Mikrobiota Fekal

5/17/2018 Mikrobiota Fekal - slidepdf.com

http://slidepdf.com/reader/full/mikrobiota-fekal 1/17

PENGARUH PADA MIKROBIOTA PROBIOTIK FESES DAN KEGIATAN

GENOTOKSIK AIR DI FESES PASIEN DENGAN DERMATITIS ATOPIK:

A, TERKONTROL PLACEBO STUDI

S M U M A R Y

Latar Belakang: mikrobiota kolon terlibat dalam penyebab kanker usus

besar menurut beberapa laporan. Studi juga menunjukkan bahwa mikrobiota yang

berbeda antara pasien atopik dan subyek sehat. Tujuan: Untuk mengevaluasi apakah

campuran probiotik yang mengandung Lactobacillus paracasei LPC-37,

Lactobacillus acidophilus 74-2, dan Bifidobacterium animalis subsp. lactis DGCC

420 dapat mempengaruhi mikrobiota dan aktivitas genotoksik pada subyek sehat

dan pasien dengan dermatitis atopik (AD). Metode: terkontrol plasebo cross-over

studi dilakukan. Lima belas orang dewasa yang sehat dan pasien dewasa 15 AD

dikonsumsi 2_ 100 ml / d baik probiotik atau minuman plasebo selama 8 minggu

yang diikuti oleh sapuan keluar jangka waktu 2 minggu sebelum menyeberang

intervensi. Air feses diisolasi dari sampel tinja dikumpulkan pada akhir setiap

periode. HT29c19a sel diinkubasi dengan air feses diukur untuk kerusakan DNA

menggunakan satu sel elektroforesis gel ("komet assay"). Spesies bakteri ditentukan

oleh qPCR dan konsentrasi rantai pendek asam lemak diukur dengan menggunakan

kromatografi gas. Hasil: suplementasi probiotik menghasilkan peningkatan

signifikan dalam laktobasilus, sedangkan jumlah Bifidobacteria dan Bacteroidetes

tetap tidak berubah. Clostridium perfringens klaster IeII menurun secara bermakna

pada subyek sehat. Potensi genotoksik (dinyatakan sebagai intensitas ekor) air

feses, tidak terpengaruh. Namun, intensitas ekor menurun secara signifikan pada

periode probiotik dibandingkan dengan plasebo (23,5 vs 16,7%) pada pasien AD.

Meskipun konsentrasi fekal dari rantai pendek asam lemak tidak terpengaruh, pH

feses berkurang secara signifikan (7,0 vs 6,6) pada pasien AD setelah probiotik.

Kesimpulan: Hasil penelitian menunjukkan bahwa probiotik menurunkan potensi

genotoksik air feses pada pasien AD. C. perfringens feses klaster IeII tingkat tetap

tidak terpengaruh menunjukkan baik perubahan dalam aktivitas mereka, atau fakta



bahwa spesies bakteri lainnya bertanggung jawab untuk kegiatan genotoksik

berkurangnya air tinja.

PENDAHULUAN

Bukti kuat yang menghubungkan perbedaan dalam komposisi mikrobiota

usus pada subyek alergi dan non-alergi telah reported.1 Hasil dari studi, khususnya,

pada bayi dengan dermatitis atopik atau alergi menunjukkan kolonisasi usus kurang

dengan kedua Lactobacillus dan Bifidobacterium dan tingkat yang lebih tinggi dari

Clostridium, serta peningkatan frekuensi untuk Staphylococcus terjadinya daripada

di non-alergi children.2e4 Sebuah hubungan langsung antara kolonisasi dengan

Clostridium difficile pada bulan-bulan pertama kehidupan dan peningkatan risiko

semua hasil atopik pada anak usia ini menunjukkan untuk pertama waktu dengan

Penders dkk. di 2007,5 Dalam dekade terakhir, banyak peneliti telah menunjukkan

bahwa mikrobiota usus memegang peranan penting dalam timbulnya atopik

diseases.3e6

Mikrobiota usus adalah sumber yang paling penting untuk stimulasi sistem

kekebalan tubuh. Menginduksi pematangan sistem kekebalan tubuh dan

mempertahankan fungsi penghalang yang mencegah invasi patogen. Metabolit

bakteri usus, seperti rantai pendek asam lemak (SCFAs) yang terlibat dalam

pertumbuhan sel epitel dan differentiation.7 Selain itu, aktivitas metabolik enzim

bakteri mempengaruhi beban dari lumen usus yang berkaitan dengan potensi

produk metabolik tidak beracun atau beracun . Khususnya, aktivitas enzim ini

berbeda antara spesies bakteri. Bakteri yang berasal dari spesies Lactobacillus dan

