Chang Medium ® C For Human Amniotic Fluid Cells

Chang Medium® CFor Human Amniotic Fluid Cells

Catalog No. T101-019, T101-059, C100+C106, C101+C108

ENGLISH

INTENDED USEChang Medium C may be used for the following applications: 1. the primary culture of amniotic fluid cells 2. growing passaged amniotic fluid cells 3. the culture of bone marrow cells 4. solid amnion tissue from chorionic villi sampling.

THIS MEDIUM HAS BEEN DESIGNED FOR USE IN BOTH OPEN (CULTURES EQUILIBRATED WITH A 5% CO2 ATMOSPHERE) AND CLOSED CULTURE SYSTEMS (CULTURES FLOODED WITH 5% CO2AND INCUBATED WITH THE CULTURE VESSELS TIGHTLY CAPPED).

Precaution: Do not use Chang Medium C components beyond the expiration date indicated on the individual labels.

PRODUCT DESCRIPTION Chang Medium® C was developed for the primary culture of human amniotic fluid cells for use in karyotyping and other antenatal genetic testing. THIS FORMULA HAS BEEN OPTIMIZED FOR BOTH OPEN AND CLOSED SYSTEMS.

STORAGE AND STABILITY Store Chang Medium C Frozen Supplement at below -10ºC, Chang Medium C Lyophilized Supplement at 2ºC to 8ºC, Chang Medium B Basal at 2ºC to 8ºC, and complete Chang Medium C at 2ºC to 8ºC. The Chang Medium B Basal must not be frozen.

Protect from fluorescent light.

See individual component bottle labels for specific expiration dates. Complete Chang Medium C may be stored at 2ºC to 8ºC for 10 days before use without affecting its function. Storage for longer than 10 days is not recommended.

DO NOT FREEZE COMPLETE CHANG MEDIUM C.

COMPONENTS mg/LSalts …………………………………………….. 7900Dextrose ………………………………………… 1400Amino Acids ………………………………………1000Polypeptides ………………………………………. 66Vi tam ins ……………………………………….. . 22Deoxyr ibonuc leos ides ………………………… 21Ribonuc leos ides ………………………………. 20Sodium Pyruvate ……………………………….. 110Other Components ……………………………… 8Hormones and Trace Elements………… 0.0025Steroid Hormones ………………………….. 0.0013Newborn Calf Serum ……………………….. 6% v/vFetal Bovine Serum ………………………… 6% v/v

PRECAUTIONS AND WARNINGS This device is intended to be used by staff trained in procedures that include the indicated application for which the device is intended.

PREPARATION FOR USE Lyophilized Supplement 1. Allow Chang Medium C Lyophilized Supplement to

equilibrate to room temperature.

2. Using aseptic techniques, add 10 mL or 50 mL of sterile distilled water to the lyophilizate. The 10 mL vial is for 90 mL Chang Medium B Basal; the 50 mL vial is for 450 mL Chang Medium B Basal.

3. Swirl the vial gently to effect complete solution. (NOTE: It may be necessary to incubate the vial at 37ºC for 5 to 10 minutes to completely dissolve the supplement).

4. Aseptically transfer the entire contents of the reconstituted Chang Medium C Supplement to the bottle of Chang Medium B Basal.

5. Mix the complete Chang Medium C well by swirling the bottle.

6. Add L-Glutamine, 10.0 mL/L (200 mM). Antibiotics may be added if desired.

DEUTSCH

BESTIMMUNGSZWECKChang Medium C kann für folgende Methoden eingesetzt werden:1. Primär Kultur von Fruchtwasserzellen2. Zuechten passagierter Fruchtwasserzellen3. Zuechtung der Kochenmarkzellen4. Amniongewebe aus Chorion Villi

Probenentnahme.

Dieses Medium wurde hergestellt für die Verwendung in geoeffnete Kultursystem ( in dem die Kul ture ist equi l ibr ier t mi t eine 5% CO2 Atmosphaere), oder fuer ein geschlossenes Kulturesystem (in dem die Kultur ueberschwemmt mit 5% CO2 und ausgebruetet in einem Behaelter, der fest mit einer Kappe bedeckt ist).

Achtung: Chang Medium C sollte nicht über das Verfallsdatum (siehe Etikett) hinaus verwendet werden.

PRODUKTBESCHREIBUNGChang Medium® C wird verwendet zur Primärkultur von humanen Fruchtwasserzellen, Karyotyping und anderen pränatalen genetischen Testmethoden. Diese Zusammensetzung wurde optimiert für beide die offene und geschlossene Systeme

LAGERBEDINGUNGEN UND STABILITÄTBewahren Sie Chang Medium C Frozen Supplement unter 10°C, Chang Medium C Lyophilized Supplement bei 2ºC bis 8ºC, Chang Medium B Basal bei 2ºC bis 8ºC, und Complete Chang Medium C bei 2ºC bis 8ºC. Chang Medium B Basal musste nicht gefroren werden.

Vor fluoreszierendem Licht schützen.

Die spezifische Verfalldaten sind auf die einzelne Flaschenetikett gezeigt. Complete Chang Medium C kann an 2ºC zu 8ºC bis 10 Tage vor Gebrauch aufbewahrte werden. Aufbewahrung länger als 10 Tage wird nicht empfohlen.

FRIEREN SIE NICHT COMPLETE CHANG MEDIUM C.

BESTANDTEILE mg/LSalze ..................................................................7900Dextrose ....................................................................1400Aminosäuren .............................................................1000Polypeptide .....................................................................66Vitamine ..........................................................................22Deoxyribonukleoside .....................................................21Ribonukleoside ..............................................................20Natrium Pyruvat ...........................................................110andere Komponenten ......................................................8Hormone und Spurenelemente ...............................0.0025Steroid Hormone .....................................................0.0013Neugeborene Kalb Serum .......................................6% v/vFoetal Rinder-Serum ...............................................6% v/v

VORSICHTSMASSNAHMEN UND WARNUNGENDiese Vorrichtung ist für die Anwendung durch Personal vorgesehen, das in Verfahren ausgebildet wurde, welche die für diese Vorrichtung angegebene zugelassene Anwendung beinhalten.

VORBEREITUNGLyophilisierte Ergänzung (Lyophilized Supplement)1. Chang Medium C Lyophilized Supplement sollte beim

Raumtemperatur equilibriert werden.

2. Mit aseptischen Tekniken, fuegen Sie 10 mL oder 50 mL von steriles destilliertes Wasser zum lyophilisierten Medium hinzu. Die 10 mL Phiole ist fuer das 90 mL Chang Medium B Basal. Die 50 mL Phiole ist fuer das 450 mL Chang Medium B Basal.

3. Wirbeln Sie die Phiole leicht um eine komplete Loesung zu ergeben. (ANMERKUNG: Es kann notwendig sein, die Phiole an 37ºC fuer 5 bis 10 Minuten auszubrüten, damit vollständig die Ergänzung aufzulösen.

4. Bringen Sie den gesamten Inhalt des wiederhergestellten Chang Medium C Supplement auf die Flasche von Chang Medium B basal.

5. Wirbeln Sie die Flasche, damit das Complete Chang Medium C gruendlich gemischt ist.

ITALIANO

SCOPOIl Chang Medium C può essere usato per le seguenti applicazioni:1. colture primarie di cellule di liquido amniotico2. colture secondarie di cellule di liquido amniotico3. colture di cellule di midollo osseo4. tessuto amniotico da villi coriali

QUESTO TERRENO PUO’ ESSERE USATO SIA IN SISTEMI APERTI (COLTURE EQUILIBRATE IN ATMOSFERA CON IL 5 % DI CO2) CHE IN SISTEMI CHIUSI (COLTURE SOTTO FLUSSO CON IL 5% DI CO2E INCUBATI IN SUPPORTI CHIUSI ERMETICAMENTE).

Precauzioni: Non usare i componenti del Chang Medium C dopo la data di scadenza indicata sull’etichetta.

DESCRIZIONE DEL PRODOTTOChang Medium® C è stato sviluppato per colture primariedi cellule di fluido amniotico umano per la determinazione del cariotipo ed altri test genetici prenatali. QUESTA FORMULA È STATA OTTIMIZZATA SIA PER SISTEMI APERTI CHE CHIUSI.

ISTRUZIONI PER LA CONSERVAZIONEConservare il Chang Medium C Frozen Supplemento al di sotto del 10°C, il Chang Medium C Supplemento Liofilizzato, il Chang Medium B Basale e il Chang Medium C completo (liofilo ricostituito + basale) a 2° - 8° C. Il Chang Medium B Basale non deve essere congelato.

Proteggere da luce fluorescente.

STABILITÀFar riferimento alle etichette dei singoli componenti per le date di di scadenza specifiche. Il Chang Medium C completo può essere conservato a 2°- 8° C per 10 giorni prima dell’uso senza che le prestazioni risultino alterate. Si raccomanda di non conservare il il CHANG MEDIUM C Completo a 2-8 °C per più di 10 giorni.

CONCENTRAZIONE DEI COMPONENTImg/L

Sale ............................................................................... 7900Destrosio ....................................................................... 1400Aminoacidi ..................................................................... 1000Polipeptidi .......................................................................... 66Vitamine ............................................................................. 22Deossiribonucleosidi .........................................................21Ribonucleosidi ................................................................... 20Pirovato di Sodio ................................................................ 110Altri Componenti ................................................................... 8Ormoni ed Elementi in Tracce .................................... 0.0025Ormoni Steroidei ......................................................... 0.0013Siero Bovino Neonatale ................................................ 6% v/vSiero Bovino Fetale .................................................. 6% v/v

PRECAUZIONI E AVVERTIMENTIQuesto dispositivo è previsto per l’uso da parte di personale addestrato nelle procedure che comprendono le applicazioni indicate per le quali il dispositivo è previsto.

PREPARAZIONE PER L’USOSupplemento Liofilizzato1. Portare il CHANG MEDIUM C Supplemento Liofilizzato

a temperatura ambiente.

2. Usando supporti sterili, aggiungere 10 mL o 50 mL di acqua distillata sterile al liofilo. Il flaconcino da 10 mL è sufficiente per 90 mL di CHANG MEDIUM B Basale; il flacone da 50 mL è sufficiente per 450mL di Chang Medium B Basile.

3. Agitare gentilmente il flacone per rendere omogenea la soluzione (NOTA: Per dissolvere completamente il Supplemento può essere necessario incubare a 37 °C per 5-10 minuti).

4. Trasferire in ambiente sterile l’intero contenuto del flacone di CHANG MEDIUM C Supplemento ricostituito nel flacone del CHANG Medium Basale.

5. Miscelare accuratamente agitando il flacone.

Frozen Supplement 1. Thaw Chang Medium C Frozen Supplement rapidly

by swirling vial in a 37ºC water bath.

2. Aseptically transfer the entire contents of the thawed Chang Medium C Supplement to the bottle of Chang Medium B Basal.

ALIQUOTING CHANG MEDIUM C SUPPLEMENT Lyophilized Supplement If you are unable to use the complete Chang Medium C within 10 days you may wish to make up smaller amounts by following this modification of procedure:

1. Reconst i tu te Chang Medium C Lyophi l ized Supplement.

2. Distribute aseptically into convenient-sized aliquots and freeze.

3. Also aseptically dispense the Chang Medium B Basal into a corresponding number of aliquots.

4. To prepare the complete Chang Medium C, add one aliquot of thawed Chang Medium C Supplement to one aliquot of Chang Medium B Basal.

5. Mix well.

Frozen Supplement 1. Thaw Chang Medium C Frozen Supplement.

2. Distribute aseptically into convenient-sized aliquots and refreeze. (NOTE: The supplement vial contains 14 mL or 70 mL. Distribute equally.)

5. Mix well.

DIRECTIONS FOR USE THE pH OF THE MEDIUM USED TO FEED THE CULTURES MUST BE BETWEEN 6.8 - 7.2 (i.e. the medium must be slightly yellowish-salmon color). pH can easily be adjusted by placing the medium in a 5% - 8% CO2 incubator with the cap slightly loosened.

The final pH must be 6.8 - 7.2.

For additional details on the use of these products, each laboratory should consult its own laboratory procedures and protocols which have been specifically developed and optimized for your individual medical program.

Use of Chang Medium C for Primary Cultures: In Situ Methodologies

1. Centrifuge amniotic fluid at low speed to concentrate the cells.

2. Resuspend the cell pellet in a small volume of the patient’s own amniotic fluid. For example, aspirate the supernate of 10 mL of spun amniotic fluid to 0.5 mL above the cell pellet and resuspend. Add sufficient Chang Medium C to the concentrated cell suspension to allow for final plating volume of 0.5 mL per cover slip (total of 4 coverslips) or 2 mL perflaskette.

3. Incubate cultures undisturbed at 37ºC 5% CO2 atmosphere.

4. Flood cultures on day 2 by adding 2 mL of Chang Medium C.

5. After 4 to 5 days, the cultures should be checked for growth. Cultures should be fed once growth has been observed. Feed cultures by removing all of the culture supernatant and replacing with 2 mL of fresh Chang Medium C. It is recommended that cultures be fed every 2 days thereafter.

6. Check cultures for growth on/or after day 5, and harvest when sufficient colonies are observed.

7. Best results are obtained when the cultures are fed with Chang Medium C the day before the harvest.

Use of Chang Medium C for Primary Cultures: Flask Methodologies

1. Centrifuge amniotic fluid at low speed to concentrate cells.

2. Resuspend the cell pellet in a small volume of the patient’s own amniotic fluid. For example, aspirate the supernate of 10 mL of spun amniotic fluid to 1 mL above the cell pellet and resuspend. Add 4 mL of Chang Medium C for a total volume of 5 mL per flask.

3. Incubate cultures undisturbed at 37ºC 5% CO2atmosphere.

4. Check for growth on day 5. Change medium with fresh Chang Medium C and harvest if sufficient cell growth is observed.

5. Check cultures for growth and completely change medium every other day thereafter until sufficient colonies are observed and are ready to harvest.

NOTE: For closed systems, flush each culture flask with 5% CO2 - 95% air for 20 seconds. Tighten the caps to the culture flasks and incubate them at 37°C. (It is recommended that a sterile plugged pasteur pipet be attached to the CO2 source to ensure sterility of the incoming gas.).

Use of Chang Medium C for Growing Passaged Amniotic Fluid Cells:

To passage the cells, treat the cultures with trypsin (or pronase, etc.) as you would normally do when cells are grown in conventional medium. However, protease treatment should be carefully monitored. Amniotic fluid cells grown in Chang Medium C tend to be more sensitive to protease treatment than amniotic fluid cells grown in conventional medium. It may be necessary to modify your protocol to take this into account.

QUALITY ASSURANCESTERILITY Serum used in the production of Chang Medium C Supplement has been tested for viral contamination per CFR Title 9 Part 113.53. It has also been screened for mycoplasma contamination. Both Chang Medium B Basal and Chang Medium C Supplement are sterilized by filtration through a 0.1 micron filter. Representative samples of Chang Medium B Basal and Chang Medium C Supplement are tested for possible bacteriological contamination following the sterility testing protocol described in the current USP Sterility test <71>.

Chang Medium® is a registered trademark of Irvine Scientific.

6. Fuegen Sie L-Glutamin, 10 mL/L (200 mm). Falls gewunscht, koennen Sie Antibiotika hinzufuegen.

Gefrorene Ergänzung (Frozen Supplement)1. Tauen Sie Chang Medium C Frozen Supplement schnell

auf, indem Sie wirbeln die Phiole in einem Wasserbad 37ºC.

2. Bringen Sie den gesamten Inhalt des aufgetauten CHANG MEDIUM C Supplement auf die Flasche von Chang Medium B Basal.

3. Wirbeln Sie die Flasche damit das Complete Chang Medium C gruendlich gemischt ist.

4. Fuegen Sie L-Glutamin, 10 mL/L (200 mm) hinzu. Falls gewuenscht, Antibiotika koennte auch hinzufuegen.

ALIQUOTEN CHANG MEDIUM C ERGÄNZUNG

Lyophilisierte Ergänzung (Lyophilized Supplement)1. Wenn Sie das Complete Chang Medium C nicht

innerhalb 10 Tage verwendet kann, dann koennen Sie kleinere Menge machen, indem Sie die Verfahren folgen:

2. Wiederherstellen Sie das Chang Medium C Lyophilized Supplement.

3. Aseptisch Verteilen Sie es in Aliquots und frieren Sie sie.

4. Teilen Sie das Chang Medium B Basal in Aliquots aus.

5. Vorbereitung des Complete Chang Medium C: fuegen Sie ein Aliquot von aufgetautem Chang Medium C Supplement zu einem Aliquot von Chang Medium B Basal hinzu.

6. Mischen Sie sie gruendlich.

Gefrorene Ergänzung (Frozen Supplement)1. Tauen Sie das Chang Medium C Frozen Supplement

2. Aseptisch verteilen Sie es in Aliquots und frieren Sie sie wieder (ANMERKUNG: Die Supplement Phiole enthaelt 14 mL oder 70 mL. Verteilen Sie es gleichmaessig).

3. Aseptisch teilen Sie Chang Medium B Basal in entsprechende Aliquots aus.

5. Mischen Sie sie gruendlich

GEBRAUCHSANWEISUNGDER pH DES MEDIUMS MIT DEM DIE KULTUREN GEFUETTERT WERDEN, MUSS IM BEREICH 6.8–7.2 liegen. (d.h. das Medium sollte eine leichte gelb-rosa Färbung haben). Der pH kann einfach eingestellt werden, indem das Medium mit leicht geöffnetem Verschluss für ca. 30 Minuten in einen 5%-8% CO2 Inkubator gestellt wird.

Der pH-Wert muss 6,8 - 7,2 betragen.

Für zusätz l iche Deta i ls über d ie Verwendung dieses Produktes, sollte das Labor seine eigenen Standardverfahren und Protokolle konsultieren, die spezifisch für den einzelnen medizinischen Service entwickelt worden und optimiert worden sind.

VERWENDUNG DES CHANG MEDIUM C FUER PRIMAERKULTUREN: IN SITU METHODEN.

1. Fruchtwasser/Amniofluessigkeit bei niedrigen Drehzahlen zentrifugieren, um die Zellen zu konzentrieren.

2. Das Zellpellet in einer kleinen Menge patienteneigener Fruchtwasser resuspendieren. zB : den Überstand von 10 ml der zentrifugierten Fruchtwasser bis auf 0,5 ml über dem Zellpellet aspirieren und resuspendieren. Ausreichend Chang Medium C zu der konzentrierten Zellsuspension zugeben: 0.5 ml pro Deckglas (maximal 4 Deckgläser) oder 2 ml pro Kulturflasche

3. Kulturen ungestört bei 37°C in 5% CO2 Atmosphäre inkubieren.

4. Am 2. Tag die Kulturen mit 2 ml Chang Medium C fluten.

5. Nach 4 bis 5 Tagen sollte das Wachstum der Kulturen überprüft werden. Die Kulturen sollten gefüttert werden, sobald sie wachsen. Dazu wird der Zellkulturüberstand entfernt und durch 2 ml neues Chang Medium C ersetzt. Danach sollten die Kulturen alle 2 Tage neu gefüttert werden.

6. Kulturwachstum am oder nach dem 5.Tag überprüfen, und wenn ausreichend Kulturen vorhanden sind, ernten.

7. Die besten Ergebnisse werden erzielt, wenn am Tag vor der Ernte nochmals mit Chang Medium C gefüttert wird.

VERWENDUNG DES CHANG MEDIUM C FUER PRIMAERKULTUREN: KOLBEN METHODEN.1. Fruchtwasser bei niedrigen Drehzahlen zentrifugieren,

um die Zellen zu konzentrieren.

2. Das Zellpellet in einer kleinen Menge patienteneigener Fruchtwasser resuspendieren. zB : den Überstand von 10 ml der zentrifugierten Fruchtwasser bis auf 1 ml über dem Zellpellet aspirieren und resuspendieren. Fuegen 4 mL von Chang Medium C bis ein Endvolumen von 5mL pro kolben.

4. Das Wachstum am 5.Tag überprüfen. Ersetzen mit neues Chang Medium C, und wenn ausreichend Kulturen vorhanden sind, ernten.

5. Ueberpruefen das Kulturwachstum, und vollstaendig aendern das Medium alle zwei Tage danach bis ausreichende Kulturen vorhanden sind.

6. Die besten Ergebnisse werden erzielt, wenn die Kulturen vor dem Tag der Ernte mit Chang Medium C gefüttert wird.

ANMERKUNG: Für geschlossene Systeme spuelen Sie jede Kulturflasche mit 5% CO2 - 95% Luft für 20 Sekunden. Verschliessen Sie die Kappen zu den Kulturflaschen fest und brüten Sie sie an 37° C. aus (es wird empfohlen, daß eine sterile verstopfte Pasteur Pipette wird angeschlossen an die CO2-Quelle, um Sterilität des ankommenden Gases zu sichern).

VERWENDUNG DES CHANG MEDIUM C FUER ZUECHTUNG DER PASSAGIERTEN KULTUREN FRUCHTWASSERZELLEN.

Zum Passagieren der Zellen werden die Kulturen mit Trypsin (oder Pronase, etc.) behandelt. Genau so, als wären die Zellen in einem konventionellen Medium gewachsen. Allerdings sollte die Protease Behandlung sorgfältig beobachtet werden, da Fruchtwasserzellen, die in Chang Medium C kultiviert wurden, sensitiver reagieren nach Protease Behandlung als Zellen in konventionellen Medien. Unter Umständen muss das Protokoll entsprechend modifiziert werden.

QUALITAETSSICHERUNGSTERILITÄTSerum für die Produktion von Chang Medium C wurde auf virale Kontamination nach CFR Title 9 Part 113.53 und Mycoplasma Kontamination getestet. Beide Chang Medium B Basal und Chang Medium C Supplement wurde sterilisiert durch Filtration mit einem 0.1µ Filter. Die Proben von Chang Medium B Basal und Chang Medium C Supplement sind auf mögliche bakterielle Kontamination getestet nach dem Steril itäts Test Protokoll beschrieben unter Sterilität (durch aktuellen USP Sterility Test <71>).

Chang Medium® ist ein eingetragenes Warenzeichen von Irvine Scientific.

6. Aggiungere L-Glutamina, 10.0 mL/L (200 mM). Se si desidera si possono anche aggiungere antibiotici.

Supplemento Congelato1. Scongelare il CHANG MEDIUM C Supplemento

congelato agitando delicatamente il flacone in un bagno di acqua a 37°C.

2. Trasferire in ambiente sterile l’intero contenuto del flacone di CHANG MEDIUM C Supplemento decongelato nel flacone del CHANG MEDIUM B Basale.

4. Aggiungere L-Glutamina, 10.0 mL/L (200mM). Se si desidera si possono anche aggiungere antibiotici.

SUDDIVISIONE DEL CHANG C SUPPLEMENTO IN ALIQUOTESupplemento LiofilizzatoSe l’intero flacone di CHANG MEDIUM C Completo non può essere utilizzato entro 10 giorni è possibile aliquotare la soluzione seguendo la procedura indicata di seguito:

1. Ricostituire il CHANG MEDIUM C Supplemento Liofilizzato.

2. Aliquotare in ambiente sterile e congelare.

3. Sempre in ambiente sterile dispensare il CHANG MEDIUM B Basale nelle aliquote corrispondenti.

4. Per preparare il CHANG MEDIUM C completo, aggiungere una un’aliquota di CHANG MEDIUM C Supplemento ad una aliquota di CHANG MEDIUM B Basale.

6. Mescolare accuratamente.

congelato.

2. Aliquotare in ambiente sterile e ricongelare (Nota: Il flacone del Supplemento contiene 14 mL o 70 mL. Distribuire equamente.)

3. Sempre in ambiente sterile dispensare il contenuto del flacone di CHANG MEDIUM B Basale nelle aliquote corrispondenti.

4. Per preparare il CHANG MEDIUM C completo, aggiungere ad una aliquota di di CHANG MEDIUM C Supplemento scongelato una aliquota di CHANG MEDIUM B Basale.

ISTRUZIONI PER L’USOIl pH DEL TERRENO USATO PER ARRICCHIRE LE COLTURE DEVE ESSERE FRA 6.8 A 7.2 (IL TERRENO DEVE ESSERE LEGGERMENTE GIALLO TENDENTE AL SALMONE). IL pH PUO’ ESSERE FACILMENTE REGOLATO PONENDO IL TERRENO IN UN INCUBATORE CON CO2 AL 5% - 8% CON IL TAPPO LEGGERMENTE SVITATO.

Il pH finale deve essere fra 6.8 e 7.2.

Per ulteriori dettagli sull’uso di questo prodotto, consultare le vostre proprie procedure di laboratorio e i protocolli che sono stati specificatamente sviluppati e ottimizzati per il vostro individuale programma medicale.

Uso di CHANG MEDIUM C per colture primarie:METODOLOGIE IN SITU

1. Centrifugare il fluido amniotico a bassa velocità per concentrare le cellule.

2. Risospendere il pellet in una piccola quantità di liquido amniotico della paziente. Ad esempio, aspirare il surnatante di 10 mL di liquido amniotico centrifugato fino a 0.5 mL al di sopra del pellet e risospendere.

