018

ii

Isolasi Senyawa Penangkap..., Dewi Astuti, Fakultas Farmasi UMP, 2018

iii


iv


v

MOTTO

“Sometimes the best thing you can do is not think, not wonder,

not imagine, not obsess. Just breathe, and have faith that

everything will work out for the best”_ unknown

“Everything is temporary, emotions, thoughts, people and

scenery. Do not become attached, just flow with it”_unknown


vi

PERSEMBAHAN

Allah SWT

Bapak Haryono Mahirin dan Ibu Yonah

Kakakku Juniawati, S.SiT.,M.Kes, dan adik-adikku Tri Lestari, Amd.Kg

dan Rakhmat Widodo

Dan untuk para pejuang S. Farm


vii

KATA PENGANTAR

Alhamdulillahirobbil’alamin, segala puji dan syukur penulis panjatkan

kehadirat Allah SWT, karena atas berkat dan rahmat-Nya, sehaingga penulis dapat

menyelesaikan skripsi dengan judul “Isolasi Senyawa Penangkap Radikal Bebas

dari Fraksi Etanol Daun Mangga (Mangifera indica L.) Var. Gedong

Menggunakan Metode Kromatografi Kolom”. Penulisan skripsi ini dilakukan

dalam rangka memenuhi salah satu syarat untuk mencapai gelar Sarjana Farmasi

pada Program Studi S1 Farmasi Fakultas Farmasi Universitas Muhammadiyah

Purwokerto.

Penulis menyadari bahwa tanpa bantuan dan bimbingan dari berbagai pihak,

dari masa perkuliahan sampai pada penyusunan skripsi ini, sangatlah sulit untuk

menyelesaikan skripsi ini. Oleh karena itu, pada kesempatan ini penulis

mengucapkan terima kasih kepada yang terhormat :

(1) Dr. H. Syamsuhadi Irsyad, S.H., M.H selaku Rektor Universitas

Muhammadiyah Purwokerto;

(2) Dr. Agus Siswanto, M.Si., Apt selaku Dekan Farmasi yang telah

memberi berbagai informasi dan bimbingan tentang tata laksana

penyusunan skripsi;

(3) Wahyu Utaminingrum, M.Sc., Apt selaku Ketua Program Studi S1

Farmasi yang telah memberi berbagai informasi dan bimbingan tentang

tata laksana penyusunan skripsi;

(4) Dr. Asmiyenti Djaliasrin Djalil, M.Si dan Ika Nurzijah, M.Sc., Apt

selaku dosen pembimbing yang telah menyediakan waktu, tenaga, dan

pikiran untuk mengarahkan dalam penyusunan skripsi ini;

(5) Rojhmadi Budi Setiyanto, A.Md selaku laboran biologi farmasi dari

Fakultas Farmasi;

(6) Seluruh dosen dan karyawan Fakultas Farmasi Universitas

Muhammadiyah Purwokerto yang telah memberi bekal bagi kehidupan;


viii

(7) Haryono Mahirin dan Yonah selaku orang tua penulis berkat

bimbingannya dengan penuh kesabaran serta kasih sayang yang sangat

besar, juga dukungan yang disertai doa yang mengiringi setiap langkah;

(8) Juniawati, S.SiT.,M.Kes kakak tercinta, Tri Lestari, Amd. Kg dan

Rakhmat Widodo adik-adik tersayangku dan seluruh keluarga penulis

terima kasih atas dukungan dan doanya;

(9) Nisa Nurulmala yang telah berjuang bersama, terima kasih atas motivasi

dan kerja sama dalam menyelesaikan skripsi ini;

(10) Sahabat sepanjang masa Setia Utami, Amd dan Hani Marwanti, Amd.

Kep, terima kasih atas dukungan, semangat dan motivasi;

(11) Sahabat seperjuangan mencari tambahan nama belakang Nila Zahrotul

Fitriyani, Rifqi Zuhriyatun Nisa, S.Kep, Nisa Aulia Muftiani, Amd.Keb.