Bifidobacterium yang ditandai dengan kegiatan yang lebih rendah dari kanker

mempromosikan enzim dibandingkan dengan bakteri lain dari mikrobiota seperti

Clostridium dan Bacteroides.8 Komposisi mikrobiota seperti yang diamati pada

penyakit atopik mengarah ke saran bahwa pasien ini memiliki lebih genotoksik

lingkungan dalam lumen usus mereka daripada orang sehat. Hal ini dapat, pada

gilirannya, menimbulkan risiko lebih tinggi terkena kanker usus besar pada

penyakit atopik. Secara umum, bagaimanapun, studi epidemiologi menunjukkan

hasil yang bertentangan untuk hubungan antara penyakit atopik dan kanker. Ini



adalah hipotesis bahwa (i) stimulasi antigenik memprediksi hubungan positif antara

kanker dan alergi (yaitu, penderita alergi memiliki risiko kanker lebih tinggi),

sedangkan, (ii) imunosurveilans dan profilaksis memprediksi asosiasi terbalik

(yaitu, penderita alergi memiliki risiko kanker lebih rendah) .9 Singkatnya, data

epidemiologi terakhir menunjukkan hubungan yang kompleks antara alergi, atopi

dan kanker yang tergantung pada kondisi atopik spesifik dan organ tertentu sites.10

Modulasi dari mikrobiota usus oleh bakteri probiotik yang dipilih

memberikan kesempatan untuk mengurangi risiko kanker usus besar. Probiotik

berasal terutama dari spesies Lactobacillus dan Bifidobacterium telah terbukti

mengurangi metabolit tertentu dan enzim konon terlibat dalam sintesis atau aktivasi

carcinogens.11 Selanjutnya, studi intervensi manusia dengan probiotik yang dipilih

mengungkapkan penurunan aktivitas enzim fekal yang menghasilkan karsinogen

bersama-sama dengan penurunan potensi genotoksik dari feses water.1, 12e14

Hipotesis bahwa modulasi dari komunitas mikroba usus dapat mencegah atau

bahkan mengobati penyakit atopik didukung oleh beberapa studi klinis yang

menentukan efek positif dari intervensi dengan bakteri probiotik pada tingkat dan

keparahan dari atopik disease.15, 16

Studi saat ini pada pasien dengan AD dan subyek sehat berfokus pada efek

dari suplemen probiotik yang mengandung Lactobacillus paracasei LPC-37,

Lactobacillus acidophilus 74-2, dan Bifidobacterium animalis subsp. lactis DGCC

420 pada bakteri selektif dari mikrobiota feses yang diduga terlibat dalam

perkembangan penyakit. Selain itu, penelitian ini bertujuan untuk: (1) mengevaluasi

apakah pasien AD memiliki lingkungan luminal lebih beracun dari orang sehat, (2)

membuktikan jika probiotik dapat mempengaruhi lingkungan kolon, yaitu potensi

genotoksik air feses, dan (3) menentukan aktivitas metabolisme mikrobiota tinja.



METODE

Studi desain dan peserta

Penelitian ini adalah double blind randomized, placebo-controlled, cross-

over uji yang dirancang untuk menyelidiki efek dari campuran probiotik pada feses

dan aktivitas mikrobiota genotoksik. Sidang ini dilakukan di Departemen Fisiologi

Gizi dan Klinik untuk Allergology Dermatologi dan dermatologis di Universitas

Friedrich Schiller Jena. Peserta direkrut antara November 2004 dan Februari 2005.

Subyek sehat direkrut melalui plakat yang ditampilkan pada papan pengumuman di

universitas dan melalui iklan di koran lokal. Pasien direkrut di Klinik untuk

Allergology Dermatologi dan dermatologis. Penelitian dilakukan antara bulan

Januari dan Juli 2005 (subjek pertama dalam subjek untuk keluar terakhir).

Sebanyak 19 pasien dengan dermatitis atopik ringan atau sedang dan 15 subyek

sehat yang terdaftar. Tiga pasien dengan AD mundur sebelum mulai sidang dan satu

pasien dengan AD putus karena penyakit ini mengharuskan pengobatan dengan

kortikosteroid, kriteria eksklusi penelitian. Karakteristik subjek dari semua relawan

yang menyelesaikan studi disajikan pada Tabel 1. Kriteria inklusi untuk subyek

yang sehat merupakan diagnosis negatif: asma alergi, rhinoconjunctivitis alergi,

alergi makanan, dan mengesampingkan diatesis atopik (kurang dari 7 poin sesuai

dengan atopyscore dari Diepgen17). Layak pasien puas semua berikut

kriteria: berusia antara 18 dan 40 tahun, diagnosis yang jelas dermatitis atopik

(lebih dari 10 poin sesuai dengan skor atopi-of Diepgen17), atau eksim lentur atau

pruritus paling sedikit 12 bulan (residivis atau permanen), skor SCORAD dari 5 -30