Aggiungere alla soluzione concentrata il CHANG MEDIUM C in modo da ottenere un volume finale di 0.5 mL per cover slip (per un totale di 4 cover slips) o di 2 mL per fiasca.

3. Incubare le colture a 37 °C in atmosfera al 5% di CO2.

4. Al secondo giorno, aggiungere 2 mL di CHANG MEDIUM C alle colture.

5. Dopo 4 o 5 giorni, controllare la crescita delle colture. Arricchire le colture non appena si osserva una crescita rimuovendo il surnatante e sostituendolo con 2 mL di CHANG MEDIUM C fresco. Si raccomanda di continuare ad arricchire le colture in questo modo ogni due giorni.

6. Controllare la crescita delle colture dopo 5 giorni e prelevarle quando si osservano sufficienti colonie.

7. Risultati migliori si ottengono arricchendo con CHANG MEDIUM C le colture il giorno prima della raccolta.

Uso di CHANG MEDIUM C per colture primarie:METODOLOGIE IN FIASCA1. Centrifugare il fluido amniotico a bassa velocità per

concentrare le cellule.

2. Risospendere il pellet in una piccola quantità di liquido amniotico della paziente. Ad esempio, aspirare il surnatante di 10 mL di liquido amniotico centrifugato fino a 1 mL al di sopra del pellet e risospendere. Aggiungere 4 mL di CHANG MEDIUM C per raggiungere un volume totale di 5 mL per fiaschetta.

4. Controllare la crescita al 5° giorno . Sostituire il terreno con CHANG MEDIUM C fresco e raccogliere se si osserva una sufficiente crescita cellulare.

5. Tenere sotto controllo la crescita e sostituire il terreno ogni giorno successivo al quinto fino a che le colonie sono in quantità sufficiente e pronte per la raccolta.

6. I migliori risultati si ottengono con colture arricchite con CHANG MEDIUM C il giorno prima della raccolta.

NOTA: Per sistemi chiusi, mettere le fiaschette sotto flusso di aria al 5 % di CO2per 20 secondi. Avvitare accuratamente i tappi delle fiaschette e incubarle a 37 °C (Si raccomanda di collegare una pipetta Pasteur sterile e tappata alla fonte di CO2per garantire la sterilità del gas entrante).

Uso di CHANG MEDIUM C per colture secondariedi liquido amniotico:

Trattare la coltura con tripsina (o pronase ecc.) come nel caso di cellule in coltura in terreno convenzionale. In ogni caso il trattamento con proteasi deve essere accuratamente monitorato. Le cellule del liquido amniotico coltivate nel terreno CHANG MEDIUM C sono generalmente più sensibili al trattamento con proteasi di quelle coltivate protease coltivate in un terreno tradizionale. In ragione di ciò può essere necessario modificare il protocollo

ASSICURAZIONE DI QUALITÀSTERILITA’Il siero usato per la produzione del CHANG MEDIUM C Supplemento è stato testato per escludere contaminazione virale seguendo la procedura CFR Titolo 9 Parte 113.53. Il siero è stato anche testato per determinare eventuali contaminazioni da micoplasma. ll CHANG MEDIUM B Basale e il CHANG MEDIUM C Supplemento sono stati sterilizzati per filtrazione mediante filtro da 0.2 mm e sonostati testati per escludere eventuale contaminazione batteriologica seguendo il protocollo delle prove di sterilità descritto nella corrente test di sterilità USP <71>.

Chang Medium® è un marchio registrato di Irvine Scientific.

2511 Daimler Street, Santa Ana, California 92705-5588Telephone: 1 949 261 7800 • 1 800 437 5706

Fax: 1 949 261 6522 • www.irvinesci.comPN 40200 Rev.10

Storage Temperature for :T101-019,T101-059,

C100, C106 and C101

Storage Temperature for:C108

European RepresentativeMPIESchutweg 13A5145 NP Waalwijk, The Netherlands

See instructionsfor use.

Symbols:

Sterilized using aseptic processing techniques

(filtration)

Catalog Number

Expiration: Year - Month - Day

Lot Number

Caution: See instructions for use

MPIE Schutweg 13a5145 NP Waalwijk,

The Netherlands

CE Mark

For in vitro diagnostic use.

Zum Gebrauch in der in vitro Diagnostik.

Per uso diagnostico in vitro.

Para uso en diagnóstico in vitro.

Pour l’usage diagnostique in vitro.

Para a utilização em diagnóstico in vitro.

Για in vitro διαγνωστική χρήση.

In vitro diagnostikum.

Til in vitro-diagnostik.

In vitro diagnostiseen käyttöön.

Lietošanai in vitro diagnostikā.

Voor in vitro diagnostisch gebruik.

Do stosowania w diagnostyce in vitro.

Pentru utilizarea fertilizării in vitro

För in vitro-diagnostik.

In vitro diagnostiliseks kasutamiseks.

In vitro diagnosztikai célra.

Skirta in vitro diagnostikos tyrimams.

In vitro diyagnostik kullanım için.

ENGLISH

DEUTSCH

Probenentnahme.

ITALIANO

5. Mix well.

congelato.

C100, C106 and C101

Symbols:

(filtration)

Catalog Number

Lot Number

The Netherlands

CE Mark

ENGLISH

DEUTSCH

Probenentnahme.

ITALIANO

5. Mix well.

congelato.

C100, C106 and C101

Symbols:

(filtration)

Catalog Number

Lot Number

The Netherlands

CE Mark

ENGLISH

DEUTSCH

Probenentnahme.

ITALIANO

5. Mix well.

congelato.

C100, C106 and C101

Symbols:

(filtration)

Catalog Number

Lot Number

The Netherlands

CE Mark

PORTUGUÊS

UTILIZAÇÃO PREVISTAO Chang Medium C pode ser utilizado nas seguintes aplicações:1. Cultura primária de células de líquido amniótico.2. Cultura de células do líquido amniótico derivadas

da cultura primária.3. Cultura de células de medula óssea.4. Tecido amniótico sólido obtido de amostras de

vilosidades coriónicas.

ESTE MEIO FOI CONCEBIDO PARA SER UTILIZADO EM SISTEMAS ABERTOS (CULTURAS EQUILIBRADAS NUMA ATMOSFERA COM 5% - 8% CO2) E EM SISTEMAS DE CULTURA FECHADOS (CULTURAS PERFUNDIDAS COM 5% DE CO2 E INCUBADAS EM RECIPIENTES HERMÉTICAMENTE FECHADOS).

Atenção: Não utilizar componentes do Chang Medium C depois da data de expiração indicada individualmente em cada rótulo.

DESCRIÇÃO DO PRODUTO O Chang Medium C foi desenvolvido para a cultura primária de células humanas de líquido amniótico, para análises de cariótipo e outras provas genéticas de diagnóstico pré-natal. ESTA FÓRMULA ESTÁ OPTIMIZADA PARA SISTEMAS ABERTOS E FECHADOS.

ESTABILIDADE E CONSERVAÇÃOConservar o Suplemento Congelado Chang Medium C inferior a -10°C. O Suplemento Liofilizado Chang Medium C entre 2ºC – 8ºC. O Chang Medium B Basal entre 2ºC – 8ºC, e o Chang Medium C Completo entre 2ºC – 8ºC. O Chang Medium B Basal não pode ser congelado.

Proteger este produto da luz fluorescente.

Verifique os rótulos individuais de cada recipiente para ver o prazo de validade específico de cada componente. O Chang Medium C Completo pode conservar-se refrigerado entre 2ºC e 8ºC no máximo de 10 dias sem que isso altere a sua funcionalidade. Não se recomenda o armazenamento por mais de 10 dias.

COMPONENTES mg/LSais .................................................................... 7900Dextrose ............................................................. 1400Aminoácidos ....................................................... 1000Polipéptidos ............................................................ 66Vitaminas ............................................................... 22Desoxirribonucleósidos ........................................... 21Ribonucleósidos ..................................................... 20Piruvato de Sodio ................................................. 110Outros Componentes ............................................... 8Hormonas e traços de outros elementos .......... 0.0025Hormonas Esteróides .......................................0.0013Soro Vitelo Recém Nascido ............................. 6% v/vSoro Bovino Fetal ............................................ 6% v/v

PRECAUÇÕES E AVISOSEste dispositivo deve ser utilizado por funcionários treinados em procedimentos aos quais se destina.

PREPARAÇÃO PARA UTILIZAÇÃOSuplemento liofilizado1. Deixar equilibrar à temperatura ambiente o Suplemento

Liofilizado do Chang Medium C.

2. Utilizando condições estéreis, adicionar 10 mL ou 50 mL de água destilada estéril ao liofilizado. O recipiente de 10 mL é para o Chang Medium B Basal de 90 mL; o recipiente de 50 mL é para o Chang Medium B Basal de 450 mL.

3. Agitar o recipiente suavemente para facilitar a completa dissolução (NOTA: pode ser necessário aquecer o recipiente 5 minutos a 37ºC para dissolver completamente o suplemento).

4. Transferir esterilmente o conteúdo completo do Suplemento Chang Medium C reconstituído no recipiente do Chang Medium B Basal.

5. Misturar bem o Chang Medium C Completo agitando bem o recipiente.

6. Adicionar L-Glutamina, 10 mL/L (200mM). Se desejar, pode adicionar antibióticos.

ΕΛΛΗΝΙΚΆ

ΕΠΙΔΙΩΚΟΜΕΝΗ ΧΡΗΣΗ Το Chang Medium C μπορεί να χρησιμοποιηθεί στις παρακάτω εφαρμογές:1. την πρωτογενή καλλιέργεια κυττάρων αμνιακού

υγρού2. την ανάπτυξη κυττάρων διόδου αμνιακού υγρού 3. την καλλιέργεια κυττάρων μυελού των οστών 4. την δειγματοληψία συμπαγούς ιστού αμνίου από

χοριακές λάχνες

ΤΟ ΜΕΣΟ ΕΧΕΙ ΣΧΕΔΙΑΣΤΕΙ ΓΙΑ ΧΡΗΣΗ ΣΕ ΑΝΟΙΚΤΑ (ΚΑΛΛΙΕΡΓΕΙΣ ΙΣΟΡΡΟΠΗΜΕΝΕΣ ΜΕ ΑΤΜΟΣΦΑΙΡΑ 5% CO2) ΚΑΙ ΚΛΕΙΣΤΑ ΣΥΣΤΗΜΑΤΑ ΚΑΛΛΙΕΡΓΕΙΑΣ (ΚΑΛΛΙΕΡΓΕΙΕΣ ΓΕΜΙΣΜΕΝΕΣ ΜΕ 5% CO

2 ΚΑΙ

ΕΠΩΑΣΜΕΝΕΣ ΜΕ ΤΑ ΔΟΧΕΙΑ ΚΑΛΛΙΕΡΓΕΙΑΣ ΣΦΙΧΤΑ ΚΛΕΙΣΤΑ).

Προσοχή: Μην χρησιμοποιείτε τα συστατικά του Chang Medium C πέρα από την ημερομηνία λήξης που αναγράφεται στις ξεχωριστές ετικέτες.

ΠΕΡΙΓΡΑΦΗ ΠΡΟΪΟΝΤΟΣ Το Chang Medium® C δημιουργήθηκε για την πρωτογενή καλλιέργεια ανθρώπινων κυττάρων αμνιακού υγρού για χρήση σε καρυοτυποποίηση και άλλες προγεννητικές γενετικές εξετάσεις. ΑΥΤΗ Η ΣΥΝΘΕΣΗ ΕΧΕΙ ΒΕΛΤΙΣΤΟΠΟΙΗΘΕΙ ΓΙΑ ΑΝΟΙΚΤΑ ΚΑΙ ΚΛΕΙΣΤΑ ΣΥΣΤΗΜΑΤΑ.

ΦΥΛΑΞΗ ΚΑΙ ΣΤΑΘΕΡΟΤΗΤΑΦυλάσσετε το Chang Medium C Κατεψυγμένα συμπλήρωμα σε θερμοκρασία κάτω των 10°C, το Chang Medium C Λυοφιλοποιημένο Συμπλήρωμα στους 2°C έως 8°C, το Chang Medium B Βασικό στους 2°C έως 8°C, και το πλήρες Chang Medium C στους 2°C έως 8°C. Το Chang Medium B Βασικό δεν πρέπει να ψύχεται.

Προστατεύστε από φθορίζον φως.

ΣΤΑΘΕΡΟΤΗΤΑΒλ. ξεχωριστές ετικέτες φιαλών για συγκεκριμένες ημερομηνίες λήξης. Το πλήρες Chang Medium C μπορεί να φυλαχτεί στους 2οC έως 8οC για 10 μέρες πριν τη χρήση, χωρίς να επηρεαστεί η λειτουργία του. Δεν συστήνεται η φύλαξη για διάστημα μεγαλύτερο των 10 ημερών.

ΜΗΝ ΚΑΤΑΨΥΧΕΤΕ ΤΟ ΠΛΗΡΕΣ CHANG MEDIUM C.

ΣΥΣΤΑΤΙΚΑ mg/LΆλατα............................................................................7900Δεξτρόζη........................................................................1400Αμινοξέα........................................................................1000Πολυπεπτίδια...................................................................66Βιταμίνες...........................................................................22Δεοξυριβονουκλεοζίτες.....................................................21Ριβονουκλεοζίτες ..............................................................20Πυροσταφιλικό Νάτριο....................................................110Λοιπά Συστατικά.................................................................8Ορμόνες και Ιχνοστοιχεία..........................................0.0025Στεροειδείς Ορμόνες..................................................0.0013Ορός Νεογέννητου Μοσχαριού..................................6% v/vΟρός Εμβρυϊκού Βοοειδούς ......................................6% v/v

ΔΙΑΣΦΑΛΙΣΗ ΠΟΙΟΤΗΤΑΣΗ συσκευή αυτή προορίζεται για χρήση από προσωπικό που έχει εκπαιδευτεί σε διαδικασίες που περιλαμβάνουν τη συγκεκριμένη εφαρμογή για την οποία προορίζεται η συσκευή.

ΠΡΟΕΤΟΙΜΑΣΙΑ ΓΙΑ ΧΡΗΣΗ Λυοφιλοποιημένο Συμπλήρωμα1. Αφήστε το Chang Medium C Λυοφιλοποιημένο

Συμπλήρωμα να ισορροπήσει σε θερμοκρασία δωματίου.

2. Ακολουθώντας ασηπτικές τεχνικές, προσθέστε 10 mL ή 50 mL αποστειρωμένου, απεσταγμένο νερού στο λυoφιλοποιημένο. Το φιαλίδιο των 10 mL είναι για 90 mL Chang Medium B Βασικό και το φιαλίδιο των 50 mL για 450 mL Chang Medium B Βασικό.

3. Στροβιλίστε απαλά το φιαλίδιο για να έχετε ένα πλήρες διάλυμα. (ΣΗΜΕΙΩΣΗ: Μπορεί να χρειαστεί να επωάσετε το φιαλίδιο στους 37οC για 5 έως 10 λεπτά, ώστε να διαλυθεί πλήρως το συμπλήρωμα).

4. Μεταφέρετε ασηπτικά όλα τα περιεχόμενα του ανασυσταμένου Chang Medium C Συμπληρώματος στη φιάλη του Chang Medium B Βασικού.

5. Ανακατέψτε το πλήρες Chang Medium C καλά, στροβιλίζοντας τη φιάλη.

Suplemento congelado1. Descongelar o Suplemento Congelado do Chang

Medium C agitando rapidamente o recipiente em banho Maria a 37ºC.

2. Transferir esterilmente o conteúdo completo do Suplemento Chang Medium C descongelado ao recipiente de Chang Medium B Basal.

3. Misturar o Chang Medium C Completo agitando bem o recipiente.

PREPARAÇÃO DE ALÍQUOTAS DE SUPLEMENTO DE CHANG MEDIUM CSuplemento liofilizadoSe não utilizar o Chang Medium C Completo durante um período de 10 dias é conveniente preparar quantidades mais pequenas de meio seguindo o seguinte protocolo:

1. Reconstituir o Suplemento Liofilizado do Chang Medium C.

2. Em condições estéreis, repartir o suplemento em alíquotas de tamanho adequado e congelá-las.

3. Também em condições de esterilidade, distribuir o Chang Medium B Basal pelo mesmo número de alíquotas.

4. Para preparar o Chang Medium C Completo, adicionar uma alíquota descongelada de Suplemento de Chang Medium C a uma alíquota de Chang Medium B Basal.

5. Misturar bem.

Medium C.

2. Em condições de esterilidade, repartir o suplemento em alíquotas de um tamanho adequado e congelá-las (NOTA: o recipiente de suplemento contém 14 mL ou 70 mL. Distribuir uniformemente).

3. Também em condições de esterilidade, repartir o Chang Medium B Basal pelo mesmo número de alícuotas.

5. Misturar bem.

INSTRUÇÕES DE UTILIZAÇÃOO pH do meio utilizado deve estar entre 6.8 e 7.2 (o meio deve apresentar uma coloração ligeiramente cor de salmão). O pH pode ajustar-se facilmente colocando o meio numa incubadora a 5% - 8% CO2, com a tampa ligeiramente desenroscada.

O pH final deve ser entre 6.8 - 7.2.

Para mais detalhes sobre a utilização deste produto, o laboratório deve consultar os seus próprios protocolos de trabalho, os quais foram desenvolvidos e optimizados especificamente de acordo com cada laboratório médico.

Utilização de Chang Medium C em culturas primárias: Metodologia In Situ.

1. Centrifugar o líquido amniótico a baixa velocidade para concentrar as células.

2. Ressuspender o precipitado de células num volume pequeno do próprio líquido amniótico do doente. Por exemplo, aspirar o sobrenadante de 10 mL deixando 0.5 mL de líquido, e ressuspender. Adicionar suficiente Chang Medium C à suspensão concentrada de células para alcançar um volume de cultura final de 0.5 mL por lamela (num total de 4 lamelas), ou 2 mL por recipiente.

3. Sem perturbar, incubar as culturas a 37°C numa atmosfera de 5% - 8% CO2.

4. No dia 2 de cultura, adicionar 2 mL de Chang Medium C.

5. Após 4 ou 5 dias, comprovar o crescimento das culturas. Uma vez que se observe crescimento, aspirar todo o meio de cultura e adicionar 2 mL de Chang Medium C fresco. A partir deste momento, é recomendável mudar o meio de cultura de 2 em 2 dias.

6. Verificar o crescimento das culturas durante ou depois do quinto dia, e colher quando se observem números suficientes de colónias.

7. Obtém-se melhores resultados quando se muda o meio com Chang Medium C no dia anterior à colheita.

Utilização de Chang Medium C em culturas primárias: Metodologia em recipiente.1. Centrifugar o líquido amniótico a baixa velocidade para

concentrar as células.

2. Ressuspender o precipitado de células num volume pequeno do próprio líquido amniótico do doente. Por exemplo, aspirar o sobrenadante de 10 mL deixando 1 mL de líquido e ressuspender. Adicionar 4 mL de Chang Medium C para obter um volume total de 5 mL por recipiente.

4. Verificar o crescimento ao dia 5. Mudar o meio por Chang Medium C fresco e colher a cultura se observar um crescimento suficiente .

5. Verificar o crescimento das culturas e mudar completamente o meio todos os dias daqui para a frente até observar um número suficiente de colónias para colheita.

NOTA: para sistemas fechados, injecte cada recipiente de cultura com uma mistura de 5% CO2 – 95% ar durante 20 segundos. Feche hermeticamente os recipientes e incube-os a 37ºC . (Recomenda-se a utilização de um pipeta Pasteur estéril na fonte de CO2 para garantir a esterilidade do gás que se injecta no meio de cultura).

UTILIZAÇÃO DE CHANG MEDIUM C NA CULTURA DE CÉLULAS DO LÍQUIDO AMNIÓTICO DERIVADAS DE CULTURAS PRIMÁRIAS.

Para passar as células cultivadas, tratar as culturas com tripsina (ou pronase, etc.) tal como se tratam normalmente as células num meio convencional. Contudo, o tratamento com pronase deve ser monitorizado cuidadosamente. Os amniócitos cultivados em Meio Chang C tendem a ser mais sensíveis ao tratamento con proteases que os cultivados em meios convencionais. Tendo este aspecto em conta, pode ser por vezes necessário reajustar o protocolo.

CONTROLO DE QUALIDADEESTERILIDADEO soro utilizado na produção de Suplemento Chang Medium C foi testado para a contaminação viral de acordo com a norma CFR capítulo 9, parte 113.53. Foi também testado para a contaminação por Micoplasma. Ambos, o Chang Medium B Basal e o Suplemento Chang Medium C foram esterilizado por filtração com filtros de 0.2 micras. Amostras representativas de Chang Medium B Basal e de Suplemento Chang Medium C foram testadas para a possível contaminação bacteriológica seguindo os protocolos de esterilidade descritos no teste de esterilidade actual da USP <71>.

Chang Medium® é uma marca registada da Irvine Scientific.

6. Προσθέστε L-Γλουταμίνη, 10.0 mL/L (200 mM). Μπορείτε επίσης να προσθέσετε αντιβιοτικά, αν το επιθυμείτε.

Κατεψυγμένο Συμπλήρωμα 1. Αποψύξτε το Chang Medium C Κατεψυγμένο

Συμπλήρωμα γρήγορα, στροβιλίζοντας το φιαλίδιο σε υδατόλουτρο θερμοκρασίας 37°C.

2. Μεταφέρετε ασηπτικά όλα τα περιεχόμενα του αποψυγμένου Chang Medium C Συμπληρώματος στη φιάλη του Chang Medium B Βασικού.

4. Προσθέσετε L-Γλουταμίνη, 10.0 mL/L (200 mM). Μπορείτε επίσης να προσθέσετε αντιβιοτικά, αν το επιθυμείτε.

ΔΙΑΜΟΙΡΑΣΜΟΣ ΣΕ ΥΠΟΠΟΛΛΑΠΛΑΣΙΑ ΤΟΥ CHANG MEDIUM C ΣΥΜΠΛΗΡΩΜΑΤΟΣ Λυοφιλοποιημένο ΣυμπλήρωμαΑν δεν μπορείτε να χρησιμοποιήσετε το πλήρες Chang Medium C εντός 10 ημερών, μπορείτε να δημιουργήσετε μικρότερες ποσότητες ακολουθώντας την εξής τροποποίηση της διαδικασίας: 1. Ανασυστήστε το Chang Medium C Λυοφιλοποιημένο

Συμπλήρωμα.

2. Διανέμετε ασηπτικά σε πρακτικού μεγέθους υποπολλαπλάσια και καταψύξτε.

3. Διαχύστε επίσης ασηπτικά το Chang Medium B Βασικό σε αντίστοιχο αριθμό υποπολλαπλασίων.

4. Για να προετοιμάσετε το πλήρες Chang Medium C, προσθέστε ένα υποπολλαπλάσιο αποψυγμένου Chang Medium C Συμπληρώματος σε ένα υποπολλαπλάσιο Chang Medium B Βασικού.

5. Ανακατέψτε καλά.

2. Διανέμετε ασηπτικά σε πρακτικού μεγέθους υποπολλαπλάσια και καταψύξτε ξανά. (ΣΗΜΕΙΩΣΗ: το φιαλίδιο συμπληρώματος περιέχει 14 mL ή 70 mL. Διανείμετε ίσα.)

ΟΔΗΓΙΕΣ ΧΡΗΣΗΣ ΤΟ pH ΤΟΥ ΜΕΣΟΥ ΠΟΥ ΧΡΗΣΙΜΟΠΟΙΕΙΤΑΙ ΓΙΑ ΤΡΟΦΗ ΤΩΝ ΚΑΛΛΙΕΡΓΕΙΩΝ ΠΡΕΠΕΙ ΝΑ ΕΙΝΑΙ 6.8 - 7.2 (δηλαδή το μέσο θα πρέπει να έχει ελαφρώς κίτρινο χρώμα σολομού). Το pH μπορεί να προσαρμοστεί εύκολα, τοποθετώντας το μέσο σε επωαστήρα 5% - 8% CO2 με το πώμα ελαφρώς χαλαρό.

Το τελικό pH πρέπει να είναι 6.8 - 7.2.

Για επιπρόσθετα στοιχεία σχετικά με τη χρήση αυτών των προϊόντων, κάθε εργαστήριο θα πρέπει να συμβουλεύεται τις δικές του εργαστηριακές διαδικασίες και τα πρωτόκολλα που έχουν αναπτυχθεί και βελτιστοποιηθεί συγκεκριμένα για το δικό σας ιατρικό πρόγραμμα.

Χρήση Chang Medium C για Κύριες Καλλιέργειες: In Situ Μεθοδολογίες

1. Υποβάλλετε σε φυγόκεντρο το αμνιακό υγρό, σε χαμηλή ταχύτητα, για συμπύκνωση των κυττάρων.

