PRAKTIKUM MIKROBIOLOGI

Laboratorium Fisiologi dan Biokimia

Fakultas Peternakan dan Pertanian

Universitas Diponegoro Semarang

Percobaan 1Sterilisasi

Tujuan : Mengetahui bagaimana cara mensterilkan alat dan bahan

Materi :Oven, autoclave, cawan petri, pipet hisap, erlenmeyer, kertas pembungkus, kapas, alkohol dan alumunium foil

Percobaan 1Metode Sterilisasi

Sterilisasi kering 1. Menyiapkan pipet, cawan petri, dan erlenmeyer sesuai kebutuhan.2. Membersihkannya dengan menggunakan kapas yang dibasahi dengan alkohol.3. Membungkus cawan petri dan pipet dengan kertas pembungkus. 4. Memasukkan alat-alat tersebut ke dalam oven selama 2 jam pada suhu 160oC atau 1

jam pada suhu 170oC dan mengeluarkannya setelah selesai, kemudian menunggu hingga dingin sebelum digunakan.

Sterilisasi basah 1. Memasukkan medium yang akan disterilisasi ke dalam erlenmeyer atau tabung

reaksi dan menutupnya dengan rapat menggunakan kapas atau aluminium foil. 2. Memasukkan erlenmeyer ke dalam autoclave dan menutupnya serta

menyalakannya.3. Menunggu hingga manometer dan thermometer menunjukkan suhu 121oC dan 2 atm

selama 15 menit.4. Membuka autoclave dan mengeluarkan medium. Khusus untuk medium agar, supaya

tidak membeku maka dimasukkan dalam inkubator bersuhu 55oC sebelum digunakan.

Percobaan 2Pembuatan MediumTujuan :Mengetahui cara membuat medium NA dan APDA

Bahan :Kentang, agar-agar, dextrose, aquades, asam tartarat, roti afkir.

Alat : Cawan petri, gelas beker, autoclave, waterbath, kertas saring, piasu, erlenmeyer.

Percobaan 2Pembuatan MediumPembuatan medium Nutrient Agar (NA)1. Tambahkan 2,3 gram agar dalam 100 ml larutkan dalam aquades. 2. Mengaduk atau mencampur menggunakan pengaduk magnetic stirrer dan melakukan

sterilisasi menggunakan autoclave.

Pembuatan medium Potato Dextrose Agar (PDA) dan Acidified Potato Dextrose Agar (APDA) 1. Mengupas kentang, bilas dengan air, mengiris kentang dengan ukuran kira-kira 1x1x1cm,

menimbangnya sebanyak 50 g kemudian memasukkan kentang dalam beker glass dan menambahkan 100 ml aquade.

2. Memanaskan beker glass dalam w selama 30 menit, menyaringnya menggunakan kain saring yang bersih.

3. Membuat medium PDA dengan komposisi 100 ml filtrat kentang, 2 gr dextrose, 2 gr agar pH 6,8 - 7,2.

4. Mensterilkan medium PDA larutan asam tartarat 10% dalam autoclave pada suhu 121oC, 2 atm selama 15 menit.

5. Masukkan medium PDA dan larutan asam tartarat 10% ke dalam inkubator suhu 50ºC tambahkan dengan pipet ukur steril larutan asam tartarat 10% ke dalam medium PDA secara aseptis sehingga menjadi medium APDA.

Percobaan 2Pembuatan Medium

PENGENCERAN BIAKAN MIKROBA

Cawan petri hasil pengenceran dimasukkan inkubator 24 jam untuk membiakkan bakteri

Percobaan 2Pembuatan Medium

PEMBUATAN BIAKAN MIKROBA

Percobaan 3Perhitungan Cawan

Tujuan :Mengetahui cara menghitung jumlah mikroba

Materi :Medium dalam cawan petri, penghitung, colony counter.

1. Mengeluarkan cawan petri dari inkubator setelah diikubasi 24 jam.

2. Meletakkan cawan petri di colony counter dan menghitung jumlah koloni antara 30 – 300.

3. Beberapa koloni yang bergabung menjadi satu merupakan suatu kumpulan koloni yang besar dimana jumlah koloninya diragukan, dapat dihitung satu koloni.

4. Suatu deretan (rantai) koloni yang terlihat sebagai suatu garis tebal dihitung sebagai satu koloni.

5. Pelaporan hasil perhitungan menggunakan Standard Plate Count (SPC)

Percobaan 3Metode Perhitungan Cawan

Percobaan 4Pewarnaan Gram

Tujuan :Mengetahui cara pewarnaan gram dalam pengamatan mikroba menggunakan mikroskop

Alat :Kaca objek, bunsen, loop, dan mikroskop.

Bahan :Larutan Gram (A, B, C, dan D), biakan bakteri Lactobaccilus bulgaricus, biakan Escherachia coli.

Percobaan 4Pewarnaan GramKultur cair, Menyebarkan satu atau lebih loop kultur cair pada kaca objek sehingga mencapai diameter kira-kira 1 - 1,5 cm2 lalu mengeringkan atau fiksasi dengan nyala api kecil dan diamati dengan mikroskop.

Kultur padat, Meneteskan 1 - 2 tetes air pada kaca objek dan mengambil sejumlah kecil mikroba menggunakan ujung loop, kemudian menyebarnya pada air diatas kaca objek sehingga mencapai diameter 1 - 1,5 cm2. Mensuspensi preparat yang terbentuk tidak boleh terlalu keruh untuk mencegah terbentuknya preparat yang terlalu tebal, memfiksasi dengan nyala api kecil. Meneteskan pewarna violet kristal (gram A) diatas preparat dan mendiamkan selama 1 menit. Membilas dengan aquades dengan memegang kaca objek pada posisi miring. Membuang sisa air yang tertinggal dan menetesi menggunakan larutan lugol (gram B) selama 2 menit. Membilas dengan aquades, kemudian menghilangkan warna dengan gram C sampai warana biru tidak luntur lagi. Membilasnya kembali dengan aquades, kemudian ditetesi dengan safranin (gram D) selama 30 detik. Bilas dengan mengunakan air dan keringkan dengan menggunakan tisu, periksa dibawah mikroskop.

BAHAN YANG HARUS DIBAWA

Kentang, Youghurt, Susu UHT, Usus, Kefir, Susu segar, Hati sapi, Keju, Paha ayam, Sayap ayam

Terima Kasih