(AD kecil atau sedang), 18 kesediaan untuk secara eksklusif menggunakan untuk

masa penelitian produk kosmetik tertentu yang direkomendasikan oleh dokter studi



dan menggunakan kelas II direkomendasikan kortikosteroid (Advantan) sebagai

terapi lebih lanjut untuk AD (misalnya selama episode). Pengecualian kriteria untuk

semua peserta termasuk: wanita hamil atau menyusui, terapi supresif atau sitostatik

imun atau terapi steroid dan fototerapi atau sistemik sistemik AD dalam 4 minggu

terakhir sebelum studi dimulai, infeksi aktif dari kulit, asma penyakit yang relevan

yang harus diobati dengan corticoids, asupan antihistamin, pengobatan antibiotik,

subjek dengan indigestibility atau alergi terhadap komponen intoleransi susu atau

laktosa (tes tusuk kulit dilakukan untuk mengesampingkan tipe 1 sensitivitas

terhadap susu sapi), pengobatan jangka panjang dengan sistemik steroid, steroid

depo, long-acting antihistamin, obat penenang dan psychopharmaceuticals, asupan

antihistamin, psychopharmaceuticals dengan efek antihistamin dan penerapan krim

yang mengandung steroid untuk lengan bawah dalam 7 hari terakhir sebelum

pengujian tusukan dan / atau pengobatan pasien dengan Astemizol ( Hismanal)

dalam waktu 4 minggu sebelum penyakit jantung tes, akut atau kronis gejala atau

penyakit internistic parah, penyakit autoimun, defisiensi imun (termasuk perawatan

penekan kekebalan tubuh), kekebalan-kompleks yang disebabkan immunopathies

atau tumor ganas, penyalahgunaan alkohol, narkoba atau obat sebagai serta

konsumsi secara teratur probiotik. Studi ini disetujui oleh Komite Etika Fakultas

Kedokteran Universitas Friedrich Schiller Jena (admin. jumlah 1452-11/04) dan

terdaftar dalam database Clinical Trials (ident. NCT00550472).

Pendaftaran dan tugas untuk intervensi dilakukan oleh dokter percobaan dan

AR. Semua orang yang terlibat (percobaan dokter, staf ilmiah) dan peserta studi

buta. Selain itu, produk penelitian telah menjadi buta dan diberi label dengan kode

numerik oleh susu produksi. Pada minggu 3-pra-periode dan sepanjang durasi studi

20-minggu, semua sukarelawan harus menghilangkan produk pro-dan prebiotik lain

selain minuman yoghurt intervensi dari diet mereka. Pada awal penelitian, semua

mata pelajaran secara acak ditugaskan untuk kelompok perlakuan 2 (1:1) sesuai

dengan daftar pengacakan yang dihasilkan komputer (pengacakan diblokir). Satu

kelompok menerima 2 _100 mL / d minuman probiotik dan yang lainnya menerima

2 _100 mL / d minum plasebo selama 8 minggu. Setelah mencuci 2-minggu keluar

periode, intervensi yang disalib antara kelompok dan produk masing dikonsumsi



selama 8 minggu. Sampel tinja dikumpulkan pada akhir setiap periode (probiotik,

plasebo, cuci bersih). Setelah melewati bangku, sampel diangkut langsung ke

lembaga dan dipersiapkan untuk analisa lebih lanjut (Gambar 1).

Studi produk

Minuman probiotik yang terdapat Streptococcus thermophilus dan

diperkaya dengan budaya probiotik L. paracasei LPC-37 (3.9_108 CFU / g), L.

acidophilus 74-2 (2.9_104 CFU / g) dan B. animalis subsp. lactis DGCC 420 (B.

lactis 420, 5,9 _104 CFU / g) (Danisco Deutschland GmbH, Niebüll, Jerman).

Asupan harian dari probiotik untuk L. paracasei LPC-37, L. acidophilus 74-2 dan B.

lactis 420 rata-rata 7,8 _1010 CFU / d, 5.8_ 106 CFU / d, dan 1.2_107 CFU / hari,

masing-masing. Strain ini dipilih karena kemampuan mereka untuk bertahan hidup

perjalanan pencernaan dan untuk mematuhi cells.19 usus manusia Pada tanggal

kedaluwarsa, setiap batch dari persiapan uji dikendalikan untuk kelangsungan hidup

ketegangan dengan menghitung piring. L. acidophilus dan L. 74-2 paracasei LPC-

37 ditanam pada Agar Lactobacillus Difco_ MRS (Difco Laboratories GmbH,

Augsburg, Jerman) untuk 3 hari atau 37 _C dan B. lactis 420 di RCM 5,9 Agar

(Merck KGaA, Darmstadt, Jerman) selama 5 d pada 37 _C. Minuman plasebo

adalah identik dengan minuman probiotik dalam hal penampilan, rasa, dan bau, tapi

tidak mengandung kultur probiotik. Isi karbohidrat, lemak dan protein dibandingkan

dalam semua batch minuman yogurt.



