Sex-speciffic effect of ACE I/D and AGT-MT235T on pulse pressure :

The HyperGEN Study

Bukti menunjukkan bahwa tekanan nadi tinggi (PP) dapat menyebabkan peningkatan risiko morbiditas dan mortalitas pada kardiovaskular . Bukti lain menunjukkan PP terkait erat dengan sifat jenis kelamin, dan faktor genetik tersebut memberikan gambaran PP yang beragan pada tiap individu. Tujuan dari proyek ini adalah untuk menilai interaksi genotip terhadap jenis kelamin pada PP dalam sampel sebagian besar keturunan Afrika Amerika dan warga kulit Putih yang memiliki hipertensi dengan menggunakan gen yang terlibat dalam sistem renin angiotensinaldosteron.

Subyek penelitian adalah peserta dalam studi Hyper-GEN, termasuk laki-laki (43%) dan perempuan (57%) dengan usia lebih dari 55 tahun (usia rata-rata = 65). Gen polimorfisme yang digunakan adalah ACE I/D (1.789 subyek genotipe) dan AGT-M235T (1.800 subyek genotipe). Kami menggunakan metode regresi linier untuk menilai interaksi genotipeterkait jenis kelamin. Untuk ACE, interaksi genotip terhadap jenis kelamin pada tekanan nadi tinggi (P = 0,04): Pada perempuan dengan genotip D/D diprediksi memiliki tekanan lebih tinggi sekitar 2mmhg, tetapi lebih rendah sekitar 1,2 mmhg pada pria jika dibandingkan dengan partisipan yang memiliki alel “I”. Interaksi yang sama juga ditemukan untuk tekanan darah sistolik. Interaksi genotip ini lebih jelas di antara partisipan pengguna obat antihipertensi (P = 0,05), tetapi tidak terlalu kentara pada partisipan yang tidak dalam masa pengobatan(P = 0,55). Dalam analisis kami tentang AGT, tidak ada bukti interaksi genotip terhadap jenis kelamin berpengaruh terhadap PP, SBP, DBP.

Pendahuluan

Ada bukti bahwa tekanan nadi tinggi, yang menunjukkan peningkatan kekakuan arteri besar, dapat menyebabkan suatu peningkatan risiko morbiditas dan mortalitas pada kardiovaskular (Casiglia et al, 2002;. Chae et al 1999;. Glynn et al 2000.; Mitchell et al. 1997). Tekanan nadi, didefinisikan sebagai perbedaan antara tekanan darah sistolik arteri (SBP) dan tekanan darah diastolik (DBP), ditentukan oleh factor jantung dan factor pembuluh darah. Ada kecenderungan untuk SBP meningkat terus selama proses penuaan sementara DBP cenderung naik hanya sampai sekitar usia 50, kemudian menurun seiring berjalan waktu(Franklin et al. 1997).

Menariknya, tekanan nadi dipengaruhi oleh jenis kelamin, sampai usia pertengahan 50 tahun wanita memiliki rata-rata tekanan yang lebih rendah, tetapi setelah itu seiring proses penuaan tekanan rata-rata terus meningkat melebihi tekanan rata-rata pria (Franklin et al. 1997). Tidak hanya tekanan nadi, kekakuan dari arteri juga dipengaruhi oleh jenis kelamin(Danchin et al 2004;. Darne et al 1989;. Mazza et al.2001)

Tekanan nadi merupakan suatu yang diwariskan secara genetic sehingga memberikan gambaran tekanan nadi yang bervariasi antara individu.Semakin bertambah usia, peran factor genetic semakin kentara terhadap tekanan nadi(Brandon dkk. 2003). Telah dilakukan studi untuk menentukan gen-gen yang mempengaruhi tekanan nadi(Atwood et al, 2001;. Bielinski et al.2005; Camp et al. 2003; Mourad et al. 2002). Namun, dasar-dasar genetik dari sifat tekanan darah telah terbukti sulit untuk diungkapkan.