2. Ανα-αιωρείστε το κυτταρικό συσσωμάτωμα σε μικρό όγκο του αμνιακού υγρού της ασθενούς. Για παράδειγμα, αναρροφήστε το υπερκείμενο υγρό των 10 mL από νηματοποιημένο αμνιακό υγρό σε 0.5 mL πάνω από το κυτταρικό συσσωμάτωμα και ανα-αιωρείστε. Προσθέστε επαρκές Chang Medium C στο συμπυκνωμένο κυτταρικό αιώρημα ώστε να έχετε τελικό όγκο καλλιέργειας 0.5 mL ανά καλυπτρίδα (σύνολο 4 καλυπτρίδες) ή 2 mL ανά φιαλίδιο.

3. Επωάστε τ ις καλλιέργειες αδιατάρακτες σε θερμοκρασία 37ο C 5% CO2 ατμόσφαιρα.

4. Γεμίστε τις καλλιέργειες την 2η ημέρα, προσθέτοντας 2 mL Chang Medium C.

5. Μετά από 4 έως 5 ημέρες, ελέγξτε την ανάπτυξη των καλλιεργειών. Οι καλλιέργειες πρέπει να τρέφονται αφού παρατηρηθεί ανάπτυξη. Θρέψτε τις καλλιέργειες αφαιρώντας όλο το υπερκείμενο υγρό και αντικαθιστώντας με 2 mL φρέσκο Chang Medium C. Συστήνεται οι καλλιέργειες να τρέφονται κάθε 2 ημέρες μετά από αυτό το σημείο.

6. Ελέγξετε την ανάπτυξη των καλλιεργειών την / μετά την 5η ημέρα και συλλέξτε όταν παρατηρηθούν επαρκείς αποικίες.

7. Τα καλύτερα αποτελέσματα λαμβάνονται όταν οι καλλιέργειες τρέφονται με Chang Medium C την ημέρα πριν τη συλλογή.

Χρήση Chang Medium C για Πρωτογενείς Καλλιέργειες: Μεθοδολογίες Προχοϊδών

1. Υποβάλλετε σε φυγόκεντρο το αμνιακό υγρό σε χαμηλή ταχύτητα, για συμπύκνωση των κυττάρων.

2. Ανα-αιωρείστε το κυτταρικό συσσωμάτωμα σε μικρό όγκο του αμνιακού υγρού της ασθενούς. Για παράδειγμα, αναρροφήστε το υπερκείμενο υγρό των 10 mL από νηματοποιημένο αμνιακό υγρό σε 1 mL πάνω από το κυτταρικό συσσωμάτωμα και ανα-αιωρείστε. Προσθέστε 4 mL από Chang Medium C για συνολικό όγκο 5 mL ανά φιαλίδιο.

3. Επωάστε τις καλλιέργειες αδιατάρακτες στους 37°C 5% CO2 ατμόσφαιρα.

4. Ελέγξτε την ανάπτυξη την 5η ημέρα. Αλλάξτε το μέσο με φρέσκο Chang Medium C και συλλέξτε αν παρατηρείται επαρκής κυτταρική ανάπτυξη.

5. Ελέγξτε την ανάπτυξη στις καλλιέργειες και αλλάξτε πλήρως το μέσο μέρα παρά μέρα, μέχρι να παρατηρηθούν επαρκείς αποικίες και να είναι έτοιμες για συλλογή.

ΣΗΜΕΙΩΣΗ: Για κλειστά συστήματα, ξεπλύνετε κάθε φιαλίδιο καλλιέργειας με 5% CO2 - 95% αέρα για 20 δευτερόλεπτα. Σφίξτε τα πώματα στα φιαλίδια καλλιεργειών και επωάστε τα στους 37°C. (Προτείνεται να προσδένεται αποστειρωμένη πιπέτα Παστέρ στην πηγή CO2 για να διασφαλίζεται η αποστείρωση του εισερχόμενου αερίου).

Χρήση Chang Medium C για Ανάπτυξη Κυττάρων Διόδου Αμνιακού Υγρού:

Για να σχηματίσετε διόδους στα κύτταρα, χορηγήστε στις καλλιέργειες θρυψίνη (ή προνάση, κλπ.) όπως θα κάνατε με κύτταρα που αναπτύσσονται σε συμβατικό μέσο. Ωστόσο, η χορήγηση πρωτεάσης θα πρέπει να ελέγχεται προσεκτικά. Τα κύτταρα αμνιακού υγρού που αναπτύσσονται σε Chang Medium C τείνουν να είναι περισσότερο ευαίσθητα στην χορήγηση πρωτεάσης απ’ ότι τα κύτταρα αμνιακού υγρού που αναπτύσσονται σε συμβατικά μέσα. Μπορεί να χρειαστεί να τροποποιήσετε το πρωτόκολλό σας για να λάβετε υπόψη τα παραπάνω.

ΔΙΑΣΦΑΛΙΣΗ ΠΟΙΟΤΗΤΑΣΑΠΟΣΤΕΙΡΩΣΗΟ ορός που χρησιμοποιείται στην παραγωγή του Chang Medium C Συμπληρώματος έχει ελεγχθεί για ιογενή μόλυνση σύμφωνα με το CFR Title 9 Part 113.53. Έχει επίσης ελεγχθεί για μόλυνση μυκοπλάσματος. Το Chang Medium B Basal και το Chang Medium C Supplement αποστειρώνονται με διήθηση μέσω φίλτρου 0.1 εκατομμυριοστόμετρων. Αντιπροσωπευτικά δείγματα του Chang Medium B Βασικού και του Chang Medium C Συμπληρώματος ελέγχονται για πιθανή βακτηριολογική μόλυνση ακολουθώντας το πρωτόκολλο ελέγχου στειρότητας που περιγράφεται στην τρέχουσα εξέταση Στειρότητας <71> της συνθήκης Φαρμακοποϊίας των ΗΠΑ.

Το Chang Medium® είναι σήμα κατατεθέν της Irvine Scientific.

FRANÇAIS

UTILISATIONLe milieu Chang C peut être utilisé pour les applications suivantes :1. La cul ture pr imaire des cel lu les du l iquide

amniotique.2. Le repiquage des cellules du liquide amniotique.3. La culture des cellules de la moelle osseuse.4. La culture des tissus des prélèvements de villosités

choriales.

CE MILIEU A ETE CONCU POUR UNE UTILISATION DANS DES SYSTEMES DE CULTURE AUSSI BIEN OUVERTS (CULTURES EQUILIBREES EN ATMOSPHERE CO2 5%) QUE FERMES (CULTURES INNONDEES AVEC 5% CO2 ET INCUBEES AVEC LES RECIPIENTS DE CULTURE HERMETIQUEMENT FERMES).

Attention: Ne pas utiliser les composantes du milieu Chang C au-delà des dates d’expirations figurant sur leurs étiquettes individuelles.

PRODUCT DESCRIPTIONLe milieu Chang® C a été développé pour la culture primaire de cellules amniotiques humaines utilisées pour les caryotypes et autres tests de diagnostic génétique anténatal. Cette formule a été optimisée pour les systèmes ouverts et fermés.

CONSERVATION ET STABILITÉConserver le supplément congelé du milieu Chang C au-dessous de 10°C. Le supplément lyophilisé, le milieu de base Chang B et le milieu complet Chang C doivent être conservés entre 2° et 8°C. Le milieu de base Chang B ne doit pas être congelé.

Protéger de la lumière fluorescente.

Pour les dates d’expirations, se conférer aux indications sur les flacons des différentes composantes. Le milieu complet Chang C peut être conservé entre 2° et 4°C pendant 10 jours avant son utilisation sans que ses fonctions soient affectées. La conservation au-delà de 10 jours est non recommandée.

COMPOSANTS mg/LSels.................................................................7900Dextrose..........................................................1400Acides aminés........................................................1000Polypeptides...............................................................66Vitamines...................................................................22Désoxyribonucléotides...............................................21Ribonucléotides..........................................................20Pyruvate de sodium..................................................110Autres composants.......................................................8Hormones et autres éléments traces..................0.0025Hormones stéroïdes............................................0.0013Sérum de veau nouveau-né................................6% v/vSérum de veau fœtal..........................................6% v/v

PRÉCAUTION ET MISE EN GARDECe dispositif est destiné à une utilisation par un personnel formé aux procédures comprenant l’application indiquée pour laquelle le dispositif est destiné.

PRÉPARATIONSupplément lyophilisé1. Permettre au supplément lyophilisé Chang C de

s’équilibrer à température ambiante.

2. Ajouter stérilement 10ml (correspondants aux flacons 90ml du milieu de base Chang B) ou 50 ml (correspondants aux flacons 450ml du milieu de base Chang B) d’eau distillée stérile.

3. Tourner les tubes doucement pour affecter la solution complète. (Remarque : il serait peut être nécessaire d’incuber les flacons à 37°C pendant 5 à 10 minutes pour dissoudre complètement le supplément).

4. Transférer stérilement le contenu du supplément Chang C reconstitué flacons de milieu de base Chang B.

5. Bien mélanger le milieu Chang C complet en agitant les flacons.

6. Ajouter du L-Glutamine, 10mg/l (200mM) et les antibiotiques.

Supplément congelé1. Décongeler le supplément congelé Chang C rapidement

en agitant le flacon dans un bain marie à 37°C.

2. Transférer stérilement le contenu du flacon du supplément Chang C au flacon du milieu de base Chang B.

3. Bien mélanger le milieu complet Chang C en agitant le flacon.

PRÉPARATION D’ALIQUOTES DU SUPPLÉMENT CHANG CSupplément lyophiliséSi vous n’êtes pas prêt à utiliser la totalité du milieu complet Chang C dans les 10 jours, vous pourriez le répartir en petites quantités en suivant le protocole qui suit :

1. Reconstituer le supplément lyophilisé Chang C.

2. Répartir stérilement en plusieurs petits volumes à votre convenance et congeler.

3. Répartir stérilement le milieu de base Chang B en un nombre égale de petits volumes.

4. Préparer le milieu complet Chang C en ajoutant une aliquote du supplément Chang C décongelé à un aliquote du milieu de base Chang B.

5. Bien mélanger.

Supplément congelé1. Décongeler le supplément congelé Chang C.

2. Répartir stérilement en plusieurs petits volumes à votre convenance et congeler. (Remarque : le flacon du supplément contient soit 14ml soit 70ml. Répartir équitablement)

5. Bien mélanger

CONSEILS D’UTILISATIONLe pH du milieu utilise pour alimenter les cellules doit etre entre 6,8 et 7,2 (le milieu doit être légèrement de couleur jaunâtre-saumon). Le pH peut facilement être ajusté en plaçant les flacons du milieu dans une étuve à CO2 (5 à 8%), le bouchon légèrement dévissé.

Le pH final doit être entre 6,8 et 7,2.

Pour plus de détails sur l’utilisation de ce produit, chaque laboratoire doit consulter ses propres procédures et protocoles spécialement développés et optimisés pour chaque indication médicale particulière.

UTILISATION DU MILIEU CHANG C POUR CULTURES PRIMAIRES : METHODE IN SITU

1. Centrifuger le liquide amniotique à faible vitesse pour concentrer les cellules.

2. Resuspendre le culot cellulaire dans un petit volume du liquide amniotique de la patiente. Par exemple, aspirer le surnageant obtenu en centrifugeant 10 ml de liquide amniotique et suspendre le culot dans 0,5 ml de ce liquide. Ajouter suffisamment de milieu Chang C à la suspension concentrée des cellules pour obtenir un volume final nécessaire pour 4 lamelles (0,5 ml par lamelle) ou 2 ml par petit flacon de culture.

3. Incuber les cultures sans agitation à 37°C en atmosphère 5% CO2.

4. Alimenter les cellules au deuxième jour en ajoutant 2 ml de milieu Chang C.

5. Après 4 à 5 jours, la croissance doit être examinée. Dès que des foyers ont été observés, les cultures doivent être alimentées en enlevant le surnageant et en le remplaçant par 2 ml de milieu Chang C frais. Il est ensuite recommandé d’alimenter les cultures tous les deux jours.

6. Examiner la croissance des cultures au/après le cinquième jour, récolter les cellules lorsque suffisamment de colonies ont été observées.

7. Les meilleurs résultats sont obtenus lorsque les cultures sont alimentées la veille de la récolte avec du milieu Chang C frais.

UTILISATION DU MILIEU CHANG C POUR CULTURES PRIMAIRES : METHODE EN FLACON1. Centrifuger le liquide amniotique à faible vitesse pour

concentrer les cellules.

2. Resuspendre le culot cellulaire dans un petit volume du liquide amniotique de la patiente. Par exemple, aspirer le surnageant obtenu en centrifugeant 10 ml de liquide amniotique et suspendre le culot dans 1 ml de ce liquide. Ajouter 4 ml de milieu Chang C à la suspension concentrée des cellules un volume final de 5 ml par flacon de culture.

4. Examiner la croissance au cinquième jour. Changer le milieu avec du milieu Chang C frais. Récolter les cellules si la croissance est suffisante.

5. Examiner la croissance et changer complètement le milieu tous les deux jours ou jusqu’à ce que le nombre des colonies soit suffisant pour la récolte.

Remarque : Pour les systèmes fermés inonder chaque flacon de culture avec 5% CO2 et 95% air pendant 20 secondes. Bien visser les bouchons des flacons et incuber à 37°C. (Il est recommandé qu’une pipette pasteur, bouchée avec du coton et stérile, soit attaché à la source de CO2 pour s’assurer de la stérilité du gaz allant dans la boite de culture).

UTILISATION DU MILIEU CHANG C POUR LE REPIQUAGE DES CELLULES DU LIQUIDE AMNIOTIQUE Pour repiquer les cellules, traiter les cultures avec la trypsine (ou pronase, etc.) comme vous le faites normalement lorsque les cellules poussent dans un milieu conventionnel. Cependant, le traitement avec des protéases doit être conduit prudemment. Les cellules du liquide amniotique qui poussent dans le milieu Chang C ont tendance à être plus sensibles que celles qui poussent dans un milieu traditionnel. Il est nécessaire d’en tenir compte dans votre protocole.

ASSURANCE QUALITÉSTÉRILITÉLe sérum utilisée dans la fabrication du supplément Chang C a été testé pour les contaminations virales selon le code des régulations fédérales CFR Title 9 Part 113.53. Il a été aussi testé pour les contaminations par mycoplasme. Le milieu de base Chang B et le supplément lyophilisé Chang C sont stérilisés par filtration avec des filtres de 0,2 µm. Des échantillons du milieu de base Chang B et du supplément Chang C sont testés pour une éventuelle contamination bactérienne selon les protocoles des tests de stérilité courants de la pharmacopée américaine (USP) <71>.

Milieu Chang® est une marque déposée de Irvine Scientific.

ESPAÑOL

APLICACIÓNEl Chang Medium C se puede utilizar en las siguientes aplicaciones:1. Cultivo primario de células de líquido amniótico.2. Cultivo de células del líquido amniótico derivadas

del cultivo primario.3. Cultivo de células de médula ósea.4. Tejido amniótico sólido obtenido de vellosidades

coriónicas.

ESTE MEDIO HA SIDO DISEÑADO PARA SER UTILIZADO TANTO EN INCUBADORES DE CO2 (CULTIVOS EQUILIBRADOS EN UNA ATMOSFERA CON 5% CO2) COMO EN SISTEMAS DE CULTIVO CERRADO (CULTIVOS PERFUNDIDOS CON 5% DE CO2 E INCUBADOS EN FRASCOS HERMÉTICAMENTE CERRADOS.

Precaución: No use los componentes del Chang Medium C después de la fecha de caducidad indicada en las distintas etiquetas individuales.

DESCRIPCIÓN DEL PRODUCTOChang Medium C es un medio desarrollado para el cultivo primario de células humanas de líquido amniótico, para análisis de cariotipo y otras pruebas genéticas de diagnóstico prenatal. ESTA FORMULA SE HA OPTIMIZADA PARA TRABAJAR TANTO EN SISTEMAS ABIERTOS COMO CERRADOS.

CONSERVACIÓN Y ESTABILIDADConservar el Suplemento Congelado del Chang Medium C por debajo de -10°C, el Suplemento Liofilizado del Chang Medium C entre 2°C y 8°C, el Chang Medium B Basal entre 2°C y 8°C, y el Chang Medium C completo entre 2°C y 8°C. El Chang Medium B Basal no se debe congelar.

Proteger este producto de la luz fluorescente.

Compruebe las etiquetas individuales de cada botella para ver las fechas de caducidad específicas de cada componente. El Chang Medium C Completo se puede conservar refrigerado entre 2ºC y 8ºC un máximo de 10 días sin que ello altere su funcionalidad. No se recomienda almacenarlo más de 10 días.

NO CONGELE EL CHANG MEDIUM C COMPLETO.

COMPONENTES mg/LSales...............................................................7900Dextrosa..........................................................1400Aminoácidos....................................................1000Polipéptidos.........................................................66Vitaminas.............................................................22Desoxirribonucleósidos........................................21Ribonucleósidos..................................................20Piruvato de Sodio...............................................110Otros Componentes...............................................8Hormonas y otros elementos traza................0.0025Hormonas Esteroides....................................0.0013Suero de ternera recién nacida.....................6% v/vSuero fetal de ternera...................................6% v/v

PRECAUCIONES Y ADVERTENCIASEste disposit ivo debe ser uti l izado por personal capacitado en procedimientos que incluyan la aplicación prevista para el mismo.

PREPARACIÓN DEL PRODUCTO Suplemento liofilizado1. Dejar equi l ibrar a temperatura ambiente el

Suplemento Liofilizado del Chang Medium C.

2. Utilizando condiciones asépticas, añadir 10 mL o 50 mL de agua destilada estéril al liofilizado. El vial de 10 mL es para el Chang Medium B Basal de 90 mL; el vial de 50 mL es para el Chang Medium B Basal de 450 mL.

3. Remueva suavemente e l v ia l para fac i l i tar la comple ta d iso luc ión (NOTA: puede ser necesario calentar el vial 5 minutos a 37ºC para disolver completamente el suplemento).

4. T r a n s f e r i r a s é p t i c a m e n t e e l c o n t e n i d o c o m p l e t o d e l S u p l e m e n t o r e c o n s t i t u i d o a l a bo te l l a de Chang Med ium B Basa l .

5. Mezclar el Chang Medium C Completo removiendo bien la botella.

6. Añadir L-Glutamina, 10 mL/L (200mM). Si se desea, se puede añadir antibióticos.

Suplemento congelado1. Descongelar el Suplemento Congelado del Chang

Medium C agitando rápidamente el vial en un baño a 37ºC.

2. Transferir asépticamente el contenido completo del Suplemento descongelado a la botella de Chang Medium B Basal.

4. Añadir L-Glutamina 10 mL/L (200mM). Si se desea, se puede añadir antibióticos.

PREPARACIÓN DE ALÍCUOTAS DE SUPLEMENTO DEL CHANG MEDIUM CSuplemento liofilizadoSi no se va a utilizar el Chang Medium C Completo en un período de 10 días es conveniente preparar cantidades más pequeñas de medio siguiendo el siguiente protocolo:

1. Reconstituir el Suplemento Liofilizado del Chang Medium C.

2. En condiciones asépticas, repartir el suplemento en alícuotas de un tamaño adecuado y congelarlas.

3. También en condiciones de asepsia, dispensar el Chang Medium B Basal en el mismo número de alícuotas.

4. Para preparar el Chang Medium C Completo, añadir una alícuota descongelada de Suplemento de Chang Medium C a una alícuota de Chang Medium B Basal.

5. Mezclar bien.

Medium C.

2. En condiciones asépticas, repartir el suplemento en alícuotas de un tamaño adecuado y congelarlas (NOTA: el vial de suplemento contiene 14 mL o 70 mL. Distribuir uniformemente).

3. Tambien en condiciones de asepsia, dispensar el Chang Medium B Basal en el mismo número de alícuotas.

5. Mezclar bien.

INSTRUCCIONES DE USOEl pH usado de los medios debe estar entre 6.8 y 7.2 (el medio debe ser de color ligeramente asalmonado). El pH puede ajustarse fácilmente poniendo el medio en un incubador al 5% a 8% CO2, con el tapón ligeramente desenroscado durante unos 30 minutos.

El pH final debe ser de 6.8 a 7.2.

Para más detalles sobre la utilización de este producto, consulte los protocolos de trabajo de su propio laboratorio, los cuales han sido desarrollados y especialmente optimizados de acuerdo a su programa médico particular.

Utilización de Chang Medium C en cultivos primarios: Metodología In Situ

1. Centrifugar el líquido amniótico a baja velocidad para concentrar las células.

2. Resuspender el precipitado de células en un volumen pequeño del propio líquido amniótico de la paciente. Por ejemplo, aspirar el sobrenadante de 10 mL dejando 0.5 mL de líquido, y resuspender. Añadir suficiente Chang Medium C a la suspensión concentrada de células para alcanzar un volumen de cultivo final de 0.5 mL por cubre-objetos (un total de 4 cubre-objetos por muestra), o 2 mL por frasco.

3. Sin perturbarlos, incubar los cultivos a 37°C en una atmósfera de 5% CO2.

4. Realimentar los cultivos en el día 2 añadiendo 2 mL de Chang Medium C.

5. A los 4 o 5 días, comprobar el crecimiento en los cultivos. Una vez que se observe crecimiento, aspirar todo el medio de cultivo y añadir 2 mL de Chang Medium C fresco. A partir de este momento, es recomendable cambiar el medio de los cultivos cada 2 días.

6. Comprobar el crecimiento de los cultivos durante o después del quinto día, y sacrificar cuando se observe que hay suficientes colonias.

7. Se obtienen mejores resultados cuando se realiza un cambio de medio con Chang Medium D el día anterior al sacrificio.

Utilización de Chang Medium C en cultivos primarios: Metodología en frasco.1. Centrifugar el líquido amniótico a baja velocidad para

concentrar las células.

2. Resuspender el precipitado celular en un volumen pequeño del propio líquido amniótico de la paciente. Por ejemplo, aspirar el sobrenadante de 10 mL dejando 1 mL de líquido y resuspender. Añadir 4 mL de Chang Medium C para obtener un volumen total de 5 mL por frasco.

4. Revisar el crecimiento en el día 5. Cambiar el medio por Chang Medium C fresco y sacrificar el cultivo si observa un crecimiento suficiente .

5. Comprobar el crecimiento de los cultivos y cambiar completamente el medio cada día de aquí en adelante, hasta observar un número suficiente de colonias para sacrificar.

6. Se obtienen mejores resultados cuando se realiza un cambio de medio con Chang Medium C el día anterior al sacrificio.

NOTA: para sistemas cerrados, inyecte cada frasco de cultivo con una mezcla de 5% CO2 – 95% aire durante 20 segundos. Cierre herméticamente los frascos e incúbelos a 37ºC . (Se recomienda unir una pipeta pasteur estéril a la fuente de CO2 para garantizar la esterilidad del gas que se inyecta en el medio de cultivo).

UTILIZACIÓN DE CHANG MEDIUM C EN EL CULTIVO DE CÉLULAS DEL LÍQUIDO AMNIÓTICO DERIVADAS DE CULTIVO PRIMARIO.Para realizar pases de los amniocitos cultivados, tratar los cultivos con tripsina ( o pronasa, etc.) como se tratan normalmente las células en un medio convencional. Es conveniente monitorizar los cultivos al tratarlos con proteasas. Los amniocitos cultivados en Medio Chang C tienden a ser más sensibles al tratamiento con proteasas que los cultivados en medios convencionales. Es recomendable controlar el proceso para reajustar el protocolo en caso que sea necesario.

CONTROL DE CALIDADESTERILIDADEl suero usado en la producción de Chang Medium C se ha testado para contaminación viral de acuerdo a la normativa CFR capítulo 9, apartado 113.53. Asimismo, se ha comprobado la contaminación por Micoplasma. El Suplemento del Chang Medium C y el Chang Medium B Basal están esterilizados por filtración en filtros de 0.2 micras. Muestras representativas del Chang Medium B Basal y del Suplemento del Chang Medium C son testadas para posibles contaminaciones bacteriológicas siguiendo los protocolos de esterilidad descritos en el test de esterilidad USP <71> actual.

Chang Medium® es una marca registrada de Irvine Scientific.

PORTUGUÊS

ΕΛΛΗΝΙΚΆ

2 ΚΑΙ

5. Misturar bem.

Medium C.

5. Misturar bem.

FRANÇAIS

choriales.

5. Bien mélanger.

5. Bien mélanger

ESPAÑOL

coriónicas.

5. Mezclar bien.

Medium C.

5. Mezclar bien.

PORTUGUÊS

ΕΛΛΗΝΙΚΆ

2 ΚΑΙ

5. Misturar bem.

Medium C.

5. Misturar bem.

FRANÇAIS

choriales.

5. Bien mélanger.

5. Bien mélanger

ESPAÑOL

coriónicas.

5. Mezclar bien.

Medium C.

5. Mezclar bien.

PORTUGUÊS

ΕΛΛΗΝΙΚΆ

2 ΚΑΙ

5. Misturar bem.

Medium C.

5. Misturar bem.

FRANÇAIS

choriales.

5. Bien mélanger.

5. Bien mélanger

ESPAÑOL

coriónicas.

5. Mezclar bien.

Medium C.