Persiapan sample

Pemisahan air feses ini dilakukan dengan sentrifugasi. Kotoran

dihomogenisasi segar ditimbang ke dalam Ultra-Clear tabung centrifuge (Beckman

Instruments GmbH, Munich, Jerman) dan disentrifugasi selama 240 menit pada

60.000 _g pada 4 _C. Fraksi supernatan (air feses) telah aliquoted dan disimpan

pada _80 _C sampai penentuan genotoxicity (ukuran hasil primer). Untuk

menentukan rantai pendek asam lemak (hasil sekunder), masing-masing sampel

tinja segar seberat 1 gram ditempatkan dalam 2 mL air suling dan disimpan pada



_20 _C sampai analisis. DNA bakteri dari sampel feses diekstraksi dan dimurnikan

menggunakan kit DNA komersial untuk sampel tinja (Invitek, Berlin, Jerman)

seperti yang dijelaskan previously.20 Kuantitas DNA ditentukan melalui suatu ND-

1000 NanoDrop penuh spektrum UV / Vis Spectrophotometer ( Wilmington, DE,

USA). DNA bakteri disimpan pada _20 _C sampai analisis qPCR (hasil sekunder

mengukur).

Kuantitatif real-time PCR

Reaksi PCR dilakukan pada total volume 25 ml. Kondisi untuk reaksi

termasuk primer, suhu annealing yang tepat, dan MgCl2 konsentrasi ditunjukkan

pada Tabel 2. Lactobacillus spp ini. PCR assay yang terkandung 1_ SYBR

Inti penyangga reagen Hijau (Applied Biosystems, Bridgewater, NJ, USA) dan 200

nM setiap primer sementara 300 nM primer masing-masing digunakan untuk Bacteroides dan Clostridium perfringens klaster PCR. Untuk uji Staphylococcus

aureus PCR, 25 ml campuran reaksi PCR terdiri dari 1_ hijau CEPAT SYBR Guru

Mix (Terapan Biosystems) dan 300 nM primer masing-masing. The 25 ml

campuran reaksi PCR untuk Bifidobacterium spp. termasuk 1_ TaqMan CEPAT

Universal Master Mix, Tidak UNG AmpErase (Terapan Biosystems), 300 nM

primer forward dan reverse serta 200 nM dari probe MGB (Dengan pemadam BHQ

non-fluorescent). Semua reaksi PCR mengandung 1 ng DNA template. Amplifikasi



dan deteksi DNA dilakukan dengan sistem ABI PRISM-deteksi sekuensing 7000

(Terapan Biosystems). Untuk pengujian masing-masing, spesies berikut digunakan

sebagai strain standar: Bacteroides fragilis ATCC 25285, Bifidobacterium DSM

20083 adolescentis, L. acidophilus NCFM dan S. aureus ATCC 29213. Sepuluh

kali lipat pengenceran seri (10 pg dan 1 ng) DNA dari strain standar digunakan

untuk kurva standar. Untuk penentuan DNA, sampel rangkap tiga yang digunakan

dan jumlah rata-rata per berat basah g feses dihitung.

Rantai pendek asam lemak

Untuk analisis rantai pendek asam lemak, sampel tinja yang dicairkan,

dicampur dan disentrifugasi pada 6000_g selama 15 menit. Selanjutnya, 500 mL

supernatan ditambahkan 50 mL standar internal (i-caproic asam), divortex dan

disentrifugasi lagi. Sampel 1 ml disuntikkan untuk gas kromatografi-pengukuran

(pada Shimadzu GC Model 17A, Shimadzu, Kyoto, Jepang). Kondisi operasi

berikut digunakan untuk pemisahan dan pendeteksian rantai pendek asam lemak:

detektor ionisasi nyala-, 15 m FFAP-kolom (15 m_0.25 mm_ 0,25 mm), hidrogen

sebagai gas pembawa dan program suhu dengan temperatur awal dari 105 _C,

meningkat 35 _C / menit, dan suhu akhir 170 _C.

