Resolution of skeletal muscle inflammation in mdx dystrophic mouse is accompanied by increased...

12
Resolution of skeletal muscle inflammation in mdx dystrophic mouse is accompanied by increased immunoglobulin and interferon-g production JUSSARA LAGROTA-CANDIDO,* RITA VASCONCELLOS,* MARTA CAVALCANTI, ³§ MARCELO BOZZA, ³ WILSON SAVINO ** AND THEREZA QUIRICO-SANTOS ² *Departments of Immunobiology, ² Cellular and Molecular Biology, Fluminense Federal University, ³ Departments of Immunology, § Preventive Medicine, DIP/HUCFF, Rio de Janeiro Federal University, Department of Immunology, Oswaldo Cruz Institute, FIOCRUZ, Rio de Janeiro, Brazil, and **CNRS UMR-8603, Hospital Necker, Paris, France Received for publication 30 August 2001 Accepted for publication 21 February 2002 Summary. Mdx mouse, the animal model of Duchenne muscular dystrophy, develops an X-linked recessive inflammatory myopathy with an apparent sustained capacity for muscle regeneration. We analysed whether changes in the skeletal muscle during myonecrosis and regeneration would correlate with functional alterations in peripheral lymphoid tissues. Here we show that during the height of myonecrosis, mdx mice display marked atrophy of periph- eral lymph nodes and extensive muscle inflammation. In contrast, enlargement of draining lymph nodes with accumulation of CD4 CD44 , CD4 CD25 , CD8 CD44 T lymphocytes and type-2 B cells was consistently observed during amelioration of the muscle lesion. In addition, regeneration of the muscular tissue was accompanied by concomitant increase of immuno- globulin-secreting cells in regional lymph nodes and bone marrow. Double immunolabelling analysis revealed intense B cell proliferation and formation of germinal centre in the follicles of dystrophic regional lymph nodes. Further- more, lymph node cells produced large amounts of IFN-g but not IL-4, IL-6 or IL-10 after in vitro mitogen stimulation with Concanavalin A. As these alter- ations occurred mainly during the recovery period, we suggested that local activation of the immune system could be an influence which mitigates the myonecrosis of muscular tissue in the mdx dystrophic mouse. Keywords: immune system, inflammation, mdx, muscular dystrophy Correspondence: Thereza Quirico-Santos, Laboratory of Cellular Pathology, Institute of Biology, UFF, Nitero Âi, 24210-130, Rio de Janeiro, Brazil. Fax: 55. 021. 2719±5934; E-mail: [email protected]; [email protected] Int. J. Exp. Path. 2002) 83, 121±132 ß 2002 Blackwell Science Ltd 121

Transcript of Resolution of skeletal muscle inflammation in mdx dystrophic mouse is accompanied by increased...

��������� � �������� ����� ��� ���� � ������������ ���� �� ���� ����� �� ��������� ��������� �� ��������� ���������

������� ��������� � ��� ��� ������������������ ������������ ������� ������� ��������������� �� ������ �������������

����������� � ��� ������� ����� ��� ��� ���� ��� ������ �� ������ �������

���������� ����������� � ��� ����� ����������� ��������� ��� !����� "� �� #�����

������� ���������� $���������� � ��� ����� %&��� �� ' ����� ��� ��%�"�(�

"� �� #������ ���'��� ��� ���)"* ��"+,-./� !����� )��0��� ����� ������

����� �! "#$ %&'(��)*�#+ ,- �&.&/* 0--1

����%*�! "#$ %&'(��)*�#+ 01 2�'$&)$3 0--0

�� ���� �!4 5#&/�� *6� )+�5)( 5#!�( #" &�6�++� 5&/�&()$ !3/*$#%63�

!� �(#%/ )+ 7(�+8�! $���//� � �+"()55)*#$3 53#%)*63 9�*6 )+ )%%)$�+*

/&/*)�+�! �)%)��*3 "#$ 5&/�(� $�.�+�$)*�#+: �� )+)(3/�! 96�*6�$ �6)+.�/

�+ *6� /8�(�*)( 5&/�(� !&$�+. 53#+��$#/�/ )+! $�.�+�$)*�#+ 9#&(! �#$$�()*�

9�*6 "&+�*�#+)( )(*�$)*�#+/ �+ %�$�%6�$)( (35%6#�! *�//&�/: ��$� 9� /6#9 *6)*

!&$�+. *6� 6��.6* #" 53#+��$#/�/� 5!4 5��� !�/%()3 5)$8�! )*$#%63 #" %�$�%6

�$)( (35%6 +#!�/ )+! �4*�+/� � 5&/�(� �+"()55)*�#+: �+ �#+*$)/*� �+()$.�5�+*

#" !$)�+�+. (35%6 +#!�/ 9�*6 )��&5&()*�#+ #" � ;� � ;;�� � ;� � 0<��� =� � ;;� (35%6#�3*�/ )+! *3%�0 � ��((/ 9)/ �#+/�/*�+*(3 #'/�$ �!

!&$�+. )5�(�#$)*�#+ #" *6� 5&/�(� (�/�#+: �+ )!!�*�#+� $�.�+�$)*�#+ #" *6�

5&/�&()$ *�//&� 9)/ )��#5%)+��! '3 �#+�#5�*)+* �+�$�)/� #" �55&+#

.(#'&(�+/��$�*�+. ��((/ �+ $�.�#+)( (35%6 +#!�/ )+! '#+� 5)$$#9: #&'(�

�55&+#()'�((�+. )+)(3/�/ $� �)(�! �+*�+/� � ��(( %$#(�"�$)*�#+ )+! "#$5)*�#+

#" .�$5�+)( ��+*$� �+ *6� "#((��(�/ #" !3/*$#%6�� $�.�#+)( (35%6 +#!�/: 2&$*6�$

5#$�� (35%6 +#!� ��((/ %$#!&��! ()$.� )5#&+*/ #" �2�� '&* +#* ��;� ��> #$

��1- )"*�$ �� ���� 5�*#.�+ /*�5&()*�#+ 9�*6 �#+�)+) )(�+ �: �/ *6�/� )(*�$

)*�#+/ #��&$$�! 5)�+(3 !&$�+. *6� $��# �$3 %�$�#!� 9� /&..�/*�! *6)* (#�)(

)�*� )*�#+ #" *6� �55&+� /3/*�5 �#&(! '� )+ �+"(&�+�� 96��6 5�*�.)*�/ *6�

53#+��$#/�/ #" 5&/�&()$ *�//&� �+ *6� 5!4 !3/*$#%6�� 5#&/�:

1��&��2 �55&+� /3/*�5� �+"()55)*�#+� 5!4� 5&/�&()$ !3/*$#%63

�#$$�/%#+!�+��@ 6�$�A) �&�$��#�)+*#/� �)'#$)*#$3 #"

��((&()$ ?)*6#(#.3� �+/*�*&*� #" ��#(#.3� �22� ��*�$#B�� 0;01-1,-���# !� �)+��$#� �$)A�(: 2)4@ <<: -01: 0C1DE<D,;F �5)�(@

G5(�H+�*5)�(:�#5:'$F *I&�$��#H&$'�:�#5:'$

�+*: �: �4%: ?)*6: J0--0K ��� 101E1,0

� 0--0 �()�89�(( ����+�� �*! 101

6� 5!4 5#&/�� )+ )+�5)( 5#!�( #" &�6�++� 5&/

�&()$ !3/*$#%63 J � K� /�5�()$ *# *6� 6&5)+ !�/�)/��

!� �(#%/ )+ 7(�+8�! $���//� � �+"()55)*#$3 53#%)*63

J�#+)8) 1DD=K: �#*6 5!4 5��� )+! � %)*��+*/ 6) �

) !�"���* �+ *6� .�+� �#!�+. "#$ !3/*$#%6�+� ) /&'%()/5)

(�55)( %$#*��+ *6)* '�+!/ *# )�*�+ )+! )//#��)*�/ 9�*6 )

�#5%(�4 #" ��(( /&$")�� %$#*��+/ 96��6 �+ *&$+ �+*�$)�*/

9�*6 *6� �4*$)��((&()$ 5)*$�4 J���K J����+/8� �� ��: 1D=DF

�$#9+ �� ��: 1DDDK: 3/*$#%6�+ !�"����+�3 �5%)�$/ �+*$)

��((&()$ �)0� 6#5�#/*)/�/ )+! !�/$&%*/ 5&(*�%(� %$#*��+

�+*�$)�*�#+/ �5%#$*)+* "#$ /�.+)((�+. "$#5 *6� ��� *# *6�

+&�(�&/ J��6(�$ 0---K: �/%�*� /6)$�+. *6� /)5� .�+�*��

)+! 5#(��&()$ !�"��*� *6� !�/�)/� )$��/ 5)$8�!(3

)5#+. 5��� )+! 6&5)+/: � 7 5��� 6) � ) 5#$�

'�+�.+ �#&$/� )+! /6#9 )+ )%%)$�+* /&/*)�+�! �)%)��*3

"#$ $�.�+�$)*�#+� 96�$�)/ 5&/�(�/ #" 3#&+. 5)(� �

%)*��+*/ )$� $�%()��! '3 ")* )+! �#++��*� � *�//&�� 9�*6

!�)*6 #��&$$�+. )$#&+! *6� /��#+! !��)!� #" (�"�

J�(()5)+! L �)5%'�(( 0---K: �+"#$*&+)*�(3� 5#/* *6�$)

%�&*�� /*$)*�.��/ 6) � '��+ %)((�)*� � $)*6�$ *6)+ �&$)*� ��

9�*6 ) "#�&/ #+ )5�(�#$)*�+. #$ $�/*$)�+�+. *6� !�/�)/�

%$#��//: 6�/ �/ %)$*(3 !&� *# ) ()�8 #" &+!�$/*)+!�+.� +#*

#+(3 #" *6� %$���/� 5#(��&()$ "&+�*�#+ #" !3/*$#%6�+� '&*

)(/# #" *6� !3/*$#%6�� %$#��// �*/�(" )+! *6� �%�/*)*��

")�*#$/ *6)* �+"(&�+�� *6� &(*�5)*� �(�+��)( %6�+#*3%�

J�+")+*� L �&/A).6 1DDDK:

�&/�&()$ !3/*$#%63 �+ 5!4 5#&/� �/ �6)$)�*�$�A�! '3

)'$&%* #+/�* #" 5&/�(� "�'$� !�.�+�$)*�#+ 9�*6 �+*�+/�

�+"()55)*#$3 �+"�(*$)*� %$�/�+* /�+�� 9�)+�+. J�#+)8)

1DD=K: 6� 6��.6* #" 53#+��$#/�/ #��&$/ +�)$ )!&(*6##!

)+! �/ "#((#9�! '3 �""��*� � 5&/�&()$ $�.�+�$)*�#+: M�*�

%�$/�/*�+* "�'$#/�/ )+! )��&5&()*�#+ #" �#++��*� � *�//&�

)""��* )(5#/* �4�(&/� �(3 *6� !�)%6$).5 J�#()+! �� ��:

1DD<K� *6#&.6 (�5' 5&/�(�/ /6#9 "�'$#/�/ *#9)$!/ *6�

�+! #" *6� /��#+! 3�)$ J?)/*#$�* L ��'�((� 1DD<K: �+ *6�/

/�+/�� 5!4 5��� 5)3 '� �#+/�!�$�! ) )(&)'(� 5#!�(

"#$ /*&!3�+. *6� %$#��// #" 5&/�(� $�.�+�$)*�#+ �+

&�6�++�*3%� 5&/�&()$ !3/*$#%63 J ��)$�# �� ��: 1D=DK:

�3#+��$#/�/ �+ 5!4 5��� �/ #"*�+ %$���!�! '3

'$�)8!#9+ )+! !�*)�65�+* #" /)$�#(�55) "$#5 *6�

')/�5�+* 5�5'$)+� )+! /&'/�I&�+* !�.�+�$)*�#+ #"

5&/�(� "�'$�/ )//#��)*�! 9�*6 �4*�+!�! �+"()55)*#$3

%$#��//: �)�$#%6).�/� � ;� )+! � =� (35%6#�3*�/

$�%$�/�+* *6� 5)�+ �#+/*�*&�+*/ #" *6� �+"()55)*#$3 ��((

%#%&()*�#+ /&$$#&+!�+. *6� !�.�+�$)*�+. 53#"�'$�/

J�� #9)(( �� ��: 1DD-F �%�+��$ �� ��: 0--1K: �� �$)(

"�+!�+./ /&%%#$* *6� 63%#*6�/�/ *6)* *6� �55&+� /3/*�5

5�.6* '� %()3�+. ) $�(� )+* $#(� �+ *6� %)*6#%63/�#(#.3 #"

!3/*$#%6�+!�"����+* 5&/�&()$ !3/*$#%63: 2#$ �+/*)+���

(35%6#�3*�/ 5)3 �#+*$�'&*� !&$�+. �)$(3 /*).�/ #" *6�

!�/�)/�� '3 �+!&��+. )%#%*#/�/ *6$#&.6 %�$"#$�+ !�%�+!

