Deteksi kanker prostat dengan menggunakan metilasi spesifik PCR.doc

8/17/2019 Deteksi kanker prostat dengan menggunakan metilasi spesifik PCR.doc

1/8

Detection of Prostate Cancer Using Methylation-Specific PCR

Oleh :

Nur Izah Ameta G99141143

Medika Putri P.S G99131051

Pembimbing

Dr. Pradipto Subiyantoro drg. Sp. !M

"#P$%&'#R$$% "(&%&" &(MU )&)& D$% MU(U'

*$"U('$S "#DO"'#R$% U%S+RSUD DR. MO#,$RD&

SUR$"$R'$

/0


2/8

Dete1si 1an1er prostat dengan mengguna1an Metilasi-Spesifi1 PCR

Hypermethylasi dari prmtr !lutathi"e S#tra"s$erase P1 %GS&P1' adalah

peru(aha" )NA ya"! seri"! ter*adi pada ka"ker prstat. +ami me"!!u"aka" metilasi

spesi$ik P,- %MSP' dari (er(a!ai (aha" aal kli"is u"tuk me"yelidiki prmtr

hypermethylasi pada pasie" de"!a" ka"ker prstat da" pasie" k"trl de"!a" (e"i!"

prstati/ hyperplasia %PH'. Pe"!!u"aa" IAamp pada sistem islasi )NA da"

HtStar&a2 )NA plimerase me"!hasilka" se"siti$itas ya"! ti"!!i dalam u*i MSP

ya"! spesi$ik u"tuk pe"elitia" i"i.

+a"ker prstat adalah ka"ker ya"! pali"! seri"! ter*adi pada laki#laki (arat. )eteksi

di"i sa"!at pe"ti"! u"tuk terapi ya"! e$ekti$. Metde deteksi ya"! umum di!u"aka"

adalah pemeriksaa" rektal da" pe"!ukura" prstate#spe/i$i/ a"ti!e" %PSA' dalam

serum. Namu" pe"e"tua" dari ti"!kat PSA sa*a tidak /ukup se"siti$ ataupu" spesi$ik

u"tuk dia!"sis pasti ka"ker prstat. Pe"!em(a"!a" metde mlekuler ya"! e$ekti$

dapat mem(erika" dia!"sis di"i ka"ker prstat.

Peru(aha" !e"etik ya"! pali"! seri"! pada karsi"ma prstat adalah hypermethylasi

dari prmtr !lutathi"e S#tra"s$erase P1 %GS&P1'. GS&P1 terli(at dalam reaksi

detksi$ikasi i"traseluler da" hasil hypermethylasi (erupa hila"!"ya ekspresi !e".

GS&P1 adalah ka"didat !e" tumr supresr pada ka"ker prstat meskipu" i"aktiasi

leh hypermethylasi (elum ter(ukti memiliki pera" ter*adi"ya pe"yakit. Namu"

hypermethylasi ter(ukti ditemuka" pada 906 pe"derita karsi"ma prstat termasuk

tahap aal pe"yakit maupu" ya"! (elum terdeteksi pada *ari"!a" "rmal atau dalam

*ari"!a" prstat pada pe"derita PH %e"i!" Prstati/ Hyperplasia'. 7leh kare"a itu

GS&P1 adalah pe"a"da ya"! (erpte"si da" (er!u"a u"tuk me"deteksi serta

me"e"tukka" stadium mlekul ka"ker prstat.

Pada )NA tumr i"traseluler da" ekstraseluler telah terdeteksi dalam /aira" tu(uh

pasie" ka"ker. 7leh kare"a itu )NA ya"! terislasi dari (er(a!ai sampel kli"is

1


3/8

pe"derita ka"ker prstat da" k"trl de"!a" (e"i!" prstati/ hyperplasia dima"a

me"eliti status metilasi prmtr !e" GS&P1 ya"! dilakuka" leh metilasi spesi$ik

P,-. IAamp )NA Mi"i kit darah da" IAamp )NA Mi"i kit ya"! di!u"aka"

u"tuk islasi )NA da" MSP dilakuka" de"!a" me"!!u"aka" plimerase HtStar&a2

)NA dari IAG8N. Pe"!!u"aa" sistem IAG8N me"!hasilka" pe"!em(a"!a" alat

tes MSP ya"! sa"!at se"siti$ da" spesi$ik. Sel#sel !a"as ya"! terdeteksi tidak ha"ya

dalam *ari"!a" da" sampel tetapi *u!a dalam plasma da" serum ya"! me"!a"du"!

*umlah ya"! *auh le(ih re"dah dari )NA.