Penentuan cyto-dan genotoxicity

Cyto-dan genotoxicity air feses sebagai hasil utama diuji dalam

HT29clone19A menurut Oberreuther-Moschner et al.14 Singkatnya, HT29 sel

dipanen dan disesuaikan dengan konsentrasi 2 _106 sel per ml dan diinkubasi

dengan 10% feses air selama 30 menit pada 37 _C. Viabilitas sel ditentukan

sebelum dan setelah diinkubasi feses melalui tripan biru exclusion.21 aktivitas

genotoksik air feses dianalisis dengan satu sel elektroforesis microgel (komet

assay). Setiap sampel feses dianalisis dalam tiga ulangan. Sebagai kontrol negatif,

0,9% NaCl isotonik dan sebagai kontrol positif 75 mM H2O2 dilibatkan untuk

masing-masing berjalan. Setelah sentrifugasi sel diinkubasi pelet sel yang tersisa

resuspended dalam 40 ml dalam 0,7% lowmelting-titik agarosa dan tertanam ke

slide pra berlapis (0,5% normal-lebur-titik agarosa). Sel ini kemudian ditutupi



dengan 80 ml 0,7% rendah lebur-titik agarosa. Setelah itu, slide ditempatkan ke

dalam larutan lisis (100 mM Na2EDTA, 1% Triton X-100, 2,5 M NaCl, 1% N-

lauroyl-sarcosin garam natrium, DMSO 10%, 10 mM Tris, pH 10) selama 60 menit

pada 4 _C dan diproses lebih lanjut ke dalam ruang elektroforesis microgel

mengandung larutan alkali (1 mM Na2EDTA, 300 mM NaOH, pH 13) selama 20

menit. Selanjutnya, elektroforesis dilakukan pada 25, 300 mM V selama 20 menit.

Selanjutnya, slide dibilas tiga kali dengan buffer netralisasi (0,4 M Tris, pH 7,5)

dan diwarnai dengan SYBR Hijau I (Sigma Deisenhofen, Jerman). Evaluasi

mikroskopis dilakukan dengan menggunakan sistem analisis citra Instrumen

tanggap (Haverhill, Suffolk, Inggris). Tingkat migrasi DNA ditentukan untuk 50

spot per slide. Intensitas ekor (TI), sebagai penanda untuk evaluasi, didefinisikan

sebagai proporsi intensitas fluoresensi ekor komet intensitas fluoresensi total.

Semua langkah-langkah kerja yang dilakukan di bawah lampu merah untuk

menghindari kerusakan DNA.

Analisis statistic

Untuk mengevaluasi ukuran sampel, analisis dilakukan dengan

menggunakan daya 6,0 PASS (NCSS statistik Software, Kaysville, UT, USA)

berdasarkan data dari literatur dan kelompok studi kami.

Perhitungan statistik dilakukan dengan SPSS versi 17.0 (SPSS Inc, Chicago,

USA). Sebagai persyaratan untuk analisis varians, semua data diuji homogenitas

varians dan untuk distribusi normal dengan uji Levene dan uji

KolmogoroveSmirnov, masing-masing. Untuk mengevaluasi data dalam hal

signifikansi statistik, diulang-langkah analisis varians (ANOVA) dengan Model

Linear Umum (GLM) diaplikasikan untuk mengidentifikasi perubahan parameter

dari waktu ke waktu, kecuali jika dinyatakan lain. Model ini menganggap kedua

perubahan individu dan antar-individu dari waktu ke waktu. Perbedaan antara

sukarelawan sehat dan pasien dengan AD dianalisis dengan menyisipkan kelompok

studi (sehat vs pasien) sebagai intersubyek. Selanjutnya, urutan intervensi sebagai

konsekuensi dari cross-over designwas dipertimbangkan dengan menyisipkan



urutan sebagai kovariat. Tidak ada pengaruh urutan ditentukan untuk setiap

parameter dianalisis.

Data yang tidak terdistribusi normal dianalisis dengan menggunakan

Wilcoxon signed-rank test untuk mengevaluasi perubahan dari waktu ke waktu dan

ManneWhitney U test untuk perbedaan antara kelompok (pasien sehat vs M),

masing-masing. Untuk setiap perbandingan, nilai P <0,05 dianggap signifikan.

HASIL

Feses mikrobiota pengukuran

Hasil analisis mikrobiota feses ditunjukkan pada Tabel 3. Suplementasi

dengan campuran probiotik yang mengandung strain laktobasilus dua dan satu

strain Bifidobacterium mengakibatkan tingkat yang lebih tinggi signifikan dari

genus Lactobacillus pada kedua kelompok subjek. Nomor Lactobacillus menurun

setelah mencuci 2-minggu keluar periode (P ¼ 0,015) dan tetap konstan pada

tingkat bahkan pada periode plasebo (P ¼ 0,001). Ada kecenderungan peningkatan

jumlah rata-rata bifido sebagai akibat dari suplementasi probiotik pada pasien AD

(P ¼ 0,088), sedangkan tingkat pada sukarelawan sehat tidak terpengaruh.