�+* )+! �+!�%�+!�+* 5��6)+�/5/ J�%�+��$ �� ��: 1DDCK

)+! )(/# ()*�$� '3 *6� #+/�* #" "�'$#*�� � �+*/ *6)* &+!�$

5�+� *6� )'�(�*3 #" 5&/�(� *# $�.�+�$)*� J�#$$�/#+ �� ��:

0---K: �#9� �$� ) $���+* /*&!3 �+5!45��� &/�+. )!�+#

�$&/ ��*#$/ �4%$�//�+. �.)()�*#/�!)/� #$ .$��+

"(&#$�/��+* %$#*��+ %#�+*�! #&* ) %#*�+*�)( $#(� "#$ �3*#

8�+�/ �+ %$#5#*�+. &%$�.&()*�#+ #" &*$#%6�+� ) �#5%�+

/)*#$3 /*$&�*&$)( 5&/�(� %$#*��+ JM)5)5#*# �� ��: 0---K:

�+*�$�/*�+.(3� ) %)*��+* 9�*6 ���8�$ 5&/�&()$ !3/*$#%63�

!� �(#%�+. )�*� � )$*6$�*�/ 9�*6 .$�)* %$#!&�*�#+ #"

�+"()55)*#$3 �3*#8�+�/� /6#9�! )5�(�#$)*�#+ #" 5&/

�&()$ !3/*$#%63 9�*6 +#$5)(�A)*�#+ #" �$�)*�+� 8�+)/�

(� �(/ J�)�.)8� �� ��: 1DDDK: � '�**�$ &+!�$/*)+!�+. #"

*6� %)$*���%)*�#+ #" *6� �55&+� /3/*�5 �+ &�6�++�

*3%� 5&/�&()$ !3/*$#%63 5)3 *6�$�"#$� %$# �!� )(&)'(�

�+"#$5)*�#+ "#$ !�/�.+�+. +�9 /*$)*�.��/ #" *$�)*5�+*:

?$� �#&/ !)*) "$#5 #&$ .$#&% /6#9�! *6)* 5)G#$

�6)+.�/ �+ *6� �3*#)$�6�*��*&$� )+! 5��$#�+ �$#+5�+*

#" (35%6#�! #$.)+/� /&�6 )/ )*$#%63 )+! ��� # �$

!�%#/�*�#+� %)$)((�(�! *6� %$#��// #" 53#+��$#/�/ )+!

�4*�+/� � �+"()55)*#$3 $�)�*�#+ �+ *6� 5&/�&()$ *�//&�

#" 5!4 5��� J�&�$��#�)+*#/ �� ��: 1DD<F ���4)/ �� ��:

1DDCK: �+ �#+*$)/*� �+6)+��! ��((&()$�*3 #" !$)�+�+. (35%6

+#!�/ 9�*6 /�.+�"��)+* �+�$�)/� #" � ;� )+! � =� ��((/

�4%$�//�+. ��� $���%*#$/ 9)/ �#+/�/*�+*(3 #'/�$ �!

!&$�+. $�.�+�$)*�#+ #" 5&/�&()$ *�//&� )+! �(�+��)( )5�(�

#$)*�#+ #" *6� !�/�)/� �+ 5!4 5��� J�).$#*)�)+!�!# �� ��:

1DDDK: ��$� 9� $�%#$* *6)* !&$�+. *6� $��# �$3 %6)/� #"

5&/�&()$ !3/*$#%63� !��(�+� �+ 53#+��$#/�/ 9)/ )��#5

%)+��! '3 �+�$�)/�! �55&+#.(#'&(�+ )+! �+*�$"�$#+�%$#!&�*�#+: 6� $�/&(*/ )$� !�/�&//�! �+ *�$5/ #+ *6�

%#//�'(� $#(� #" *6� �55&+� /3/*�5 �+ *6� 5�*�.)*�#+ #"

*6� 5&/�&()$ (�/�#+ �+ 5!4 5#&/�:

��������� �� ������

3�����

�!4 !3/*$#%6�� )+! ).�5)*�6�! �<C��N1-� �#+*$#(

+#+!3/*$#%6�� 5��� 9�$� 5)�+*)�+�! �+ *6� )+�5)(

6#&/� #" *6� �%)$*5�+* #" ��((&()$ )+! �#(��&()$

��#(#.3 )* 2(&5�+�+/� 2�!�$)( �+� �$/�*3: ���� 9�$�

8�%* )* ) �#+/*)+* *�5%�$)*&$� J0- ��K 9�*6 ) (�.6* �3�(�

#" 10 @ 10 6� $���� �! )��!�"��! 9)*�$ )+! �+$��6�! !��*

/&%%(�5�+*�! 9�*6 �*)5�+/ �� ����� �4 �+ )+ )**�5%* *#

5�+�5�A� !�/*$�// )+! ) #�! /*)$ )*�#+ !&� *# 5&/�&()$

!3/*$#%63� 9)*�$ 9)/ %$# �!�! �+ ) '#**(� 9�*6 (#+.�$ /�%

)+! %�((�*�! "##! �+ ) $���%��+* %()��! #+ *6� "(##$ #" *6�

�).�: �)(� )+�5)(/ 9�$� /�(��*�! )* ).�/ �#$$�/%#+!

�+. *# 5)�+ %6)/�/ #" *6� !�/�)/�@ 6��.6* #" 53#+��$#/�/

J;9��8/K� )5�(�#$)*�#+ #" 53#+��$#/�/ J109��8/K )+!

�)$(3 "�'$#/�/ J0;9��8/K:

#4 5�����+������ �� ��4

100 � 0--0 �()�89�(( ����+�� �*!� ������������ # ���� � 67���������� ���8���� ��� 101E1,0

!�������� ������� ��� 9 ���������� ������

:����� ����8�� 5&/�(� "$#5 ;� 10 )+! 0;9��8 5!4 5���

9�$� �)$�"&((3 $�5# �! )+! "�4�! �+ "#$5)(�+'&""�$�!

J%�C:0K ��((#+�. "�4)*� �: 2� ��5 /��*�#+/ #" %)$)""�+

�5'�!!�! *�//&� 9�$� /*)�+�! 9�*6 6)�5)*#43(�+E�#/�+

J��K: �.�+�$)*�+.N+��$#*�� "�'$�/ 9�$� �!�+*�"��! '3 )+

6#5#.�+�#&/ %)(� �#/�+#%6�(�� /)$�#%()/5� 96�$�)/

$�.�+�$)*�+. "�'$�/ '3 *6��$ /*$#+. /)$�#%()/5�� ')/#

%6�(�) )+! ��+*$)((3 (#�)*�! +&�(��: 6� *#*)( /&$")�� )+!

*6)* #��&%��! '3 53#+��$#/�/� $�.�+�$)*�+. "�'$�/ #$

"�'$#/�/ 9)/ !�*�$5�+�! 9�*6 *6� ����� ?$#.$)5

J�)*�#+)( �+/*�*&*�/ #" ��)(*6 �5).� ?$#.$)5� ���K:

6� !�""�$�+�� '�*9��+ *6�/� *9# 5�)/&$�5�+*/ 9)/

�4%$�//�! )/ *6� %�$��+*).� #" %)*6#(#.��)( )$�) �+ *6�

�$#///��*�#+: �5).�/ "$#5 *6� �+*�$� �$#// /��*�#+

&/�+. ) 0-� #'G��*� � 9�$� )�I&�$�! 9�*6 ) �#&+!

��/�#+ ���$# J���K !�.�*)( �)5�$):

��� �8���8������

:����� ����8�� /8�(�*)( 5&/�(� 9�*6 !$)�+�+. )4�(()$3 )+!

'$)�6�)( (35%6 +#!�/ 9)/ �)$�"&((3 $�5# �! )+! "�4�! "#$

, 6 �+ �)$+#3O/ "�4)*� �: ���*�#+/ %()��! #+ %#(3�(3/�+�

J��.5) �6�5��)( �#5%)+3� ��� ���K %$��#)*�! /(�!�/

9�$� '(#�8�! "#$ �+!#.�+#&/ %�$#4�!)/� )�*� �*3 9�*6 ,P

63!$#.�+ %�$#4�!� �+ %6#/%6)*�'&""�$�! /)(�+� J?��K "#$

<5�+ )+! 9)/6�! 9�*6 ?�� �#+*)�+�+. -:1P ��� J"$)�

*�#+ �K )+! -:-1P $�*#+ 71-- J��.5)K: �%*�5)( !�(&*�#+/

#" '�#*�+3()*�! )+*�?��� �(#+� ?�1- J��(( %$#(�"�$)*�#+

)//#��)*�! 5)$8�$K )+! %&$�"��! )+*��00- �(#+� ��,>�0

J� ��(( 5)$8�$K '#*6 %&$�6)/�! "$#5 ?6)$5�+.�+ J�)+

��.#� ��� ���K 9�$� )%%(��! )+! /��*�#+/ �+�&')*�! )*

$##5 *�5%�$)*&$� �+ ) 5#�/* �6)5'�$ "#$ >-5�+: ���*�#+/

9�$� *6�+ /&'G��*�! "#$ ;-5�+ *# .#)* )+*�$)* �.�

%�$#4�!)/� �#+G&.)*� J��.5)K )+! /*$�%*) �!�+)(8)(�+�

%6#/%6)*)/� J�#&*6�$+ ��#*��6+#(#.3 �//#��)*�/�

��$5�+.6)5� ��� ���K: ?�$#4�!)/� 9)/ $� �)(�! 9�*6

)5�+#�*63(�)$')A#(� J��.5)K �+ *6� %$�/�+�� #" �0�0

)+! %6#/%6)*)/� 9�*6 <'$#5# ;�6(#$# ,�+!#(3( %6#/

%6)*� )+! +�*$# '(&� *�*$)A#(�&5 J�35�! �)'#$)*#$��/

�+�:� ���K: �(( /��*�#+/ 9�$� (�.6*(3 �#&+*�$/*)�+�! 9�*6

�)3�$O/ 6)�5)*#43(�+: 2#$ 6�/*#(#.��)( /*&!��/ )* (�)/*

"� � )+�5)(/ %�$ .$#&% 9�$� �4)5�+�!:

2#$ )//�//5�+* #" � ;� )+! � =� ��(( /&'/�*/ �+

*6� �+"()55)*#$3 �+"�(*$)*�� :����� ����8�� 9)/

�5'�!!�! �+ �� J�//&��8� ��(�/ �+�� �(86)$*�

���K )+! /&'/�I&�+*(3 "$#A�+ �+ (�I&�! +�*$#.�+: 2� ��5*6��8 /��*�#+/ 9�$� "�4�! �+ )��*#+� )+! �+�&')*�!

