penyelamatan embrio

8/14/2019 penyelamatan embrio

1/10

TOPIK 8

PENYELAMATAN EMBRIO TANAMAN HASIL FERTILISASI

Disusun oleh

Angela

DEPARTEMEN AGRONOMI DAN HORTIKULTURA

FAKULTAS PERTANIAN

INSTITUT PERTANIAN BOGOR

2010


2/10

I. PENDAHULUAN

I.1 Latar belakang

Konservasi keanekaragaman hayati secara luas diakui sebagai prioritas

tinggi untuk perhatian dalam debat yang berlangsung antara lingkungan dan

pembangunan. Khususnya, konservasi sumber daya genetik tanaman untuk

pangan dan pertanian, satu sektor keanekaragaman hayati, dianggap sebagai

elemen utama dari setiap strategi untuk mencapai pembangunan pertanian

berkelanjutan, bersama dengan konservasi sumber daya alam lainnya. Beragam

metode konservasi dilakukan sesuai dengan situasi yang dihadapi. Metode ini

dapat dibagi secara luas menjadi ex situ dan in situ.

Konservasi in situ merupakan konservasi di area hutan belantara, cagar

alam, kawasan lindung, dan dalam sistem pertanian tradisional (disebut demikian,

on-farm konservasi). Konservasi ex situ melibatkan menghilangkan sumber daya

genetik tanaman dari habitat alam mereka dan menempatkan mereka di bawah

kondisi penyimpanan buatan.

Pendekatan konservasi ex situ yang paling sering dilakukan adalah

penyimpanan benih. Tiga kategori tanaman yang menimbulkan masalah

penyimpanan benih antara lain; 1) tidak menghasilkan benih sama sekali dan

diperbanyak secara vegetatif , contohnya pisang, 2) tanaman tersebut memiliki

genotipe steril atau benih ortodoks, seperti kentang dan singkong, dan 3) tanaman

tersebut memproduksi benih rekalsitran (Altman, 1998)

Terdapat dua kategori embrio yang mungkin tumbuh dengan normal, atau

terkadang in vivo, atau dibawah kontrol lingkungan in vitro:

1. Zygotic embryos, terbentuk dari zigot yang dihasilkan dari fusi regulertelur.

2. Non-zygotic embryos, dibentuk oleh sel-sel selain zigot

Parthenogenetic embryos, terbentuk dari telur yang tidak dibuahi,

atau telur yang dibuahi tanpa kariogamy

Androgenetic embryos, yang dibentuk dari mikrospora,

microgametophytes atau sperma.


3/10

Somatic embryos (embryoids), dibentuk dari sel somatic baik

secara in vivo ataupun in vitro.(Huang, 1988)

Masalah lainnya adalah penyerbukan dan pembuahan dapat berhasil

namun setelah persilangan buatan seringkali dijumpai buah yang terbentuk gugur

saat embrio belum matang, terbentuk buah dengan endosperm yang kecil atau

terbentuk buah dengan embrio yang kecil dan lemah. Kondisi tersebut dapat

menghambat program pemuliaan tanaman karena embrio muda, embrio dengan

endosperm kecil atau embrio kecil dan lemah seringkali tidak dapat berkecambah

secara normal dalam kondisi biasa.

Untuk mengatasi hal tersebut di atas maka embrio tersebut dapat

diselamatkan dan ditanam secara aseptis dalam media buatan sehingga dapat

berkecambah dan menghasilkan tanaman utuh. Teknik untuk menanam embrio

muda ini dikenal dengan sebutan penyelamatan embrio (embryo rescue)

(Muslim,2009)

Embryo culture atau kultur embrio adalah salah satu yang paling awal

untuk kultur jaringan yang menggunakan embrio muda (immature embryo) atau

embrio dewasa/tua (mature embryo) yang diisolasi agar dapat menghasilkan

tanaman yang lengkap (Conger,1980).