Selanjutnya, konsumsi campuran probiotik menyebabkan penurunan yang

signifikan dari C. perfringens klaster IeII pada subyek sehat, tapi tidak pada pasien

dengan AD. Anggota dari kelompok ini hadir dalam 93% dari pasien AD, tapi

hanya dalam 64% dari subyek sehat. Selain itu, tingkat yang lebih tinggi dari C.

perfringens klaster IeII terdeteksi pada pasien AD dibandingkan dengan subyek

sehat di semua periode studi. Tidak ada perbedaan yang diamati untuk

Lactobacillus spp, Bifidobacterium spp.. dan Bacteroidese Prevotellae

Porphyromonas kelompok antara subyek sehat dan pasien AD. Selain itu, tingkat

feses dari kelompok BacteroidesePrevotellaePorphyromonas tetap tidak

terpengaruh oleh suplementasi probiotik. S. aureus terdeteksi pada hanya satu

pasien AD setelah mencuci keluar periode (8_ 104 bakteri / g).

Rantai pendek asam lemak (tinja kimia)



Konsentrasi feses dari total rantai pendek asam lemak serta tingkat asetat,

propionat, butirat, dan valerat caproate tidak dipengaruhi oleh suplementasi

probiotik di kedua subyek sehat dan pasien AD (Tabel 4). Namun, pada pasien AD,

pH feses segar ditemukan menurun secara signifikan pada periode probiotik

dibandingkan dengan plasebo (6,6 _ 0,5 vs 0,4 7.0_, P ¼ 0,037). Dua minggu

setelah cuci bersih, sedikit menurun, tetapi tidak signifikan diamati (6.9_ 0,4, P ¼

0,139). Pada orang dewasa sehat, tidak ada perbedaan signifikan terlihat antara

periode studi (6,7 _0.5 (probiotik) vs 6,8 _0.5 (cuci bersih) vs 6,8 _ 0,4 (plasebo)).

Sitotoksisitas dan genotoxicity air feses

Inkubasi sel HT29clone19A dengan air feses tidak menunjukkan efek yang

signifikan terhadap viabilitas sel. Sebelum memulai percobaan, viabilitas sel rata-

rata adalah 99,3 _0.2%, sedangkan setelah 30 menit inkubasi dengan air feses,

kelangsungan hidup berkisar antara 97,6% dan 98,8% pada periode studi yang

berbeda. Setelah inkubasi dengan larutan garam isotonik (0,9%) sebagai kontrol

negatif, viabilitas sel menyumbang 97.0_1.4%. Oleh karena itu, air feses tidak

sitotoksik terhadap sel HT29.

Air tinja dari orang dewasa yang sehat tidak menginduksi istirahat untai

DNA yang lebih signifikan dalam HT29 sel dibandingkan dengan kontrol salin

isotonik. Selanjutnya, suplementasi dengan campuran probiotik tidak berpengaruh

pada aktivitas genotoksik sampel air feses pada kelompok penelitian (Gambar 2).

Sebaliknya, pada pasien dengan AD, suplementasi dengan kombinasi L. paracasei

LPC-37, L. acidophilus 74-2 dan B. animalis subsp. lactis DGCC 420 menghasilkan

penurunan yang signifikan dari genotoxicity air feses di HT29 sel dari 23,5 _9.2%

pada periode plasebo menjadi 16,7% setelah _7.6 probiotik. Tingkat ini sebanding

dengan tingkat plasebo subyek sehat dengan 14,6 _ 6,8%. Selain itu, nilai intensitas

membandingkan ekor periode plasebo mengungkapkan secara signifikan lebih

tinggi genotoksik potensi sampel air dari feses pasien AD daripada dari subyek

sehat (Gbr. 2).



Diskusi

Saldo dalam komposisi mikroba usus adalah penting dalam hal risiko

kanker kolorektal. Pada pasien AD, komposisi mikroba dari mikrobiota usus

cenderung ketidakseimbangan menuju manfaat bagi bakteri berbahaya. Bukti ada

bahwa bakteri probiotik menengahi efek menguntungkan dengan memodifikasi

mikrobiota usus dan aktivitas metabolik. Hal ini sebelumnya telah menunjukkan

bahwa campuran probiotik dilengkapi terpengaruh parameter kekebalan tubuh

perifer dan cenderung menghilangkan gejala kulit di AD patients.20

Dalam penelitian ini, suplementasi dengan minuman probiotik meningkat

secara signifikan laktobasilus feses total dalam kedua kelompok studi. Tingkat

berkorelasi cukup dengan konsentrasi L. paracasei (P ¼ 0,005, n = 90) dalam mata

pelajaran dilengkapi dengan dosis tertinggi dalam campuran probiotik (publikasi

200.820). Jumlah total Bifi-dobacterium tidak diubah secara signifikan oleh

intervensi probiotik, meskipun peningkatan dari spesies B. dikonsumsi lactis

diamati (diterbitkan 200.820). Ini mungkin indikasi pergeseran dalam genus

Bifidobacterium lactis terhadap B. menggarisbawahi in vitro terdeteksi adhesi

efektif strain ini untuk lendir usus manusia (terisolasi dari orang dewasa)dibandingkan dengan jenis lainnya Bifidobacteria. 19 Di sisi lain, tingkat B. lactis