9�*6 )+*�� ; J�Q1:<K )+! )+*�� = J<,>CK 63'$�!#5)

/&%�$+)*)+*/: 6$�� 5!4 5��� 9�$� �+�(&!�! %�$ ).�

)+! *6$�� �+*�$� �$#///��*�#+/ #" /8�(�*)( 5&/�(� 9�$�

)+)(3/�! 9�*6 ) 0-� #'G��*� � "#$ �)�6 5#&/�:

3����� � ���� ����� ���0�� �� ��& ��������

#&'(� #$ *6$���#(#&$ /*)�+�+. 9�$� %�$"#$5�! 9�*6

"(&#$�/���+E�/#*63#��)+)*� J2��K� �%63�#�$3*6$�+J�?�K�

*$��#(#&$ J�K #$ �&)+*&5 $�! �#+G&.)*�/� &/�+. *6�

"#((#9�+. 5#+#�(#+)( )+*�'#!��/ J5�'/K@ � ;N�?�

�(#+� �,; J���*#+ ��8�+/#+� �)+ �#/�� ��� ���KF

� =N'�#*�+ �(#+� <,>:C J�#&*6�$+ ��#*��6+#(#.3

�//#��)*�/� ��$5�+.6)5� ��� ���KF � <N'�#*�+ �(#+�

�3*1 J���*#+ ��8�+/#+KF � 0<N2�� J�(#+� ��1,K�

����N2�� J�(#+� �<C<DCK "$#5 ��.5): �+*��00-N

�?� J�(#+� ��,E>�0K� � ;;N2�� �(#+� ��C� � >0�N

2�� J�(#+� ��(1;K )+! )+*��.�N2�� J�(#+� �>>-:0K

9�$� %&$�6)/�! "$#5 ?6)$5�+.�+:

�4�(()$3 )+! '$)�6�)( (35%6 +#!�/� /%(��+ )+! '#+�

5)$$#9 9�$� �)$�"&((3 $�5# �! )+! �(�)+�! "$#5

)!�%#/� *�//&�: �#+� 5)$$#9 ��((/ 9�$� �#((��*�! "$#5

*6�.6 )+! /6�+ '#+�/: ��(( /&/%�+/�#+/ %$�%)$�! '3

"�+� 5�+��+. *6� #$.)+/ 9�*6 +��!(�/ �+ ?�� %�C:0�

9�$� %)//�! *6$#&.6 ) +3(#+ /�� � )+! /&/%�+!�! �+

����#(! ?�� /&%%(�5�+*�! 9�*6 0P 6�)*�+)�*� )*�!

"�*)( �)(" /�$&5 J2��K J��'�# ���� �)�*6�$/'&$.�

���K: ��! '(##! ��((/ 9�$� $�5# �! "#((#9�+. �+�&')

*�#+ 9�*6 -:1>< � $�/)55#+�&5 �6(#$�!� "#$ 05�+:

��((/ 9�$� 9)/6�! 9�*6 ?���0P 2�� )+! �)'�(�*3

!�*�$5�+�! '3 *6� *$3%)+ '(&� �4�(&/�#+ *�/*:

6$�� 6&+!$�! *6#&/)+! ��((/ 9�$� �+�&')*�! "#$

1-5�+ )* ; �� 9�*6 ?�� E 0P 5�4*&$� J @ K "�*)( �)("

/�$&5 )+! 1N1- !�(&*�! +#$5)( 5#&/� /�$&5: 2#$

*6$���#(#&$ /*)�+�+.� ��((/ 9�$� �+�&')*�! 9�*6 #%*�5)(

�#+��+*$)*�#+ #" /%���"�� )+*�'#!��/ "#$ 0-5�+ )* ; ��:��+!�+. #" '�#*�+3()*�! )+*�'#!��/ 9)/ !�*�$5�+�! "#(

(#9�+. /*�%9�/� �+�&')*�#+ "#$ ,-5�+ 9�*6 /*$�%*) �!�+E

�&)+*&5 $�! �#5%(�4 J��.5)K: ��((/ 9�$� "�4�! 9�*6

?���1P "#$5)(!�63!� �#+*)�+�+. -:-<P )A�!�: � (� �+.

.)*� �4�(&!�+. ��(( !�'$�/ )+! +#+ �)'(� ��((/ 9)/ !�*�$

5�+�! &/�+. "#$9)$! /: /�!� /�)**�$ %)$)5�*�$/ )+!

0- --- � �+*/ 9�$� )�I&�$�! &/�+. ) 2����)(�'&$ �3*#

5�*�$ &/�+. ����I&�/* /#"*9)$� J���*#+ ��8�+/#+�

�)+ ��.#� ���K:

�������� � ��� ���� ���+�������� ����

2#$ �7 ��� �4%�$�5�+*/� *#*)( +&5'�$/ #" �.�� �.� )+!

�.� %()/5) ��((/ 9�$� !�*�$5�+�! '3 ) 5#!�"��)*�#+ #" *6�

��!.9��8 )+! �#(* ������%#*�//)3 *��6+�I&� J���K

J��!.9��8 L �#(* 1D=,F �$)!��+ �� ��: 1DD;K: �$��"(3� 5��$#

*�*$� %()*�/ J�&4(#+ �0D ���� ���� 2$)+��K 9�$� �#)*�!

"#$ 1>6 )* ; �� 9�*6 )+*��.�� )+*��.� #$ )+*��.� )+*�

'#!��/ J�#&*6�$+ ��#*��6:� ��$5�+.6)5� ��� ���K !�(&*�!

�+ �#)*�+. '&""�$ J-:-<� Q0�?�;K )+! '(#�8�! "#$ 1 6 9�*6

?�� �#+*)�+�+. 1P .�()*�+ J��.5)K:

5���8���� ��������� ��� ��������� � �������

� 0--0 �()�89�(( ����+�� �*!� ������������ # ���� � 67���������� ���8���� ��� 101E1,0 10,

��$�)( !�(&*�#+/ #" ��(( /&/%�+/�#+/ �+ �?�� 1>;- 9�*6

0P 2�� #'*)�+�! "$#5 �+!� �!&)( (35%6 +#!�/� /%(��+ #$

'#+� 5)$$#9 9�$� /��!�! )+! �+�&')*�! "#$ > 6 )* ,C ���+ ) 6&5�!�"��! <P ��0 �+�&')*#$: �"*�$ 9)/6�+. #&* *6�

��((/� %()*�/ 9�$� �+�&')*�! 9�*6 *6� �#$$�/%#+!�+. .#)*

)+*�5#&/� �.�� �.� #$ �.� )(8)(�+�%6#/%6)*)/� �#+G&

.)*� J�#&*6�$+ ��#*��6:K "#$ D-5�+ )* ,C �� �+ ) 6&5�!�"��!

<P ��0 �+�&')*#$: �%#*/ .�+�$)*�! '3 /%���"�� '�+!�+. #"

/��$�*�! �.� 9�$� $� �)(�! 9�*6 <'$#5#;�6(#$#,

�+!#(3( %6#/%6)*� J���?K /&'/*$)*� !�(&*�! �+ 0)5�+#0

5�*63(1%$#%$)+#(#( )(8)(�+� '&""�$ /#(&*�#+: 6� +&5'�$

#" %()/5) ��((/ %�$ /��!�! ��(( 9)/ !�*�$5�+�! '3 �#&+*

�+. *6� /%#*/ 9�*6 ) 5).+�"��$ (�+/: 6� )'/#(&*� +&5'�$

#" +)*&$)((3 #��&$$�+. %()/5) ��((/ �+ �)�6 #$.)+ 9)/

�)(�&()*�! "$#5 *6� *#*)( +&5'�$ #" ��((/:

� ����8���� ��� ����� �� �+ �*$# �������

��� ����

�#+� 5)$$#9� )4�(()$3 )+! '$)�6�)( (35%6 +#!� ��((/

#'*)�+�! "$#5 �<C��N1- #$ 5!4 5���� 9�$� �&(*&$�! �+

�?�� 1>;- 5�!�&5 /&%%(�5�+*�! 9�*6 1-P 2��� 05�

�.(&*)5�+� )+! <� 1-�< � �5�$�)%*#�*6)+#( �+ )

0;9�(( *�//&� �&(*&$� %()*� J�#$+�+.� �M� ���K )* ) �#+

��+*$)*�#+ #" 0� 1-> ��((/N5�: �#+� 5)$$#9 ��(( /&/%�+

/�#+/ 9�$� ��+*$�"&.�! *6$#&.6 ) 6�.6 !�+/�*3 2��#((�?)I&�

/#(&*�#+ J�5�$/6)5 ?6)$5)��) ��#*��6: �+�:� ?�/�)*)9)3�

��� ���K *# #'*)�+ 5#+#+&�(�)$ ��(( /&/%�+/�#+/: � ��((/

9�$� �+$��6�! '3 %)++�+. 9�*6 1--�.N5� #" %&$�"��!

6)5/*�$ )+*�5#&/� )+*���� �(#+� �<C<DC J�#&*6�$+

��#*��6:K: 6�/ %$#��!&$� 9)/ �)$$��! #&* *9��� )+! 3��(!�!

5#$� *6)+ =-P �00- %#/�*� � ��((/� )/ �#+"�$5�! '3

�55&+#�3*#�6�5�/*$3 )+! "(#9 �3*#5�*$3: 2#$ �+!&�*�#+

#" �� ���� )+*�'#!3 %$#!&�*�#+� 1-�.N5� #" (3%#%#(3

/)��6)$�!� J�?�K "$#5 6�8����8�� ��� /�$#*3%� -<<@�<

9)/ )!!�! J��.5)K: �"*�$ �+�&')*�#+ "#$ < !)3/ )* ,C ���+ ) 6&5�!�"��! <P ��0 �+�&')*#$� �&(*&$� /&%�$+)*)+*/

9�$� 6)$ �/*�! )+! /*#$�! )* �0- �� &+*�( &/�:

�������� � �������+������� ��� ���� ��� �������

�� � ���� ���������

���$#%()*�/ J�&4(#+ �0D ���� ���� 2$)+��K 9�$�

�#)*�! 9�*6 < �.N5� #" )+*��.�� )+*��.� #$ )+*��.�

)+*�'#!��/ !�(&*�! �+ �#)*�+. '&""�$ J-:-< � Q0�?�;K "#$

1> 6 )* ; ��: �!!�*�#+)( ����� %()*�/ 9�$� �#)*�! 9�*6

1-5.N5� #" $)''�* 5&/�(� 53#/�+� 53�(�+ ')/�� %$#*��+

J��?K #$ *3%� ��� 6�/*#+� "$#5 �)(" *635&/ J��.5)K

"#$ �� ���� )+*�.�+/%���"�� )+*�'#!3 %$#!&�*�#+: �#+

/%���"�� '�+!�+. /�*�/ 9�$� /)*&$)*�! 9�*6 ?�� �#+*)�+

�+. 1P .�()*�+ "#$ 1 6 )+! 9)/6�! /&'/�I&�+*(3 9�*6

?�� �#+*)�+�+. -:-<P 9��+0- J?��K:

��$�)( !�(&*�#+/ #" �&(*&$� /&%�$+)*)+* 9�$� �+�&')*�! )*

,C �� "#$ D-5�+ 9�*6 *6� �#$$�/%#+!�+. /%���"�� )+*�.�+

�#)*�! �+ D>9�(( 5��$#%()*�/: �55&+#.(#'&(�+ J�.K '�+!

�+. 9)/ !�*�$5�+�! "#((#9�+. �+�&')*�#+ 9�*6 .#)* )+*�

5#&/� �.�� �.� #$ �.� %�$#4�!)/��#+G&.)*� J�#&*6�$+

��#*��6:K: �+A35� )�*� �*3 9)/ *6�+ $� �)(�! 9�*6

�%6�+3(�+�!�)5�+� J��.5)K �+ *6� %$�/�+�� #" �0�0

)+! *6� $�)�*�#+ /*#%%�! 9�*6 ,� �0��;: �'/#$')+�� )*

;D0 +5 9)/ 5�)/&$�! &/�+. )+ �55&+#$�)!�$ J�+*6#/

0-1-� �&/*$�)K: �+*�'#!3 �#+��+*$)*�#+/ 9�$� �)(�&()*�!

'3 &/�+. *6� (�+�)$ $)+.�/ #" *6� !�(&*�#+ )+! /*)+!)$!

�&$ �/ .�+�$)*�! 9�*6 %&$�"��! /%���"�� 5#&/� 5#+#�(#

+)( �.�� �.� #$ �.� )+*�'#!3 J�#&*6�$+ ��#*��6:K:

5���8���� ��� ����� �� �+ �*$# ���0��� ��� ����

��� 9 �����������

9# 5�((�#+ ��((/N5�� #'*)�+�! "$#5 5!4 #$ �#+*$#( )4�(

()$3 )+! '$)�6�)( (35%6 +#!�/ 9�$� /��!�! �+ 0;9�((

*�//&� �&(*&$� %()*�/ J�#$+�+.� �M� ���K �+ *6� %$�/�+��

#" <�.N5� �#+�)+) )(�+ � J��.5)K )+! �+�&')*�! )*

,C �� �+ ) <P ��0 )*5#/%6�$�: �&(*&$� /&%�$+)*)+*/

9�$� �#((��*�! )"*�$ 0; #$ ;= 6 "#$ �3*#8�+� I&)+*�"��)*�#+

'3 ����� J?6)$5�+.�+� �)+ ��.#� ��K: ���$#*�*$�

%()*�/ J�&4(#+ �0D ���� ���� 2$)+��K 9�$� �#)*�!