5. Mezclar bien.

ANVENDELSEChang Medium C kan anvendes til følgende applikationer: 1. Primær dyrkning af amnionvæskeceller 2. Dyrkning af passerede amnionvæskeceller 3. Dyrkning af knoglemarvsceller 4. Solidt amnionvæv fra chorionvilliprøver

DETTE MEDIUM ER FREMSTILLET TIL BRUG I BÅDE ÅBNE (KULTURER DER ER TILPASSET EN ATMOSFÆRE PÅ 5 % CO2) OG LUKKEDE DYRKNINGSSYSTEMER (KULTURER TILSAT 5 % CO2 OG INKUBERET MED TÆT LUKKET LÅG PÅ DYRKNINGSKARRENE).

Forsigtig: Chang Medium C-komponenter må ikke anvendes efter udløbsdatoen på de enkelte etiketter.

PRODUKTBESKRIVELSE Chang Medium® C blev udviklet til primær dyrkning af humane amnionvæskeceller til karyotypebestemmelse og anden antenatal genetisk testning. DENNE FORMULERING ER OPTIMERET TIL BÅDE ÅBNE OG LUKKEDE SYSTEMER.

OPBEVARING OG STABILITET Opbevar Chang Medium C frossent supplement tillæg på under 10°C, Chang Medium C lyofiliseret supplement ved 2-8 ºC, Chang Medium B basal ved 2-8 ºC og komplet Chang Medium C ved 2-8 ºC. Chang Medium B basal må ikke nedfryses.

Beskyttes mod fluorescerende lys.

Se udløbsdatoen på de enkelte flaskers etiket. Komplet Chang Medium C kan opbevares ved 2-8 ºC i højest 10 dage inden brug uden, at det mister sin virkning. Det anbefales ikke at opbevare det længere end 10 dage.

KOMPLET CHANG MEDIUM C MÅ IKKE NEDFRYSES.

KOMPONENTER mg/l Salte...........................................................................7900 Dekstrose...................................................................1400Aminosyrer..................................................................1000Polypeptider....................................................................66Vitaminer.........................................................................22Deoxyribonukleosider.....................................................21Ribonukleosider..............................................................20Natriumpyruvat.............................................................110Andre komponenter..........................................................8Hormoner og sporelementer....................................0.0025Steroidhormoner......................................................0,0013Serum fra nyfødt kalv........................................6 % vol/volFøtalt bovint serum...........................................6 % vol/vol

FORHOLDSREGLER OG ADVARSLER Dette udstyr er beregnet til brug af personale, der er uddannet i procedurer, der inkluderer den indicerede anvendelse, som dette udstyr er beregnet til.

FORBEREDELSELyofiliseret supplement 1. Lad Chang Medium C lyofiliseret supplement nå

stuetemperatur.

2. Brug aseptisk teknik og tilsæt 10 ml eller 50 ml sterilt, destilleret vand til lyofilisatet. 10 ml-flasken er til 90 ml Chang Medium B basal, og 50-ml-flasken er til 450 ml Chang Medium B basal.

3. Hvirvl flasken forsigtigt, så indholdet opløses helt. (BEMÆRK: Det kan være nødvendigt at inkubere flasken ved 37 ºC i 5-10 minutter for at opløse supplementet helt).

4. Overfør aseptisk hele indholdet af det restituerede Chang Medium C supplement til flasken med Chang Medium B basal.

5. Bland det komplette Chang Medium C godt ved at hvirvle flasken.

KÄYTTÖTARKOITUSChang Medium C:tä voidaan käyttää seuraaviin sovellutuksiin: 1. amnionnesteen solujen primääriviljely 2. viljelmässä jakautuneiden amnionnesteen solujen

kasvatus 3. luuydinsolujen viljely 4. kiinteä amnionkudos korionvillusnäytteistä.

TÄMÄ ELATUSAINE ON SUUNNITELTU KÄYTETTÄVÄKSI SEKÄ AVOIMISSA (VILJELMÄT TASAPAINOTETAAN 5 % CO2-ILMAKEHÄSSÄ) ETTÄ SULJETUISSA VILJELYJÄRJESTELMISSÄ (VILJELMÄT TÄYTETÄÄN 5 % CO2:LLA JA INKUBOIDAAN VILJELYPULLOJEN KORKIT TIUKASTI SULJETTUINA).

Varoitus: Älä käytä Chang Medium C:n aineosia etiketissä annetun viimeisen käyttöpäivän jälkeen.

TUOTTEEN KUVAUS Chang Medium® C kehitettiin ihmisen amnionnesteen solujen primääriseen viljelyyn karyotyypitystä ja muuta antenataalista geneettistä testausta varten. TÄMÄ KOOSTUMUS ON OPTIMOITU SEKÄ AVOIMIA ETTÄ SULJETTUJA JÄRJESTELMIÄ VARTEN.

SÄILYTYS JA STABIILIUS Säilytä Chang Medium C Frozen Supplement alle -10 °C, Chang Medium C lyofilisoitu lisäaine lämpötilassa 2 °C – 8 °C, Chang Medium B Basal lämpötilassa 2 °C – 8 °C, ja täydellinen Chang Medium C lämpötilassa 2 °C – 8 °C. Chang Medium B Basal -elatusainetta ei saa pakastaa.

Suojaa fluoresoivalta valolta.

Katso yksittäisten aineosien pullojen etiketeistä spesifiset viimeiset käyttöpäivät. Täydellistä Chang Medium C -elatusainetta voidaan säilyttää lämpötilassa 2 °C – 8 °C 10 päivän ajan ennen käyttöä ilman että tämä vaikuttaisi sen toimintaan. Yli 10 päivän säilytystä ei suositella.

ÄLÄ PAKASTA TÄYDELLISTÄ CHANG MEDIUM C -ELATUSAINETTA.

AINEOSAT mg/lSuolat..........................................................................7,900Dekstroosi...................................................................1,400Aminohapot.................................................................1,000Polypeptidit.......................................................................66Vitamiinit...........................................................................22Deoksiribonukleosidit........................................................21Ribonukleosidit.................................................................20Natriumpyruvaatti............................................................110Muut aineosat.....................................................................8Hormonit ja hivenaineet.............................................0,0025Steroidihormonit.........................................................0,0013Vastasyntyneen vasikan seerumi.............................6 % v/vFetaalinaudan seerumi.............................................6 % v/v

VAROTOIMET JA VAROITUKSET Tämä laite on tarkoitettu sellaisten henkilöiden käytettäväksi, jotka on koulutettu suorittamaan toimenpiteitä, joihin kuuluu laitteen käyttötarkoituksen mukainen asianmukainen käyttö.

VALMISTELU KÄYTTÖÄ VARTEN Lyofilisoitu lisäaine 1. Anna Chang Medium C lyofilisoidun lisäaineen

tasapainottua huoneenlämpötilaan.

2. Lisää aseptisilla tekniikoilla 10 ml tai 50 ml steriiliä tislattua vettä lyofilisaattiin. 10 ml:n pullo on Chang Medium B Basal -elatusainetta (90 ml) varten; 50 ml pullo on Chang Medium B Basal -elatusainetta (450 ml) varten.

3. Pyöritä pulloa hellävaroen täydellisen liukenemisen aikaansaamiseksi . (HUOMAUTUS: Voi ol la välttämätöntä inkuboida pulloa 37 °C:n lämpötilassa 5–10 minuuttia lisäaineen liuottamiseksi täysin).

4. Siirrä aseptisesti uudelleen liuotetun Chang Medium C -lisäaineen koko sisältö Chang Medium B Basal -pulloon.

6. Tilsæt L-glutamin, 10,0 ml/l (200 mM). Antibiotika kan eventuelt tilsættes.

Frossent supplement 1. Optø hurtigt Chang Medium C frossent supplement ved

at hvirvle flasken i et 37 °C vandbad.

2. Overfør aseptisk hele indholdet af det optøede Chang Medium C supplement til flasken med Chang Medium B basal.

AFMÅLING AF CHANG MEDIUM C SUPPLEMENT I MINDRE MÆNGDER Lyofiliseret supplement Hvis det komplette Chang Medium C ikke kan anvendes inden for 10 dage, kan det afmåles i mindre mængder vha. denne ændring i proceduren:

1. Restituer Chang Medium C lyofiliseret supplement.

2. Fordel mediet aseptisk i mængder af passende størrelse og nedfrys dem.

3. Dispenser også aseptisk Chang Medium B basal i et tilsvarende antal mængder.

4. Det komplette Chang Medium C klargøres ved at tilsætte én afmålt mængde optøet Chang Medium C supplement til én afmålt mængde Chang Medium B basal.

5. Bland godt.

Frossent supplement 1. Optø Chang Medium C frossent supplement.

2. Fordel mediet aseptisk i mængder af passende størrelse og nedfrys dem. (BEMÆRK: Flaskerne med supplement indholder 14 ml eller 70 ml. Fordel ligeligt).

5. Bland godt.

BRUGSANVISNING PH-VÆRDIEN AF DET MEDIUM, DER ANVENDES TIL KULTURERNE, SKAL VÆRE 6,8-7,2 (dvs. at mediet skal have en let gullig laksefave). pH-værdien kan let justeres ved at anbringe mediet i en inkubator med 5-8 % CO2 med låget løsnet let.

Den endelige pH-værdi skal ligge på 6,8-7,2.

For yderligere oplysninger om brug af disse produkter skal hvert laboratorium henvise til egne procedurer og protokoller, som er blevet specifikt udviklet og optimeret til laboratoriets eget, medicinske program.

Anvendelse af Chang Medium C til primære kulturer: Metodologi in situ

1. Centrifuger amnionvæsken ved lav hastighed for at koncentrere cellerne.

2. Resuspender cellepelleten i en lille volumen af pa t ien tens egen amnionvæske. Asp i re r fx supernatanten fra 10 ml centrifugeret amnionvæske til 0,5 ml over cellepelleten, og resuspender. Tilsæt nok Chang Medium C til den koncentrerede cellesuspension for at få en endelig volumen på 0,5 ml pr. dækglas (i alt 4 dækglas) eller 2 ml pr. ampul.

3. Inkubér kulturerne uforstyrret ved 37 °C i en atmosfære med 5 % CO2.

4. Skyl kulturerne på dag 2 ved at tilsætte 2 ml Chang Medium C.

5. Efter 4-5 dage skal kulturernes vækst kontrolleres. Kulturerne skal forsynes med nyt medium, når vækst observeres. Dette gøres ved at fjerne hele kultursupernatanten og tilsætte 2 ml friskt Chang Medium C. Det anbefales, at kulturerne forsynes med friskt medium hver 2. dag herefter.

6. Kontroller kulturernes vækst på/eller efter dag 5 og høst, når der kan observeres nok kolonier.

7. De bedste resultater opnås, hvis kulturerne forsynes med Chang Medium C dagen inden, at de høstes.

Anvendelse af Chang Medium C til primære kulturer: Metodologi med kolbe 1. Centrifuger amnionvæsken ved lav hastighed for at

koncentrere cellerne.

2. Resuspender cellepelleten i en lille volumen af patientens egen amnionvæske. Aspirer fx supernatanten fra 10 ml centrifugeret amnionvæske til 1 ml over cellepelleten, og resuspender. Tilsæt 4 ml Chang Medium C, så den totale volumen er 5 ml pr. kolbe.

4. Kontroller væksten på dag 5. Udskift mediet med friskt Chang Medium C og høst, hvis tilstrækkelig cellevækst kan observeres.

5. Kontroller kulturernes vækst og udskift mediet fuldstændigt hver anden dag herefter, indtil nok kolonier kan observeres, som er klar til at blive høstet.

BEMÆRK: I lukkede systemer skal hver dyrkningskolbe tilsættes 5 % CO2 - 95 % luft i 20 sekunder. Luk låget tæt til på dyrkningskolberne og inkuber ved 37 °C. (Det anbefales at slutte en steril Pasteurpipette med hætte til CO2-kilden for at sikre, at den indgående gas er steril).

Anvendelse af Chang Medium C til dyrkning af passerede amnionvæskeceller:

Passage af cellerne opnås ved at behandle kulturerne med trypsin (eller pronase m.m.) som ved celler, der dyrkes i konventionelt medium. Proteasebehandling skal imidlertid overvåges nøje. Amnionvæskeceller, der dyrkes i Chang Medium C, har en tendens til at være mere sensitive over for proteasebehandling end amnionvæskeceller, der dyrkes i konventionelt medium. Det kan være nødvendigt at ændre protokollen for at tage hensyn hertil.

KVALITETSSIKRINGSTERILITET Det serum, der er anvendt til fremstilling af Chang Medium C supplement, er blevet testet for viruskontamination ifølge CFR Title 9 Part 113.53. Det er også blevet screenet for mykoplasmakontamination. Chang Medium B basal og Chang Medium C supplement er steriliseret vha. filtrering gennem et filter på 0,1 mikron. Repræsentative prøver af Chang Medium B basal og Chang Medium C supplement er blevet testet for bakteriologisk kontamination ifølge den aktuelle protokollen for sterilitetstesting som beskrevet i den aktuelle USP sterilitetstest <71>.

Chang Medium® er et registreret varemærke tilhørende Irvine Scientific.

5. Sekoita täydellinen Chang Medium C hyvin pyörittämällä pulloa.

6. Lisää L-glutamiini, 10,0 ml/l (200 mM). Muita antibiootteja voidaan lisätä haluttaessa.

Pakastettu lisäaine 1. Sulata Chang Medium C pakastettu lisäaine nopeasti

pyörittämällä pulloa 37 °C:n vesihauteessa.

2. Siirrä aseptisesti sulatetun Chang Medium C -lisäaineen koko sisältö Chang Medium B Basal -pulloon.

CHANG MEDIUM C -LISÄAINEEN JAKAMINEN ERIIN Lyofilisoitu lisäaine Jos et pysty käyttämään täydellistä Chang Medium C:tä 10 päivän sisällä, haluat kenties jakaa sen pienempiin määriin noudattamalla tämä muutettua menetelmää:

1. Liuota Chang Medium C lyofilisoitu lisäaine.

2. Jaa aseptisesti sopivan kokoisiin alikvootteihin (eriin) ja pakasta.

3. Jaa myös aseptisesti Chang Medium B Basal vastaavaksi määräksi alikvootteja.

4. Täydellisen Chang Medium C:n valmistamiseksi lisää yksi sulatettu Chang Medium C -lisäaineen alikvootti yhteen alikvoottiin Chang Medium B Basal -elatusainetta.

5. Sekoita hyvin.

Pakastettu lisäaine 1. Sulata Chang Medium C pakastettu lisäaine.

2. Jaa aseptisesti sopivan kokoisiin alikvootteihin (eriin) ja pakasta uudelleen. (HUOMAUTUS: Lisäainepullo sisältää 14 ml tai 70 ml. Jaa tasaisesti.)

5. Sekoita hyvin.

KÄYTTÖOHJEET VILJELMIEN RUOKKIMISEEN KÄYTETYN ELATUSAINEEN pH:N ON OLTAVA VÄLILLÄ 6,8–7,2 (eli elatusaineen on oltava väriltään hieman kellertävän lohenpunainen). pH:ta voidaan säätää helposti sijoittamalla elatusaine 5 % – 8 % CO2-soluviljelykaappiin niin että korkki on hieman löysällä.

Lopullisen pH:n on oltava 6,8–7,2. Lisätietoja näiden tuotteiden käytöstä kunkin laboratorion tulee hakea omista menettelyohjeistaan ja protokollista, jotka on erityisesti kehitetty ja optimoitu paikallista lääkinnällistä ohjelmaa varten.

Chang Medium C:n käyttö primääriviljelmiin: in situ menetelmät

1. Sentrifugoi amnionneste pienellä nopeudella solujen konsentroimiseksi.

2. Suspendoi solusakka uudelleen pieneen tilavuuteen potilaan omaa amnionnestettä. Esimerkiksi ime sentrifugoidun amnionnesteen (10 ml) supernatantti 0,5 ml:n ti lavuuteen solusakan yläpuolella ja suspendoi uudelleen. Lisää riittävästi Chang Medium C:tä konsentroituun solusakkaan, jotta lopullinen maljaustilavuus on 0,5 ml per peitinlasi (kaikkiaan 4 peitinlasia) tai 2 ml per pieni pullo.

3. Inkuboi viljelmiä niitä liikuttamatta 37 °C:n lämpötilassa 5 % CO2-ilmakehässä.

4. Täytä viljelmät päivänä 2 lisäämällä 2 ml Chang Medium C:tä.

5. Viljelmien kasvu tulee tarkistaa 4–5 päivän kuluttua.Viljelmiä on ruokittava kun kasvua on havaittu. Ruoki viljelmiä poistamalla kaikki viljelmän supernatantti ja vaihtamalla tilalle 2 ml tuoretta Chang Medium C:tä. Suositellaan, että viljelmiä ruokitaan tämän jälkeen joka toinen päivä.

6. Tarkista viljelmien kasvu päivänä 5 tai sen jälkeen ja kerää solut, kun havaitset riittävän määrän pesäkkeitä.

7. Parhaat tulokset saadaan, kun viljelmiä ruokitaan Chang Medium C:llä keräämistä edeltävänä päivänä.

Chang Medium C:n käyttö primääriviljelmiin: Pullossa suoritettavat menetelmät

2. Suspendoi solusakka uudelleen pieneen tilavuuteen potilaan omaa amnionnestettä. Esimerkiksi ime sentrifugoidun amnionnesteen (10 ml) supernatantti 1 ml:n tilavuuteen solusakan yläpuolella ja suspendoi uudelleen. Lisää 4 ml Chang Medium C:tä niin, että kokonaistilavuus on 5 ml per pullo.

4. Tarkista kasvu päivänä 5. Vaihda elatusaine tuoreeseen Chang Medium C:hen ja kerää, jos havaitset riittävää solujen kasvua.

5. Tarkista viljelmien kasvu ja vaihda kokonaan elatusaine joka toinen päivä tämän jälkeen, kunnes havaitaan riittävästi pesäkkeitä ja ne ovat valmiita kerättäviksi.

HUOMAUTUS: Suljetuissa järjestelmissä huuhtele jokainen viljelypullo kaasuseoksella 5 % CO2 – 95 % ilmaa 20 sekunnin ajan. Sulje viljelypullojen korkit tiukasti ja inkuboi niitä 37 °C:n lämpötilassa. (On suositeltavaa, että steriili, suodattimella varustettu pasteur-pipetti kiinnitetään CO2-lähteeseen sisään tulevan kaasun steriiliyden varmistamiseksi.)

Chang Medium C:n käyttö viljelmässä jakautuneiden amnionnesteen solujen kasvattamiseksi:

Kun haluat antaa solujen jakautua viljelmässä, käsittele viljelmiä trypsiinillä (tai pronaasilla jne.), kuten normaalisti tekisit silloin kun soluja kasvatetaan tavanomaisessa elatusaineessa. Proteaasikäsittelyä on kuitenkin seurattava huolellisesti. Amnionnesteen soluilla, jotka kasvatetaan Chang Medium C:llä, on taipumus olla herkempiä proteaasikäsittelylle kuin amnionnesteen soluilla, jotka kasvatetaan tavanomaisessa elatusaineessa. Protokollan muuttaminen tämän ottamiseksi huomioon saattaa olla tarpeen.

LAADUNVARMISTUSSTERIILIYS Chang Medium C -lisäaineen tuotantoon käytettävästä seerumista on testattu viruskontaminaatio CFR Title 9 Part 113.53:n mukaisesti. Sille on myös tehty mykoplasmakontaminaatiota koskeva seulontatutkimus. Sekä Chang Medium B Basal että Chang Medium C -lisäaine steriloidaan suodattamalla 0,1 mikronin suodattimen läpi. Chang Medium B Basal -elatusaineesta ja Chang Medium C -lisäaineesta testataan edustavien näytteiden mahdollinen bakteerikontaminaatio noudattamalla steriiliyden testausprotokollaa, joka on kuvattu nykyisessä USP-steriiliystestissä <71>.

Chang Medium® on Irvine Scientificin rekisteröity tavaramerkki.

LATVISKI

IETEICAMĀ IZMANTOŠANAChang Medium C var lietot turpmāk minētajos gadījumos:

1. augļa ūdeņu šūnu primārajā kultivēšanā2. nošķirtu augļa ūdeņu šūnu audzēšanā3. kaulu smadzeņu šūnu kultivēšanā4. kompaktajiem amnija audiem, kas iegūti horija

bārkstiņu parauga izmeklēšanā.

ŠĪ BAROTNE IR PAREDZĒTA IZMANTOŠANAI GAN VAĻĒJĀS (KULTŪRAS STABILIZĒTAS 5% CO2 VIDĒ), GAN SLĒGTĀS KULTIVĒŠANAS SISTĒMĀS (KULTŪRAS UZPLUDINĀTAS AR 5% CO2 UN KULTŪRU SATUROŠIE KONTEINERI IEVIETOTI INKUBATORĀ AR STINGRI NOSLĒGTIEM AIZBĀŽŅIEM).

Uzmanību: Nelietojiet Chang Medium C veidojošās daļas pēc derīguma termiņa, kas norādīts katra konkrētā iepakojuma marķējumā.

PRODUKTA APRAKSTSChang Medium® C ir izveidots izmantošanai cilvēka augļa ūdeņu šūnu primārajā kultivēšanā, lai veiktu kariotipu noteikšanas un citus antenatālos ģenētiskos testus. ŠIS SASTĀVS IR OPTIMIZĒTS IZMANTOŠANAI GAN AR VAĻĒJU, GAN SLĒGTU SISTĒMU.

UZGLABĀŠANA UN STABILITĀTEUzglabājiet Chang Medium C Frozen Supplement temperatūrā zem -10ºC temperatūrā, Chang Medium C liofilizēto piedevu jāuzglabā 2ºC līdz 8ºC temperatūrā, Chang Medium B Basal (pamata) jāuzglabā 2ºC līdz 8ºC temperatūrā, bet pilnīgo (complete) Chang Medium C - 2ºC līdz 8ºC temperatūrā. Chang Medium B Basal (pamata) nedrīkst saldēt.

Aizsargāt no fluorescējošas gaismas iedarbības.

Konkrēto derīguma termiņu skatiet atsevišķās sastāvdaļas pudeles marķējumā. Pirms lietošanas Complete Chang Medium C var uzglabāt 2ºC līdz 8ºC temperatūrā 10 dienas, neiespaidojot barotnes funkcijas. Šādi nav ieteicams uzglabāt ilgāk par 10 dienām.

NESALDĒT COMPLETE CHANG MEDIUM C.

SASTĀVDAĻAS mg/lSāļ i ……………………………………... . . . . . . . . 7900Dekstroze ………………………………………………. 1400Aminoskābes ……………………………….. . 1000Pol ipept īd i …………………………………….. . . 66Vi tamīn i …………………………………….. . . . . . . 22Dezoks i r ibonukleozīd i ………………………… 21R i b o n u k l e o z ī d i … … … … … … … … … … … … 2 0Nātrija piruvāts …………………………………………….. 110Citas sastāvdaļas ………………………………………… 8Hormoni un iezīmēšanas sastāvdaļas …………… 0.0025Steroīdhormoni…………………………………….. 0 .0013Jaundzimušu teļu serums ………… 6% no kopējā tilpumaLiellopu embriju serums …………... 6% no kopējā tilpuma

PIESARDZĪBAS PASĀKUMI UN BRĪDINĀJUMIŠo ierīci ir paredzēts izmantot personālam, kas ir apmācīts tādu procedūru veikšanai, kuras ietver norādīto izmantošanu, kurai šī ierīce ir paredzēta.

SAGATAVOŠANA LIETOŠANAILiofilizētā piedeva1. Ļaujiet Chang Medium C liofilizētajai piedevai

nostabilizēties līdz istabas temperatūrai.

2. Izmantojot aseptiskus paņēmienus, pievienojiet liofilizātam 10 ml vai 50 ml sterila, destilēta ūdens. 10 ml flakons ir paredzēts 90 ml Chang Medium B Basal (pamata); 50 ml flakons ir paredzēts 450 ml Chang Medium B Basal (pamata).

3. Uzmanīgi pagroziet flakonu, lai panāktu pilnīgu izšķīšanu. (PIEZĪME: Var būt nepieciešams inkubēt flakonu 37º C temperatūrā 10 minūtes, lai piedevu pilnībā izšķīdinātu).

4. Aseptiski pārnesiet visu sagatavotā Chang Medium C Supplement (piedevas) saturu uz Chang Medium B Basal (pamata) pudeli.

5. Labi samaisiet pilnīgo Chang Medium C, pavirpinot pudeli.

6. Pievienojiet 10,0 ml (200 mM) L-glutamīna. Ja vēlams, var pievienot antibiotikas.

Saldētā piedeva1. Ātri atlaidiniet Chang Medium C saldēto piedevu,

pagrozot pudeli 37°C ūdens peldē.