agak rendah dibandingkan dengan konsentrasi seluruh bifido dan, dengan demikian,

mungkin tidak mempengaruhi jumlah total. Feses Bifidobacterium tingkat pada

sukarelawan muda relatif rendah dibandingkan dengan penelitian sebelumnya di

usia-cocok mata pelajaran, tetapi juga dibandingkan dengan peserta lanjut usia.

22e26 ini bertentangan dengan pendapat umum bahwa Bifidobacterium tingkat

lebih tinggi pada orang dewasa muda dibandingkan orang tua. 27e29 Namun,



konsentrasi Lactobacillus ditentukan oleh qPCR sesuai dengan data.25 diterbitkan

sebelumnya, 30 tingkat feses dari kelompok Bacteroidese Prevotellae

Porphyromonas tetap tidak terpengaruh oleh suplemen dan sesuai dengan hasil yang

diperoleh dalam studies.22 lain, 30 Tidak ada variasi yang diamati antara sehat

subyek dan pasien untuk kelompok bakteri. Sebaliknya, tingkat feses dari C.

perfringens klaster IeII berbeda secara signifikan antara pasien AD dan orang

dewasa yang sehat (Tabel 3). Lebih sampel tinja positif (14 dari 15) dan tingkat

yang lebih tinggi dari kilau C. perfringens IeII ditemukan pada pasien AD.

Clostridia secara luas knownto terlibat dalam pembentukan senyawa beracun dan

genotoksik karena tingginya aktivitas mereka b-lucuronidase dan, dengan demikian,

mungkin memodulasi risiko cancer.31 Menariknya, pada pasien atopik, aktivitas

genotoksik air feses meningkat pada semua mempelajari periodscompared untuk

healthycontrols. Pengamatan dan perbedaan yang sangat signifikan dalam periode

plasebo (P ¼ 0,006, Gambar. 2) menunjukkan bahwa potensi genotoksik air feses

umumnya mungkin meningkat pada pasien AD. Untuk yang terbaik dari

pengetahuan kami, ini adalah studi pertama menyelidiki potensi genotoksik air feses

pada pasien dermatitis atopik. Suatu kegiatan genotoksik tinggi faecalwater secara

langsung berhubungan dengan tumor meningkat incidence.32 Hal ini menimbulkan

pertanyaan apakah risiko kanker usus besar umumnya meningkat pada pasien

atopik. Sebuah meta-analisis dari Sherman et al.9 dievaluasi hubungan antara alergi,

sebagai bagian dari penyakit atopik, dan kanker. Analisis lebih dari 500 penelitian

antara tahun 1955 dan 2006 mengungkapkan bahwa lebih dari dua kali lebih banyak

studi melaporkan hubungan terbalik allergyecancer dari asosiasi positif dilaporkan.

Nilai dari asosiasi bervariasi antara kanker sistem organ yang berbeda. Khusus

untuk kanker usus besar dan dubur, hubungan terbalik diamati pada subyek alergi.

Sebuah penelitian di Jerman caseecontrol yang meneliti hubungan atopi dan risiko

kanker kolorektal tidak menunjukkan hubungan statistik yang signifikan dari kanker

kolorektal dan diseases.10 atopi atau atopi terkait Observasi ini bertentangan

dengan anggapan kita. Namun, kedua studi difokuskan terutama pada jalur

imunologi melalui sistem IgE dan fungsi pelindung dan tidak secara khusus pada

kondisi lingkungan yang sangat mempengaruhi usus besar karsinogenesis.



Umumnya, kekebalan penjelasan untuk hubungan dipostulasikan antara atopi dan

risiko kanker masih sangat spekulatif. Mungkin, respon kekebalan sehingga

imunosurveilans meningkat melebihi efek metabolik berbahaya dimediasi oleh

bakteri usus spesifik seperti Clostridia dan Bacteroides yang meningkat di AD.

Kemajuan dalam pemahaman pathwaysmay kanker andimmunological menawarkan

petunjuk lebih lanjut pada peran gangguan atopik dan risiko berbagai jenis kanker.