# �$+�.6* )* ; �� 9�*6 0 �.N9�(( #" %&$�"��! �)%*&$�+.

5�' *# 5#&/� �2��� ��;� ��> #$ ��1- J?6)$5�+.�+K

�+ 1--5� �)$'#+)*� '&""�$� %�D:<: ?()*�/ 9�$� 9)/6�!

"� � *�5�/ 9�*6 ?��9��+: �#+/%���"�� '�+!�+. /�*�/

9�$� /)*&$)*�! 9�*6 1-P 2�� �+ ?�� "#$ 1 6 )+! 9)/6�!

9�*6 ?��9��+: 6�$�)"*�$ /&%�$+)*)+*/ )+! �#$$�/

%#+!�+. �3*#8�+� /*)+!)$! !�(&*�! �+ ?��N2�� 9�$�

)!!�!: ?()*�/ 9�$� �+�&')*�! # �$+�.6* )* ; ��� /&'

/�I&�+*(3 9)/6�! "#&$ *�5�/ 9�*6 ?��9��+ )+!

�+�&')*�! )* $##5 *�5%�$)*&$� "#$ ;-5�+ 9�*6 *6�

�#$$�/%#+!�+. '�#*�+3()*�! )+*��2��� ��;� ��> #$

��1- )+*�'#!3 J?6)$5�+.�+K: �"*�$ 9)/6�+. *6� %()*�/�

) �!�+�#+G&.)*�! 6#$/�$)!�/6 %�$#4�!)/� 9)/ )!!�!

)+! �+�&')*�! "#$ ,-5�+: �+A35� )�*� �*3 9)/ $� �)(�!

9�*6 ,�,��<�<�*�*$)5�*63('�+A�!�+� )+! 1:05� �0�0

�+ ��*$)*� '&""�$ J%�<:-K: 6� $�)�*�#+ 9)/ /*#%%�! '3

)!!�+. 1 � ��(: �'/#$')+�� 9)/ 5�)/&$�! )* ;<- +5

&/�+. *6� �+*6#/ 0-1- ����� !� ��� J�&/*$�)K )+!

�3*#8�+� �#+��+*$)*�#+/ 9�$� I&)+*�"��! &/�+. ) !#&'(�

��.6*%#�+* /*)+!)$! �&$ �:

*��������� ������

���$#/#"* �4��( DC /#"*9)$� J���$#/#"*� ��)**(�� ��K�

9)/ &/�! *# �)(�&()*� 5�)+ )+! /*)+!)$! !� �)*�#+/:

�+%)�$�! �*&!�+*O/ �*�/* 9)/ )%%(��! *# )//�// *6�

(� �( #" /*)*�/*��)( /�.+�"��)+��:

#4 5�����+������ �� ��4

10; � 0--0 �()�89�(( ����+�� �*!� ������������ # ���� � 67���������� ���8���� ��� 101E1,0

�������

!�������� ��� ���8������ ������ �

�����8�� � ���

&$�+. *6� 6��.6* #" 53#+��$#/�/ J)* ;9��8/K /8�(�*)(

5&/�(�/ #" !3/*$#%6�� 5��� J)'(� 1K 9�$� &+!�$.#�+.

) /�5�()$ �4*�+* #" +��$#/�/ )+! $�.�+�$)*�#+ 9�*6 %$#5

�+�+* �+"()55)*�#+ J2�.: 1)�!K: 6�$�)"*�$ J)* 109��8/K

) 5)$8�! $�!&�*�#+ #" $�.�+�$)*�+. ')/#%6�(�� "�'$�/ )+!

) %$� )(�+�� #" $�.�+�$)*�! 63%�$*$#%6��! 53#"�'$�/

9�*6 ��+*$)((3 (#�)*�! +&�(�� 9�$� #'/�$ �! J2�.: 1'��K:

�+ �#+*$)/*� #(!�$ J0;9��8K 5!4 5��� /6#9�! �4*�+/� �

����� � 2$�I&�+�3 #" !�/*�+�* %)*6#(#.��)( (�/�#+/ �+ 5!4

/8�(�*)( 5&/�(�: ��/&(*/ )$� �4%$�//�! )/ 5�)+ � �

J/*)+!)$! !� �)*�#+K �+ %�$��+*).�N&+�* )$�) #" �+"()55)*#$3�+"�(*$)*�� $�.�+�$)*�+. 53#"�'$� )+! "�'$#/�/: � 0-4 #'G��*� �

9)/ &/�! "#$ *6� )+)(3/�/ #" *6$�� �+*�$� �$#// /��*�#+ #"

:����� ����8�� /8�(�*)( 5&/�(� "$#5 *6$�� )+�5)(/ %�$ .$#&% )*).�/ ;9��8/� 109��8/ )+! 0;9��8/:

�.�

J9��8/K

�+"()55)*#$3

�+"�(*$)*�

��.�+�$)*�+.

53#"�'$� 2�'$#/�/

; 1D:-� D:0 11:C� 0:= -:0� -:110 <:C� -:> -:,� -:, 1:1� -:C0; <:,� ,:0 -:,� -:> 1-:,�1:D

a b

c d

e f

!����� � �)�5)*#43(�+�#/�+ /*)�+�+. #" ) < �5 9)4�5'�!!�! /��*�#+ #" :����� ����8�� 5&/�(� "$).5�+*/ #" ; 9��8 J)�!K� 10 9��8 J'��K

)+! 0; 9��8 J�� "K !3/*$#%6�� 5���: J)E!K �4*�+/� � 53#+��$#/�/ 9�*6 63)(�+� "�'$�/ J()$.� )$$#9K )+! �+"()55)*#$3 ��(( �+"�(*$)*�#+ J/*)$K 9�*6

5)+3 %#(35#$%6#+&�(�)$ J)$$#9K )+! 5#+#+&�(�)$ ��((/ J)$$#9 6�)!K )* *6� 6��.6* #" 53#+��$#/�/F J'E�K +&5�$#&/ 53#"�'$�/ 9�*6 ��+*$)(+&�(�� J)$$#9 6�)!K� /�)$�� �+"()55)*#$3 "#�&/ J/*)$K )+! �#++��*� � *�//&� J)/*�$�/8KF J�E"K 63%�$*$#%6��! J)$$#9 6�)!K )+! +��$#*�� J)$$#9K

53#"�'$�/ )+! # �$!�%#/�*�#+ #" �#++��*� � *�//&� J)/*�$�/8K )* �)$(3 "�'$#/�/ %�$�#!: �$�.�+)( 5).+�"��)*�#+�1-- J)� 'K��0-- J�K��1--- J!� �� "K:

5���8���� ��������� ��� ��������� � �������

� 0--0 �()�89�(( ����+�� �*!� ������������ # ���� � 67���������� ���8���� ��� 101E1,0 10<

"�'$#/�/ 9�*6 !�+/� !�%#/�*�#+ #" �#++��*� � *�//&��

+&5�$#&/ !�.�+�$)*�+.N+��$#*�� "�'$�/ )+! 5�+�5)(

�+"()55)*�#+ J2�.: 1��"K:

�55&+#6�/*#�6�5��)( )+)(3/�/ /6#9�! *6)* !&$�+.

*6� 6��.6* #" 53#+��$#/�/ � ;� J<1-� ;- ��((/N55,K�

� =� J0=D� 0- ��((/N55,K )+! /#5� � (35%6#�3*�/

J<0� = ��((/N55,K 9�$� %$�/�+* �+ *6� /8�(�*)( 5&/�(�

#" !3/*$#%6�� 5���: �+ �#+*$)/*� $)$� )+! � (35%6#�3*�/

��((/ 9�$� "#&+! �+ *6� /8�(�*)( 5&/�(� #" !3/*$#%6��

5��� )* 10 )+! 0;9��8/:

3�� � ����� � � ����8���� �� �����8�� ����8

��� ��� ��� ����& � ���� 0������ � ���

�����������

&$�+. *6� 6��.6* #" 53#+��$#/�/� $�.�#+)( (35%6 +#!�/

#" ;9��8#(! 5!4 5��� /6#9�! ) 5)$8�! $�!&�*�#+ #"

��((/ �+ �#5%)$�/#+ *# �#+*$#( �<C��N1-� )(*6#&.6

) 5#$� /�.+�"��)+* J�� -:---1K �""��* 9)/ #'/�$ �! "#$

� (35%6#�3*�/ J2�.: 0K:

��.�+�$)*�#+ #" 53#+��$#/�/ J)* 109��8/K 9)/

)��#5%)+��! '3 $�!&�*�#+ #" � ;� )+! � =� ��((/

�+ *6� /8�(�*)( 5&/�(� #" 5!4 5��� J!)*) +#* /6#9+K:

�#9� �$� �+()$.�5�+* #" $�.�#+)( (35%6 +#!�/ 9�*6

/�.+�"��)+* J�� -:---1K �+�$�)/� #" � (35%6#�3*�/

9)/ �#+/�/*�+*(3 #'/�$ �! �#+�#5�*)+* *# $�.�+�$)*�#+

#" 53#"�'$�/ )+! 5�*�.)*�#+ #" 5&/�&()$ �+"()55)*�#+:

6�/ "�)*&$� 9)/ 5#$� %$#5�+�+* �+ 0;9��8 5!4 5���:

� 5�(! �+�$�)/� �+ *6� )'/#(&*� +&5'�$/ #" � ;� )+!

� =� ��((/ 9�$� )(/# #'/�$ �! �+ ) 109��8 5!4

5#&/�� )(*6#&.6 ) /�.+�"��)+* )&.5�+*)*�#+ 9)/ �#+

/�/*�+*(3 #'/�$ �! �+ 0;9��8#(! 5���: 2&$*6�$ )+)(3/�/

*# � )(&)*� *6� %�$��+*).� #" � <� ��((/ 9�*6�+

*6� �00-��.�� %#%&()*�#+ /6#9�! *6)* *6� 5)G#$�*3

'�(#+.�! *# ) �#+ �+*�#+)( *3%� �0 (35%6#�3*� /&'/�*

J2�.: ,K: �+ )!!�*�#+� ) /�.+�"��)+* �+�$�)/� #" � ;;� )+!