I.2 Tujuan

Tujuan dari percobaan ini adalah melatih mahasiswa cara untuk

mengisolasi embrio dari biji dan menumbuhkannya pada media in vitro.


4/10

II. BAHAN DAN METODE

II.1 Waktu dan tempat

Percobaan ini dilakukan pada:

Hari / tanggal : Selasa / 2009

Waktu : pukul 13.00 16.00 WIB

Tempat : Laboratorium Bioteknologi Tanaman

II.2 Bahan dan alat

Bahan :

Bahan tanaman adalah 15 biji kacang merah

Media MS11 ( MS + 0.5 mg/L BAP + 0.1 mg/L IAA + 30 g/L gula ), pH

media 5.9 sebelum di autoclave

Bahan sterilisasi biji adalah detergen

Clorox ( Sodium hypoclorit ) 30 % dan 5 %

Aquades steril

Alkohol 70 %

Alat yang dipergunakan antara lain Laminar Air Flow Cabinet

(dibersihkan terlebih dahulu dengan alkohol), pinset dan scalpel (disterilisasi

dalam autoclave selama 1 jam dalam suhu 1210C tekanan 0.175 bar), bunsen,

hand sprayer, masker, tissue.

II.3 Cara kerja

Biji kacang merah dicuci dengan menggunakan air detergen, biji dicuci

sambil dibuang kulitnya (dilakukan di luar laminar), kemudian dibilas dengan

aquades steril sebanyak dua kali. Selanjutnya di dalam laminar, biji direndam

dalam larutan Clorox 30 % selama 15 menit, kemudian dibilas dengan aquades

satu kali.

Setelah itu, biji kacang merah dibelah dengan hati-hati agar embrio tidak

rusak, selanjutnya embrio diisolasi dari endospermanya. Embrio direndam dalam

larutan Clorox 5 % selama 2 menit, lalu dibilas dengan aquades sebanyak dua


5/10

kali. Embrio yang telah steril ditanam pada media MS11 sebanyak 5 embrio per

botol, kemudian disimpan dalam ruang kultur dengan penyinaran 16 jam per hari.

2.4 Pengamatan

Pengamatan yang dilakukan terhadap peubah:

1. jumlah embrio yang steril dan tumbuh

2. jumlah embrio yang mati dan gejalanya

3. persentase embrio yang berkecambah dan saat mulai berkecambah


6/10

III. HASIL DAN PEMBAHASAN

III.1 Hasil

Kelompok Jumlah embryo steril dan tumbuh

1 MST 2 MST 3 MST 4 MST 5 MST

1 7 7 7 5 5

2 13 5 5 5 5

3 15 15 15 15 15

4 15 15 15 15 15

5 5 5 3 0 0

6 7 0 0 0 0

7 13 9 0 0 0

8 5 5 5 5 5

9 15 15 10 10 10

10 15 15 15 13 11

11 5 1 0 0 0

12 15 15 15 15 15

sd 10.833 4.549 8.916 5.853 7.5 6.274 6.916 6.3597 6.75 6.210

Kelompok Jumlah embryo mati

1 MST 2 MST 3 MST 4 MST 5 MST1 8 8 8 10 10

2 1 9 9 9 9

3 0 0 0 0 0

4 0 0 0 0 0

5 0 0 2 5 5

6 8 15 15 15 15

7 0 4 13 13 13

8 10 10 10 10 10

9 0 0 5 5 5

10 5 5 5 7 9

11 0 2 3 5 5

12 0 0 0 0 0 sd 2.667 3.9157 4.416 5.0535 5.833 5.169 6.583 5.0354 6.75 5.083


7/10

0

2

4

6

8

10

12

1 MST 2 MST 3 MST 4 MST 5 MST

embrio steril d

tumbuh

embrio mati

Kelompok

Jumlah embrio

berkecambah

Persentase embrio

berkecambah1 7 46.70%

2 5 35.71%

3 15 100%

4 15 100%

5 3 60%

6 7 46.77%

7 0 0%

8 5 33.33%

9 15 100%

10 15 100%

11 7 3%

12 15 100% sd 9.083 5,567 60.46% 39%

III.2 Pembahasan

Dari data yang diperoleh dapat dilihat bahwa jumlah embrio yang steril

dan tetap tumbuh semakin menurun setiap minggunya, hingga pada 5 MST rata-

rata embrio yang tumbuh adalah 6.75 dengan standar deviasi 6.210. nilai standar

deviasi yang cukup besar ini dikarenakan terdapat empat kelompok dengan

jumlah embrio tumbuhnya nol (0) sedangkan kelompok lainnya diatas lima (5).

Sedangkan jumlah embrio yang mati berbanding terbalik dengan jumlah

embrio yang tumbuh. Setiap minggunya jumlah embrio yang mati bertambah dan

pada 5 MST rata-rata embrio yang mati adalah 6.75 dengan standar deviasi 5.083.

Meningkatnya jumlah embrio yang mati dapat disebabkan oleh

kontaminasi virus, bakteri, atau cendawan. Hal ini terjadi karena praktikan dan

peralatan yang kurang steril atau tidak hati-hati saat melakukan praktikum.


8/10

Pada data jumlah embrio yang berkecambah dan persentase

perkecambahannya, yang paling kecil adalah kelompok 7 dengan persentase 0%

tetapi terdapat lima kelompok dengan persentase perkecambahan 100% dan

kelompok lainnya dengan persentase di bawah 50%. Rata-rata untuk jumlah

embrio yang berkecambah adalah 9.083 dengan standar deviasi 5.567, sedangkan

rata-rata untuk persentase perkecambahan adalah 60.46 % dengan standar deviasi

39%. Dengan nilai rata-rata perkecambahan di atas 50% bisa dikatakan praktikum

penyelamatan embrio ini berhasil.


9/10

IV. KESIMPULAN DAN SARAN

4.1 Kesimpulan

Jumlah embrio yang tumbuh dan mati berbanding terbalik. Jumlah embrio

yang tumbuh menurun setiap minggunya, tapi jumlah embrio yang mati setiap

minggunya meningkat. Dapat dikatakan praktikum penyelamatan embrio pada

media in vitro ini cukup berhasil karena rata-rata perkecambahan di atas 50 %.

4.2 Saran

Metode penyelamatan embrio ini semoga dapat dikembangkan dan

dilaksanakan pada praktikum selanjutnya dengan bahan tanaman yang berbeda.

Selain untuk menambah wawasan dan kemampuan mahasiswa dalam mengisolasi

embrio, juga untuk menambah koleksi plasma nutfah yang tidak dapat

dikembangbiakan secara generatif yang saat ini semakin langka.


10/10

DAFTAR PUSTAKA

Altman, Arie. 1998.Agricultural Biotechnology . New York: Marcel Dekker, Inc.

Muslim, Ahmadi. 2009.Kultur Embrio dan Penyelamatan Embrio (Embryo

Culture and Embryo Rescue). [online].

(http://bloginvitro.blogspot.com/search/label/KULTUR%20ANTHERA

%20(MIKROSPORAdiakses tanggal 04 Januari 2010)

Conger, B.V. 1980. Cloning Agricultural Plants via In Vitro Techniques.

Florida: CRC Press, Inc.

Huang, Cheng-Hwa. 1988. Cell and Tissue Culture in Field Crop Improvement.

Taiwan: Agriculture Building, 14 Wenchow Street
http://bloginvitro.blogspot.com/search/label/KULTUR%20ANTHERA%20(MIKROSPORAhttp://bloginvitro.blogspot.com/search/label/KULTUR%20ANTHERA%20(MIKROSPORAhttp://bloginvitro.blogspot.com/search/label/KULTUR%20ANTHERA%20(MIKROSPORAhttp://bloginvitro.blogspot.com/search/label/KULTUR%20ANTHERA%20(MIKROSPORA

penyelamatan embrio

Documents

Transcript of penyelamatan embrio