Kondisi di usus besar dan, dengan demikian, potensi genotoksik

dipengaruhi oleh beberapa parameter, sebagaimana telah ditunjukkan. Data

eksperimen dari beberapa penelitian telah menunjukkan bahwa asupan oral

probiotik dan prebiotik menghasilkan pengurangan risiko tumor dengan

mengurangi paparan genotoxins di gut.32e34 Secara khusus L. acidophilus 145

dalam kombinasi dengan longum B. 913 dan B. animalis dilengkapi subsp. lactis

DGCC 420 mengurangi potensi genotoksik air feses in vivo dan sesuai di vitro.14,

35 Pool-Zobel et al.36 dan Rowland et al.37 melaporkan fungsi pelindung dari

lactobacilli yang berbeda dan spesies bifido pada kerusakan DNA yang diinduksi

karsinogen dalam sel usus besar dari tikus dan penurunan b-glukuronidase aktivitas

di isi sekum. Informasi ini sejalan dengan penelitian lain yang mendokumentasikan

lactobacilli dan bifidobacteria menghasilkan tingkat rendah dari b-glukuronidase,

tetapi juga azoreductase dan nitroreductase, sedangkan anaerob yang ketat

(Bacteroides sp, Clostridium sp.). Menghasilkan tingkat tinggi enzim beracun 8,38,

39. Reguler asupan berbeda strain probiotik Lactobacillus mengungkapkan

penurunan konsentrasi feses dan kegiatan ini kanker mempromosikan enzim dalam

humans.12, 40,41 Dalam penelitian ini, suplementasi dengan L. paracasei LPC-37,

L. acidophilus 74-2, dan B. lactis DGCC 420 tidak mempengaruhi genotoxicity air

feses pada subyek sehat. Sebaliknya, air feses pasien atopik memiliki potensi

genotoksik jelas berkurang setelah konsumsi 8-minggu dari minuman probiotik.

Efek yang berbeda dari probiotik dalam kelompok mata pelajaran menunjukkan

bahwa interaksi bakteri probiotik dengan mikrobiota tersebut mungkin dipengaruhi

oleh kondisi khusus yang tergantung pada status kesehatan dari tuan rumah. Guerin-

Danan et al.41 ditentukan enzim tertinggi aktivitas penurun efek probiotik pada

subyek dengan tingkat awal tinggi aktivitas enzim, konsekuensi logis dari



genotoxicity air umumnya tinggi feses pada pasien AD. Di sisi lain, pH feses adalah

signifikan secara signifikan adalah dikurangi pada pasien pada periode probiotik

yang mungkin telah mengakibatkan penghambatan pertumbuhan dan aktivitas

potensial karsinogen bakteri pembentuk. Sejak feses C. perfringens klaster IeII

tingkat tetap tidak terpengaruh, kelompok lainnya Clostridia atau spesies bakteri

yang mungkin bertanggung jawab atas aktivitas genotoksik berkurangnya air tinja.

Saran ini didukung oleh genotoxicity tidak berubah pada subyek sehat dan secara

signifikan mengurangi tingkat C. perfringens klaster IeII pada periode probiotik.

Rantai pendek asam lemak adalah produk fermentasi yang paling penting

bakteri di usus besar. Sebagian besar (sampai 95%) dari ALRP dan produk lainnya

yang dibentuk oleh bakteri usus diserap dari usus atau lebih metabolized.42 Oleh

karena itu, perubahan kecil dalam ekskresi fekal menunjukkan perbedaan besar

dalam produksi ALRP atau penyerapan di usus. Dalam studi ini, tidak ada variasi

yang signifikan dalam konsentrasi feses dari asetat ALRP utama, propionat dan

butirat n-akibat konsumsi probiotik ditentukan dibandingkan dengan plasebo.

Dengan demikian, produk metabolik lainnya dari ALRP tampaknya bertanggung

jawab atas pH feses secara signifikan berkurang pada pasien pada periode probiotik.

Secara umum, efek dari probiotik pada konsentrasi ALRP feses pada manusia

bervariasi tergantung pada strain probiotik dan bakteri diberikan count.43e46

Konsentrasi dan rasio molar asetat, propionat dan butirat dalam penelitian ini tidak

berbeda antara subyek sehat dan pasien AD dan sebanding dengan tingkat diperoleh

dari dalam studies.47 lain, 48 Kesimpulannya, air feses pasien lebih genotoksik

dibandingkan dengan subyek sehat yang menunjukkan risiko yang lebih tinggi

kemungkinan untuk kanker usus besar pada pasien AD. Kombinasi probiotik yang

mengandung L. paracasei LPC-37, L. acidophilus 74-2, dan B. lactis DGCC 420

mampu secara signifikan mengurangi potensi genotoksik air feses pada pasien AD

dan dengan demikian, dapat berkontribusi pada lingkungan yang kurang

karsinogenik. Namun, feses terdeteksi C. perfringens klaster IeII tampaknya tidak

bertanggung jawab atas aktivitas genotoksik berkurang.

Mikrobiota Fekal

Documents

Transcript of Mikrobiota Fekal