2.4 . Persiapan ekstrak ACY encer

Sampel beku dari sampel kentang yang sudah diblanching dan yang sudah

dihomogenisasi dengan nanopure water ( 1:1 v / w ) aga dapat menjadi konsistensi yang

seragam , disaring melalui 4 - lapisan kain tipis dan disentrifugasi menggunakan kondisi yang

sama seperti yang dijelaskan di atas . Supernatan yang jernih dikumpulkan , dan alikuot ekstrak

diencerkan dalam buffer pH yang berbeda ( Tabel 1 ; Robinson , 1986) . Rasio sampel / buffer

yang digunakan adalah sedemikian rupa sehingga penyerapan maksimum terlihat pada ekstrak

saat pH 1 adalah sekitar 0,7 . Rasio ini digunakan untuk mempersiapkan larutan dengan pH lain .

Selain itu, sodium azide ( 0,1 % g / v ) ditambahkan ke semua larutan ACY dari pengawet . pH

akhir dari larutan diukur dan disesuaikan dengan menambahkan beberapa tetes NaOH ( 4-6 M )

atau HCl ( 1,5-4 M ) . ekstrak pewarna komersial disiapkan dengan cara yang sama . semua

ekstrak kemudian didiamkan untuk menyeimbangkan pada suhu kamar dalam larutan buffer

selama 1 jam sebelum dilakukan pengukuran (dimasukkan untuk menghindari kebingungan

mengenai pengambilan sampel waktu , lihat di bawah ) . Ekstrak ACY encer kemudian ditransfer

dan ditutup menjadi 8 mL botol kaca bening ( i.d 1 cm ) .

2.4.1 . Persiapan ekstrak ACY kentang encer di tinctorial strengths yang berbeda

Sampel kentang yang dihomogenisasi dengan pH 1 buffer (1:1 v / w ) dan pH yang telah

disesuaikan menjadi 3 dengan menggunakan beberapa tetes 1,5 N HCl . Ekstrak kemudian

disentrifugasi seperti dijelaskan di atas dan supernatan dikumpulkan dalam 8 mL botol kaca

bening (i.d 1 cm). Warna visual dari ekstrak pada berbagai tinctorial strengths ( TS ) dievaluasi

dengan spektrofotometer dan colorimeter . TS dari ekstrak dihitung dari absorbansi maksimum

dalam kisaran yang terlihat dikali faktor pengenceran ( Wrolstad , 2000). sampel yang dianalisis

dalam tiga ulangan .

2.5 . Atribut stabilitas termal dan warna visual dari ekstrak ACY encer

Stabilitas termal dari ekstrak dievaluasi dengan Hewlett Packard 8452A photodiode array

spectrophotometer (Agilent Technologies; Palo Alto, CA) dengan mengukur perubahan dalam

penyerapan ( ABS ) pada panjang gelombang yang berbeda dan membandingkan retensi warna

( % perubahan ABS ) pada panjang gelombang maksimum yang terlihat ( λmax ) ( Tabel 2 ) .

pengukuran pada 700 nm diambil untuk mengoreksi kekeruhan . Indeks Browning, pengukuran

perubahan senyawa browning, ditentukan dari (ABS420 - ABS700) / (ABS λmax - ABS700) =

( Jackman et al . , 1987) . Sampel dianalisis tiga kali ulangan. Selain itu, perubahan dalam

warna visual dinilai dengan colorimeter Minolta CT – 310 ( Konica Minolta Inc , Mahwah , NJ )

dengan mengukur nilai Hunter L * C * Ho ( menggunakan iluminan C ) . Meskipun warna dapat

dilaporkan dalam sistem yang berbeda , parameter penerangan ( L * ) , kroma ( C*=√a x2+b x2 )

dan hue ( Ho= arctan b * / a * ) digunakan karena koordinat L * a * b *yang paling umum tidak

menyatakan warna dan kroma secara langsung dan sulit untuk menafsirkan secara mandiri

( McGuire , 1992) . Pengaruh pH dievaluasi selama 4 minggu dengan menyimpan ekstrak pada

kondisi pH yang berbeda ( pH 1-10 ) , di suhu kamar ( 25 oC ) dan dalam gelap .

Pengaruh suhu pada stabilitas dan warna visual dari ekstrak dievaluasi dalam ekstrak

pada pH 3 . Degradasi termal dievaluasi pada 25 , 50 , 80 dan 98 oC setelah penyimpanan

ekstrak di air-circulating oven dalam kondisi gelap . Pengukuran diambil pada waktu 0 jam, 2

jam , 12 jam , 1 hari , 2 hari , 3 hari , 1 minggu , 2 minggu dan 4 minggu , untuk semua ekstrak ,

kecuali yang disimpan pada 98 oC, dilakukan pada 0 , 30 , 60 , 90 dan 120 menit . Periode

penyimpanan berbeda untuk setiap perlakuan termal karena perbedaan kecepatan degradasi ACY

. Warna polimer ekstrak pada pH 3 ditentukan sesuai Wrolstad ( 1976) . Secara singkat , 0,2 mL

dari 20 % K2O5S2 ditambahkan ke 2,8 mL ekstrak . Sebagai kontrol, 0,2 mL air ditambahkan ke

sampel 2,8 mL yang lain. Pembacaan absorbansi pada 420 nm , λmax, dan pada 700 nm ( untuk

mengoreksi kekeruhan ) direkam menggunakan spektrofotometer . Densitas warna dihitung dari

¿ x DF (dilution factor)dari sampel air yang diberi perlakuan dan warna polimer dihitung dari ¿

x DF dari sampel sulfit-bleached . % warna polimer dihitung dari ( warna polimer / densitas

warna ) x 100 .

Urutan pertama parameter degradasi termal dari berbagai kondisi yang diuji ditentukan

dari persamaan : ABS/ABS0 = e-kt . Ketergantungan suhu dari nilai k ditentukan dari persamaan

Arrhenius : kT = K0e-Ea/RT , di mana Ea adalah energi aktivasi . Nilai half –life dihitung dari t1/2 =

ln ( 2 ) / kT , nilai D dihitung dari D = ln ( 10 ) / kT ,nilai z dihitung dengan memplot log D vs T ,

dan nilai Q10 dihitung dari Q10 = 1010 / Z. Perubahan nilai-nilai L * , C * , dan Ho

dimodelkan menurut kinetika orde-nol untuk parameter L * dan Ho ( L * atau Ho = kt ) dan

menurut orde pertama kinetika degradasi untuk parameter C * .

2.6 . Grafik dan analisis statistik

Ringkasan statistik ( mean dan standar deviasi) dan grafik yang diperoleh dengan

menggunakan Microsoft® Excel 2000 ( Microsoft Corp , 1999) . Regresi linear dan non - linear

diperoleh dengan menggunakan GraphPad Prism versi 4.00 untuk Windows ( GraphPad

Software , San Diego , CA ) . Analisis statistik dilakukan dengan prosedur GLM dari SAS®

System for Windows ( version 8.1 ) ( SAS Institute , Inc , 1999) . Mean dibandingkan dengan

menggunakan Duncan’s Multiple Range Test ( P < 0,05 ).