CHANG MEDIUM C PIEDEVU IEDALĪŠANA DEVĀSLiofilizētā piedevaJa nespējat izlietot pilnīgo Chang Medium C 10 dienu laikā, Jūs, iespējams, vēlēsieties sagatavot mazāku daudzumu, izmantojot šo modificēto procedūru:

1. Izšķīdiniet Chang Medium C liofilizēto piedevu.

2. Aseptiski iedaliet parocīga lieluma devās un sasaldējiet atkārtoti.

3. Aseptiski iedaliet arī Chang Medium B Basal (pamata) atbilstoša skaita devās.

4. Lai sagatavotu pilnīgo Chang Medium C, pievienojiet vienu devu atlaidinātas Chang Medium C Supplement (piedevas) vienai devai Chang Medium B Basal (pamata).

5. Labi samaisiet.

Saldētā piedeva1. Atlaidiniet Chang Medium C saldēto piedevu.

2. Aseptiski iedaliet parocīga lieluma devās un sasaldējiet atkārtoti. (PIEZĪME: Flakons satur 14 ml vai 70 ml piedevas. Iedaliet vienlīdzīgās daļās.)

5. Labi samaisiet.

LIETOŠANAS NORĀDĪJUMITās barotnes pH, kuru izmanto kultūru barotņu papildināšanai, ir jābūt 6,8-7,2 (t. i., barotnei jābūt nedaudz iedzeltenā laša krāsā). pH līmeni iespējams vienkārši pielāgot, ievietojot barotnes flakonu ar nedaudz vaļīgāk uzliktu aizbāzni 5%-8% CO2 inkubatorā.

Galīgajam pH līmenim ir jābūt 6,8-7,2.

Lai uzzinātu papildu informāciju par šo produktu lietošanu, katrai laboratorijai jāiepazīstas ar tajā noteiktajām procedūrām un protokoliem, kas īpaši izstrādāti un optimizēti individuālas medicīniskas programmas veikšanai.

Chang Medium C l ietošana primārai kultivēšanai: in situ metode

1. Centrifugējiet augļa ūdeņu šķidrumu ar nelielu ātrumu, lai koncentrētu šūnas.

2. Suspendējiet šūnu lodīti no jauna nelielā daudzumā paša pacienta augļa ūdeņu šķidruma. Piemēram, aspirējiet līdz 0,5 ml supernatanta no 10 ml augļa ūdeņu centrifugāta virs šūnas lodītes un resuspendējiet. Pievienojiet koncentrētajai šūnu suspensijai pietiekamu daudzumu Chang Medium C, lai galīgajam uzklāšanas daudzumam paredzētu 0,5 ml uz katru segstikliņu (pavisam 4 segstikliņi) vai 2 ml uz flakonu.

3. Netraucēti inkubējiet kultūras 37º C temperatūrā 5% CO2 vidē.

4. 2. dienā uzpludiniet kultūras, pievienojot 2 ml Chang Medium C.

5. Pēc 4 līdz 5 dienām jāpārbauda kultivēto šūnu augšana. Tiklīdz tiek novērota kultūru augšana, tām jāpapildina barība. Papildiniet barotni, noņemot visu supernatantu no kultūras un aizvietojot to ar 2 ml svaiga Chang Medium C. Pēc tam ieteicams kultūrām pievienot barotni ik pa 2 dienām.

6. Pārbaudiet kultūru augšanu 5. dienā/pēc 5. dienas un veiciet ievākšanu, kad var novērot pietiekama apjoma kolonijas.

7. Vislabākie rezultāti tiek iegūti, pievienojot kultūrām Chang Medium C barotni iepriekšējā dienā pirms ievākšanas.

Chang Medium C lietošana primārai kultivēšanai: Flakona metode

2. Suspendējiet šūnu lodīti no jauna nelielā daudzumā paša pacienta augļa ūdeņu šķidruma. Piemēram, aspirējiet līdz 1 ml supernatanta no 10 ml augļa ūdeņu centrifugāta virs šūnas lodītes un suspendējiet atkārtoti. Pievienojiet 4 ml Chang Medium C, lai kopējais daudzums katrā flakonā būtu 5 ml.

4. 5. dienā pārbaudiet augšanu. Aizvietojiet barotni ar svaigu Chang Medium C un veiciet ievākšanu, ja novērojama pietiekami efektīva šūnu augšana.

5. Pēc tam pārbaudiet kultūru augšanu un pilnībā nomainiet barotni katru otro dienu, līdz var novērot pietiekama apjoma kolonijas, kas gatavas ievākšanai.

PIEZĪME: Slēgtām sistēmām katra kultūras flakona skalošanai izmantojiet 5% CO2 - 95% gaisa maisījumu 20 sekundes. Cieši uzlieciet kultūras flakoniem aizbāžņus un inkubējiet tos 37° C temperatūrā. (Ieteicams piestiprināt CO2avotam sterilu Pastēra pipeti ar aizbāzni, lai nodrošinātu ieplūstošās gāzes sterilitāti.)

Chang Medium C lietošana nošķirtu augļa ūdeņu šūnu audzēšanā:

Lai nošķirtu šūnas, apstrādājiet kultūras ar tripsīnu (vai pronāzi, u. c.), kā Jūs parasti darītu, ja šūnas tiktu audzētas standarta barotnē. Tomēr, apstrādājot ar proteāzi, jāveic uzmanīga novērošana. Augļa ūdeņu šūnām, kas audzētas Chang Medium C, ir nosliece uz lielāku jutīgumu pret apstrādi ar proteāzi nekā augļa ūdeņu šūnām, kas audzētas standarta barotnē. Var būt nepieciešams pārveidot protokolu, lai ņemtu vērā šo faktu.

KVALITĀTES NODROŠINĀŠANASTERILITĀTEChang Medium C Supplement (piedevas) ražošanā izmantotais serums ir ticis testēts attiecībā uz kontamināciju ar vīrusiem saskaņā ar Federālā noteikumu kodeksa (CFR) 9. nodaļas, sadaļas 113.53 nosacījumiem. Barotne tikusi rūpīgi testēta attiecībā uz piesārņojumu ar mikoplazmu. Gan Chang Medium B Basal (pamata), gan Chang Medium C Supplement (piedeva) ir sterilizēti, filtrējot caur 0,1 mikronu filtru. No Chang Medium B Basal (pamata) un Chang Medium C Supplement (piedeva) ņemtie paraugi ir pārbaudīti, lai noteiktu iespējamo bakterioloģisko piesārņojumu, ievērojot sterilitātes testēšanas protokolu, kas aprakstīts pašreizējos ASV Farmakopejas (USP) noteikumos par sterilitātes testēšanu <71>.

Chang Medium® ir reģistrēta Irvine Scientific preču zīme.

ČESKY

,URČENÉ POUŽITÍ Chang Medium C lze použít k následujícím činnostem: 1. primární kultivace buněk z plodové vody 2. množení pasážovaných buněk z plodové vody 3. kultivace buněk kostní dřeně 4. odběr vzorků pevné amniotické tkáně z choriových

klků.

TOTO MÉDIUM JE URČENO K POUŽITÍ V OTEVŘENÝCH (KULTIVACE V ATMOSFÉŘE S 5 % CO2) I UZAVŘENÝCH SYSTÉMECH (KULTURY INKUBOVÁNY V PEVNĚ UZAVŘENÝCH KULTIVAČNÍCH NÁDOBKÁCH V 5% CO2).

Upozornění: Složky média neužívejte po uplynutí doby použitelnosti uvedené na jejich štítcích.

POPIS VÝROBKU Chang Medium® C bylo vyvinuto k primární kultivaci lidských buněk z plodové vody pro účely karyotypizace a jiných genetických testů. SLOŽENÍ PŘÍPRAVKU BYLO OPTIMALIZOVÁNO PRO OTEVŘENÉ I UZAVŘENÉ SYSTÉMY.

UCHOVÁNÍ A STABILITA Zmrazený doplněk Chang Medium C Frozen Doplatek za cenu nižší než 10°C, Lyofilizovaný doplněk Chang Medium C při teplotě 2 až 8 ºC, základní Chang Medium B při teplotě 2 až 8 ºC a úplné Chang Medium C při teplotě 2 až 8 ºC. Základní Chang Medium B nesmí být zmrazeno.

Chraňte před fluorescenčním světlem.

Datum použití jednotlivých složek najdete na štítku jejich lahvičky. Úplné Chang Medium C lze bez vlivu na funkci uchovávat při teplotě 2 až 8 ºC po 10 dní. Skladování déle než 10 dní se nedoporučuje.

ÚPLNÉ CHANG MEDIUM C CHRAŇTE PŘED MRAZEM.

SLOŽKY mg/lSoli................................................................................7900Glukóza.........................................................................1400Aminokyseliny................................................................1000Polypeptidy........................................................................66Vitamíny.............................................................................22Deoxyribonukleosidy.........................................................21Ribonukleosidy..................................................................20Pyruvát sodný..................................................................110Jiné složky..........................................................................8Hormony a stopové prvky..........................................0,0025Steroidní hormony......................................................0,0013Prekolostrální telecí sérum......................................6 % obj.Fetální telecí sérum.................................................6 % obj.

BEZPEČNOSTNÍ OPATŘENÍ A VAROVÁNÍ Zařízení bylo určeno pro použití školeným personálem při zákrocích, které zahrnují indikovanou aplikaci, pro kterou je zařízení určeno.

PŘÍPRAVA K POUŽITÍ Lyofilizovaný doplněk 1. Lyofilizovaný doplněk Chang Medium C nechte

vytemperovat na pokojovou teplotu.

2. Asepticky přidejte k lyofilizátu 10 ml nebo 50 ml sterilní destilované vody. 10ml lahvička je určena pro 90ml balení základního Chang Medium B; 50ml lahvička pak pro 450ml balení základního Chang Medium B.

3. Jemně lahvičkou zakružte, aby se obsah úplně rozpustil. (POZNÁMKA: Možná bude k úplnému rozpuštění nutné lahvičku 5 – 10 minut inkubovat při teplotě 37 ºC.)

4. Asepticky přeneste všechen rozpuštěný doplněk do láhve se základním Chang Medium B.

5. Dobře promíchejte kroužením láhve.

6. Přidejte L-glutamin, 10,0 ml/l (200 mM). V případě potřeby lze přidat antibiotika.

Zmrazený doplněk

1. Zmrazený doplněk Chang Medium C rychle rozmrazte kroužením lahví ve vodní lázni vyhřáté na 37 °C.

2. Asepticky přeneste celý obsah rozmrazeného doplňku do láhve se základním Chang Medium B.

DÁVKOVÁNÍ DOPLŇKU CHANG MEDIUM CLyofilizovaný doplněk Pokud nemůžete úplné Chang Medium C spotřebovat do 10 dní, můžete připravit i menší množství, a to následující úpravou postupu:

1. Rozpusťte Lyofilizovaný doplněk Chang Medium C.

2. Asepticky rozdělte do alikvotů o vhodné velikosti a zmrazte.

3. Rovněž asepticky nadávkujte základní Chang Medium B do odpovídajícího počtu alikvotů.

4. Až budete chtít připravit úplné Chang Medium C, přidejte jeden díl rozmrazeného doplňku k jednomu dílu základního Chang Medium B.

5. Dobře promíchejte.

Zmrazený doplněk 1. Rozmrazte Zmrazený doplněk Chang Medium C.

2. Asepticky rozdělte do alikvotů o vhodné velikosti a znovu zmrazte. (POZNÁMKA: Lahvička doplňku obsahuje 14 ml nebo 70 ml přípravku. Rozdělte materiál rovnoměrně.)

POKYNY K POUŽITÍ pH MÉDIA POUŽÍVANÉHO K DOPLNĚNÍ ŽIVIN MUSÍ BÝT V ROZMEZÍ 6,8–7,2 (médium tedy musí mít mírně nažloutlou lososovou barvu). pH lze snadno upravit vložením média s mírně povolenou čepičkou do inkubátoru s atmosférou 5-8 % CO2.

Výsledné pH musí být v rozmezí 6,8-7,2.

Pro dodatečné podrobnosti o použití těchto výrobků by každá laboratoř měla konzultovat vlastní laboratorní metody a protokoly, které byly vytvořeny a optimalizovány zvlášť pro váš konkrétní zdravotnický program.

Použití média k primární kultivaci: kultivace in situ

1. Odstřeďte plodovou vodu při nízkých otáčkách a koncentrujte tak buňky.

2. Rozpusťte buněčnou peletu v malém objemu plodové vody stejné pacientky. Například odsajte supernatant z 10 ml plodové vody a ponechte jen 0,5 ml nad peletou. Poté znovu rozpusťte. Ke koncentrované buněčné suspenzi přidejte dostatečné množství Chang Medium C, abyste měli 0,5 ml suspenze na jedno krycí sklíčko (celkem 4 krycí sklíčka) nebo 2 ml na kultivační lahvičku.

3. Inkubujte kultury v klidu při teplotě 37° C a atmosféře 5 % CO2.

4. Druhý den kultury zalijte 2 ml přípravku Chang Medium C.

5. Po 4 – 5 dnech zkontrolujte růst kultur. Jakmile začnou

růst, je třeba dodat živiny. Odstraňte proto veškerý supernatant a nahraďte 2 ml čerstvého Chang Medium C. Poté doporučujeme doplňovat živiny každé 2 dny.

6. Dále růst kultury kontrolujte průběžně a odeberte materiál, jakmile se vytvoří dostatek kolonií.

7. Optimálních výsledků dosáhnete odebráním materiálu den po přidání čerstvého média.

Použití Chang Medium C k primární kultivaci: kultivace v lahvích

2. Rozpusťte buněčnou peletu v malém objemu plodové vody stejné pacientky. Například odsajte supernatant z 10 ml plodové vody a ponechte jen 1 ml nad peletou. Poté znovu rozpusťte. Přidejte 4 ml přípravku Chang Medium C do celkového objemu 5 ml na láhev.

4. Zkontrolujte růst 5. den. Vyměňte médium za čerstvé Chang Medium C, a pokud je kultura dostatečně narostlá, odeberte materiál.

5. Poté obden kontrolujte růst kultury a zcela vyměňujte médium, dokud se nevytvoří dostatek kolonií a nejsou připraveny k použití.

POZNÁMKA: U uzavřených systémů proplachujte každou kultivační láhev 20 sekund směsí 5 % CO2 – 95 % vzduchu. Uzavřete kultivační láhve čepičkami a inkubujte při teplotě 37 °C. Doporučujeme k ústí zdroje plynu připojit sterilní Pasteurovou pipetu, abyste zajistili sterilitu plynu.

Použití k množení pasážovaných buněk z plodové vody:

Chcete-li buňky pasážovat, ošetřete kulturu trypsinem (nebo pronázou atd.), jak to normálně provádíte u buněk pěstovaných v konvenčním médiu. Průběh ošetření proteázou však pečlivě monitorujte. Buňky z plodové vody kultivované v přípravku Chang Medium C bývají citlivější na ošetření proteázou než buňky z konvenčního média. Možná bude nutné v tomto smyslu upravit protokol.

KONTROLA KVALITY STERILITA Sérum použité k produkci doplňku média bylo testováno na možnou virovou kontaminaci dle amerického předpisu CFR Title 9 Part 113.53. Byl proveden také screening možné kontaminace mykoplazmaty. Doplněk Chang Medium C i základní Chang Medium B jsou sterilizovány filtrací přes 0,1µm filtry. Reprezentativní vzorky doplňku i základního média jsou kontrolovány s ohledem na možnou kontaminaci, a to podle protokolu pro test sterility popsaného v aktuálním znění testu USP Sterility <71>.

Chang Medium® je registrovaná ochranná známka společnosti Irvine Scientific.

stuetemperatur.

5. Bland godt.

5. Sekoita hyvin.

LATVISKI

5. Labi samaisiet.

ČESKY

klků.

Zmrazený doplněk

stuetemperatur.

5. Bland godt.

5. Sekoita hyvin.

LATVISKI

5. Labi samaisiet.

ČESKY

klků.

Zmrazený doplněk

stuetemperatur.

5. Bland godt.

5. Sekoita hyvin.

LATVISKI

5. Labi samaisiet.

ČESKY

klků.

Zmrazený doplněk

NEDERLANDS

BEDOELD GEBRUIKChang Medium C kan worden gebruikt voor de volgende toepassingen: 1. de primaire kweek van vruchtwatercellen 2. groeiende gepasseerde vruchtwatercellen 3. de kweek van beenmergcellen 4. vast amnionweefsel uit chorion villi-monsters.

DIT MEDIUM IS GESCHIKT VOOR GEBRUIK IN ZOWEL OPEN (KWEKEN DIE ZIJN GEËQUILIBREERD MET EEN 5% CO2-ATMOSFEER) EN GESLOTEN KWEEKSYSTEMEN (KWEKEN VOLLEDIG BEDEKT MET 5% CO2 EN GEÏNCUBEERD MET KWEEKFLESSEN MET GOED VASTGEDRAAIDE DOPPEN).

Voorzichtig: gebruik Chang Medium C-componenten niet na de vervaldatum die op de afzonderlijke stickers is vermeld.

PRODUCTBESCHRIJVING Chang Medium® C werd ontwikkeld voor de primaire kweek van humane vruchtwatercellen voor gebruik bij karyotypering en ander prenataal genetisch onderzoek. DEZE FORMULE IS GEOPTIMALISEERD VOOR ZOWEL OPEN ALS GESLOTEN SYSTEMEN.

BEWAREN EN STABILITEIT Bewaar Store Chang Medium C Frozen Supplement minder dan 10°C, Chang Medium C gelyofiliseerd supplement bij 2 ºC tot 8 ºC, Chang Medium B basaal bij 2 ºC tot 8 ºC en compleet Chang Medium C bij 2 ºC tot 8 ºC. Chang Medium B basaal mag niet worden ingevroren.

Beschermen tegen fluorescerend licht.

Zie de afzonderlijke componentenstickers op de flessen voor de specifieke vervaldatum. Compleet Chang Medium C mag worden bewaard bij 2 ºC tot 8 ºC gedurende 10 dagen voordat het wordt gebruikt, zonder dat dit de werking beïnvloedt. Bewaren gedurende meer dan 10 dagen wordt afgeraden.

COMPLEET CHANG MEDIUM C MAG NIET WORDEN INGEVROREN.

COMPONENTEN mg/lZouten..................................................................7900Dextrose...............................................................1400Aminozuren..........................................................1000Polypeptiden............................................................66Vitaminen.................................................................22Deoxyribonucleosiden..............................................21Ribonucleosiden.......................................................20Natriumpyruvaat.....................................................110Andere componenten.................................................8Hormonen en sporenelementen........................0,0025Steroïdehormonen.............................................0,0013Serum van pasgeboren kalveren......................6% v/vSerum van ongeboren kalveren (FBS)..............6% v/v

VOORZORGSMAATREGELEN EN WAARSCHUWINGEN Dit hulpmiddel is bedoeld voor gebruik door personeel dat opgeleid is voor procedures inclusief de aangegeven toepassing waarvoor het hulpmiddel is bedoeld.

PREPAREREN VAN COMPLEET CHANG MEDIUM C Gelyofiliseerd supplement 1. Laat Chang Medium C gelyofiliseerd supplement op

omgevingstemperatuur komen.

2. Voeg op aseptische wijze 10 ml of 50 ml steriel gedistilleerd water toe aan het lyofilisaat. De 10 ml flacon is voor 90 ml Chang Medium B basaal; de 50 ml flacon is voor 450 ml Chang Medium B basaal.

3. Draai de flacon voorzichtig rond om een goede oplossing te krijgen. (OPM.: het kan noodzakelijk zijn om de flacon in een incubator te zetten bij 37 ºC gedurende 5 tot 10 minuten om het supplement volledig te laten oplossen).

4. Breng de gehele inhoud van het gereconstitueerde Chang Medium C supplement op aseptische wijze over naar de fles met Chang Medium B basaal.

5. Meng het complete Chang Medium C goed door de fles rond te draaien.

POLSKI

ZASTOSOWANIEPożywka Chang Medium C może być używana w następujących procedurach: 1. hodowla pierwotna komórek ludzkiego płynu

owodniowego 2. rosnące pasażowane komórek płynu owodniowego 3. hodowla komórek szpiku kostnego 4. biopsja stałej tkanki owodni z kosmówki.

POŻYWKA TA JEST PRZEZNACZONA DO UŻYCIA Z A R Ó W N O W S Y S T E M A C H O T W A R T Y C H (RÓWNOWAŻONYCH W ATMOSFERZE 5% CO2), JAK I ZAMKNIĘTYCH (POSIEWY TRAKTOWANE 5% CO2 I INKUBOWANE W SZCZELNIE ZAMKNIĘTYCH NACZYNIACH NA POSIEW).

Środki ostrożności: Nie stosować składników Chang Medium C po upływie daty ważności podanej na poszczególnych etykietach.

OPIS PRODUKTU Pożywka Chang Medium® C została wyprodukowana dla hodowli pierwotnych komórek ludzkiego płynu owodniowego do kariotypowania i przeprowadzania innych przedporodowych testów genetycznych. TA PROCEDURA ZOSTAŁA ZOPTYMALIZOWANA ZARÓWNO DLA OTWARTYCH, JAK I ZAMKNIĘTYCH SYSTEMÓW. PRZECHOWYWANIA I STABILNOŚĆ Przechowywać zamrożony dodatek pożywki Chang Medium C w temperaturze poniżej -10°C, liofilizowany dodatek Chang Medium C w temperaturze od 2°C do 8°C, podstawową pożywkę w temperaturze od 2°C do 8°C i całkowitą pożywkę Chang Medium C w temperaturze od 2°C do 8°C. Podstawowa pożywka Chang Medium B nie może być zamrożona.

Chronić przed światłem fluorescencyjnym.

Data ważności znajduje się na etykietach butelek poszczególnych składników. Całkowita pożywka Chang Medium C może być przechowywana w temperaturze od 2°C do 8°C przez 10 dni bez negatywnego wpływu na jej działanie. Nie zaleca się przechowywania dłużej niż 10 dni.

NIE ZAMRAŻAĆ CAŁKOWITEJ POŻYWKI CHANG MEDIUM C.

SKŁADNIKI mg/lSole......................................................................7900Dekstroza.............................................................1400Aminokwasy..........................................................1000Polipeptydy...............................................................66Witaminy...................................................................22Dezoksyrybonukleozydy...........................................21Rybonukleozydy.......................................................20Pirogronian sodu....................................................110Inne składniki.............................................................8Hormony i elementy śladowe............................0,0025Hormony steroidowe.........................................0,0013Surowica nowonarodzonego cielęcia................6% v/vPłodowa surowica bydlęca................................6% v/v

ŚRODKI OSTROŻNOŚCI I OSTRZEŻENIA To urządzenie jest przeznaczone do użycia przez personel wykwalifikowany w dziedzinie procedur obejmujących wskazane zastosowanie, dla którego to urządzenie jest przeznaczone.

PRZYGOTOWANIE CAŁKOWITEJ POŻYWKI CHANG MEDIUM C. Dodatek liofilizowany 1. Pozostawić liofilizowany dodatek Chang Medium C do

osiągnięcia temperatury pokojowej.

2. Stosując technikę aseptyczną, dodać 10 ml lub 50 ml sterylnej wody destylowanej do liofilizatu. Fiolka 10 ml jest przeznaczona dla 90 ml pożywki podstawowej Chang Medium B; fiolka 50 ml jest przeznaczona dla 450 ml pożywki podstawowej Chang Medium B.

3. Potrząsnąć delikatnie fiolkę ruchem wirowym, aby doprowadzić do powstania roztworu. (UWAGA: Może być konieczne inkubowanie fiolki w temperaturze 37°C przez 5 do 10 minut, aby całkowicie rozpuścić dodatek).

4. Przenieść aseptycznie całą zawartość rozpuszczonego dodatku Chang Medium C do butelki z podstawową pożywką Chang Medium B.

ROMÂNĂ

INDICAŢIILE UTILIZĂRII MEDIULUI Chang Medium C poate fi utilizată pentru următoarele aplicaţii: 1. Cultura primară de lichid de celule amniotice 2. Tranziţia celulelor lichidului amniotic în creştere 3. Cultura celulelor de măduvă osoasă 4. Ţesutul solid de amnion din mostre chorionic villi

ACEST MEDIU POATE FI UTILIZAT PENTRU AMBELE SISTEME: DESCHISE (CULTURI ECHILIBRATE CU 5% CO2 ATMOSFERIC) ŞI SISTEME DE CULTURĂ ÎNCHISE (CULTURI INUNDATE CU 5% CO2 ŞI INCUBATE CU VASE DE CULTURĂ ÎNCHISE ERMETIC)

Precauţiunii: A nu se utiliza componenţii Chang Medium C după data expirări indicată pe etichetele individuale.

DESCRIEREA PRODUSULUI Chang Medium® C este destinată pentru culturile primare de celule din lichidul amniotic uman pentru utilizarea în caritipuri şi alte analize prenatale genetice. ACEASTĂ FORMULĂ POATE FI UTILIZATĂ PENTRU AMBELE SISTEME: DESCHISE SAU ÎNCHISE.

MODUL DE PĂSTRARE ŞI TERMENUL DE VALABILITATE Păstraţi Suplementul congelat de Chang Medium C la sub -10ºC, Suplementul Chang Medium C Lipolizat de la 2 ºC până la 8 ºC, Chang Medium B Basal de la 2 ºC până la 8 ºC, şi Chang Medium C complet de la 2 ºC până la 8 ºC. Chang Medium B Basal nu trebuie congelat.