(12) Teman-teman kuliah Elvina Farica Azalia, Fadhilah Zahra Nadia, Firda

Aulia Ikhsani, Desiana Nur Handayani, Ulfatunnisa Fauziyah, Nimas

Irjayanti, Ika Ryandita, Rima Anggita, Lina Yusrina Noor, Nanda Elfa

Amelia, dan lainnya yang tidak bisa penulis sebutkan satu-persatu, terima

kasih atas dukungan dan motivasi;

(13) Teman-teman Farmasi angkatan 2014 terima kasih atas dukungan,

motivasi, selalu tetap semangat;

(14) Semua pihak yang telah membantu penulis dalam menyelesaikan skripsi

ini.

Besar harapan penulis, skripsi ini dapat bermanfaat. Penulis menyadari

sepenuhnya bahwa tanpa bantuan dari berbagai pihak penyusunan skripsi ini tidak

akan berjalan dengan baik. Akhir kata, semoga Allah SWT memberikan balasan

atas segala kebaikan semua pihak yang telah membantu. Semoga skripsi ini

membawa manfaat bagi pengembangan ilmu. Aamiin.

Purwokerto, 04 Agustus 2018

Penulis

DEWI ASTUTI

1408010105


ix

RIWAYAT HIDUP

Nama : Dewi Astuti

NIM / Angkatan : 1408010105 / 2014

Tempat / Tanggal Lahir : Purbalingga / 03 Juli 1995

Jenis Kelamin : Perempuan

Agama : Islam

Alamat : Makam RT.02 RW.09 Kecamatan Rembang,

Kabupaten Purbalingga, Provinsi Jawa Tengah

Riwayat Pendidikan :

1. Perguruan Tinggi : Fakultas Farmasi Universitas Muhammadiyah

Purwokerto (Angkatan 2014)

2. SMA / Tahun Lulus : SMA Negeri 1 Bobotsari / 2014

3. SMP / Tahun Lulus : SMP Negeri 1 Karangmoncol / 2011

4. SD / Tahun Lulus : SD Negeri 4 Makam / 2008


x


xi

ISOLASI SENYAWA PENANGKAP RADIKAL BEBAS DARI FRAKSI ETANOL

DAUN MANGGA (Mangifera indica L.) VAR. GEDONG DENGAN MENGGUNAKAN

METODE KROMATOGRAFI KOLOM

Dewi Astuti1, Asmiyenti Djaliasrin Djalil1, Ika Nurzijah1

ABSTRAK

Radikal bebas adalah atom atau molekul yang memiliki elektron tidak

berpasangan (unpaired electron), sangat reaktiv dan dapat menyebabkan stres

oksidatif. Stres oksidatif di dalam tubuh menyebabkan beberapa penyakit akut

seperti kanker, aterosklerosis, penyakit koroner, serta penyakit autoimun. Stres

oksidatif dapat dihambat oleh suatu senyawa yang disebut sebagai antioksidan.

Daun Mangifera indica L. (mangga) varian gedong memiliki potensi sebagai

sumber antioksidan alami yang kuat. Tujuan dari penelitian ini adalah untuk

mengisolasi senyawa antioksidan yang terdapat dalam fraksi etanol daun mangga

gedong menggunakan kromatografi kolom dan menguji aktivitas antioksidan

isolat yang didapat menggunakan metode DPPH ((2,2-difenil-1-pikrilhidrazil).

Ekstraksi dan fraksinasi menggunakan pelarut n-heksana : etil asetat : etanol.

Fraksi etanol kemudian diisolasi menggunakan kromatografi kolom dengan fase

diam silika gel 60 dan fase gerak gradien kloroform : aseton : asam format.