� >0�� /&'/�*/ 9�*6�+ � ;� )+! � =� (35%6#�3*�/

)+! )(/# � 0<�� ;� ��((/ 9�$� #'/�$ �! �+ 0;9��8

3

2

1

010

8

4

6

2

010

8

4

6

2

0TCR CD4+ + TCR CD8+ + B220+

4 wk

12 wk

24 wk

∗∗∗

∗∗

∗∗

∗∗∗∗

Cel

l num

ber

(×10

)6

!�����"� 2(#9 �3*#5�*$3 )+)(3/�/ #" 5#+#+&�(�)$ ��((/ %$�/

�+* �+ )4�(()$3 )+! '$)�6�)( (35%6 +#!�/ #" 5��� )* ;9��8/�

109��8/ )+! 0;9��8/: �+� $�%$�/�+*)*� � �4%�$�5�+* �/

%$�/�+*�! "#$ �)�6 ).�: ��/&(*/ )$� �4%$�//�! )/ 5�)+�� #" "#&$ )+�5)(/: 6�/ �4%�$�5�+* 9)/ %�$"#$5�! "#&$ *�5�/:� �<C��N 1-� 5!4: ���-:-< )+! ���� -:---1:

103

102

101

100

103

102

101

100

104

103102101100 104 103102101100 104

IgM

B220

a

20

15

10

5

0CD5+

C57BL/10 mdx

35.63% 49.55%

Cel

l num

ber

(%)

b

!������� 2(#9 �3*#5�*$3 )+)(3/�/ 9�*6 )+*��00-N�?�� )+*�

�.�N2�� )+! )+*�� < '�#*�+N/*$�%*#) �!�+I&)+*&5 $�! #"

/�+.(� ��(( /&/%�+/�#+/ "$#5 )4�(()$3 )+! '$)�6�)( (35%6 +#!�/#" �#+*$#( )+! 5!4 5��� )* 0;9��8/: J)K �4%$�//�#+ #" �00-

)+! �.�F J'K %�$��+*).� #" � <� ��((/ �+ *6� �00-��.��

%#%&()*�#+: �+� $�%$�/�+*)*� � �4%�$�5�+* �/ %$�/�+*�!:

��/&(*/ )$� �4%$�//�! )/ 5�)+�� #" "#&$ )+�5)(/: ��5�()$$�/&(*/ 9�$� /��+ �+ "#&$ )!!�*�#+)( �4%�$�5�+*/: � �<C��N 1-�

5!4: ��� -:-<:

#4 5�����+������ �� ��4

10> � 0--0 �()�89�(( ����+�� �*!� ������������ # ���� � 67���������� ���8���� ��� 101E1,0

5!4 5��� J2�./ ;):'K: �#+�*6�(�// �4%$�//�#+ #"

� 0<� ��((/ 9�*6�+ *6� � =� %#%&()*�#+ 9)/ �$3

(#9 �+ (35%6 +#!�/ "$#5 '#*6 /*$)�+/ #" +#+!3/*$#%6��

�<C��N1- )+! !3/*$#%6�� 5��� J!)*) +#* /6#9+K:

�55&+#6�/*#�6�5��)( )+)(3/�/ #" *6� :����� ����8��

5&/�(� 9�*6 )+*�?��� )+! )+*��00- 5#+#�(#+)( )+*�

'#!��/ �#+"�$5�! *6)* )"*�$ �4*�+/� � 53#+��$#/�/�

$�!&�*�#+ #" 5&/�&()$ �+"()55)*�#+ �#$$�()*�! 9�*6 )��&

5&()*�#+ #" � ��((/ J�00-�K �+ *6� $�.�#+)( (35%6 +#!�/

#" 5!4 5���: �+!��!� 0;9��8#(! 5!4 5��� /6#9�!

�+()$.�5�+* #" �#$*��)( )$�)/ J2�.: <)�'K: �#$�# �$� �*

9)/ %#//�'(� *# #'/�$ � � ��(( %$#(�"�$)*�#+ )+! "#$5)*�#+

#" .�$5�+)( ��+*$�/ �+ *6� "#((��(�/ #" 5!4 5��� J2�.: <��!K:

�#+� 5)$$#9 #" 5!4 !3/*$#%6�� 5��� J2�.: >K /6#9�!

) 5)$8�! $�!&�*�#+ #" �00-(# ��((/ !&$�+. *6� 6��.6*

#" 53#+��$#/�/ J)* ;9��8/K: �+ �#+*$)/*� ) �#+/�/*�+*

�+�$�)/� #" �00-6� ��(( +&5'�$/ 9)/ #'/�$ �! �+

#(!�$ )+�5)(/ J0;9��8/K� )(*6#&.6 +# !�""�$�+�� 9)/

#'/�$ �! '�*9��+ �#+*$#( )+! 5!4 5��� )* 109��8/:

� /(�.6* !��$�)/� �+ *6� )'/#(&*� +&5'�$ #" )+! �

��((/ 9)/ /��+ �+ *6� /%(��+ #" 5!4 5���� '&* #+(3 )* *6�

6��.6* #" 53#+��$#/�/ J)* ;9��8/K: M�* *6�$� 9)/ +#

!�""�$�+�� �+ $�()*� � +&5'�$/ #" )+! � ��((/ '�*9��+

�#+*$#( �<C��N1- )+! 5!4 !3/*$#%6�� 5��� )* )(( ).�/

/*&!��! J!)*) +#* /6#9+K:

��� ���� ���+�������� ���� �� ����8�� ����

�+)/5&�6 )/ � (35%6#�3*�/ 9�$� �+�$�)/�! �+ %�$�%6

�$)( (35%6 +#!�/ )+! '#+� 5)$$#9 #" 5!4 5��� !&$�+.

)5�(�#$)*�#+ #" 53#+��$#/�/ J)* 109��8/K� �* )%%�)$�!

$�(� )+* *# )//�// 96�*6�$ *6#/� ��((/ !�""�$�+*�)*�!

�+*# %()/5) ��((/: �+!��! ) �#+/�/*�+* �+�$�)/� #"

�./��$�*�+. ��((/ �+ $�.�#+)( (35%6#�! #$.)+/ !&$�+.

5&/�(� $�.�+�$)*�#+ 9)/ "#&+! #2�.: CK:

�+ �7 ��� �4%�$�5�+*/� �.�/��$�*�+. ��((/ 9�$�

/�.+�"��)+*(3 �+�$�)/�!� �/%���)((3 �+ !$)�+�+. (35%6

+#!�/ #" 5!4 5��� )* 109��8/ J�� -:-<� 2�.: C)K

)+! 0;9��8/ J�� -:---1� 2�.: C!K: ?$�/�+�� #" �.�

/��$�*�+. ��((/ J�� -:-1K 9)/ �#+/�/*�+*(3 #'/�$ �! �+

(35%6 +#!�/ #" 5!4 5��� )* 0;9��8/: �� )(/# "#&+!

)+ �+�$�5�+* #" �.�/��$�*�+. ��((/ J�� -:-1K �+ *6� /%(��+

#" 5!4 5��� )* 109��8/ J2�.: C'K )+! #" �.�/��$�*�+.

��((/ J�� -:-1� 2�.: C"K �+ *6� '#+� 5)$$#9 #" 0;9��8

5!4 5��� !&$�+. *6� %�$�#! #" �+�$�)/�! �#++��*� �

*�//&� !�%#/�*�#+ �+ *6� /8�(�*)( 5&/�(�:

���)&/� #" )*$#%63� �* 9)/ +#* %#//�'(� *# !�*��* '3

����� /%#* )//)3 *6� %$�/�+�� #" �./��$�*�+. ��((/ �+

$�.�#+)( (35%6 +#!�/ !&$�+. *6� 6��.6* #" 53#+��$#/�/:

�#+�*6�(�//� +# !�""�$�+�� 9)/ #'/�$ �! �#+��$+�+.

*6� %$�/�+�� #" �.%$#!&��+. ��((/ �+ *6� '#+� 5)$$#9

)+! /%(��+ #" 5!4 5��� )* *6�/ ).�:

�+ �*$# ��� ���� ��� ��� ����

� (35%6#�3*�/ "$#5 '$)�6�)( )+! )4�(()$3 (35%6 +#!�/ #"

10 )+! 0;9��8 5!4 5��� 9�$� /*�5&()*�! �� ���� 9�*6

1- �. �?�� ) %#(3�(#+)( ���(( )�*� )*#$� *# )/��$*)�+

*6� (� �(/ #" �. %$#!&�*�#+ )+! *6� %)**�$+ #" )+*�.�+��

$��#.+�*�#+:�#*6 �#+*$#( )+!5!45���%$#!&��!�#5%)$

)'(� (� �(/ #" �. �+ *6� '#+� 5)$$#9 /&%�$+)*)+*/ J!)*)

+#* /6#9+K: �)*6�$ /&$%$�/�+.(3� � (35%6#�3*�/ "$#5

(35%6 +#!�/ #" 109��8 )+! 0;9��8 5!4 5��� %$#!&��!

(#9�$ (� �(/ #" �.� )+! �.� J2�.: =)K: �35%6#�3*�/ "$#5

!3/*$#%6�� 5��� )(/# %$#!&��! �.� )+*�'#!3 9�*6

(#9�$ $�)�*� �*3 J2�.: ='K "#$ )+*�.�+/ J6�/*#+�� 53#/�+K

8+#9+ *# '� $�(�)/�! "$#5 *6� (�/�#+�! *�//&� $)*6�$

*6)+ "#$ &+$�()*�! )+*�.�+/ J��?K:

�+ �*$# ���0��� ��� ����

�35%6#�3*�/ !�$� �! "$#5 !$)�+�+. (35%6 +#!�/ #"

!3/*$#%6�� )+! ).�5)*�6�! �#+*$#( 5��� 9�$� /*�5&

()*�! �� ���� 9�*6 �#+�)+) )(�+ � J�#+ �K: �&(*&$�

3

2

1

0CD25+ CD44+ CD62L+

CD4+

3

2

1

0 CD44+ CD62L+

CD8+

aA

bsol

ute

cell

num

bers

10)5

b

∗∗

∗∗ ∗

∗∗

!����� $� �4%$�//�#+ #" � 0<� � ;; )+! � >0� 9�*6�+ � ;�

J%)+�( )K )+! � =� J%)+�( 'K ��((/ "$#5 0;9��8 5!4 (35%6

+#!�/: ��/&(*/ )$� �4%$�//�! )/ 5�)+�� #" "#&$ )+�5)(/:�+� $�%$�/�+*)*� � �4%�$�5�+* �/ %$�/�+*�!: ��5�()$ $�/&(*/

9�$� /��+ �+ *6$�� )!!�*�#+)( �4%�$�5�+*/: � �<C��N 1-�

5!4: ���-:-<� ����-:---1:

5���8���� ��������� ��� ��������� � �������

� 0--0 �()�89�(( ����+�� �*!� ������������ # ���� � 67���������� ���8���� ��� 101E1,0 10C

/&%�$+)*)+*/ 9�$� �#((��*�! 0; #$ ;=6 )"*�$ )+! �4)5�+�!

"#$ �2��� ��;� ��> )+! ��1- �3*#8�+� %$#!&�*�#+ '3

�����: �/ /6#9+ �+ 2�.: D� !3/*$#%6�� (35%6#�3*�/ "$#5

$�.�#+)( (35%6 +#!�/ /*�5&()*�! 9�*6 �#+ � %$#!&��!

5#$� �2�� *6)+ *6#/� .�+�$)*�! "$#5 �#+*$#( 5��� )*

;9��8/ J�� -:--<K� 109��8/ J�� -:-<K )+! 0;9��8/

J�� -:--<K: ��5�()$ $�/&(*/ 9�$� #'*)�+�! 9�*6 /&%�$

+)*)+*/ 6)$ �/*�! "$#5 0; )+! ;= 6 ��(( �&(*&$�/: �#+*$#(

�&(*&$�/ 9�*6 ��((/ .$#9�+. �+ )'/�+�� #" �#+ � %$#

!&��! &+!�*��*)'(� (� �(/ #" �2��: ��8�9�/�� ��(( �&(*&$�/&%�$+)*)+*/ 6)$ �/*�! )"*�$ 0; )+! ;= 6 %$#!&��!

&+!�*��*)'(� (� �(/ #" ��;� ��> )+! ��1- J!)*) +#*

/6#9+K:

%��������

�+ *6� %$�/�+* %)%�$ 9� $�%#$* *6)* !&$�+. *6� 6��.6* #"

53#+��$#/�/� 96�+ /8�(�*)( 5&/�(�/ #" 5!4 5��� /6#9

�4*�+/� � �+"()55)*#$3 $�)�*�#+ )+! !�.�+�$)*�#+� *6�$�

�/ ) .�+�$)( )*$#%63 #" (35%6#�! #$.)+/: 6�/ �#+*$)/*/

9�*6 )��&5&()*�#+ #" �#+ �+*�#+)( *3%�0 � (35%6#

�3*�/ )+! 5)$8�! �55&+#.(#'&(�+ %$#!&�*�#+ �+ '#*6

$�.�#+)( (35%6 +#!�/ )+! '#+� 5)$$#9 !&$�+. �(�+��)(

)5�(�#$)*�#+ )+! $�.�+�$)*�#+ #" *6� 5&/�&()$ (�/�#+:

�� "&$*6�$ #'/�$ �! *6)* $�%()��5�+* #" 53#"�'$�/ '3

�#++��*� � *�//&� �+ *6� (�5' 5&/�(�/ #" 5!4 5#&/�

#��&$$�! /� �$)( 9��8/ �)$(��$ *6)+ %$� �#&/(3 $�%#$*�!