Feriţi de lumină fluorescentă.

MODUL DE PĂSTRARE ŞI TERMENUL DE VALABILITATE Vezi componentele individuale pe eticheta sticlei pentru date specifice de expirare. Chang Medium C complet se poate păstra de la 2 ºC până la 8 ºC pe 10 zile înainte de utilizare fără să afecteze proprietăţile. Nu se recomandă păstrarea peste 10 zile.

COMPONENŢIImg/L

Săruri............................................................................. 7900 Dextroză ....................................................................... 1400 Amino Acizi .................................................................... 1000 Polipeptide ...................................................................... 66 Vitamine ........................................................................... 22 Dezoxiribonicleotide ......................................................... 21 Ribonucleotide .................................................................. 20 Piruvat de Sodiu ............................................................... 110 Alte Componente ................................................................. 8 Hormoni şi Elemente Reziduale .................................... 0.0025 Hormoni Steroizi ......................................................... 0.0013 Serum de Viţel nou născut ............................................... 6% v/v Ser de Bovină fetală ...................................................... 6% v/v

AVERTISMENTE ŞI PRECAUŢIUNI Acest dispozitiv este destinat să fie utilizat de personalul specializat în proceduri care includ aplicarea indicată pentru care a fost creat dispozitivul.

PREPARAREA PENTRU UTILIZARE Suplimentul Liofilizat 1. Permiteţi Suplimentul Liofilizat Chang Medium C să fie

echilibrat la temperatura camerei.

2. Utilizând technici aseptice, adăugaţi 10 mL sau 50 mL de apă destilată sterilă la liofilizat. La flaconul de 10 mL este 90 mL de Chang Medium Basal; la flaconul de 50 mL este 450 mL Chang Medium B Basal.

3. Învârtiţi flaconul cu grijă pentru ca să formeze soluţia. (NOTĂ: Poate să necesite să fie incubat flaconul la 37 ºC pentru 5 - 10 minute ca să se dizolve complet suplimentul).

4. Transferaţi aseptic tot conţinutul reconstituit de Suplimentul Chang Medium C la sticla de Chang Medium B Basal.

SVENSKA

AVSEDD ANVÄNDNINGChang Medium C kan användas för följande tillämpningar: 1. primärodling av celler i amnionvätska2. odling av celler från amnionvätska i efterföljande

passage3. odling av benmärgsceller4. för fast vävnad från chorionvilli-prov.

DETTA MEDIUM HAR UTVECKLATS FÖR ANVÄNDNING I BÅDE ÖPPNA (KULTURER EKVILIBRERADE I EN 5 % CO2-ATMOSFÄR) OCH SLUTNA ODLINGSSYSTEM (KULTURER FLÖDADE MED 5 % CO2 OCH INKUBERADE MED ODLINGSKÄRLEN TÄTT FÖRSLUTNA).

Obs! Använd inte Chang Medium C-komponenterna efter de utgångsdatum som anges på de individuella etiketterna.

PRODUKTBESKRIVNINGChang Medium® C har utvecklats för primärodling av celler i human amnionvätska för karyotypbestämning och andra antenatala genetiska tester. DENNA NÄRINGSLÖSNING HAR OPTIMERATS FÖR BÅDE ÖPPNA OCH SLUTNA SYSTEM.

FÖRVARING OCH HÅLLBARHETChang Medium C fryst supplement skall förvaras vid under –10°C, Chang Medium C frystorkat supplement vid 2–8 ºC, Chang Medium B basaltt vid 2–8 ºC och komplett Chang Medium C vid 2–8 ºC. Chang Medium B basalt får inte frysas.

Skyddas från fluorescerande ljus.

Se flasketiketterna på de individuella komponenterna för specifika utgångsdatum. Komplett Chang Medium C kan förvaras vid 2–8 ºC i 10 dagar före användning utan att dess funktion påverkas. Förvaring under längre tid än 10 dagar rekommenderas ej.

KOMPLETT CHANG MEDIUM C FÅR EJ FRYSAS.

KOMPONENTER mg/L Salter....................................................................7900Dextros.................................................................1400Aminosyror............................................................1000Polypeptider...............................................................66Vitaminer...................................................................22Deoxiribonukleosider................................................21Ribonukleosider........................................................20Natriumpyruvat........................................................110Andra komponenter....................................................8Hormoner och spårämnen.................................0.0025Steroider.............................................................0.0013Serum från nyfödda kalvar................6 % volym/volym Fetalt bovint serum............................6 % volym/volym

FÖRSIKTIGHETSÅTGÄRDER OCH VARNINGARDenna produkt är avsedd att användas av personal med utbildning i procedurer vilka inkluderar den indicerade tillämpning för vilken produkten är avsedd.

BEREDNING AV KOMPLETT CHANG MEDIUM C Frystorkat supplement1. Låt Chang Medium C frystorkat supplement uppnå

rumstemperatur.

2. Använd aseptisk teknik för att tillsätta 10 mL eller 50 mL sterilt destillerat vatten till det frystorkade pulvret. 10 mL-ampullen är avsett för 90 mL Chang Medium B basalt; 50 mL-ampullen är avsedd för 450 mL Chang Medium B basalt.

3. Snurra ampullen varligt så att allt pulver löses upp. (OBS! Det kan vara nödvändigt att inkubera ampullen vid 37 ºC i 5–10 minuter för att helt lösa upp supplementet).

4. Överför aseptiskt hela mängden rekonstituerat Chang Medium C-supplement till flaskan med Chang Medium B basalt.

6. Voeg L-glutamine toe, 10,0 ml/l (200 mM). Antibiotica kunnen, indien gewenst, worden toegevoegd.

Bevroren supplement 1. Ontdooi Chang Medium C bevroren supplement snel

door de flacon rond te draaien in een 37 ºC waterbad.

2. Breng de gehele inhoud van het ontdooide Chang Medium C supplement op aseptische wijze over naar de fles met Chang Medium B basaal.

OPDELEN VAN CHANG MEDIUM C SUPPLEMENT Gelyofiliseerd supplement Als u het complete Chang Medium C binnen 10 dagen niet kunt gebruiken, kunt u kleinere hoeveelheden aanmaken met de onderstaande gewijzigde procedure:

1. Reconstituteer Chang Medium C gelyofiliseerd supplement.

2. Verdeel het op aseptische wijze in gemakkelijk hanteerbare delen en vries deze in.

3. Verdeel Chang Medium B basaal ook op aseptische wijze in een overeenkomstig aantal delen.

4. Om het complete Chang Medium C te prepareren, voeg één deel ontdooid Chang Medium C supplement toe aan één deel Chang Medium B basaal.

5. Meng het goed.

Bevroren supplement 1. Ontdooi Chang Medium C bevroren supplement.

2. Verdeel het op aseptische wijze in gemakkelijk hanteerbare delen en vries deze opnieuw in. (OPM.: de supplementflacon bevat 14 ml of 70 ml. Verdeel dit in gelijke delen.)

5. Meng het goed.

GEBRUIKSAANWIJZING DE pH VAN HET MEDIUM DAT WORDT GEBRUIKT OM DE KWEKEN TE VOEDEN MOET LIGGEN TUSSEN 6,8 EN 7,2 (d.w.z. het medium moet een lichtgele zalmkleur hebben). De pH kan iets worden aangepast door het medium met iets losgedraaide dop in een 5%-8% CO2-incubator te zetten.

De definitieve pH moet liggen tussen 6,8 en 7,2.

Voor aanvullende informatie over het gebruik van deze producten, dient elk laboratorium haar eigen laboratoriumprocedures en -protocollen te raadplegen die speciaal zijn ontwikkeld en geoptimaliseerd voor uw individueel medisch programma.

Gebruik van Chang Medium C voor primaire kweken: in situ-methode

1. Centrifugeer het vruchtwater met lage snelheid om de cellen te concentreren.

2. Resuspendeer het celpellet in een kleine hoeveelheid van het eigen vruchtwater van de patiënt. Voorbeeld: aspireer het supernatant van 10 ml gecentrifugeerd vruchtwater tot 0,5 ml boven het celpellet en resuspendeer. Voeg voldoende Chang Medium C toe aan de geconcentreerde celsuspensie zodat er een eindvolume van 0,5 ml per afdekplaatje (in totaal 4 afdekplaatjes) of 2 ml per fles beschikbaar is.

3. Zet de kweken ongestoord in de incubator bij 37 °C en 5% CO2-atmosfeer.

4. Bedek de kweken op dag 2 volledig door 2 ml Chang Medium C toe te voegen.

5. Na 4 tot 5 dagen moet de groei van de kweken worden gecontroleerd. De kweken moeten worden gevoed als eenmaal is vastgesteld dat zij groeien. Voed de kweken door al het kweeksupernatant te verwijderen en te vervangen door 2 ml vers Chang Medium C. Het verdient aanbeveling de kweken

daarna om de 2 dagen te voeden.

6. Controleer de kweken op groei op/na dag 5, en oogst als voldoende kolonies worden waargenomen.

7. De beste resultaten worden verkregen als de kweken worden gevoed met Chang Medium C op de dag vóór het oogsten.

Gebruik van Chang Medium C voor primaire kweken: flesmethode 1. Centrifugeer het vruchtwater met lage snelheid om de

cellen te concentreren.

2. Resuspendeer het celpellet in een kleine hoeveelheid van het eigen vruchtwater van de patiënt. Voorbeeld: aspireer het supernatant van 10 ml gecentrifugeerd vruchtwater tot 1 ml boven het celpel let en resuspendeer. Voeg 4 ml Chang Medium C toe zodat het totaalvolume per fles 5 ml bedraagt.

4. Controleer op groei op dag 5. Vervang het medium door vers Chang Medium C en oogst als voldoende celgroei wordt waargenomen.

5. Controleer of de kweken groeien en vervang het medium volledig elke dag daarna totdat voldoende kolonies worden waargenomen en kunnen worden geoogst.

OPM.: bij gesloten systemen moet elke kweekfles gedurende 20 seconden met 5% CO2 - 95% lucht worden gespoeld. Draai de doppen van de kweekflessen vast en zet deze in de incubator bij 37 °C. (Het verdient aanbeveling een steriel, afgesloten Pasteurpipet aan te sluiten op de CO2-bron om de steriliteit van het instromende gas te garanderen.).

Gebruik van Chang Medium C voor groeiende gepasseerde vruchtwatercellen:

Om de cellen te passeren, behandel de kweken met trypsine (of pronase etc.) zoals u dat normaal gesproken zou doen als cellen groeien in een traditioneel medium. De proteasebehandeling dient echter zorgvuldig in de gaten te worden gehouden. Vruchtwatercellen die gekweekt zijn in Chang Medium C hebben de neiging gevoeliger te zijn voor proteasebehandeling dan vruchtwatercellen die zijn gekweekt in een traditioneel medium. Het kan noodzakelijk zijn om uw protocol te wijzigen om hiermee rekening te houden.

KWALITETISBORGINGSTERILITEIT Het serum dat is gebruikt bij de productie van Chang Medium C Supplement is getest op virale besmetting volgens CFR Title 9, Part 113.53. Het is ook getest op mycoplasmabesmetting. Zowel Chang Medium B basaal als Chang Medium C supplement zijn gesteriliseerd middels filtratie met behulp van een 0,1 micron filter. Representatieve Chang Medium B basaal- en Chang Medium C supplement-monsters zijn getest op mogelijke bacteriologische besmetting volgens het steriliteitstestprotocol zoals beschreven in de huidige USP-steriliteitstest <71>.

Chang Medium® is een gedeponeerd handelsmerk van Irvine Scientific.

5. Wymieszać całkowitą pożywkę Chang Medium C przez wirowanie butelki.

6. Dodać L-glutaminę, 10,0 ml/l (200 mM). W razie potrzeby można zastosować dodatkowe antybiotyki.

Dodatek zamrożony 1. Szybko rozmrozić dodatek Chang Medium C przez

wirowanie fiolki w łaźni wodnej o temperaturze 37°C.

2. Przenieść aseptycznie całą zawartość rozpuszczonego dodatku Chang Medium C do butelki z podstawowa pożywką Chang Medium B.

3. Wymieszać calkowitą pożywkę Chang Medium C przez wirowanie butelki.

ROZDZIAŁ DODATKU CHANG MEDIUM C NA ALIKWOTY Dodatek liofilizowany Jeżeli nie jest możliwe zużycie całkowitej pożywki Chang Medium C w ciągu 10 dni, można przygotować mniejsze ilości przez następujące zmodyfikowanie procedury:

1. Rozpuścić liofilizowany dodatek Chang Medium C.

2. Rozdzielić aseptycznie na odpowiednie wielkościowo alikwoty i zamrozić.

3. Także rozdzielić aseptycznie pożywkę podstawową Chang Medium B do odpowiadających

alikwotów.

4. Aby przygotować całkowitą pożywkę Chang Medium C, dodać jeden alikwot rozmrożonego dodatku Chang Medium C do jednego alikwotu podstawowej pożywki Chang Medium B.

5. Wymieszać dokładnie.

Dodatek zamrożony 1. Rozmrozić zamrożony dodatek Chang Medium C.

2. Rozdzielić aseptycznie na odpowiednie wielkościowo alikwoty i ponownie zamrozić. (UWAGA: Fiolka z dodatkiem zawiera 14 ml lub 70 ml. Rozdzielić po równo.)

3. Także rozdzielić aseptycznie pożywkę podstawową Chang Medium B do odpowiadających alikwotów.

4. Aby przygotować całkowitą pożywke Chang Medium C, dodać jeden alikwot rozmrożonego dodatku Chang Medium C do jednego alikwotu podstawowej pożywki Chang Medium B.

INSTRUKCJE UŻYCIA pH pożywki używanej do odżywiania hodowli musi mieścić się w granicach 6,8 – 7,2 (tzn. kolor pożywki musi być lekko zółtawo-różowy). pH można łatwo dostosować przez umieszczenie pożywki w inkubatorze 5%-8% atmosferze CO2 z lekko poluzowaną zatyczką.

Końcowe pH musi być 6,8 – 7,2. Zob.

Aby zapoznać się z dodatkowymi szczegółami użycia tych produktów, każde laboratorium powinno odwołać się do jego własnych procedur laboratoryjnych i protokołów, które zostały specjalnie opracowane i zoptymalizowane dla indywidulanego programu medycznego.

Użycie Chang Medium C do hodowli pierwotnych: metodologie in situ.

1. Wirować płyn owodniowy przy niskich obrotach, aby spowodować skupienie komórek.

2. Ponownie zawiesić pelet w małej objętości własnego płynu owodniowego pacjentki. Na przykład odebrać 10 ml nadsączu z wirowanego płynu owodniowego do 0,5 ml peletu ponad komórkami i ponownie zawiesić. Dodać wystarczającą ilość pożywki Chang Medium C do stężonej zawiesiny komórek, aby zapewnić ostateczną objętość posiewu bakterii na pożywce stałej wynoszacą 0,5 ml na szkiełko nakrywkowe (razem 4 szkiełka nakrywkowe) lub 2 ml na kolbkę.

3. Inkubować hodowle nienaruszone w temperaturze 37°C, 5% atmosferze CO2.

4. W drugim dniu przepłukać hodowle poprzez dodanie 2 ml Chang Medium C.

5. Po 4 do 5 dniach należy sprawdzić wzrost hodowli. Hodowle należy odżywiać po zaobserwowaniu wzrostu. Odżywiac hodowle poprzez odebranie wszystkich nadsączy i wymianę z 2 ml świeżej pożywki Chang Medium C. Zaleca się, żeby hodowle były nastepnie odżywiane co 2 dni.

6. Sprawdzić wzrost hodowli w piątym dniu lub póżniej i zebrać je jeśli zaobserwowano wystarczającą ilość kolonii.

7. Najlepsze wyniki otrzymywano, gdy hodowle były odżywiane pożywką Chang Medium C na dzień przed zebraniem.

Użycie Chang Medium C do hodowli pierwotnych: metodologie dla kolb

2. Ponownie zawiesić pelet w małej objętości własnego płynu owodniowego pacjentki. Na przykład odebrać 10 ml nadsączu z wirowanego płynu owodniowego do 1 ml peletu ponad komórkami i ponownie zawiesić. Dodać 4 ml Chang Medium C do całkowitej objętości 5 ml na kolbę.

4. Sprawdzić wzrost dnia 5-ego. Jeżeli zaobserwowano wystarczający wzrost, zmienić pożywkę na świeżą Chang Medium C i zebrać.

5. Sprawdzić wzrost hodowli i całkowicie zmieniać pożywkę codziennie do zaobserwowania wystarczającej ilości kolonii, gotowej do zbioru.

UWAGA: W przypadku systemów zamkniętych, przepłukać każdą kolbę na posiew mieszaniną 5% CO2 - 95% powietrze przez 20 minut. Szczelnie zamknąć zatyczki kolb z posiewami I inkubować w temperaturze 37°C. (Jest zalecane, aby sterylna pipeta Pasteura została dołączona do źródła CO2, aby zapewnić sterylność wchodzącego gazu).

Użycie Chang Medium C do posiewów wzrastających pasażowanych komórek płynu owodniowego:

W celu pasażowania komórek poddać hodowle działaniu trypsyny (lub pronazy, itd.), tak jak postępuje się w przypadkach gdy komórki wzrastają na konwencjonalnej pożywce. Jednakże, działanie proteazy należy dokładnie monitorować. Komórki płynu owodniowego rosnące na pożywce Chang Medium C są bardziej czułe na działanie proteazy niż komórki płynu owodniowego rosnące na pożywce konwencjonalnej. Jeśli wziąć to pod uwagę może być konieczna modyfikacja protokołu.

KONTROLA JAKOŚCISTERYLNOŚĆ Surowica używana do produkcji dodatku Chang Medium C została przetestowana na zanieczyszczenia wirusowe, zgodnie z CFR Title 9 Part 113.53. Pożywka ta była też badana przesiewowo na obecność zanieczyszczeń mykoplazmą. Pożywka podstawowa Chang Medium B i dodatek Chang Medium C są sterylizowane przez filtrację przy zastosowaniu filtra o wielkości porów 0,1 mikrona. Wybrane próbki pożywki podstawowej Chang Medium B i dodatku Chang Medium C zostały przetestowane na obecność zanieczyszczeń bakteriologicznych, zgodnie z protokołem testowania sterylności, opisanym w bieżącym teście sterylności USP <71>.

Chang Medium® jest zarejestrowanym znakiem towarowym Irvine Scientific.

5. Amestecaţi complet Chang Medium C bine prin învârtirea sticlei.

6. Adăugaţi Glutamina -L, 10.0 mL/L (200 mM). Pot fi adăugate antibiotice dacă doriţi.

Suplimentul Congelat 1. Decongelaţi Suplimentul Chang Medium C Congelat

repede prin învârtirea flaconului în baie de apă la 37 ºC.

2. Transferaţi aseptic tot conţinutul reconstituit dezgheţat de Suplimentul Chang Medium C la sticla de Chang Medium B Basal.

4. Adaugaţi Glutamina -L, 10.0 mL/L (200 mM). Pot fi adăugate antibiotice dacă doriţi.

ALICOTAREA SUPLIMENTULUI DE CHANG MEDIUM CSupliment Liofilizat Dacă nu puteţi să completaţi Chang Medium C în timp de 10 zile puteţi să preparaţi porţiuni mai mici prin următoarele modificări de procedură:

1. Reconstiuiţi Suplimentul Liofilizat Chang Medium C.

2. Distribuiţi aseptic în porţiuni conveniabile de alicot şi congelaţi.

3. De asemenea distribuiţi aseptic Chang Medium B Basal în număr corespunzător de alicoţi.

4. Pentru a prepara Chang Medium C complet, adăugaţi alicot dezgheţat de Suplimentul Chang Medium C la alicotul de Chang Medium B Basal.

5. Amestecaţi bine.

Suplimentul Congelat 1. Dezgheţaţi Suplimentul de Chang Medium C congelat.

2. Distribuiţi aseptic în porţiuni conveniabile de alicot şi recongelaţi. (NOTĂ: Suplimentul de flacon conţine 14 mL sau 70 mL. Distribuiţi egal).

4. Pentru a prepara Chang Medium C complet, adăugaţi alicot dezgheţat din Suplimentul Chang Medium C la alicotul de Chang Medium B Basal.

INSTRUCŢIUNI DE UTILIZARE Ph –ul MEDIULUI UTILIZAT SĂ HRĂNIŢI CULTURILE TREBUIE SĂ FIE ÎNTRE 6.8—7.2 (de exemplu mediul trebuie să fie galben roz-portocaliu în culoare). pH-ul poate fi ajustat prin amplasarea mediului în 5% - 8% incubator CO2 cu capacul puţin slăbit.

Ph –ul final trebuie să fie între 6.8- 7.2.

Pentru detalii suplimentare privind folosirea acestui produs, fiecare laborator trebuie să consulte protocolul pentru procedurile utilizate în laborator care sunt specifice şi optimizate pentru programul medical individual.

Utilizaţi Chang Medium C pentru Culturi Primare: Metodologie In Situ

1. Centrifugaţi lichidul amniotic la viteză joasă pentru a concentra celulele.

2. Resuspendaţi celula pelată într-un volum mic de lichid amniotic al pacientei. De exemplu, aspiraţi supernatantul de 10 mL de lichid amniotic la 0.5 mL deasupra celulei pelate şi resuspendaţi. Adăugaţi Chang Medium C suficient la concentratul de celulă suspensie pentru a permite acoperirea finală a

volumului de 0.5 mL pe lamelă (total 4 lamele) sau 2 mL pe flaconaşe.

3. Incubaţi culturile nedistribuite la 37 ºC 5% CO2 atmosferic.

4. Inundaţi culturile în ziua două prin adăugarea de 2mL de Chang Medium C.

5. După 4 la 5 zile, culturile trebuie verificată dezvoltarea culturilor. Culturile trebuie să fie hrănite odată ce se obsearvă dezvoltarea lor. Hrăniţi culturile prin eliminarea supernatantului şi înlocuiţi cu 2 mL de Chang Medium C proaspăt. Este recomandat să fie hrănite culturile în fiecare 2 zile după aceea.

6. Verificaţi culturile pentru dezvoltare în/sau după ziua 5-a, şi recoltaţi când colonii suficiente sunt observate.

7. Cele mai bune rezultate sunt obţinute când culturile sunt hrănite cu Chang Medium C ziua înainte de recoltare.

Utilizaţi Chang Medium C pentru Culturi Primare: Metodologie Flacone

2. Resuspendaţi celula pelată într-un volum mic de lichid amniotic al pacientei. De exemplu, aspiraţi supernatantul de 10 mL de lichid amniotic la 1 mL deasupra celulei pelate şi resuspendaţi. Adăugaţi 4 mL de Chang Medium C la volumul total de 5 mL pe flacon.

4. Verificaţi dezvoltarea în ziua a 5-a. Schimbaţi mediul cu Chang Medium C proaspăt şi recoltaţi dacă sunt celule suficiente dezvoltate.

5. Verificaţi culturile pentru dezvoltare şi schimbaţi complet mediul la două zile după acea până când apar colonii suficiente gata pentru recoltare.

(NOTĂ: Pentru sisteme închise clătiţi fiecare flacon cu 5% CO2 – 95% aer pentru 20 de secunde. Strângeţi capacul falconului de cultură şi după acea incubaţi la 37 ºC. (Este recomandat ca să fie ataşată o pipetă sterilă de sursa CO2 pentru a asigura sterilitatea gazului introdus).

Utilizarea Chang Medium C pentru celule de tranziţie de lichid amniotic:

Pentru a transfera celulele, trataţi cultura cu tripsină (sau pronase, etc.) aşa cum aţi proceda normal când celulele se dezvoltă în mediu convenţional. Oricum, tratamentul de protează trebuie să fie supravegheat cu mare atenţie. Celule de lichidul amniotic a celulelor dezvoltate in Chang Medium C au tendinţă să fie mai sensibile la tratamentul de protează decât cele dezvoltate în mediul convenţional. Poate fi necesară modificarea protocolului D-vs. Pentru a lua aceasta în considerare.

ASIGURAREA CALITĂŢIISTERILITATE Serul utilizat la producţia Suplimentului de Chang Medium C au fost testate pentru contaminări virale pe baza CFR titlul 9 partea 1113.53. Deasemenea a fost verificat pentru contaminare cu mycoplasmă. Ambele medii: Chang Medium B Basal şi Suplimentul Chang Medium C au fost sterilizate prin filtrare cu un filtru de 0.1 microni. Mostre reprezentative de Chang Medium B Basal şi Supliment de Chang Medium C au fost testate pentru posibilitatea contaminări bacteriologice urmând protocolul curent pentru testul de sterilizare descris în USP -ul <71> test de sterilitate.

Chang Medium® este o marcă înregistrată de către Irvine Scientific.

5. Blanda det kompletta Chang Medium C väl genom att snurra flaskan.

6. Tillsätt L-glutamin, 10,0 mL/L (200 mM). Antibiotika kan tillsättas om så önskas.

Fryst supplement1. Tina Chang Medium C fryst supplement snabbt genom

att snurra ampullen i ett 37 °C vattenbad.