'e1nologi Metilasi-Spsifi1 PCR

)i ti"!kat eukaritik )NA metilasi ha"ya pada sitki" terte"tu terletak 5 u"tuk

!ua"si" a. Hal i"i ter*adi terutama di daerah ya"! kaya G, ya"! dike"al se(a!ai

pulau ,pG. :"tuk mem(edaka" keadaa" uruta" metilasi MSP (er!a"tu"! pada

di$ere"sial mdi$ikasi kimia sitsi" residu dalam )NA. Pe"!(ata" de"!a" "atrium

(isul$it me"!k"ersi sitsi" residu unmethylated ke dalam urasil mem(iarka"

sitsi" methylated tidak (eru(ah. Mdi$ikasi i"i me"/iptaka" ra"!kaia" )NA ya"!

(er(eda u"tuk )NA methylated da" unmethylated . Primer P,- dapat dira"/a"!

sehi"!!a dapat di!u"aka" u"tuk mem(edaka" a"tara uruta" ya"! (er(eda. )ua

pasa"! primer dira"/a"!; satu set de"!a" uruta" a"il u"tuk tidak (eru(ah sitsi""ya

%methylated dalam )NA !e"mik' da" ya"! lai""ya ditetapka" de"!a" uruta" a"il

de"!a" diru(ah sitsi" %unmethylated dalam )NA !e"mik'. Per(a"di"!a" hasil P,-

me"!!u"aka" dua pasa"! primer me"!u"!kapka" keadaa" metilasi )NA.


4/8

Gam(ar 1. Pada ra"!kaia" dilusi sel =N,aP ya"! dilarutka" ke dalam sampel darah

dari d"r ya"! sehat de"!a" alel GS&P1 u"methylated. Prduk $lurese" (iru

%99(p' (erasal dari prmtr u"methylated. Pa"*a"! )NA pe"a"da %-7> 500

$lurese" merah' ya"! di!u"aka" ?5 %pe"u"*uk' da" 100 (p. =; Sel =N,aP mur"i

,; =apisa" (u$$y /at mur"i. A"ak Pa"ah; pita $rekue"si ya"! sa"!at samar tidak

terdeteksi dalam (e(erapa eksperime" k"trl. Am(a"! se"sitiitas ya"! di!u"aka"

adalah @00 sel =N,aP.

Gam(ar @. )ata dari @@ da" @? pasie" dalam ta(el 1 da" @ dari k"trl de"!a" PH

ditu"*ukka" pada %pasie" 4 da" 1'. Prduk $lurese" (iru %9@(p' (erasal dari

prmtr GS&P1 hypermethylated da" prduk $lurese"s hi*au %99(p' (erasal dari

3


5/8

prmtr unmethylated . S; SerumB P=; PlasmaB H@7; air. Alel Methylated GS&P1

selalu disertai de"!a" alel unmethylated me"!k"tami"asi sum(er ""mali!"a"t.

I"sel; )NA dari sel =N,aP ha"ya de"!a" alel methylated .

!ahan dan Cara

Sampel terdiri dari 33 pasie" de"!a" karsi"ma prstat da" @C pasie" de"!a" (e"i!"

prstati/ hyperplasia %PH' disertai i"$rmed /"se"t. Sampel ya"! (erasal dari

lapisa" (u$$y /at e*akulasi da" serum atau plasma ya"! dikumpulka" kemudia"

)NA diislasi me"!!u"aka" IAamp )NA darah Mi"i kit atau IAamp )NA Mi"i

kit %ya"! se(elum"ya (er"ama *ari"!a" IAamp kit'. Sampel (erasal dari *ari"!a"

prstat ya"! diam(il pada pasie" ya"! me"*ala"i perasi PH atau ka"ker prstat

da" )NA diislasi dari *ari"!a" se!ar#(eku me"!!u"aka" IAamp )NA Mi"i +it.

)NA *u!a diislasi dari sel =N,aP !aris sel ka"ker prstat ya"! diketahui (ersi$at

(ialel prmtr GS&P1 hypermethylasi da" sel =N,aP die"/erka" kedalam sampel

darah e"a dari d"r ya"! sehat %u"tuk pe"!u*ia" se"sitiitas'.

MSP u"tuk me"deteksi GS&P1 hypermethylasi ya"! dilakuka" seperti di*elaska"

diatas. Se/ara si"!kat reaksi dilakuka" dalam lume reaksi 10 Dl me"!!u"aka"

plymerase HtStar&a2 )NA da" C pml masi"!#masi"! primer. Primer ya"!

(er$lurese"si de"!a" la(el da" khusus u"tuk methylated atau unmethylated pada

prmtr GS&P1. Primer spesi$ik u"tuk prmtr ya"! methylated ; 5E#CFAM#&&,

GGG G&G &AG ,GG &,G &,#3E da" 5E#G,, ,,A A&A ,&A AA& ,A, GA, G#

3E. Primer spesi$ik u"tuk prmtr u"methylated; 5E#H8>#GA& G&& &GG G&A

G&G G&& G&E da" 5E#,,A ,,, ,AA &A, &AA A&, A,A A,A#3E. +"disi

MSP adalah; de"!a" suhu dari 95

, 15 me"it; diikuti leh 55 siklus dari 95

, 30detik; 59, 30 detik; ?@, 30 detik diikuti leh ?@, me"it %ekste"si akhir'.