Penelitian sebelumnya pada tekanan nadi menunjukkan bahwa: (1) tekanan nadi merupakan prediktor penting dari penyakit kardiovaskular dan kematian, (2) gen tampaknya mempengaruhi tekanan nadi, dan (3) jenis kelamin dapat memberikan efek modifikasi dalam hubungan antara tekanan nadi dan penyakit kardiovaskular dan mortalitas. Penelitian ini mencoba untuk mengintegrasikan konsep-konsep apakah renin-angiotensin-aldosteron system (RAAS) calon geno-tipe, yang telah terbukti mempengaruhi tekanan darah. (Castellano et al 2003; Jeunemaitre et al 1992;. Lim et al.2002; Siani et al. 2004; Tiago et al. 2003), terkait dengan tekanan nadi apabila dihubungkan dengan jenis kelamin, yaitu, adakah interaksi antara gen dan gender yang dapat mempengaruh tekanan nadi?

Gen-gen kandidat diantaranya adalah angiotensin enzim I-converting (ACE) Insertion /Deletion (I / D) polimorfisme pada kromosom 17 dan AGT-M235T angiotensinogen (AGT) polimorfisme pada kromosom 1. ACE D/D genotip telah dikaitkan dengan peningkatan risiko tekanan darah tinggi dan infark miokard dalam beberapa penelitian-penelitian, meskipun hubungan ini tidak selalu terlihat (Cam-bien et al 1992;. Pereira et al 2003;. Samani et al 1996.;Uemura et al. 2000). Demikian pula, T / T genotipe pada lokus AGT-M235T telah ditunjukkan dalam penelitian sebelumnya memiliki pengaruh dalam peningkatan risiko hipertensi dan DBP yang lebih tinggi, tapi sekali lagi asosiasi tidak konsisten di semua populasi (Cai et al. 2004; Fornage et al. 1995, Niu et al. 1999; Pereira dkk.2003; Say et al. 2005).

Adanya interaksi gen terhadap jenis kelamin telah diperiksa untuk sejumlah ciri-ciri yang berbeda, termasuk tekanan darah pada hewan dan manusia (Atwood et al 2006;. Utara et al. 2003; O'Donnell et al. 1998). Penelitian sebelumnya dari ACEI / D dan polimorfisme AGT-M235T secara khusus telah mengungkapkan beberapa bukti interaksi gen yang terkait jenis kelamin. Misalnya, dalam beberapa penelitian diungkapkan ACE D/D genotip dikaitkan dengan peningkatan risiko hipertensi, hipertrofi jantung, infark miokard dan peningkatan DBP dikalangan pria, tapi tidak pada wanita (O'Donnell et al 1998.;Orlowska-Baranowska et al. 2004; Petrovic et al. 2004). Demikian pula, T / T AGT-M235T genotipe telah terbukti memiliki hubungan dengan peningkatan risiko hipertensi dan peningkatan SBP di kalangan wanita, tapi tidak pada pria (Sethi et al.2001).

Metode

Populasi

Subyek penelitian adalah peserta hypertension genetic epidemiology network (HyperGEN), yang merupakan salah satu dari empat jaringan dari program NHLBI Family blood pressure program (FBPP) . Tujuan dari HyperGEN adalah untuk mengidentifikasi dan mengelompokkan gen-gen yang terlibat dalam pengembangan hipertensi (Williams et al. 2000). Kriteria perekrutan untuk Hyper-GEN diperlukan bahwa setidaknya dua orang yang bersaudara kandung yang didiagnosa dengan hipertensi sebelum usia 60 tahun, dengan hipertensi yang didefinisikan sebagai SBP sama dengan atau lebih besar dari 140 mmHg dan / atau DBP sama atau lebih besar dari 90 mmHg yang diukur pada dua kunjungan yang terpisah, atau sedang dalam pengobatan hipertensi. Selain merekrut partisipan yang bersaudara dari program NHLBI, hyperGEN juga merekrut partisipan di luar populasi sumber seperti dari Salt Lake City, UT, Birmingham, AL, Forsyth County, NC; Framingham, MA, dan Minneapolis, MN.