Aktivitas antioksidan kualitatif isolat dianalisis dengan metode KLT dan pereaksi

semprot DPPH. Isolat dikelompokan berdasarkan nilai Rf yang sama. Selanjutnya

dilakukan uji aktivitas antioksidan pada fraksi etanol, isolat A, isolat B, dan isolat

C dengan metode DPPH dan untuk menentukan nilai IC50. Nilai IC50 fraksi etanol

sebesar 18,972 ppm, sedangkan isolat A, isolat B, dan isolat C berturut-turut

sebesar 9,280 ppm, 27,753 ppm, dan 37,837 ppm dengan kontrol positif vitamin C

8,010 ppm. Analisis dengan kruskal-wallis (p≤0,05) yang menunjukan adanya

perbedaan yang signifikan pada masing-masing grup sampel. Uji Mann Whitney

menunjukan bahwa isolat A memiliki kemampuan antioksidan yang sebanding

dengan vitamin C.

Kata kunci: antioksidan, fraksi etanol daun mangga gedong, kromatografi

kolom, DPPH.


xii

ISOLATION OF FREE RADICAL SCAVENGER(S) FROM ETHANOL

FRACTION OF MANGO LEAVES (Mangifera indica L.) GEDONG

VARIETIES USING COLUMN CHROMATOGRAPHY METHOD

Dewi Astuti1, Asmiyenti Djaliasrin Djalil1, Ika Nurzijah1

ABSTRACT

Free radicalis atom or molecule that has unpaired electrons, very reactive and can

causes oxidative stress. Oxidative stress in the body leads to several diseases such

as cancer, atherosclerosis, coronary disease, and autoimmune diseases. Oxidative

stress can be inhibited by substances called antioxidants. Mango (Mangifera

indica L. ) leaves from Gedong varieties has a potential as a source of natural

antioxidants. This study aims to isolate the antioxidant compounds present in the

ethanol fraction of mango leaf (Gedong var.) using column chromatography and

test its antioxidant activity using DPPH (2,2-diphenyl-1-picrylhydrazyl) assay.

Extraction and fractination was carried out using n-hexane : ethyl acetate :

ethanol. Ethanol fraction was then isolated by column chromatography with silica

gel 60 as stationary phase and chloroform : acetone : formic acid as mobile phase.

Qualitative analysis to test the presence of antioxidant compounds was carried out

using thin layer chromatography, followed by DPPH spraying. The positive

isolates from DPPH spraying were classified into isolate A, B, and C based on

their Rf value. Further study was conducted on ethanol fraction, isolate A, isolate

B, and isolate C with DPPH assay to determine the IC50 value. The result showed

that IC50 value of ethanol fraction was 18.972 ppm, while isolate A, isolate B,

and isolate C were 9.280 ppm, 27.753 ppm and 37.837 ppm, respectively, in

comparison to vitamin C (8.010 ppm) as a positive control. Kruskal-wallis

(p≤0.05) indicated a significant difference in each sample group. Mann Whitney

test showed that isolate A has antioxidant ability that is comparable to vitamin C.

Keywords: antioxidant, ethanol fraction of mangoleaves (gedong var.), column

chromatography, DPPH assay.