Prduk dia"alisis de"!a" !el pliakrilamid 56 seperti ya"! di*elaska" pada tek"l!i

MSP.

2asil dan Dis1usi

4


6/8

)NA tumr dalam /aira" tu(uh selalu disertai de"!a" )NA ya"! "rmal dari sel#sel

""mali!"a"t. 7leh kare"a itu me"!u*i se"sitiitas u*i MSP de"!a" me"!e"/erka"

sel =N,aP %ter(ukti me"a"!!u"! hypermethylated alel prmtr GS&P1 sa*a' dalam

sampel darah dari d"r ya"! sehat. )NA diislasi dari lapisa" (u$$y /at @00Dl da"

MSP me"deteksi @00 sel#sel ka"ker prstat a"tara @@ 10? leuksit ""mali!"a"t.

&a(el 1. Prmtr hypermethylasi pada pasie" de"!a" ka"ker prstat

Stadium

%&NM'

Nmr

Pasie"


7/8

&3 (N0M0G3 15 M : M N)

&3 N1M0G3 11 : : : N)

&3 NM0G3 N) : : M

&4 N0M0G3 @1 M M M N)

&4 N1M0G3 3@ N) : M N)

&4 NM0G3 10 N) M M N)

&4 NM0G3 1 M : M N)

&4 NM0G3 1 N) M M N)

&4 NM0G3 30 N) : M N)

M1 @9 M : M N)

M1 @C M M M N)

M1 1@ N) : M N)

M1 @0 M M M N)

M1 @ N) M M N)

M1 33 N) M M N)

M1 13 M M M N)

+etera"!a"; Pe"ilaia" tumr kele"*ar !etah (e"i"! stadium metastasis %&NM'

me"urut klasi$ikasi :I,, 199?. M1; Metastasis ka"ker prstat M; GS&P1 prmtr

Hypermethylasi :; GS&P1 prmtr u"methylated %#';tidak ada )NA ampli$ia(le (aik u"tuk hypermethylated atau u"methylated N); %"t d"e' (elum dilakuka".

Hasil a"alisis MSP pada (er(a!ai sampel kli"is dira"!kum dalam &a(el 1 da" /"th

data dari @ pasie" ditu"*ukka" pada !am(ar @. )ari sampel ya"! diu*i GS&P1

prmtr hypermethylasi ditemuka" pada 946 dari sampel *ari"!a" 306 dari sampel

6


8/8

lapisa" (u$$y /at ?@6 dari sampel plasma atau serum da" 506 dari e*akulasi.

Se(alik"ya GS&P1 hypermethylasi tidak ditemuka" pada setiap sampel ya"! diu*i

dari @@ pasie" PH %data tidak ditampilka"'. 7leh kare"a itu :*i MSP 1006

spesi$ik.

-P,- ampli$ikasi m-NA dari PSA dalam e*akulasi da" pem(asuha" uretra tidak

(isa mem(edaka" a"tara sampel "rmal da" !a"as. Namu" pada u*i MSP tampak"ya

le(ih se"siti$ kare"a tidak ha"ya terdeteksi GS&P1 hypermethylasi dalam plasma

atau serum sampel tetapi *u!a di (e(erapa sampel e*akulasi. )eteksi hypermethylasi

dari 306 sampel lapisa" (u$$y /at *u!a me"u"*ukka" (aha u*i MSP sa"!at se"siti$

kare"a )NA tumr dari sel#sel !a"as se(a!ia" ke/il lapisa" (u$$y /at ya"! (a"yak

die"/erka" de"!a" )NA dari leuksit ya"! "rmal. Hypermethylasi dari prmtr

GS&P1 adalah peristia ka"ker spesi$ik :*i i"i mu"!ki" me"!hi"dari si"yal psiti$

palsu ya"! terkada"! ditemuka" dalam tek"ik -P,-.

"esimpulan

Pe"!!u"aa" sistem islasi IAamp )NA da" )NA Plymerase HtStar&a2

me"!hasilka" u*i MSP ya"! sa"!at se"siti$ da" spesi$ik. :*i i"i (erhasil terdeteksi

hypermethylasi dari GS&P1 dari prmtr GS&P1 tidak ha"ya dari sampel *ari"!a"

pada pasie" de"!a" ka"ker prstat tetapi *u!a dalam prprsi ya"! ti"!!i dari sampel

serum da" plasma ya"! *umlah isi"ya *auh le(ih re"dah dari )NA.

7

Deteksi kanker prostat dengan menggunakan metilasi spesifik PCR.doc

Documents

Transcript of Deteksi kanker prostat dengan menggunakan metilasi spesifik PCR.doc