J?)/*#$�* L ��'�((� 1DD<K: �+*�$�/*�+.(3� �+�$�)/�! !�%#/

�*�#+ #" �#++��*� � *�//&� �+ 0;9��8 5!4 !3/*$#%6��

5��� 9)/ )(/# )��#5%)+��! '3 %$#5�+�+* �+()$.�5�+*

#" !$)�+�+. (35%6 +#!�/ )+! �+�$�)/�! )��&5&()*�#+

#" )+! � ��((/:

��((/ )$� $�%#$*�! *# �#+*$�'&*� /�.+�"��)+*(3 *# )%#%

*#/�/ #" /8�(�*)( 5&/�(� )+! %$#.$�//� � "�'$�+#.�+�/�/

� �!�+* !&$�+. $�%�)*�! �3�(�/ #" 5!4 5&/�&()$ *�//&�

!�.�+�$)*�#+ J�#$$�/#+ �� ��: 0---F �%�+��$ �� ��: 0--1K:

�5%(��)*�#+ "#$ *6� %)$*���%)*�#+ #" ��((/ �+ *6� %$#��//

#" "�'$#/�/ 9)/ $���+*(3 !�5#+/*$)*�! �+ �4%�$�5�+*/

�)$$��! #&* �+ 5!4 5��� 9�*6 *6� +&N+& ')�8.$#&+!:

a b

c d

c

PF

c

GC

!�����&� ?6#*#5��$#.$)%6/ /6#9�+. �6)$)�*�$�/*�� /*)�+�+. #" �00- J$�!K )+! ?��� J'()�8K �4%$�//�#+ �+ 0;9��8 5!4 (35%6 +#!�

J'K �#5%)$�! 9�*6 �#+*$#( �<C��N1- J)K: �#*� *6� %$�/�+�� #" .�$5�+)( ��+*$� "#$5)*�#+ �+ 5!4 (35%6 +#!� J�K: �00-� ?����

(35%6#�3*�/ �+ *6� .�$5�+)( ��+*$� )$� �+!��)*�! '3 )$$#9 6�)! J!K: �$�.�+)( 5).+�"��)*�#+�0-- J)� '� �K )+! �1--- J!K:

�� �#$*��)(F ?2� %)$)"#((��&()$F ��� .�$5�+)( ��+*$�:

#4 5�����+������ �� ��4

10= � 0--0 �()�89�(( ����+�� �*!� ������������ # ���� � 67���������� ���8���� ��� 101E1,0

�+ *6�/ 5#!�(� *$)+/%()+*)*�#+ #" +#$5)( *635�� *�//&� �+*#

5!4+&N+& 5��� $�%(�+�/6�! !�%#/�*�#+ #" )(*�$�! �#(

().�+ �+ *6� 5&/�&()$ *�//&� �#5%)$)'(� *# 9�(!*3%�

5!4 !3/*$#%6�� 5��� J�#$$�/#+ �� ��: 0---K: �#9� �$�

*6� "$�I&�+�3 #" )�*� )*�! ��((/ 9)/ +#* �(� )*�! �+

5!4 !$)�+�+. (35%6 +#!�/ !&$�+. *6� 6��.6* #" 53#

+��$#/�/� )/ $���+*(3 $�%#$*�! J�%�+��$ �� ��: 0--1K:

6� 6�.6 �4%$�//�#+ #" � >0� �+ 5!4 (35%6 +#!�/ )*

0;9��8/ /&..�/*/ *6� �4�/*�+�� #" /*$#+. $��$&�*5�+*

"$#5 *6� ��$�&()*�+. ��(( %##( !&$�+. )5�(�#$)*�#+ #"

53#+��$#/�/ �+ 5!4 5���: 6�/ +#*�#+ �/ /&%%#$*�! '3

) %$� �#&/ #'/�$ )*�#+ /6#9�+. �+�$�)/�! �> �+*�.$�+

)+! ��� �4%$�//�#+ �+ *6� %#/*�)%�(()$3 6�.6 �+!#

*6�(�)( �+&(�/ J���/K #" 5!4 !$)�+�+. (35%6 +#!�/

J�).$#*)�)+!�!# �� ��: 1DDDK: 2&$*6�$5#$�� 9� )(/#

#'/�$ �! ) /�.+�"��)+* �+�$�)/� #" � 0<� )+! � ;;�

��((/ �+ $�.�#+)( (35%6 +#!�/ #" 5!4 5��� )* 0;9��8/�

!&$�+. 5�*�.)*�#+ #" �+"()55)*�#+ )+! �)$(3 "�'$#/�/ #"

/8�(�*)( 5&/�(�: �+*�$�/*�+.(3� *6�$� )$� $�%#$*/ �+!��)*�+.

*6)* $�.&()*#$3 ��((/ �4%$�// *6� %6�+#*3%� � ;�� 0<�

J�#+�)$#(# L �� �+./ 0---K� *6&/ /&..�/*�+. *6)* $�.&

()*#$3 ��((/ 5�.6* '� %()3�+. ) �$�*��)( $#(� �+ *6� �#+*$#(

#" �+"()55)*�#+ )(/# �+ *6� 5!4 5&/�&()$ !3/*$#%63:

�+ *6�/ /�+/�� *6� �55&+� $�.&()*#$3 )�*� �*3 #" *6�

� ;�� 0<� %#%&()*�#+ �/ %)$*(3 5�!�)*�! *6$#&.6

�2� /��$�*�#+ J�)8).&�6� 0---K� ) �3*#8�+� �+ #( �!

�+ !� �(#%5�+* #" "�'$#/�/ �+ 5&/�&()$ !3/*$#%63

J��$+)/�#+� �� ��: 1DD<K: �4%�$�5�+*/ )$� +#9 &+!�$

9)3 �+ #$!�$ *# �/*)'(�/6 �� ���� *6� %$���/� "&+�*�#+ #"

/&�6 %&*)*� � �55&+#$�.&()*#$3 ��((/ �+ *6� �#+*$#( #"

�+"()55)*#$3 (�/�#+ �+ 5!4 !3/*$#%6�� 5���:

�!4 (35%6 +#!� ��((/ %$#!&��! ()$.� )5#&+*/ #" �2��'&* +#* ��;� ��> #$ ��1- )"*�$ �� ���� 5�*#.�+ /*�5&()

*�#+ 9�*6 �#+�)+) )(�+ �� �/%���)((3 !&$�+. $�.�+�$)*�#+

#" 5&/�&()$ !3/*$#%63: �� �$)( .$#9*6 ")�*#$/ J�:.: �2��K)$� $�%#$*�! *# %)$*���%)*� )/ $�.&()*#$/ #" �#++��*� �

*�//&� !�%#/�*�#+ %)$*(3 '3 �+"(&�+��+. *6� %$#!&�*�#+ #"

��� �#5%#+�+*/ J��((�)& 1DD>F �).$#*)�)+!�!# �� ��:

1DD>K: ?$#(�"�$)*�#+ )+! !�""�$�+*�)*�#+ #" 53#.�+�� ��((/

)$� � �+*/ !�%�+!�+* #+ *6� �4%$�//�#+ #" ��$*)�+

.�+�/� 96��6 )$� .$�)*(3 �+"(&�+��! '3 ��(( �+*�$)�*�#+/

9�*6 *6� ��� J2#/*�$ �� ��: 1D=CF ��+8# L �#�**�+.�$

1D=CK: ��5'�$/ #" *6� �+*�$"�$#+�+!&��'(� %$#*��+ %0--

")5�(3 6) � '��+ $�%#$*�! *# '� �4%$�//�! !&$�+.

53#'()/* !�""�$�+*�)*�#+ J��& �� ��: 0---K:

�2�� �/ ) �3*#8�+� *6)* )(/# &%$�.&()*�/ *6�

�4%$�//�#+ #" )!6�/�#+ 5#(��&(�/� 5)G#$ 6�/*#�#5%)*�'�(

�*3 �#5%(�4 .�+� %$#!&�*/ )+! �6�5#8�+�/� 96��6 �)+

&(*�5)*�(3 /*�5&()*� )+ �+"()55)*#$3 $�)�*�#+ #��&$$�+.

�+ *6�5&/�&()$ *�//&� J���6)�(�/ �� ��: 1DD,F ��3�/��3+)

L Q$#(��8 0---K: ?)$)!#4��)((3� *6�$� )$� $�%#$*/ /6#9

�+. *6)* �2�� 5)3 )(/# �4�$* ) %$#*��*� � �""��* �+

5#!�(/ 96�$� 5)�$#%6).�/ )$� �#+/�!�$�! )/ 5)G#$

�""��*#$ ��((/ �+ *�//&� !)5).� J�)**63/ �� ��: 1DDDF

$)+ �� ��: 0---F �)**63/ �� ��: 0--1K: �+*�$�/*�+.(3�

6�%)*�� .$)+&(#5) #" *�8���� ������+"��*�!

5��� 9�*6 !�"����+* �+*�$"�$#+.)55) $���%*#$ J�2����N�K 6)! )+ �+6)+��! "�'$#*�� $�)�*�#+ )+! )+ �+�$�)/�!

$)*�# #" # �$ � ��((/ J�(� ��$) �� ��: 0---K: ��+�� �+ 5!4

�+"()55)*�#+� �)�1� ��((/ )$� 5#$� )'&+!)+* !&$�+.

*6� 6��.6* #" 53#+��$#/�/� �* �/ %#//�'(� *6)* �2�� �/

%()3�+. ) %$#*��*� � $#(� �+ *6� �#+*$#( #" /8�(�*)( 5&/�(�

�+"()55)*�#+ )+! "�'$#/�/ �+ *6� 5!4 5���:

�+ $�.)$! *# � (35%6#�3*� !� �(#%5�+*� �2�� %)$*���

%)*�/ )/ ) !�$��* � ��((5)*&$�+. �3*#8�+�� !$� �+. +#$5)(

� ��(( *# )�*� � �. /��$�*�#+ J�6)+. �� ��: 1DDDK: �+ *6�/

25

20

15

10

5

0

25

20

15

10

5

0

25

20

15

10

5

0TCR+ B220lo

Cel

l num

ber

(×10

)6

B220hi

4 wk

12 wk

24 wk

!����� '� ��� )+! �00-� ��(( +&5'�$/ �+ *6� '#+� 5)$$#9 #"5��� )* ).�/ ;9��8/� 109��8/ )+! 0;9��8/: �+� $�%$�

/�+*)*� � �4%�$�5�+* �/ /6#9+: ��/&(*/ )$� �4%$�//�! )/

5�)+�� #" "#&$ )+�5)(/: ��5�()$ $�/&(*/ 9�$� /��+ �+ *6$��)!!�*�#+)( �4%�$�5�+*/: � �<C��N 1-� 5!4: ���-:-<:

5���8���� ��������� ��� ��������� � �������

� 0--0 �()�89�(( ����+�� �*!� ������������ # ���� � 67���������� ���8���� ��� 101E1,0 10D

/�+/�� �7 ��� �4%�$�5�+*/ /6#9�! *6)* $�.�+�$)*�#+ #"

53#+��$#/�/ 9)/ )��#5%)+��! '3 �+�$�)/�! +&5'�$/ #"

�./��$�*�+. ��((/ �+ *6� $�.�#+)( (35%6 +#!�/ )+! '#+�

5)$$#9 #" 5!4 5��� )"*�$ 53#+��$#/�/: �+ 8��%�+. 9�*6

*6�/� "�+!�+./� 9� #'/�$ �! �+�$�)/�! � ��(( %$#(�"�$)*�#+

)+! "#$5)*�#+ #" .�$5�+)( ��+*$�/ �+ *6� "#((��(�/ #" 5!4

5��� )"*�$ *6� %�$�#! #" 53#+��$#/�/: 6� $�/&(*/ /6#9�+.

�+�$�)/�! +&5'�$/ #" �00-� � ��((/ )+! �.�/��$�*�+.