xiii

DAFTAR ISI

Halaman

HALAMAN JUDUL i

HALAMAN PERSETUJUAN ii

HALAMAN PENGESAHAN iii

HALAMAN PERNYATAAN ORISINALITAS iv

MOTTO v

PERSEMBAHAN vi

KATA PENGANTAR vii

RIWAYAT HIDUP ix

HALAMAN PERSETUJUAN PUBLIKASI x

ABSTRAK xi

ABSTRACT xii

DAFTAR ISI xiii

DAFTAR TABEL xiv

DAFTAR GAMBAR xv

DAFTAR LAMPIRAN xvii

BAB 1. PENDAHULUAN

A. Latar Belakang 1

B. Perumusan Masalah 3

C. Tujuan Penelitian 3

D. Manfaat Penelitian 3

BAB 2. TINJAUAN PUSTAKA

A. Hasil Penelitian Terdahulu 4

B. Landasan Teori 5

1. Tumbuhan Mangga 5

2. Kandungan Kimia 7

3. Radikal Bebas 9

4. Antioksidan 11

5. Ekstraksi dan Isolasi 12

6. Kromatografi Kolom 15

7. Kromatografi Lapis Tipis 16

8. Metode Uji Antioksidan dengan Metode DPPH 18


xiv

9. Spektrofotometri UV-Vis 18

C. Kerangka Konsep 20

D. Hipotesis 21

BAB 3. METODE PENELITIAN

A. Jenis dan Rancangan Penelitian 22

B. Variabel Penelitian 22

C. Waktu dan Tempat Penelitian 22

D. Bahan dan Alat 22

E. Cara Penelitian 23

F. Analisis Data 25

BAB 4. HASIL DAN PEMBAHASAN

A. Determinasi Tanaman 26

B. Pengumpulan dan Pembuatan Simplisia 26

C. Pembuatan Fraksi Etanol Daun Mangga Gedong 27

D. Pemisahan dengan Kolom Kromatografi 28

E. Hasil Penentuan Panjang Gelombang Maksimum (λmaks) DPPH 30

F. Pembacaan Operating Time 30

G. Aktivitas Antioksidan Fraksi Etanol, Isolat A, Isolat B,

Isolat C dan Vitamin C 31

BAB 5. KESIMPULAN DAN SARAN

A. Kesimpulan 37

B. Saran 37

DAFTAR PUSTAKA 38

LAMPIRAN 41


xv

DAFTAR TABEL

Halaman

Tabel 2.1. Turunnya kepolaran pelarut ............................................................... 16

Tabel 4.1. Hasil pembacaan operating time .......................................................31

Tabel 4.2. Nilai IC50 fraksi etanol, isolat A, isolat B, isolat C dan vitamin C ......33

Tabel 4.3. % penghambatan fraksi etanol, isolat A, isolat B, isolat C dan vitamin

C......................................................................................................34


xvi

DAFTAR GAMBAR

Halaman

Gambar 2.1 Mangga Gedong ............................................................................. 5

Gambar 2.2 Struktur mangiferin ......................................................................... 8

Gambar 2.3 Reduksi DPPH dari senyawa antioksidan ........................................18

Gambar 4.1 Hasil DPPH semprot .......................................................................29

Gambar 4.2 Hasil panjang gelombang maksimum larutan DPPH .......................30

Gambar 4.3 Struktur vitamin C ..........................................................................32

Gambar 4.4 Grafik nilai IC50 vitamin C fraksi etanol, isolat A, isolat B, isolat C

dan vitamin C. ...............................................................................33


xvii

DAFTAR LAMPIRAN

Lampiran 1 Hasil determinasi daun mangga gedong (Mangifera indica L.) ........41

Lampiran 2 Perhitungan bobot kering terhadap bobot basah daun mangga

(Mangifera indica L.) var. gedong .....................................................................43

Lampiran 3 Perhitungan rendemen fraksi etanol dan isolat .................................44

Lampiran 4 Gambar profil kromatografi lapis tipis .............................................45

Lampiran 5 Perhitungan Rf dan hRf ...................................................................49

Lampiran 6 Perhitungan pembuatan larutan stok dan seri konsentrasi.................52

Lampiran 7 Perhitungan persen penghambatan dan IC50.....................................56

Lampiran 8 Hasil normalitas dan homogenitas fraksi etanol, isolat A, B, dan C

terhadap aktivitas penangkap radikal bebas DPPH .............................................62

Lampiran 9 Hasil kruskal-wallis test kelompok uji terhadap vitamin C ..............63

Lampiran 10 Hasil uji mann withney IC50...........................................................64


ISOLASI SENYAWA PENANGKAP RADIKAL BEBAS DARI ...

Documents

Transcript of ISOLASI SENYAWA PENANGKAP RADIKAL BEBAS DARI ...