TRIGLISERIDA

Trigliserida merupakan ester pada gliserol dengan 3 asam lemak Dan paling berlimpah secara alami. Mereka diangkut ke dalam plasma terkait untuk apolipoprotein membentuk lipoprotein density yang sangat rendah (VLDL) Dan kilomikron. Pengukuran trigliserida digunakan untuk pemeriksaan status lipid dalam mendeteksi resiko atherosklerosis dan memonitoring lipid yang terdeteksi rendah. Studi terbaru menunjukkan bahwa kadar trigliserida yang tinggi dikombinasikan dengan peningkatan konsentrasi lipoprotein densitas yang rendah (LDL) merupakan resiko tinggi untuk penyakit jantung koroner (CHD). Kadar trigliserida yang tinggi juga terjadi dalam berbagai penyakit liver, ginjal, Dan pankreas.

Serum atau plasma trigliserida diukur Oleh kuantitas trigliserida pada semua lipoprotein yang bersama-sama diambil. Pengukuran ini secara mendasar dipengaruhi oleh konsumsi makanan berlemak. Akurasi pengukuran konsentrasi trigliserida serum dasar hanya dapat diperoleh ketika pasien Telah berpuasa 12 - 14 jam.

Langkah pertama dari metode rujukan adalah sebuah ekstraksi kloroform trigliserida dari serum untuk menghilangkan campuran larutan air yang terkandung zat pengganggu seperti glukosa dan gliserol. Langkah selanjutnya, asam silikat di tambahkan ke akstrak untuk menghilangkan phospholipid Dan trigliserida terhidrolisis dengan KOH untuk menghasilkan gliserol Dan asam lemak. Gliserol kemudian teroksidasi menjadi formaldehyde, yang membentuk sebuah hasil warna dengan asam kromotropik. Hasil ini dapat menjadi pengukuran Oleh kolorimetri pada 570 nm.

Pada metode routine, trigliserida dalam plasma atau serum merupakan pengukuran enzymatic. Percampuran reagent yang tersedia mengandung semua enzim, buffer, Dan kofaktor yang dibutuhkan untuk assay. Reagen tersebut dioptimalkan untuk sytem analitis produsen. Sebagian besar reagen kit, langkah pertama yang umum ialah sebuah lipase-mediated yang terhidrolisis pada trigliserida untuk gliserol Dan asam lemak:

1 trigliserida +3H2O------------------> 1 gliserol + 3 asam lemak

Gliserol berlanjut menjadi phosphorylated oleh glycerokinase untuk glycerophosphate, menggunakan ATP. Sebagian besar metode, untuk dihidroxiaseton Dan H2O2. H2O2 kemudian diukur Oleh metode standar, seperti peroksidase mediated kondensasi pada N-ethyl-N(2-hydroxy-3-sulfopropyl)-3,5-dimethoxy-4-fluoroanaline Dan 4-aminoantipyrine, menghasilkan reaksi berwarna biru. Metode lainnya menggunakan glycerophosphate dehydrogenase Dan NAD untuk produksi dihydroxyacetone phosphate Dan NADH. NADH ditentukan spectrophotometer pada 340 nm atau dalam reaksi yang dikatalisis Oleh diaphorase yang menghasilkan sebuah format dari pewarna tetrazolium menggunakan NADH. Formazan dapat diukur pada 500 nm.

Metode trigliserida enzymatic tidak dapat diukur phospholipid-Nya atau gula Dan sampai pada garis konsentrasi 700 mg/dL. Metodenya sangat cocok untuk automasi. Tetapi Gliserol bebas, Akan berkontribusi untuk total jumlah trigliserida yang diukur. Konsentrasi gliserol pada serum segar atau plasma biasanya tidak melebihi 100 mg/dL. Tingkatan gliserol Akan meningkat 50 - 100 fold pada hiperglikerolemia, sebuah gangguan yang jarang berhubungan dengan cacat atau kekurangan enzim glikerokinase. Gliserol bebas dapat diukur yang dijelaskan dalam uji untuk trigliserida (lihat sebelumnya), dengan kelalaian pada langkah awal lipase.

METODE

Tes Colorimetric enzymatic menggunakan gliserol-3-phosphate-oxidase (GPO).

PRINSIP

Penentuan trigliserida setelah pemisahan enzymatic dengan lipoprotein lipase. Indikatornya adalah quinoneimine yang dimana adalah di hasilkan Dari 4-aminoantipyrine Dan 4-chlorophenol Oleh hydrogen peroxide di bawah aksi catalytic pada peroxidase.