��((/ �+ *6� '#+� 5)$$#9 #" 0;9��8 5!4 5��� /&..�/*

Lymph nodes Spleen Bone marrow300

250

200

150

100

50

0

4

3

2

1

0

3

2

1

0

lgM lgG lgA

lgM lgG lgA

lgM lgG lgA lgM lgA300

250

200

150

100

50

0lgM lgG lgA lgM lgG lgA

a b c

d e f

Cel

l num

ber

( ×10

)3100

80

0

60

40

20

200

80

0

40

120

160

12 w

eeks

24 w

eeks

!����� (� �&5'�$/ #" �./��$�*�+. ��((/ �+ !$)�+�+.(35%6 +#!�/ J)� !K� /%(��+ J'� �K )+! '#+� 5)$$#9

J�� "K #" �#+*$#( )+! 5!4 5��� )* 109��8/ J)� '� �K

)+! 0;9��8/ J!� �� "K: �)�6 /35'#( $�%$�/�+*/ #+�

)+�5)(: � �.�� � �.� )+! � �.� "#$ 5!4 )+!�#$$�/%#+!�+. #%�+ /35'#(/ "#$ �#+*$#( 5���: �)$/

!�%��* 5�)+ )(&�/:

12

10

8

6

4

2

0IgM IgG IgA

∗∗∗

∗∗∗

a

500

400

300

200

100

0Myosin Histone MBP

Ig c

once

ntra

tion

(g/

ml)

µA

bsor

banc

e (4

92nm

)

b

∗∗

∗∗

!������� �� ���� �55&+#.(#'&(�+ /��$�*�#+ �+ *6� /&%�$+)*)+*/

#" (35%6#�3*�/ !�$� �! "$#5 )4�(()$3 )+! '$)�6�)( (35%6 +#!�/#" 109��8 5!4 5��� �&(*� )*�! �+ %$�/�+�� #" �?� J1-�.N5�K:

?)+�( J)K /6#9/ �.�� �.� )+! �.� /��$�*�#+ �+ �<C��N 1- #$

5!4 /&%�$+)*)+*/: ?)+�( J'K /6#9/ )+*�.�+ $�)�*� �*3 #"

(35%6#�3*� /&%�$+)*)+*/: �+�6&+!$�! �� #" %$#*��+ )+*�.�+/J1-�.N5�K 9�$� &/�! "#$ �#)*�+. 9�((/ #" 5��$#*�*$� %()*�/:

�&%�$+)*)+* $�)�*� �*3 9)/ )//�//�! 9�*6 )+*��.� )+*�'#!��/

'3 !�$��* �����: ��%$�/�+*)*� � �4%�$�5�+*/ )$� %$�/�+*�!:

��/&(*/ )$� �4%$�//�! )/ 5�)+�� #" "� � )+�5)(/: ��5�()$$�/&(*/ 9�$� #'*)�+�! �+ *6$�� /�%)$)*� �4%�$�5�+*/:� �<C��N 1-� 5!4: ����-:--1� ����� -:---1:

3000

2500

2000

1500

10004 wk 12 wk 24 wk

IFN

-(p

g/m

l)γ

∗∗

∗∗∗

!�����)� �+�$�)/�! %$#!&�*�#+ #" �2�� '3 (35%6#�3*� %##(

"$#5 < 5!4 #$ �<C��N 1- 5��� )* ).�/ #" ;� 10 )+! 0;9��8/:

�35%6#�3*�/ 9�$� /*�5&()*�! #$ +#* 9�*6 �#+ � J<�.N5�K

"#$ 0; 6: ��/&(*/ )$� �4%$�//�! )/ 5�)+�� #" 9�((/:�+� $�%$�/�+*)*� � �4%�$�5�+* �/ /6#9+: ��5�()$ $�/&(*/

9�$� #'*)�+�! �+ *6$�� /�%)$)*� �4%�$�5�+*/: � �<C��N 1-�

5!4: ��� -:-<� ����-:--<:

#4 5�����+������ �� ��4

1,- � 0--0 �()�89�(( ����+�� �*!� ������������ # ���� � 67���������� ���8���� ��� 101E1,0

*6)* )�*� )*�! � ��((/ )$� 5�.$)*�+. "$#5 *6� !$)�+�+. (35%6

+#!� *#9)$!/ *6� '#+� 5)$$#9 "#$ )+*�'#!3 /��$�*�#+:

�#+ �$/�(3� *6� %##$ $�/%#+/� #" �� ���� � (35%6#�3*�

/*�5&()*�#+ 5�.6* '� !&� *# 5)4�5)( �� ��� )�*� )*�#+ #"

*6�/� ��((/ *6�$�'3 (�5�*�+. "&$*6�$ �. %$#!&�*�#+: 6�/ /&.

.�/*�#+ �/ /&%%#$*�! '3 /�5�()$ �� ���� /*&!��/ 9�*6 ��$�

'$#/%�+)( "(&�! (35%6#�3*�/ "$#5 %)*��+*/ 9�*6 5&(*�%(�

/�(�$#/�/� )+ �+"()55)*#$3 !�53�(�+)*�+. !�/�)/� #" *6�

��+*$)( +�$ #&/ /3/*�5 9�*6 �55&+� $�)�*� �*3 "#$ 53�(�+

)+*�.�+/ J��+$�8//#+ �� ��: 1D=>K: �35%6#�3*�/ "$#5 5!4

5��� J109��8/ #+9)$!/K )(/# %$#!&��! �� ���� �.� )+*�

'#!3 9�*6 (#9�$ $�)�*� �*3 "#$ )+*�.�+/ J6�/*#+�� 53#/�+K

8+#9+ *# '� $�(�)/�! "$#5 *6� (�/�#+�! *�//&�� $)*6�$ *6)+

"#$ &+$�()*�! )+*�.�+/ J��?K: &$�+. )%#%*#/�/� +&�(�)$

�#5%#+�+*/ J ��� 6�/*#+� )+! %6#/%6)*�!3(/�$�+�K *$)+/

(#�)*�! �+*# 5�5'$)+#&/ '(�'/ 5)3 '�+! *# *$)%%�!

/�(")+*�.�+/ )+! )�*� )*� �#5%(�5�+* �)/�)!�� 96��6

*6�$�"#$� %$#5#*�/ *6��$ $�5# )( 5�!�)*�! '3 �.� )&*#

)+*�'#!��/ J��A#.&�6� �� ��: 1DDCK: 6� %$#��// #" !�.�+

�$)*�#+ )+! $�5# )( #" +��$#*�� *�//&� �/ )+ �5%#$*)+*� �+*

%$���!�+. �""��*� � 5&/�(� $�.�+�$)*�#+ J?)/*#$�* L

��'�((� 1DD<K: �+ *6�/ $�.)$!� *6� %$�/�+�� #" %6).#�3*�/

)+! �+�$�)/�! �.� %$#!&�*�#+ �#&(! '� %$#5#*�+. $�5# )(

#" )%#%*#*�� '(�'/ "$#5 53#+��$#*�� *�//&� )+! %$#')'(3

'(#�8�+. )�*� )*�#+ #" )&*#$�)�*� � ��((/: 6�/ 9#&(!

"&$*6�$ �#+*$�'&*� *# *6� $�/#(&*�#+ #" �+"()55)*�#+ )+!

/8�(�*)( 5&/�(� $�.�+�$)*�#+: �+*�$�/*�+.(3� �+*$) �+#&/

.)55).(#'&(�+ *6�$)%3 #" %)*��+*/ 9�*6 !�$5)*#53#/�*�/

J� �K� )+ �+"()55)*#$3 )&*#�55&+� 5&/�&()$ !�/�)/��

)**�+&)*�/ *�//&� �+"()55)*�#+ )+! �5%$# �/ 5&/�(�

�3*#)$�6�*��*&$� J�5�5�3) �� ��: 0---K:

�* �)+ '� )$.&�! *6)* )�*� )*�#+ #" *6� �55&+� /3/*�5

�+ 5!4 5#&/� �/ )+ �%�/*)*�� � �+*� /��#+!)$3 *# 5&/

�&()$ �+"()55)*�#+: �#9� �$� )/ #%%#/�! *# �+"()55)

*�#+ 9�*6 )��&5&()*�#+ #" � ;�� � =� ��((/ �+ *6�

/8�(�*)( 5&/�(� �+ ;9��8#(! 5!4 5���� !$)�+�+.

(35%6 +#!�/ /6#9�! )*$#%63 !&$�+. #+/�* )+! 6��.6*

#" 53#+��$#/�/: �+ )!!�*�#+� �+()$.�5�+* #" 5!4 (35%6

+#!�/ 9)/ #+(3 � �!�+* !&$�+. 5�*�.)*�#+ #" �+"()55)

*�#+: 2&$*6�$5#$�� )��&5&()*�#+ #" )+! � (35%6#�3*�/

%�$/�/*�! "#$ /� �$)( 5#+*6/: ��.)$!(�// #" 96�*6�$

)�*� )*�#+ #" *6� �55&+� /3/*�5 /6#&(! '� �#+/�!�$�!

)+ �%�%6�+#5�+#+ #$ +#*� *6� �5%#$*)+* ")�* �/ *6)*

�+�$�)/�! (35%6#�3*� )�*� )*�#+ 9�*6 �55&+#.(#'&(�+

)+! �3*#8�+� /��$�*�#+ �#&(! '� %)$*(3 $�/%#+/�'(� "#$

5�*�.)*�#+ #" �+"()55)*�#+ )+! /8�(�*)( 5&/�(� $�.�+�$

)*�#+ �+ 5!4 !3/*$#%6�� 5���: �+ ")�*� �* �/ �&$$�+*(3

)���%*�! *6)* *6� !� �(#%5�+* #" &�6�++�*3%�

5&/�&()$ !3/*$#%63 �/ ) +�* $�/&(* #" �+*�$)�*�#+/ '�*9��+

*6� %$�5)$3 .�+�*�� (�/�#+ )+! ) /�* #" �#5%�+/)*#$3

$�/%#+/�/ "$#5 ) )$�)'(� .�+�*����+ �$#+5�+*)( +�*

9#$8 J�+")+*� L �&/A).6 1DDDK:

6� /*&!3 !�/�$�'�! 6�$��+ 6)/ .�+�$)*�! /� �$)(

�5%#$*)+* "�+!�+./ 9�*6 %)$*��&()$ $�(� )+�� *# ) '�**�$

&+!�$/*)+!�+. #+ *6� %)*6#%63/�#(#.3 #" 5&/�&()$ !3/

*$#%63 �+ *6� 5!4 5#&/�: # #&$ 8+#9(�!.�� #&$ $�/&(*/

)$� *6� "�$/* *# !�5#+/*$)*� ) �#$$�()*�#+ '�*9��+

(35%6#�3*� )�*� )*�#+ )+! $�/#(&*�#+ #" 53#+��$#/�/

�+ 5!4 5���: )8�+ *#.�*6�$� *6�/� !)*) /&..�/* *6)*

�6)+.�/ #��&$$�+. 9�*6�+ *6� 5&/�&()$ *�//&� !&$�+.

!�/*�+�* %6)/�/ #" &�6�++�*3%� 5&/�&()$ !3/*$#%63

)$� �(���*�+. "&+�*�#+)( �6)+.�/ �+ *6� �55&+� /3/*�5�

96��6 &(*�5)*�(3 �#&(! '� %)$*���%)*�+. �+ *6� $�/#(&

*�#+ #" �+"()55)*�#+ )+! $�.�+�$)*�#+ #" /8�(�*)( 5&/�(�

�+ *6� 5!4 !3/*$#%6�� 5#&/�:

*���+����� ���

6� )&*6#$/ )$� .$)*�"&( *# ��+) �: �#$*�/ )+! �)$*�$) :

�(� ��$) "#$ �4��((�+* *��6+��)( )//�/*)+��: 6�/ 9#$8

$���� �! "�+)+��)( /&%%#$* "$#5 ?����7� ��?I�

2�?��� )+! 2���?:

��������

������� �: L ���?���� Q:?: J0---K �+�5)( 5#!�(/ "#$

5&/�&()$ !3/*$#%63@ )(&)'(� *##(/ "#$ *6� !� �(#%5�+* #"

*6�$)%��/: ! �4 ��4 ;����4 )� 0;<DE0;>C:�����M� Q:� ���������� �:� ������� �:?: L ���Q�� �:�:

J0---K #9+$�.&()*�#+ #" �2�1 5��� )+! %$#*��+ �+ *6�

5&/�(�/ #" %)*��+*/ 9�*6 �+"()55)*#$3 53#%)*6��/ )"*�$

*$�)*5�+* 9�*6 6�.6!#/� �+*$) �+#&/ �55&+#.(#'&(�+: ����4��� ��4 )$� DDE1-;:

���������� ?:� �������� �:� ���2�������� ?: � ��: J1DD<K

�4%$�//�#+ #" *$)+/"#$5�+. .$#9*6 ")�*#$�1 �+ !3/*$#%6��

%)*��+* 5&/�(�/ �#$$�()*�/ 9�*6 "�'$#/�/: #4 ����4 �����4 )'�11,CE11;;:

������� �: J1DD>K �+*�$"�$#+�@ '�#(#.3 )+! $#(� �+ %)*6#.�+�/�/:

3��4 ��� ��4 '"� >1E1-D:����� �:� ���?��� �:� ���2 �:2: L ������ �:�: J1DD<K ��*�

!�%�+!�+* %)*6#(#.��)( !�""�$�+��/ �+ /5##*6 5&/�(�/ )+!