Subyek penelitian ini terdiri dari pria dan wanita (43% dan 57% masing-masing) di atas usia 55 tahun dengan data fenotipik dan genotipik. Kami membatasi analisis kami kepada mereka di atas usia 55 karena ini adalah usia di mana populasi dengan DBP mengalami perubahan dalam lintasan dari peningkatan ke menurun, dan tekanan nadi pada wanita lebih rendah daripada pria pada usia muda dan lebih tinggi pada pria ketika usia tua (Franklin et al. 1997). Untuk ACE polimorfisme, 1.789 individu memiliki genotip dan fenotip data. Partisipan dengan AGT genotip dan fenotip data ada 1.800 partisipan. Dari para peserta yang ada dalam analisis ini, 65,8% diantaranya merupakan dua orang saudara kandung anggota NHLBI dengan hipertensi, 26,7% penderita hipertensi yang diambil secara acak, 6,8% merupakan orang tua dari penderita hipertensi dan 0,6% merupakan partisipan yang memiliki riwayat keturunan hipertensi. Pada penderita hipertensi anggota NHLBI, 93% menjalani pengobatan hipertensi sedangkan pada partisipan yang daimbil secara acak hanya 42% yang menjalani pengobatan hipertensi.

Phenotyping

Untuk memastikan pengukuran yang berimbang diantara 5 pusat dari jaringan HyperGEN, semua tekanan darah diukur dengan menggunakan perangkat Dinamap (model 1846 SX/P, Critikon, Tampa, FL). Pusat Koordinasi HyperGEN menerapkan kontrol kualitas dengan langkah langkah seperti pemantauan untuk pencegahan pengukuran yang berulang, diferensiasi tiap sumber populasi (Williams et al. 2000). Pengukuran tekanan darah dilakukan dalam posisi duduk. Pengukuran dilakukan sebanyak tiga kali dan pengukuran kedua diambil sebagai nilai rata-rata pengukuran. Tekanan nadi dihitung dengan cara mengurangi nilai SBP terhadap DBP (SBP-DBP). Tinggi diukur pada peserta tanpa menggunakan sepatu, tumit dirapatkan dan berdiri

secara vertical terhadap pengukur. Berat diukur dengan menggunakan timbangan dan tanpa sepatu. Umur, jenis kelamin, etnis dan penggunaan obat yang dilaporkan sendiri oleh peserta

Genotyping

Ekstraksi DNA dan metode pemurnian menggunakan metode presipitasi garam untuk menghilangkan protein dengan menggunakan Puregene reagen (Gentra System, Inc, Minneapolis, MN) ditambahkan dengan natrium dodekilsulfat. Sekitar 300µg DNA diperoleh dari masing-masing peserta, yang disimpan sebagai stok larutan sebanyak 20 µg/ml dalam 1,0 mM EDTA 10 mM Tris, pH 7,3. Jenis buffer dan konsentrasi yang dikehendaki oleh fasilitas penulisan genotip dibuat dari pengenceran ini.

Penulisan genotip ACE I/D polimorfisme merupakan suatu modifikasi dari prosedur yang dijelaskan oleh Kim et al. (2001). Prosedur ini dimodifikasi dengan menggantikan 0,11 µg /µl BSA untuk 8-metoksipsoralen dengan siklus berikut ini: 95 ° C selama 7 menit, 12 siklus 95 ° C selama 1 menit, 63 ° C selama 1 menit, 72 ° C selama 1,5 menit, diikuti oleh 30 siklus dari 95 ° C selama 45 s, 65 ° C selama 45 s, 72 ° C selama 45 s, dan Ekstensi terakhir pada 72 ° C selama 5 menit. AGT-M235T polimorfisme, yang mengarah ke substitusi dari metionin (M) atau treonin (T) pada kodon 235, dianalisis dengan polymerase chain reaction standar (PCR) dan varian M235T diukur dengan spektrofotometri.

Analisa Statistik

STATA versi 9.2 digunakan untuk semua analisis (Stata Korporation, College Station, Texas). Kami menggunakan metode regresi linear untuk menilai interaksi genotipe berdasarkan jenis kelamin, menggambarkan tekanan nadi sebagai variabel dependen, dan kandidat genotipe, jenis kelamin, dan (genotipe × jenis kelamin) produk sebagai variabel independen, disesuaikan untuk usia, berat badan, tinggi, etnis (Afrika Amerika atau Putih), dan apakah peserta mengambil terapi antihipertensi (Y / N). Karena penelitian HyperGEN termasuk di dalamnya anggota keluarga, kami menggunakan model campuran ("XTMIXED" di STATA) untuk memperhitungkan korelasi tekanan nadi yang mungkin terjadi dalam keluarga. Kami menggunakan nomor identifikasi keluarga sebagai "Kelompok" variabel.