Trigliserida -------LPL-------> gliserol + asam lemak

Gliserol + ATP ------GK-----> Dihydroxyaceton phosphate + H2O2

Gliserol-3-phosphate + O2 -------GPO--------> Dihydroxyaceton phosphate + H2O2

2 H2O2 + aminoantipyrine + 4-chlorophenol --------POD---------> ineimine + HCL + 4H2O

REAGEN

Good's buffer pH 7.2 50 mmol/L

4-chlorophenol 4 mmol/L

ATP 2 mmol/L

Mg2+ 15 mmol/L

Glycerokinase (GK) 0.4 kU/L

Peroxidase (POD) 2 kU/L

Lipoprotein lipase (LPL) 2 kU/L

4-aminoantipyrine 0.5 mmol/L

Glycerol-3-phosphate-oxidase (GPO) 2 kU/L

Standard: 200 mg/dL (2,3 mmol/L)

PETUNJUK PENYIMPANAN dan STABILITAS REAGEN

Reagen Dan standar masih dalam dalam keadaan stabil hingga akhir pada indikasi bulan kadaluarsa, jika disimpan pada suhu 2-80C, terlindungi Dari cahaya Dan terhindar kontaminasi. Jangan membekukan reagen.

Catatan: ini harus disebutkan, pengukuran itu kadang-kadang tidak dipengaruhi Oleh perubahan warna, selama absorbansi reagen <0.3 pada 546 nm.

PERHATIAN Dan PENCEGAHAN

1. Reagen tersebut mengandung sodium azide ( 0,95 g/L ) sebagai bahan pengawet. Jangan ditelan! Hindari kontak dengan kulit Dan membran mukosa.

2. Mengambil tindakan pencegahan yang diperlukan untuk penggunaan reagen laboratorium.

SPESIMEN

Serum, heparin plasma atau Plasma EDTA

Stabilitas: 2 hari pada 20-250C,

7 hari pada 4-8 0C,

Pada akhir tahun pada -20 0C.

Menghindari spesimen yang terkontaminasi.

PROSEDUR UJI

BLANKO SAMPEL/STANDAR

Sampel atau Standar - 10

Dis.water 10. -

Reagent 1000 1000

Campurkan, inkubasi 20 menit pada suhu 20-28 0C Atau 10 menit pada suhu 37 0C. Membaca absorbansi kembali Dari reagen BLANKo selama 60 menit.

PERHITUNGAN

Dengan standar atau kalibrator

kebenaran untuk gliserol bebas, substrat 10 mg/dL ( 0,11 mmol/L ) Dari hasil perhitungan trigliserida.

FAKTOR KONVERSI

Trigliserida [ mg/dL ] x 0,01126 = trigliserida [ mmol/L ]

KARAKTERISTIK KINERJA

Tes telah dikembangkan untuk menentukan konsentrasi trigliserida dalam rentang pengukuran dari 1 - 1000 mg/dL ( 0,01 - 11,3 mmol/L). Ketika nilai-nilai melebihi kisaran sampel ini harus diencerkan 1 + 4 dengan larutan NaCl dan hasil dikalikan dengan 5.

SPESIFISITAS/ INTERFERENS (Gangguan)

tidak Ada gangguan yang diamati Oleh bilirubin hingga 40 mg/dL. Asam askorbat, awal gangguan dengan konsentrasi pada 6 mg/dL, awal gangguan hemoglobin dengan konsentrasi 250 mg/dL.

SENSIVISITAS/ BATAS DETEKSI

Batas deteksi terendah adalah 1 mg/dL.

KISARAN REFERENSI

Diinginkan : < 200 mg/dL (Puasa) (2,3 mmol/L)

Batas tertinggi : 200-400 mg/dL ( 2,3- 4,5 mmol/L)

tinggi : >400 mg/dL (4,5 mmol/L)

INTERPRETASI KLINIS

Studi epidemiologi Telah mengamati bahwa kombinasi Dari plasma trigliserida >180 mg/dL ( > 2.0 mmol/L ) Dan HDL - kolestrol < 40 mg/dL ( 1.0 mmol/L ) memprediksi resiko tinggi Dari CDH. Batas Tingkatan ( > 200 mg/dL) harus selalu dianggap berhubungan dengan faktor resiko lainnya Untuk CHD.