/8�(�*)( 5&/�(�/ #" *6� )!&(* 5!4 5#&/�: � ��� < )����

�� >;DE><C:����� �:�:� 2����� �:� ?�??������ �: � ��: J1DDDK 3/*$#%6��

%6�+#*3%� �+!&��! �� ���� '3 )+*�'#!3 '(#�8)!� #" 5&/�(�

�E!3/*$#.(3�)+E()5�+�+ �+*�$)�*�#+: #4 ����4 *��4 "�0-DE01>:

������ �:� ��22����� �:� M��� � �: L ������� �: J1D=DK

2�'$#'()/* .$#9*6 ")�*#$ �+ *6� �4*$)��((&()$ 5)*$�4 #"

!3/*$#%6�� J5!4K 5#&/� 5&/�(�: *������ $$� >==E>D-:2���� �:2:� ���?��� �:�: L Q��2��� �:�: J1D=CK � ()5�+�+

/&'/*$)*� %$#5#*�/ 53#.�+�/�/ �+ $)* /8�(�*)( 5&/�(�

�&(*&$�/@ )+)(3/�/ #" $�%(��)*�#+ )+! !� �(#%5�+* &/�+.

)+*�!�/5�+ 5#+#�(#+)( )+*�'#!��/: ���4 ���4 ""� 11E0-:��� ��� �:� 2��� �:� ������� �:� �� ����� �: L ������� �:

J1DD;K ��.)*� � /�(��*�#+ #" 5&(*�$�)�*� � � ��(( �(#+�/ �+

+#$5)( )!&(* 5���: 6 �4 #4 ��� ��4 "$� 1,;<E1,<0:

5���8���� ��������� ��� ��������� � �������

� 0--0 �()�89�(( ����+�� �*!� ������������ # ���� � 67���������� ���8���� ��� 101E1,0 1,1

�����Q���� �:� Q�������� �:� 2������� ?: L ��� ��� �:

J1D=>K ��$�'$#/%�+)( "(&�! (35%6#�3*�/ "$#5 %)*��+*/ 9�*65&(*�%(� /�(�$#/�/ !# +#* �+�$�)/� �55&+#.(#'&(�+ #$

5�)/(�/ )+*�'#!3 %$#!&�*�#+ )"*�$ /*�5&()*�#+ 9�*6 %#8�9��!

5�*#.�+: #4 )� ���� ��4 � 1<E,-:��2��� �:?: L ������� �:�: J1DDDK ���6)+�/5/ #" $�/�/*)+��

*# %)*6#.�+�/�/ �+ 5&/�&()$ !3/*$#%6��/: ��4 ����4 ���8��4

)&� 1<<E1>C:��������� � � �:� ��� ����� 2:�:2:� �������� � :�:�: L

������ �: J1DD>K �""��*/ #" �+*�$"�$#+� &%#+ *635��

�%�*6�(�)( ��((N*635#�3*� �+*�$)�*�#+/ 5�!�)*�! '3 �4*$)

��((&()$ 5)*$�4 (�.)+!/ )+! $���%*#$/: ����4 ��� ��4 (,�0,<E0;;:

��������� � � �:� ������� �:� ������ �: L ������������ :

J1DDDK �4%$�//�#+ #" �4*$)��((&()$ 5)*$�4 (�.)+!/ )+! $���%

*#$/ �+ *6� 5&/�&()$ *�//&� )+! !$)�+�+. (35%6 +#!�/ #" 5!4

!3/*$#%6�� 5���: ����4 ��� ��4 )�� 1;,E1<1:��� �:� ���� �:� ���� �: � ��: J0---K �3# !�%�+!�+*

�+!&�*�#+ !&$�+. 53#'()/* !�""�$�+*�)*�#+ #" %0-;� ) %$#*��+

)(/# �+!&��'(� '3 �+*�$"�$#+: ��4 ����4 ���4 ",� C-0;EC-,>:�����Q� M:� ����� Q:� ����Q� M: L �Q����� Q: J1DDDK

�#$5)(�A)*�#+ #" �$�)*�+� 8�+)/� (� �( !&$�+. )$*6$�*�/ �+ )

%)*��+* 9�*6 ���8�$ 5&/�&()$ !3/*$#%63: )� ���� &"�1C0E1C;:

���M� ?:� �������� Q: L ����� : � ��: J1DDDK �+6)+��!

)&*#�55&+� )$*6$�*�/ �+ �2�� $���%*#$!�"����+* 5��� �/

�#+!�*�#+�! '3 53�#')�*�$�) �+ 2$�&+!O/ )!G& )+* )+! '3

�+�$�)/�! �4%)+/�#+ #" �)�1� 53�(#�! ��((/: #4 ��� ��4 '�� ,<-,E,<1-:

���M� ?:� �������� Q: L ������� �: J0--1K �)�1� 53�(#

%#��/�/ �+!&��! '3 �2�@ ) �(&� *# *6� %)$)!#4��)( �""��*/ #"�2�� �+ )&*#�55&+� !�/�)/� 5#!�(/: :���� ��� ��4 ""�,>CE,C1:

�� ����� �:�:� ��� �:�: L ������ �: J1DD-K �)*&$� #"

*6� 5#+#+&�(�)$ �+"�(*$)*� )+! *6� 5��6)+�/5 #" 5&/�(�!)5).� �+ G& �+�(� !�$5)*#53#/�*�/ )+! &�6�++� 5&/�&()$

!3/*$#%63: #4 )� ��4 *��4 ))� 1DDE01C:������ �:2: J0---K �$)�+ !3/*$#%6�+� +�&$#.�+�*��/ )+!

5�+*)( $�*)$!)*�#+: ����� "�4 "��4 �"� 0CCE,-C:���Q� �:�: L �������� : J1D=CK ���&%)*�#+ #" �4*$)��((&()$

5)*$�4 $���%*#$� �+*�.$�+� �/ ) �#+*$#( %#�+* "#$ 53#.�+��

!�""�$�+*�)*�#+: ���� & � <1E<C:��������� :� ������� �: L ����2�� �: J1DD,K �#+/*�*&*� �

)+! �3*#8�+��+!&��! �4%$�//�#+ #" 6&5)+ (�&8#�3*� )+*�

.�+/ )+! ��(( )!6�/�#+ 5#(��&(�/ '3 6&5)+ 53#*&'�/:

3�4 #4 ���8�4 $�� 11;0E11;D:��������� �:� ��������� �:� ���� �:�:� ?��22�� 2:�: L

���� �:Q: J1DDCK �&%%$�//� � $#(� #" � ��((/ �+ �6$#+��

�#(�*�/ #" ��(( $���%*#$ � 5&*)+* 5���: #4 67�4 ���4 �'�1C;DE1C<>:

�������� �:� �� �:�:� ?����� �:� ?���� �� : L

����������� �: J0---K ��((!�%�+!�+* "�'$#/�/ �+ *6�

5!4 !3/*$#%6�� 5#&/�: 5������� �����4 �,� ==1E=D1:

����Q� �: J1DD=K �+�5)( 5#!�(/ #" 5&/�&()$ !3/*$#%6��/:

5������� 3���4 *��4 $�� =E1>:�������� �:�:� ������Q� �:�:� ������ �:�: � ��: J0---K

*�8���� ����� �..�+!&��! 6�%)*�� .$)+&(#5) �+

5��� !�"����+* "#$ *6� �+*�$"�$#+.)55) $���%*#$ 6) �)(*�$�! %#%&()*�#+ #" 5)�$#%6).�/� (35%6#�3*�/ )+! �#+

+��*� � *�//&� ��((/: ������ ������4 "� 1=1CE1=0>:?����� �: L ������� �: J1DD<K �!4 5��� /6#9 %$#.$�//� �

9�)8+�// )+! 5&/�(� !�*�$�#$)*�#+ 9�*6 ).�: )� ��4 *��4 ")� DCE1-<:

������������ :� ������� �:�: L ������ �: J1DD<K �+�$�)/�!

!�%#/�*�#+ #" �4*$)��((&()$ 5)*$�4 �#5%#+�+*/ �+ *6� *635&/

.()+! #" 5!4 5#&/�@ �#$$�()*�#+ 9�*6 *6� 5&/�&()$ (�/�#+:#4 )� ���� ��4 &)� DE1=:

��M����M�� �:�: L Q�����Q Q:�: J0---K �6�5#8�+� %$#

!&�*�#+ '3 $)* 53#�3*�/ �4%#/�! *# �+*�$"�$#+.)55): ����4

��� ��4 )$� 1-<E11,:��������� �:�: L ������� �:Q: J0---K 6� $#(� #" !�""�$�+*

/&'/�*/ #" $�.&()*#$3 ��((/ �+ �#+*$#((�+. )&*#�55&+�*3:

� ��4 %���4 ��� ��4 "� >C>E>=,:��Q������ �: J0---K ��.&()*#$3 ��((/@ 8�3 �#+*$#((�$/ #"

�55&+#(#.�� /�("*#(�$)+��: ���� , � ;<<E;<=:�� ����Q :�: L ��� ?:�: J1D=,K � /#(�!%6)/� �55&+#

�+A35)*�� *��6+�I&� "#$ *6� �+&5�$)*�#+ #" /%���"�� )+*�'#!3/��$�*�+. ��((/: #4 ��� ��4 ���84 &(� ,-1E,-D:

���7���:�:���������� � ��:�:��������:L������������:

J1DDCK 6� �5%#$*)+�� #" 5!4 5#&/� �+ *6� %)*6#%63/�#(#.3

#" &�6�++�O/ 5&/�&()$ !3/*$#%63: 3�94 )� ���9 ����4 &&�>1-E>1C:

������Q� ?:� ���� M:� �M �����Q �:�:� ������ �:�:�

������� �:�: L ������ ?: J1D=DK 6� 5#(��&()$ ')/�/ #"5&/�&()$ !3/*$#%63 �+ *6� 5!4 5#&/�@ ) %#�+* 5&*)*�#+:

*������ �,� 1<C=E1<=-:�?����� �:�:� ���������� ������ �:� ����Q�� Q: L

� ���� �:�: J0--1K ��(%�$ J� ;�K )+! �3*#*#4�� J� =�K ��((/ %$#5#*� *6� %)*6#(#.3 #" !3/*$#%6�+!�"����+* 5&/�(�:

����4 ��� ��4 )�� 0,<E0;,:�?����� �:�:� ����� �:�:� ����Q�� Q:�:� �� ������ �:�: L

� ���� �:�: J1DDCK �3#+&�(�)$ )%#%*#/�/ �+ !3/*$#%6�� 5!45&/�(� #��&$/ '3 %�$"#$�+5�!�)*�! �3*#*#4���*3: #4 ����4

�����4 � 0C;<E0C<1:��� �:�:� ?����� �:�: L ����� : J0---K �2�� /6)%�/

�55&+� �+ )/�#+ #" *6� ��+*$)( +�$ #&/ /3/*�5 �) $�.&()*�#+

#" �6�5#8�+�/: #4 ��� ��4 '$� 0C<DE0C>=:M������ Q:� M���� Q:� ��M���� M: � ��: J0---K �55&+�

$�/%#+/� *# )!�+# �$&/!�(� �$�! )+*�.�+/ &%$�.&()*�/&*$#%6�+ )+! $�/&(*/ �+ 5�*�.)*�#+ #" 5&/�(� %)*6#(#.3 �+

5!4 5���: ! �4 ;��� :8��4 � >>DE>=-:����� �:7:� 7��� �:�:� ��� 7:2:� ��� �� ��� � ?:�:� ��� �:

L ���Q �: J1DDDK ���� 9�*6 �2�� $���%*#$ !�"����+�3 )$� (�///&/��%*�'(� *# �4%�$�5�+*)( �&*#�55&+� �3)/*6�+�) �$) �/:

#4 ��� ��4 '"� ,CC<E,C=1:

#4 5�����+������ �� ��4

1,0 � 0--0 �()�89�(( ����+�� �*!� ������������ # ���� � 67���������� ���8���� ��� 101E1,0