Kami memasukkan genotipe tambahan sebagai kategoris variabel dalam tiga tingkat (misalnya dengan ACE I/D polimorfisme: D/D, I/D dan I/I), dan juga gabungan beberpa kelompok genotip. Tidak ada asumsi linearitas untuk efek utama atau efek dari interaksi genotipe ketika dimodelkan dalam tiga kategori-uji signifikansi Interaksi adalah 2 ° uji kebebasan untuk tiga genotip analisis kategori, dan 1 ° uji kebebasan untuk dua analisis kategori genotipe.

Untuk menghitung jenis kelamin dan spesifik genoti yang telah disusun, setelah perintah estimasi ("XTMIXED" dalam kasus ini),Perintah "ADJUST" pada STATA menyediakan prediksi

xbeta yang disesuaikan (rerata variabel dependen dalam linear regresi) untuk model. Kami memperkirakan rata-rata untuk setiap tingkat jenis kelamin dan genotype dengan menggunakan pernyataan "BY ()". Penyesuaian variable spesifik (misalnya, usia, berat badan, tinggi badan, etnis, penggunaan obat anti-hipertensi) diatur sesuai dengan perkiraan rata-rata.

Hasil

Frekuensi dari genotipe etnis-specifik untuk masing-masing kandidat gen ditunjukkan dalam Table1. Genotipe yang diamati tidak berbeda dari yang diharapkan untuk Keseimbangan Hardy-Weinberg untuk ACEor AGTgenotip bila dihitung secara specific etnis. Table2 menyajikan ringkasan statistik untuk karakteristik peserta, distratifikasi berdasarkan gen dan jenis kelamin.

ACE I/D

Kami menggolongkan genotipe sebagai kategoris variabel dengan tiga tingkat: D/D, I/D dan I/I. Ada pendapat yang mengatakan bahwa dengan D/D wanita memiliki tekanan nadi lebih tinggi daripada perempuan dengan genotip I/I atau I/D, sedangkan genotip D/D pada laki-laki memiliki tekanan nadi lebih rendah dibandingkan dengan I/I atau I/D (P = 0,12). Terdapat sedikit perbedaan antara grup I/I dan I/ D setelah disesuaikan untuk usia, tinggi badan, berat badan, etnis dan penggunaan obat hipertensi. Oleh karena itu, kami mengeluarkan kelompok I/I dan I/D. Ketika ACE polymorphism itu dimodelkan dalam dua kategori, terdapat interaksi genotip terhadap jenis kelamin yang lebih signifikan pada tekanan nadi (P = 0,04). Wanita dengan D/D genotipe memiliki tekanan nadi rata-rata lbih tinggi 2,2 mmhg daripada dengan alel I . Namun, bagi pria terjadi sebaliknya. Pria dengan genotip D/D memiliki tekanan nadi rata-rata 1.2mmhg lebih rendah dibandingkan laki-laki dengan alel I (Gambar 1).

Untuk menilai apakah interaksi ini adalah unik untuk pulsa tekanan, terpisah dari pengukuran SBP dan DBP yang merupakan referensi tekanan nadi berasal, kami mengulangi analisis dua kali menggunakan SBP dan DBP sebagai variabel terikat dengan strategi penyesuaian yang sama. Interaksi genotip terhadap jenis kelamin pada SBP adalah serupa dengan yang ditemukan untuk tekanan nadi: Wanita dengan D/D genotipe memiliki tekanan nadi rata-rata lbih tinggi 2,0 mmhg daripada dengan alel I, Pria dengan genotip D/D memiliki tekanan nadi rata-rata 2,1 mmhg lebih rendah dibandingkan laki-laki dengan alel I (p = 0,07, Gbr.2). Tidak ada interaksi yang signifikan untuk DBP: pria dan wanita yang membawa alel I memiliki rata-rata DBP sedikit lebih tinggi (0,8 dan 0,2 mmHg, masing-masing) dibandingkan dengan D/D genotipe (P = 0,60).

Sehubungan dengan populasi penelitian kami termasuk Afrika Amerika (n = 614) dan putih (n = 1.175), kami menguji apakah interaksi ini juga berlaku untuk partisipan yang berbeda etnis. Berdasarkan penggolongan etnis, interaksi terkait jenis kelamin juga konsisten dalam dua kelompok: Wanita dengan D/D genotipe memiliki tekanan nadi rata-rata lebih tinggi, sedangkan pria dengan D/D genotipe memiliki tekanan nadi rata-rata lenih rendah bila dibandingkan dengan mereka yang memiliki alel I (P = 0,22 untuk Afrika Amerika, P = 0,09 untuk kulit putih).