2. Överför aseptiskt hela mängden tinat Chang Medium C-supplement till flaskan med Chang Medium B basalt.

ALIKVOTERING AV CHANG MEDIUM C-SUPPLEMENT Frystorkat supplementOm det kompletta Chang Medium C inte kommer att användas upp inom 10 dagar kan det vara lämpligt att dela upp det i mindre mängder med hjälp av följande modifierade procedur:

1. Rekonstituera Chang Medium C frystorkat supplement.

2. Fördela mediet aseptiskt i alikvoter av lämplig storlek och frys ner dem.

3. Dela även aseptiskt upp Chang Medium B basalt i motsvarande antal alikvoter.

4. För att bereda komplett Chang Medium C tillsätts en alikvot tinat Chang Medium C-supplement till en alikvot av Chang Medium B basalt.

5. Blanda väl.

Fryst supplement1. Tina Chang Medium C fryst supplement.

2. Fördela mediet aseptiskt i alikvoter av lämplig storlek och frys ner dem på nytt. (OBS! Ampullen med supplement innehåller 14 mL eller 70 mL. Fördela jämnt.)

5. Blanda väl.

BRUKSANVISNINGpH I DET MEDIUM SOM ANVÄNDS FÖR NÄRINGSTILLFÖRSEL TILL KULTURERNA MÅSTE VARA MELLAN 6,8,8–7,2 (dvs. mediet måste ha svagt gulaktig-laxfärg). pH kan enkelt justeras genom att mediet placeras i en 5–8 % CO2-inkubator med locket lätt lossat.

Det slutliga pH måste vara 6,8–7,2.

För ytterligare information om användning av dessa produkter bör varje laboratorium konsultera sina egna laboratorieförfaranden och -protokoll som utvecklats och optimerats särskilt för de egna medicinska programmen.

Användning av Chang Medium C för primärodling: In situ-metodik

1. Centrifugera amnionväskan på låg hastighet så att cellerna koncentreras.

2. Resuspendera pelleten i en liten volym av patientens egen amnionvätska. Aspirera t.ex. supernatanten från 10 mL centrifugerad amnionvätska till 0,5 mL ovanför cellpelleten och resuspendera pelleten. Tillsätt tillräckligt med Chang Medium C till den koncentrerade cellsuspensionen för att möjliggöra en

slutlig utstryksvolym av 0,5 mL per täckglas (totalt 4 täckglas) eller 2 mL per flaskett.

3. Inkubera kulturerna utan att störa dem vid 37 ºC i 5 % CO2-atmosfär.

4. Flöda kulturerna på dag 2 genom att tillsätta 2 mL Chang Medium C.

5. Efter 4-5 dagar bör kulturerna kontrolleras med avseende på växt. När växt har observerats bör kulturerna tillföras näring. Tillför näring till kulturerna genom att avlägsna all supernatant och ersätta den med 2 mL färskt Chang Medium C. Det rekommenderas att därefter tillföra näring till kulturerna varannan dag.

6. Kontrollera kulturerna med avseende på växt på/efter dag 5 och skörda dem när tillräckligt med kolonier observeras.

7. Bästa resultat erhålls när kulturerna tillförs näring med Chang Medium C dagen innan de skördas.

Användning av Chang Medium C för primärodling: Metod med flaska1. Centrifugera amnionväskan på låg hastighet så att

cellerna koncentreras.

2. Resuspendera pelleten i en liten volym av patientens egen amnionvätska. Aspirera t.ex. supernatanten från 10 mL centrifugerad amnionvätska till 1 mL ovanför cellpelleten och resuspendera pelleten. Tillsätt 4 mL Chang Medium C till en total volym på 5 mL per flaska.

4. Kontrollera kulturerna med avseende på växt på dag 5. Byt till färskt Chang Medium C och skörda om tillräcklig cellväxt observeras.

5. Kontrollera kulturerna med avseende på växt och byt därefter ut mediet varannan dag tills tillräckligt med kolonier observeras och är klara att skördas.

OBS! I slutna system flushas varje odlingsflaska med 5 % CO2 – 95 % luft i 20 sekunder. Dra åt locket på odlingsflaskorna och inlubera dem vid 37 °C. (Det rekommenderas att ansluta en steril, pluggad pasteurpipett till CO2-källan för att säkerställa att den inkommande gasen är steril.).

Användning av Chang Medium C för odling av celler från amnionvätska i efterföljande passage:

För passage av cellerna behandlas kulturerna med trypsin (eller pronas, etc.) på normalt sätt som vid odling av celler i konventionellt medium. Proteasbehandlingen bör dock noga övervakas. Celler från amnionvätska som odlas i Chang Medium C tenderar att vara känsligare för proteasbehandling än celler från amnionvätska som odlas i konventionellt medium. Laboratoriets protokoll kan behöva modifieras för att ta hänsyn till detta faktum.

KVALITETSSÄKRINGSTERILITETDet serum som används vid framställningen av Chang Medium C-supplement har testats för viral kontamination enligt CFR titel 9 del 113.53. Det har också screenats för kontamination av mykoplasma. Både Chang Medium B basalt och Chang Medium C-supplement har steriliserats genom filtrering genom ett 0,1 mikron-filter. Representativa prover av Chang Medium B basalt och Chang Medium C-supplement testas för bakteriell kontamination enligt det sterilitetstestningsprotokoll som beskrivs i aktuell USP Sterility test <71> (sterilitetstest enligt United States Pharmacopeia).

Chang Medium® är ett registrerat varumärke som tillhör Irvine Scientific.

NEDERLANDS

POLSKI

ROMÂNĂ

COMPONENŢIImg/L

SVENSKA

rumstemperatur.

5. Meng het goed.

alikwotów.

5. Blanda väl.

NEDERLANDS

POLSKI

ROMÂNĂ

COMPONENŢIImg/L

SVENSKA

rumstemperatur.

5. Meng het goed.

alikwotów.

5. Blanda väl.

NEDERLANDS

POLSKI

ROMÂNĂ

COMPONENŢIImg/L

SVENSKA

rumstemperatur.

5. Meng het goed.

alikwotów.

5. Blanda väl.

MAGYAR

RENDELTETÉSA Chang Medium C használható a következő alkalmazásokban: 1. magzatvíz sejtjeinek primer tenyészete 2. passzált magzatvíz sejtek növekedése 3. csontvelő sejtek tenyészete 4. szilárd amnionszövet a chorionboholy mintából

EZT A MÉDIUMOT MIND NYITOTT (TENYÉSZET EKVILIBÁRLTATVA VAN 5%-OS CO2 ATMOSZFÉRÁBAN) MIND PEDIG ZÁRT KULTÚRÁS RENDSZEREKRE (TENYÉSZET ELÁRASZTVA 5% CO2-VEL ÉS INKUBÁLVA SZOROSAN LEZÁRT TENYÉSZTŐEDÉNYBEN) TERVEZTÉK.

Figyelmeztetés: Ne haszná l j a Chang Med ium C komponenseit az egyes adott címkéken feltüntetett lejárati határidőn túl.

TERMÉKLEÍRÁS A Chang Medium® C-t humán magzatvíz sejtek primer tenyészetéhez tervezték kariotipizálásban és más antenatális genetikai vizsgálatokban való alkalmazásnál. EZT A FORMULÁT OPTIMALIZÁLTÁK NYITOTT ÉS ZÁRT RENDSZERRE EGYARÁNT.

TÁROLÁS ÉS STABILITÁS Tárolja a Chang Medium C fagyasztott kiegészítőt -10°C, Chang Medium C liofilizált kiegészítőt 2°C és 8°C között, Chang Medium B alapot 2°C és 8°C között, Chang Medium C-t 2°C és 8°C között. A Chang Medium B alapot nem szabad fagyasztani!

Védje a fluoreszcens fénytől.

Nézze meg az adott komponens üvegének címkéjén a specifikus lejárati időpontot. A teljes Chang Medium C 10 napig tárolható a használat előtt 2°C és 8°C között anélkül, hogy az hatással lenne a működésére. 10 napon túli tárolása nem javasolt.

NE FAGYASSZA A TELJES CHANG MEDIUM C-T!

ALKOTÓK mg/mlsók........................................................................7900dextróz..................................................................1400aminosavak...........................................................1000polipeptidek..............................................................66vitaminok..................................................................22dezoxi-ribonukleiozidok............................................21ribonukleozidok.........................................................20nátrium-piruvát........................................................110más alkotók................................................................8hormonok és nyomelemek................................0.0025szteroid hormonok..............................................0.0013újszülött borjúszérum........................................6% v/vmagzati marhaszérum.......................................6% v/v

ÓVINTÉZKEDÉSEK ÉS FIGYELMEZTETÉSEK Ezt az eszközt úgy tervezték, hogy használata az eszköz tervezett alkalmazását is magába foglaló eljárásokban kiképzett személyzet által történjen.

BEREDNING FÖR ANVÄNDNINGLiofilizált kiegészítő 1. Hagyja a Chang Medium C liofilizát kiegészítőt

egyensúlyba kerülni szobahőmérsékleten.

2. Aszeptikus technikát alkalmazva adjon 10 ml vagy 50 ml steril desztillált vizet a liofilizátumhoz. A 10 ml fiola a 90 ml Chang Medium B alaphoz, az 50 ml fiola a 450 ml Chang Medium B alaphoz való.

3. Rázza a fiolát óvatosan a teljes feloldás eléréséhez. (MEGJEGYZÉS: Lehet, hogy 5 -10 percig inkubálni kell a fiolát 37 °C-on ahhoz, hogy a kiegészítő teljesen feloldódjon.)

4. Aszeptikusan vigye át az újra összeállított Chang Medium C kiegészítő teljes tartalmát a Chang Medium B alap üvegébe.

5. Keverje össze a teljes Chang Medium C-t alaposan az üveg rázogatásával.

LIETUVIŲ K.

REKOMENDUOJAMA TAIKYMO SRITIS Chang Medium C terpė gali būti naudojama pagal tokią paskirtį: 1. pirminės vaisiaus vandenų ląstel ių kultūros

auginimas 2. vaisiaus vandenų persėtos kultūros ląstel ių

auginimas 3. kaulų čiulpų ląstelių kultūros auginimas 4. kietųjų amniono audinių kultūrų auginimas iš

chorionų gaurelių mėginių.

ŠI TERPĖ SUKURTA NAUDOTI TIEK ATVIROSIOSE ( K U LT Ū R O S P U S I A U S V I R I N A M O S 5 % C O 2 ATMOSFEROJE), TIEK UŽDAROSIOSE KULTIVAVIMO SISTEMOSE (KULTŪROS VEIKIAMOS 5% CO2 IR INKUBUOJAMOS SANDARIUOSE KULTIVAVIMO INDUOSE).

Perspėjimas: Chang Medium C komponentų naudoti negalima pasibaigus atskirose etiketėse nurodytam tinkamumo laikui.

PRODUKTO APRAŠYMAS Chang Medium® C terpė buvo sukurta pirminės žmogaus vaisiaus vandenų ląstelių kultūros auginimui atliekant kariotipavimo ir kitus antenatalinius genetinius tyrimus. ŠI RECEPTŪRA YRA OPTIMIZUOTA TIEK ATVIROSIOMS, TIEK UŽDAROSIOMS KULTIVAVIMO SISTEMOMS.

LAIKYMO SĄLYGOS Chang Medium C šaldytą priede mažesnis kaip -10 °C temperatūroje, Chang Medium C liofilizuotą priedą laikyti 2 °C–8 °C temperatūroje, Chang Medium B bazinę terpę laikyti 2 °C–8 °C temperatūroje, o kompleksinę Chang Medium C terpę laikyti 2 °C–8 °C temperatūroje. Chang Medium B bazinės terpės negalima užšaldyti.

Saugoti nuo fluorescencinių spindulių.

STABILUMAS Specifinis tinkamumo laikas nurodytas atskirų komponentų butelių etiketėse. Prieš naudojimą kompleksinę Chang Medium C terpę galima laikyti 2 °C–8 °C temperatūroje 10 dienų nepakenkiant jos funkcinėms savybėms. Laikyti ilgiau kaip 10 dienų nerekomenduojama.

KOMPLEKSINĖS CHANG MEDIUM C TERPĖS NEGALIMA UŽŠALDYTI.

SUDĖTIS mg/lDruskos................................................................7900Dekstrozė.............................................................1400Aminorūgštys.......................................................1000Polipeptidai................................................................66Vitaminai...................................................................22Deoksiribonukleozidai...............................................21Ribonukleozidai........................................................20Natrio piruvatas.......................................................110Kiti sudėtiniai komponentai.........................................8Hormonai ir mikroelementai...............................0,0025Steroidiniai hormonai.........................................0,0013Atsivesto veršiuko serumas...............................6% v/vGalvijų vaisiaus serumas...................................6% v/v

ATSARGUMO PRIEMONĖS IR ĮSPĖJIMAI Šis prietaisas yra skirtas naudoti darbuotojams, apmokytiems atlikti procedūras, susijusias su prietaiso taikymu pagal numatytą paskirtį.

KOMPLEKSINĖS CHANG MEDIUM C TERPĖS RUOŠIMAS Liofilizuotas priedas 1. Leiskite Chang Medium C liofilizuotam priedui kambario

temperatūroje nusistovėti iki pusiausvirosios būsenos.

2. Laikydamiesi aseptikos reikalavimų, į liofilizatą įpilkite 10 ml arba 50 ml sterilaus distiliuoto vandens. 10 ml buteliukas yra skirtas 90 ml Chang Medium B bazinei terpei; ml buteliukas yra skirtas 450 ml Chang Medium B bazinei terpei.

3. Atsargiai pasukdami buteliuką sumaišykite visą tirpalą. (PASTABA: Buteliuką gali prireikti 5–10 minučių inkubuoti 37 °C temperatūroje, kol priedas visiškai ištirps).

KULLANIM AMACIChang Medium C şu uygulamalar için kullanılabilir:

1. amniyotik sıvı hücrelerinin primer kültürü2. geçitli (passaged) amniyotik sıvı hücreler geliştirme3. kemik iliği hücreleri kültürü4. koryon villi örneklemesinden sonra som amniyon doku.

BU MEDYUM HEM AÇIK (%5 CO2’Lİ ATMOSFERLE DENGELENMİŞ KÜLTÜRLER) HEM DE KAPALI KÜLTÜR SİSTEMLERİNDE (%5 CO2’YE MARUZ BIRAKILMIŞ VE SIKI KAPAKLI KÜLTÜR KAPLARINDA İNKÜBE EDİLMİŞ KÜLTÜRLER) KULLANIM İÇİN TASARLANMIŞTIR.

Önlem: Chang Medium C bileşenlerini, etiketlerin üzerinde belirtilen son kullanım tarihinden sonra kullanmayın.

ÜRÜN TANIMIChang Medium® C, karyotipleme ve diğer antenatal genetik testlerde kullanıma yönelik olarak insan amniyotik sıvı hücrelerinin primer kültürü için geliştirilmiştir. BU FORMÜL HEM AÇIK HEM DE KAPALI SİSTEMLER İÇİN OPTİMİZE EDİLMİŞTİR.

SAKLAMA VE STABİLİTEChang Medium C Donmuş Takviyeyi -10°C’nin altında, Chang Medium C Liyofilize Takviyeyi 2°-8°C arasında, Chang Medium B Bazal’ı 2°-8°C arasında ve tam Chang Medium C’yi 2°-8°C arasında saklayın. Chang Medium B Bazal dondurulmamalıdır.

Florasan ışığından koruyun.

Spesifik son kullanma tarihleri için bileşen şişelerinin etiketlerine bakın. Tam Chang Medium C işlevi etkilenmeden kullanım öncesi 2°-8°C arasında 10 gün boyunca saklanabilir. 10 günden fazla saklama tavsiye edilmemektedir.

TAM CHANG MEDIUM C’Yİ DONDURMAYIN.

BİLEŞENLER

Tuzlar ..........................................................................7900Dekstroz .....................................................................1400Amino Asitler ...............................................................1000Polipeptitler .....................................................................66Vitaminler ........................................................................22Deoksiribonükleositler ....................................................21Ribonükleositler ..............................................................20Sodyum Pirüvat ............................................................110Diğer bileşenler .................................................................8Hormonlar ve Eser Elementler ................................0.0025Steroid Hormonlar ...................................................0.0013Yenidoğan Dana Serumu.........................................6% v/vFetal Bovin Serum ...................................................6% v/v

ÖNLEMLER VE UYARILARBu cihaz, cihazla ilgili olarak tanımlanan uygulamaları da kapsayan yardımla üreme prosedürlerinde eğitimli personel tarafından kullanıma yönelik olarak tasarlanmıştır.

KULLANIM İÇİN HAZIRLAMALiyofilize Takviye1. Chang Medium C Liyofilize Takviyesini oda sıcaklığına gelmek üzere bırakın.

2. Aseptik teknikler kullanarak liyofilizata 10 mL veya 50mL steril damıtılmış su ekleyin. 10m Lviyal 90 mL Chang Medium B Bazal içindir. 50 mL viyal 450 mL Chang Medium B Bazal içindir.

3. Tam çözülme için viyali girdap oluşturacak şekilde nazikçe çevirin. (NOT: Takviyeyi tam olarak çözmek için viyali 5-10 dakika boyunca 37°C’da inkübe etmek gerekebilir.)

4. Aseptik bir şekilde, sulandırılmış Chang Medium C Takviyesinin tüm içeriğini Chang Medium B Bazal şişesine aktarın.

6. Adjon hozzá 10 ml/l (200 mM ) L-glutamint. Szükség szerint antibiotikum adható hozzá.

Fagyasztott kiegészítő 1. Olvassza fel Chang Medium C fagyasztott kiegészítőt

a fiolát 37°C vízfürdőben körkörösen mozgatva.

2. Aszeptikusan vigye át a felengedett Chang Medium C kiegészítő teljes tartalmát Chang Medium B alap üvegébe.

3. Keverje össze a teljes Chang Medium C-t jól, az üveg körkörös mozgatásával.

4. Adjon hozzá 10,0 ml/l (200mM) L-glutamint. Szükség szerint antibiotikum adható hozzá.

CHANG MEDIUM C KIEGÉSZITŐ ALIQUOTOLÁSA Liofilizált kiegészítő Ha nem tudja a teljes Chang Medium C-t 10 napon belül felhasználni, célszerű kisebb mennyiségeket készíteni, követve ezt a módosított eljárást:

1. Rekonstruálja a Chang Medium C liofilizált kiegészítőt.

2. Ossza szét aszeptikusan megfelelő méretű aliquotokra és fagyassza le újra.

3. Szintén aszeptikusan, ossza szét Chang Medium B alapot a megfelelő számú aliquotra.

4. A teljes Chang Medium C elkészítéséhez adjon egy aliquot felengedett Chang Medium C kiegészítőt egy aliquot Chang Medium B alaphoz.

5. Keverje össze jól.

Fagyasztott kiegészítő 1. Olvassza fel Chang Medium fagyasztott kiegészítőt.

2. Ossza szét aszeptikusan megfelelő méretű aliquotokra és fagyassza le újra. (MEGJEGYZÉS: A kiegészítő fiola 14 ml vagy 70 ml-t tartalmaz. Ossza egyenlő részekre.)

4. A teljes Chang Medium C elkészítéséhez adjon egy felengedett Chang Medium C kiegészítőt egy aliquot Chang Medium B alaphoz.

HASZNÁLATI UTASITÁS A TENYÉSZETEKET TÁPLÁLÓ MÉDIUM pH –JA 6,8 ÉS 7,2 KÖZÖTT KELL LEGYEN (azaz a médium gyengén sárgás lazacszínű kell legyen). A pH könnyen beállítható a médiumot 5%-8% CO2-s inkubátorba helyezve, meglazított fedővel.

A végső pH 6,8-7,2 között kell, hogy legyen.

E termékek használatára vonatkozóan a további részletekért minden laboratóriumnak a sajátos orvosi programjukra speciálisan kifejlesztett és optimalizált saját laboratóriumi eljárásaikban és protokolljaikban kell utánanéznie.

Chang Medium C használata primer tenyészethez: In Situ módszerek:

1. Centrifugálja a magzatvizet kis sebességgel a sejtek koncentrálására.

2. Szuszpendálja újra a pelletet a beteg saját magzatvizének kis térfogatával. Például, szívja le a 10 ml centrifugált magzatvizet a sejtpellet felett 0,5 ml-re és szuszpendálja újra. Adjon megfelelő mennyiségű Chang Medium C-t a koncentrált sejt szuszpenzióhoz, szánjon 0,5 ml végtérfogatot a bevonathoz fedőlemezenként ( összesen 4 fedőlemez) vagy 2 ml-t üvegcsékként.

3. Inkubálja a tenyészeteket nyugalomban, 37°C-on 5% CO2 atmoszférában.

4. Árassza el a tenyészetet a 2. napon 2 ml Chang Medium C hozzáadásával.

5. 4-5 nap eltelte után ellenőrizni kell a tenyészeteket növekedését. A tenyészeteket táplálni kell, ha növekedést tapasztalt. Táplálja a tenyészetet úgy, hogy eltávolít minden felülúszót és helyettesíti 2 ml friss Chang Medium C-vel. Tanácsos a tenyészeteket ezután minden 2 napban táplálni.

6. Ellenőrizze a tenyészeteket növekedését az 5. napon vagy 5 nap után, és végezze el a begyűjtést, ha a kolóniák megfelelőek.

7. A legjobb eredményt akkor kapja, ha a tenyészetet a begyűjtést megelőző napon Chang Medium C-vel táplálta.

Chang Medium C alkalmazása primer tenyészeteknél: Lombik módszerek 1. Centrifugálja a magzatvizet kis sebességgel a sejtek

koncentrálására.

2. Szuszpendálja újra a pelletet a beteg saját magzatvizének kis térfogatával. Például, szívja le a 10 ml centrifugált magzatvizet a sejtpellet felett 1ml-re és szuszpendálja újra. Adjon 4 ml Chang Medium C-t lombikonként 5 ml össztérfogathoz.

3. Inkubálja a tenyészeteket nyugalomban 37°C-on 5% CO2 atmoszférában.

4. Ellenőrizze a növekedést az 5. napon. Cserélje ki a médiumot friss Chang Medium C-re és végezzen begyűjtést, ha megfelelő sejtnövekedést tapasztalt.

5. Ellenőrizze a tenyészeteket növekedését és cserélje ki teljesen a médiumot minden második nap ezután addig, amíg megfelelő kolóniákat nem észlel és kész a begyűjtésre.

6. A legjobb eredményeket akkor éri el, ha a tenyészetet a begyűjtést megelőző napon Chang Medium C-vel táplálta.

MEGJEGYZÉS: Zárt rendszerhez, öblítsen át minden tenyésztőedényt 5% CO2- 95% levegővel 20 másodpercre. Zárja le a tenyésztő lombikok kupakját és inkubálja azokat 37 °C-on. (Ajánlatos egy steril bedugott pasteur pipettát csatlakoztatni a CO2 forráshoz a bejövő gáz sterilitásának biztosítására).

Chang Medium C alkalmazása passzált magzatvíz sejtek növekedésére:

A sejtpasszáláshoz kezelje a kultúrát tripszinnel (vagy pronázzal, stb.) ahogy normálisan teszi, amikor hagyományos közegben tenyészti a sejteket. A proteáz kezelést azonban szigorúan monitorozni kell. A magzatvíz sejtek növekedése a Chang Medium C-ben érzékenyebbnek tűnik a proteáz kezelésre, mint a hagyományos mediumban növelt magzatvíz sejteké. Lehetséges, hogy meg kell változtatnia a protokollját ennek figyelembevételére.

MINŐSÉGBIZTOSITÁSSTERILITÁS A Chang Medium kiegészítő készítésekor használt szérumot vizsgálták vírus szennyezésre CFR 9. /113.53. szerint. Ellenőrizték Mycoplasma szennyezére is. Mind Chang Medium B alap, mind pedig Chang Medium C kiegészítő sterilizált, 0,1 mikronos szűrőn szűrt. A Chang Medium B alap és a Chang Medium C kiegészítő reprezentatív mintáit vizsgálták lehetséges baktérium szennyezettségre a jelenlegi USP sterilitási tesztben <71> leirt sterilitási tesztprotokoll szerint.

Chang Medium® az Irvine Scientific bejegyzett márkaneve.

4. Aseptiniu būdu visą atskiesto Chang Medium C priedo turinį perpilkite į Chang Medium B bazinės terpės butelį.

5. Sukdami butelį gerai sumaišykite kompleksinę Chang Medium C terpę.

6. Pridėkite L-glutamino, 10,0 ml/l (200 mM). Pageidaujant galima papildyti antibiotikais.

Šaldytas priedas 1. Chang Medium C šaldytą priedą greitai atitirpinkite

sukiodami buteliuką 37 °C vandens vonelėje.

2. Aseptiniu būdu visą atšildyto Chang Medium C priedo turinį perpilkite į Chang Medium B bazinės terpės butelį.

CHANG MEDIUM C PRIEDO DALIJIMAS Į PORCIJAS Liofilizuotas priedas Jei negalėsite kompleksinę Chang Medium C terpę sunaudoti per 10 dienų, gali būti tikslinga pasigaminti mažesnius kiekius pagal toliau pateikiamą modifikuotą procedūrą. 1. Atskieskite Chang Medium C liofilizuotą priedą.

2. Aseptiniu būdu išpilstykite reikiamo dydžio alikvotinėmis dalimis ir jas užšaldykite.

3. Taip pat aseptiniu būdu į atitinkamą skaičių alikvotinių dalių išpilstykite Chang Medium B bazinę terpę.

4. Ruošdami kompleksinę Chang Medium C terpę, į vieną Chang Medium B bazinės terpės porciją dėkite vieną atšildyto Chang Medium C priedo porciją.

5. Gerai sumaišykite.

Šaldytas priedas 1. Atšildykite Chang Medium C šaldytą priedą.

2. Aseptiniu būdu išpi lstyki te reikiamo dydžio alikvotinėmis dalimis ir vėl užšaldykite. (PASTABA: Priedo buteliuke yra 14 ml arba 70 ml tirpalo. Paskirstykite vienodai.)

NAUDOJIMO NURODYMAI Kultūroms maitinti naudojamos terpės rūgštingumas turi būti pH 6,8–7,2 (t. y. terpė turi būti šiek tiek gelsvai lašišinės spalvos). pH galima lengvai pakoreguoti terpę palaikant 5%–8% CO2 inkubatoriuje su šiek tiek atlaisvintu dangteliu.

Galutinė pH reikšmė turi būti 6,8–7,2.

Dėl išsamesnių šių produktų naudojimo gairių kiekviena laboratorija turi žiūrėti savo vidaus darbo tvarkos taisykles ir metodinius nurodymus, specialiai parengtus ir optimizuotus pagal atskiros medicininės programos nuostatas.

Chang Medium C terpės naudojimas pirminėms kultūroms: in situ metodai

1. Vaisiaus vandenis centrifuguokite mažu greičiu koncentruotai ląstelių masei gauti.

2. Nusėdusias ląsteles resuspenduokite nedideliame pačios pacientės vaisiaus vandenų kiekyje. Pavyzdžiui, nusiurbkite 10 ml centrifuguotų vaisiaus vandenų supernatantą palikdami 0,5 ml virš ląstelių nuosėdų ir resuspenduokite. Į koncentruotą ląstelių suspensiją pridėkite pakankamai Chang Medium C terpės,

kad galutinis po kiekvienos plokštelės dengiamuoju stikleliu tenkantis tūris būtų 0,5 ml (iš viso 4 dengiamieji stikleliai) arba po 2 ml vienam flakonėliui.

3. Kultūras netrukdomai inkubuokite 37 °C temperatūroje 5% CO2 atmosferoje.

4. 2-ą dieną ant kultūrų užliekite po 2 ml Chang Medium C terpės.

5. Praėjus 4–5 dienoms, reikia patikrinti kultūrų augimą. Pastebėjus augimą, kultūras reikia pamaitinti. Kultūras maitinkite nusiurbdami visą virš pasėlio susidariusį supernatantą ir jį pakeisdami 2 ml šviežios Chang Medium C terpės. Po to kultūras rekomenduojama maitinti kas 2 dienas.

6. 5-ą dieną arba po 5 dienų patikrinkite kultūrų augimą ir aptikę pakankamai kolonijų ląsteles surinkite.

7. Geriausių rezultatų pasiekiama Chang Medium C terpe pasėlius maitinant dieną prieš ląstelių surinkimą.

Chang Medium C terpės naudojimas p i rminėms kul tūroms: ku l t ivav imo flakonuose metodai 1. Vaisiaus vandenis centrifuguokite mažu greičiu

koncentruotai ląstelių masei gauti.

2. Nusėdusias ląsteles resuspenduokite nedideliame pačios pacientės vaisiaus vandenų kiekyje. Pavyzdžiui, nusiurbkite 10 ml centrifuguotų vaisiaus vandenų supernatantą palikdami 1 ml virš ląstelių nuosėdų ir resuspenduokite. Pridėkite 4 ml Chang Medium C terpės, kad bendras tūris flakone būtų 5 ml.

4. 5-ą dieną patikrinkite augimą. Terpę pakeiskite šviežia Chang Medium C terpe ir pastebėję pakankamai priaugusių ląstelių jas surinkite.

5. Po to kas antrą dieną patikrinę kultūrų augimą visiškai pakeiskite terpę, kol bus priaugę pakankamai kolonijų, kurias galima surinkti.

PASTABA: Kultivuodami uždarosiose sistemose, kiekvieną pasėlio flakonėlį 20 sekundžių eksponuokite 5% CO2 ir 95% oro mišiniu. Sandariai prisukę dangtelius, flakonus su kultūromis inkubuokite 37 °C temperatūroje. (Rekomenduojama prie CO2 šaltinio prijungti sterilią Pastero pipetę su kamštuku, užtikrinant įeinančių dujų sterilumą.)

Chang Medium C terpės naudojimas vaisiaus vandenų persėtų kultūrų ląstelėms auginti:

Norėdami persėti ląsteles, kultūras apdorokite tripsinu (arba pronaze ar kt.), kaip kad paprastai darytumėte augindami ląsteles įprastinėje terpėje. Visgi apdorojimo proteazėmis procesą būtina atidžiai stebėti. Chang Medium C terpėje augintos vaisiaus vandenų ląstelės turi didesnį polinkį jautriau reaguoti į apdorojimą proteazėmis negu įprastinėje terpėje augintos vaisiaus vandenų ląstelės. Į tai atsižvelgiant gali prireikti pakoreguoti tyrimo metodo protokolą.

KOKYBĖS LAIDAVIMASSTERILUMAS Serumas, naudotas gaminant Chang Medium C priedą, virusinių užkratų atžvilgiu yra ištirtas pagal 9 CFR kodekso 113.53 dalies standartus. Taip pat patikrinta, ar jis neužkrėstas mikoplazmomis. Tiek Chang Medium B bazinė terpė, tiek Chang Medium C priedas yra sterilizuoti filtruojant per 0,1 mikronų filtrus. Chang Medium B bazinės terpės ir Chang Medium C priedo tipiniai pavyzdžiai yra išbandyti bakteriologinio užkrėtimo rizikai nustatyti pagal šiuo metu patvirtintą Jungtinių Valstijų farmakopėjos (USP) sterilumo bandymų protokolą <71>.

Chang Medium® yra „Irvine Scientific“ bendrovės registruotas prekės ženklas.

5. Şişeyi helezonik bir şekilde iyice sallayarak tam Chang Medium C’yi karıştırın.

6. L-Glutamin 10.0 mL/L (200 mM) ekleyin. İstenirse antibiyotikler eklenebilir.

Donmuş Takviye1. Viyali 37°C su banyosunda helezonik bir şekilde hızla sallayarak Chang Medium C Donmuş Takviyeyi çözün.

2. Aseptik bir şekilde, çözünmüş Chang Medium C Takviyesinin tüm içeriğini Chang Medium B Bazal şişesine aktarın.

CHANG MEDIUM C TAKVİYESİNİN ALİKOTLANMASILiyofilize TakviyeEğer tam Chang Medium C’yi 10 gün içinde kullanamıyorsanız, prosedürde şu modifikasyonu izleme yoluyla daha küçük miktarlar oluşturmak isteyebilirsiniz:

1. Chang Medium C Liyofilize Takviyeyi sulandırın.

2. Aseptik bir şekilde uygun şekilde ebatlandırılmış alikotlara dağıtın ve dondurun.

3. Yine aseptik bir şekilde Chang Medium B Bazal’ı tekabül eden sayıda alikotlara dağıtın.

4. Tam Chang Medium C’yi hazırlamak için çözünmüş bir alikot Chang Medium C Takviyesini bir alikot Chang Medium B Bazal’a ekleyin.

5. İyice karıştırın.

Donmuş Takviye1. Chang Medium C Donmuş Takviyeyi çözün.

2. Aseptik bir şekilde uygun şekilde ebatlandırılmış alikotlara dağıtın ve yeniden dondurun. (NOT: Takviye viyali 14 mL veya 70 mL içerir. Eşit şekilde dağıtın.)

KULLANIM YÖNERGELERİ

KÜLTÜRLERİ BESLEMEK İÇİN KULLANILACAK MEDYUMUN pH’I 6.8 İLA 7.2 ARASINDA OLMALIDIR (yani medyum hafif sarımsı somon renginde olmalıdır). Medyum kapağı hafif gevşek şekilde %5-%8’lik bir CO2 inkübatörü içine konarak pH kolayca ayarlanabilir.

Son pH 6.8-7.2 olmalıdır.

Bu ürünlerin kullanımıyla ilgili ek ayrıntılar için, her laboratuar, kendi medikal programınız için özel olarak geliştirilmiş ve optimize edilmiş olan kendi laboratuar prosedürlerine ve protokollerine başvurmalıdır.

Chang Medium C’nin Primer Kültürler İçin Kullanımı: In Situ Yöntemler

1. Hücreleri konsantre etmek için amniyotik sıvıyı düşük hızla santrifüjleyin.

2. Hücre pelletini hastanın kendi amniyotik sıvısının küçük bir hacmi içinde yeniden süspanse edin. Örneğin inceltilmiş 10 mL amniyotik sıvının üst fazını hücre pelletinin 0.5 mL üstüne çekin ve yeniden süspanse edin. Lamel (toplam 4 lamel) başına 0.5 mL’lik veya flasket başına 2 mL’lik son kaplama hacmi

sağlamak için, konsantre hücre süspansiyonuna yeterli miktarda Chang Medium C ekleyin.3. Kültürleri 37°C %5 CO2’lik atmosferde kendi haline bırakarak inkübe edin.

4. İkinci günde kültürlere 2 mL Chang Medium C ekleyin.

5. 4-5 gün sonra kültürlerin gelişim durumu kontrol edilmelidir. Gelişim gözlenir gözlenmez kültürler beslenmelidir. Kültürleri beslemek için tüm kültür üst fazını atın ve 2 mL yeni Chang Medium C ekleyin. Bunun ardından kültürlerin her 2 günde bir beslenmesi tavsiye edilmektedir.

6. Beşinci günde veya sonrasında kültürlerin gelişim durumunu kontrol edin ve yeterince koloni gözlendiğinde hasat yapın.

7. En iyi sonuçların elde edilmesi için, kültürler hasattan önceki gün Chang Medium C ile beslenmelidir.

Chang Medium C’nin Primer Kültürler İçin Kullanımı: Flask Yöntemleri1. Hücreleri konsantre etmek için amniyotik sıvıyı düşük hızla santrifüjleyin.

2. Hücre pelletini hastanın kendi amniyotik sıvısının küçük bir hacmi içinde yeniden süspanse edin. Örneğin inceltilmiş 10 mL amniyotik sıvının üst fazını hücre pelletinin 1 mL üstüne çekin ve yeniden süspanse edin. Flask başına 5 mL’lik toplam hacim için 4 mL Chang Medium C ekleyin.

3. Kültürleri 37°C %5 CO2’lik atmosferde kendi haline bırakarak inkübe edin.

4. Beşinci gün kültürlerin gelişim durumunu kontrol edin. Medyumu yeni Chang Medium C ile değiştirin ve eğer yeterli hücre gelişimi gözleniyorsa hasat edin.

5. Kültürlerin gelişim durumunu kontrol edin ve bundan sonra yeterli koloni gözlenene ve hasada hazır olana kadar iki günde bir medyumu tamamen değiştirin.

6. En iyi sonuçların elde edilmesi için, kültürler hasattan önceki gün Chang Medium C ile beslenmelidir. NOT: Kapalı sistemler için, her bir flaskı 20 saniye boyunca %5 CO2 -%95 havaya maruz bırakın. Kültür flasklarının kapaklarını sıkıca kapatın ve 37°C’da inkübe edin. (Giren gazın sterilitesini sağlamak için CO2 kaynağına steril bir tıpalı pastör pipeti takılması tavsiye edilmektedir.)

Chang Medium C’nin Geçitli Amniyotik Sıvı Hücreleri Yetiştirmek İçin Kullanımı:

Hücreleri geçitlemek için, normalde hücreler normal medyumda yetiştirildiği zaman yaptığınız gibi kültürlere tripsin (veya pronaz vs) uygulayın. Fakat proteaz uygulaması dikkatli bir şekilde gözlenmelidir. Chang Medium C’de yetiştirilen amniyotik sıvı hücreleri, geleneksel medyumda yetiştirilmiş amniyotik sıvı hücreleriyle karşılaştırıldığında proteaz uygulamasına karşı genellikle daha hassastır. Protokolünüzü bunu dikkate alacak şekilde değiştirmeniz gerekebilir.

KALİTE GÜVENCESİ

STERİLİTEChang Medium C Takviyesinin üretiminde kullanılan serum, CFR 9’uncu Başlık, 113.53’üncü Bölüm’e uygun olarak viral kontaminasyon için test edilmiştir. Mikoplazma kontaminasyonu için de kontrol edilmiştir. Hem Chang Medium B Bazal hem de Chang Medium C Takviyesi 0.1 mikronluk bir filtreden geçirilerek sterilize edilmiştir. Chang Medium B Bazal ve Chang Medium C Takviyesinin temsil örnekleri, güncel USP Sterilite testi <71>’de tanımlanan sterilite test protokolü izlenerek olası bakteriyolojik kontaminasyona karşı test edilmiştir.

Chang Medium® Irvine Scientific’in tescilli bir markasıdır.

KASUTUSVALDKOND Söödet Chang Medium C võib kasutada järgmisteks rakendusteks: 1. amnionivedeliku rakkude tüvikultuuri kultiveerimine 2. passaaži läbinud amnionivedel iku rakkude

kasvatamine 3. luuüdirakkude kultiveerimine4. kõldkestahattudest tahkete amnioni kudede

proovide võtmine.

SÖÖDE ON KOOSTATUD KASUTAMISEKS NII LAHTISE (5% CO2-ATMOSFÄÄRIGA TASAKAALUSTATUD KULTUURIDEGA) KUI KA KINNISE KULTUURI SÜSTEEMIDES (5% CO2-GA LOPUTATUD JA TIHEDALT KORGISTATUD KULTUURIANUMATES KULTUURIDEGA).

Ettevaatust: Ärge kasutage söötme Chang Medium C komponente pärast iga komponendi etiketile märgitud kõlblikkusaja lõppu.

TOOTE KIRJELDUS Sööde Chang Medium® C arendati välja inimese amnionivedeliku rakkude tüvikultuuri kultiveerimiseks karüotüübi määramise otstarbel ja muuks antenataalseks geneetiliseks testimiseks. SEGU ON OPTIMEERITUD NII LAHTISTES KUI KA KINNISTES MEETODITES KASUTAMISEKS.

SÄILITAMINE JA STABIILSUS Hoidke külmutatud lisas Chang Medium C Frozen Supplement temperatuuril -10ºC, lüofiliseeritud lisand Chang Medium C Lyophilized Supplement temperatuuril 2ºC kuni 8ºC, põhisööde Chang Medium B Basal temperatuuril 2ºC kuni 8ºC ja täissööde Chang Medium C temperatuuril 2ºC kuni 8ºC. Põhisöödet Chang Medium B Basal ei tohi külmutada.

Kaitske fluorestsentsvalguse eest.

Kontrollige iga komponendi pudelil selle komponendi kõlblikkusaja lõppu. Täissöödet Chang Medium C võib hoida temperatuuril 2ºC kuni 8ºC 10 päeva enne selle kasutamist selle funktsiooni kahjustamata. Hoidmine rohkem kui 10 päeva ei ole soovitatav.

ÄRGE KÜLMUTAGE TÄISSÖÖDET CHANG MEDIUM C.

KOMPONENDID mg/LSoolad.......................................................7900Dekstroos..................................................1400Aminohapped.............................................1000Polüpeptiidid..................................................66Vitamiinid.......................................................22Desoksüribonukleosiidid.................................21Ribonukleosiidid.............................................20Naatriumpüruvaat.........................................110Muud komponendid..........................................8Hormoonid ja mikroelemendid..................0,0025Steroidhormoonid....................................0,0013Vastsündinud vasika seerum....................6% v/vVeise loote seerum..................................6% v/v

ETTEVAATUSABINÕUD JA HOIATUSED S e e s e a d e o n e t t e n ä h t u d k a s u t a m i s e k s tervishoiutöötajatele, kes on saanud vastava koolituse, kaasa arvatud selle seadme kavandatud kasutuse alal.

TÄISSÖÖTME CHANG MEDIUM C VALMISTAMINELüofiliseeritud lisand 1. Lubage lüofiliseeritud lisandil Chang Medium

C Lyophi l ized Supplement tasakaalustuda toatemperatuurini.

2. Aseptilisi tehnikaid kasutades lisage lüofilisaadile 10 mL või 50 mL steriilset destilleeritud vett. 10 mL viaal on mõeldud 90 mL põhisöötme Chang Medium B Basal jaoks; 50 mL viaal on mõeldud 450 mL põhisöötme Chang Medium B Basal jaoks.

3. Keerutage viaali õrnalt, et lahustumine oleks täielik. (MÄRKUS: Viaali inkubeerimine 5 kuni 10 minutit temperatuuril 37 ºC võib osutuda vajalikuks, et lisand täielikult lahustuks).

4. Aseptiliselt viige kogu rekonstitueeritud lisand Chang Medium C Supplement põhisöödet Chang Medium B Basal sisaldavasse pudelisse.

5. Segage täissööde Chang Medium C pudelit keerutades korralikult läbi.

6. Lisage L-glutamiin, 10,0 mL/L (200 mM). Soovi korral võite lisada antibiootikume.

Külmutatud lisand 1. Kiirelt sulatage külmutatud lisand Chang Medium C

Frozen Supplement viaali 37°C vesivannis keerutades.

2. Aseptiliselt viige kogu sulatatud lisand Chang Medium C Supplement põhisöödet Chang Medium B Basal sisadavasse pudelisse.

LISANDI CHANG MEDIUM C SUPPLEMENT ALIKVOOTIDE VÕTMINELüofiliseeritud lisand Kui teil ei ole võimalik täissöödet Chang Medium C 10 päeva jooksul ära kasutada, võib-olla soovite valmis segada väiksemaid koguseid järgmise modifitseeritud protseduuri järgi:

1. Rekonstitueerige lüofiliseeritud lisand Chang Medium C Lyophilized Supplement.

2. Jagage aseptiliselt sobiva suurusega alikvootideks ja külmutage.

3. Jagage aseptiliselt ka põhisööde Chang Medium B Basal sama paljudeks alikvootideks.

4. Täissöötme Chang Medium C valmistamiseks lisage üks alikvoot sulatatud lisandit Chang Medium C Supplement ühele alikvoodile põhisöödet Chang Medium B Basal.

5. Segage hästi.

Külmutatud lisand 1. Sulatage külmutatud lisand Chang Medium C Frozen

Supplement.

2. Jagage aseptiliselt sobiva suurusega alikvootideks ja külmutage uuesti. (MÄRKUS: Lisandiviaal sisaldab 14 mL või 70 mL. Jagage võrdeteks osadeks.)

5. Segage hästi.

KASUTUSJUHISED Kultuuride söötmiseks kasutatava söötme pH peab olema 6,8...7,2 (st sööde peab olema kergelt kollakat lõhevärvi). pH-d saab kergesti korrigeerida lõdvalt korgistatud söötme asetamisega 5%...8% CO2 inkubaatorisse.

Lõplik pH peab olema 6,8...7,2.

Toodete kasutamise üksikasjaliku informatsiooni vajamise korral peab iga labor kasutama oma labori protseduure ja protokolle, mis on välja arendatud ja optimeeritud konkreetselt teie oma meditsiiniprogrammi jaoks.

C h a n g M e d i u m C f o r k a s u t a m i n e tüvikultuuride kultiveerimiseks: In Situ meetod

1. Tsentrifuugige amnionivedelik madalal kiirusel, et rakud kontsentreeruks.

2. Resuspendeerige rakukämp väheses patsiendi oma amnionivedelikus. Näiteks – aspireerige tsentrifuugitud 10 mL amnionivedeliku supernatant kuni seda on rakukämbu kohale jäänud 0,5 mL ja resuspendeerige.

Lisage kontsentreeritud rakususpensioonile küllalt söödet Chang Medium C, et see lubab lõpuks esemeklaasi iga katteklaasi (kokku 4 katteklaasi) alla kanda 0,5 mL ehk 2 mL kolbikese kohta.

3. Inkubeerige kultuurid segamatult 5% CO2-atmosfääris temperatuuril 37 °C.

4. Loputage kultuurid 2. päeval, kasutades selleks 2 mL söödet Chang Medium C.

5. 4 kuni 5 päeva möödudes kontrollige kultuuride kasvu. Kasvu täheldamisel tuleb kultuure hakata söötma. Söötke kultuurid kogu kultuuri supernatandi eemaldades ja seda asendades 2 mL värske söötmega Chang Medium C. Pärast seda on soovitatav kultuuride söötmine iga 2 päeva tagant.

6. Kontrollige kultuuride kasvu 5. päeval või pärast seda ja piisaval arvul kolooniate tekkimise korral koguge need kokku.

7. Parimad tulemused saate siis, kui söödate kultuure söötmega Chang Medium C päev enne nende kokku kogumist.

Söötme Chang Medium C kasutamine tüvikultuuride kultiveerimiseks: kolbi meetod 1. Tsentrifuugige amnionivedelik madalal kiirusel, et rakud

kontsentreeruks.

2. Resuspendeerige rakukämp väheses patsiendi oma amnionivedelikus. Näiteks – aspireerige tsentrifuugitud 10 mL amnionivedeliku supernatant kuni seda on rakukämbu kohale jäänud 1 mL ja resuspendeerige. Lisage 4 mL söödet Chang Medium C et igas kolbis oleks vedeliku lõplik kogus 5mL.

3. Inkubeerige kultuurid segamatult 5% CO2- atmosfääris temperatuuril 37 °C.

4. Kontrollige kultuuride kasvu 5. päeval. Kui täheldate piisavat rakkude kasvu, vahetage sööde välja värske söötme Chang Medium C vastu ja koguge kokku.

5. Kontrollige kultuuride kasvu ja vahetage sööde täielikult välja ülepäeviti pärast seda kuni täheldate piisaval arvul kolooniaid ja need on kogumiseks valmis.

MÄRKUS: Kinnises süsteemis loputage iga kultuurikolb 20 sekundit 5% CO2 - 95% õhuga. Tihendage kultuurikolbide korgid ja inkubeerige temperatuuril 37°C. (Soovitatav on steriilse tropiga Pasteuri pipeti kinnitamine CO2 allikale, et tagada sissevoolava gaasi steriilsus.).

Söötme Chang Medium C kasutamine passaaži läbinud amnionivedeliku rakkude kultiveerimiseks:

Rakkude passaaži teostamiseks töödelge kultuure trüpsiiniga (või proteinaasi vms) nagu rakkude harilikult konventsionaalses söötmes kasvatamise puhul. Töötlemist proteinaasiga tuleb aga hoolikalt jälgida. Söötmes Chang Medium C kasvatatud amnionivedeliku rakud kipuvad olema tundlikumad proteinaasiga töötlemisele kui tavalises söötmes kasvatatud amnionivedeliku rakud. Seda arvesse võttes võib protokolli muutmine osutuda vajalikuks.

KVALITEEDI GARANTIISTERIILSUS Lisandi Chang Medium C Supplement tootmisel kasutatud seerumit on testitud viirusega kontaminatsiooni suhtes vastavalt koodeksi CFR 9. peatüki osale 113.53. Seda on skriinitud ka mükoplasmaga kontaminatsiooni suhtes. Põhisööde Chang Medium B Basal ja lisand Chang Medium C Supplement on steriliseeritud kasutades 0,1 mikronilist filtrit. Põhisöötme Chang Medium B Basal ja lisandi Chang Medium C Supplement proovid on testitud võimaliku bakteriaalse saastatuse suhtes järgides kehtivas USP steriilsuse testis <71> toodud steriilsuse kontrollimise protokolli.

Chang Medium® on firma Irvine Scientific registreeritud kaubamärk.

MAGYAR

LIETUVIŲ K.

BİLEŞENLER

koncentrálására.

KALİTE GÜVENCESİ

proovide võtmine.

5. Segage hästi.

Supplement.

5. Segage hästi.

kontsentreeruks.

MAGYAR

LIETUVIŲ K.

BİLEŞENLER

koncentrálására.

KALİTE GÜVENCESİ

proovide võtmine.

5. Segage hästi.

Supplement.

5. Segage hästi.

kontsentreeruks.

MAGYAR

LIETUVIŲ K.

BİLEŞENLER

koncentrálására.

KALİTE GÜVENCESİ

proovide võtmine.

5. Segage hästi.

Supplement.

5. Segage hästi.

kontsentreeruks.

ENGLISH

DEUTSCH

Probenentnahme.

ITALIANO

5. Mix well.

congelato.

C100, C106 and C101

Symbols:

(filtration)

Catalog Number

Lot Number

The Netherlands

CE Mark

Chang Medium ® C For Human Amniotic Fluid Cells

Documents

Transcript of Chang Medium ® C For Human Amniotic Fluid Cells