Sementara itu, bila disesuaikan untuk penggunaan obat antihipertensi dalam model multivariat, kami juga menilai apakah interaksinya konsisten di antara partisipan yang sedang dalam pengobatan hipertensi (n = 1.294) dan mereka yang tidak memakai obat antihipertensi (n = 495). Analisis stratifikasi mengungkapkan bahwa ada bukti interaksi ACE genotip terhadap jenis kelamin terjadi di antara mereka yang menjalani pengobatan (P = 0,05) (Gbr.3), tapi tidak pada kelompok tanpa pengobatan (P = 0,55). Tampaknya SBP sebagian besar berkontribusi terhadap interaksi tekanan nadi di antara mereka yang mengambil obat antihipertensi: ketika kita mengevaluasi pengukuruan SBP secara terpisah di antara partisipan yang dalam pengobatan hipertensi dan yang tidak dalam pengobatan hipertensi, kalangan partisipn pria dengan genotip D/D memiliki rata-rata SBP yang lebih rendah (129,6 mmHg vs 132,8 mmHg, masing-masing) dibandingkan dengan partisipan pria alel I, sementara wanita dengan D/D genotipe memiliki rata-rata SBP lebih tinggi dibandingkan wanita dengan alel I (131,5 mmHg vs 129,8 mmHg,

masing-masing) (P = 0,06, Gbr.3). Pada kelompok yang tidak dalam pengobatan hipertensi tidak terlihat interaksi yang sama yang berpengaruh SBP (P = 0.70). Untuk DBP, baik kelompo dalam pengobatan atau tidak dalam pengobatan menunjukkan interaksi ACE genotype terhadap jenis kelamin (P = 0,38 dan P = 0,73, masing-masing).

AGT M235T

AGT variant tidak menunjukkan bukti interaksi genotipe terkait jenis kelamin pada tekanan nadi dalam analisis kami. Untuk tambahan model interaksi, pria memiliki tekanan nadi rata-rata 58,6, 58,4 dan 58,1 mmHg untuk genotip T/T, M/T dan M/M. Pada wanita, tekanan nadi rata-rata adalah 62,2, 61,2 dan 62,6 mmHg masing-masing untuk genotip. P value untuk tes interaksi adalah 0,70. Kami juga melihat SBP dan DBP sebagai variabel dependen, dan sekali lagi tidak ada bukti dari interaksi genotipe terkait jenis kelamin (P = 0,53 untuk SBP, P = 0,41 untuk DBP). Karena frekuensi alel antara Afrika Peserta Amerika dan Putih yang berbeda pada lokus AGT-M235T (lihat Table1), kami melakukan analisis spesifik terhadap etnis untuk kandidat genotipe juga. Tidak ada bukti interaksi dari genotipe terhadap jenis kelamin baik pad tekanan nadi, SBP atau DBP pada keturunan Afrika Amerika atau kulit putih.

Diskusi

Dalam analisis kami tentang polimorfisme AGT-M235T, tidak ada bukti interaksi genotip terhadap jenis kelamin yang terdeteksi mempengaruhi tekanan nadi, SBP, DBP. Namun, untuk kandidat ACE I/D polimorfisme terdeteksi ada interaksi pada tekanan nadi yang konsisten di seluruh etnis, Pada perempuan dengan genotip D/D diprediksi memiliki tekanan lebih tinggi sekitar 2mmhg, tetapi lebih rendah sekitar 1,2 mmhg pada pria, dibandingkan dengan I/D atau I/I genotipe (P = 0,04). Kami mengamati interaksi yang sama dalam pengukuran SBP. Meskipun, tekanan nadi dianggap penanda kekakuan arteri, dan dapat memberikan informasi tentang risiko penyakit kardiovascular ,dalam penelitian ini interaksi ditangkap oleh ukuran SBP saja, dan tampaknya tidak menjadi fungsi dari interaksi dinamis antara SBP dan DBP. Sejauh pengetahuan kami belum ada penelitian yang dipublikasikan menunjukkan interaksi gen terhadap jenis kelamin terhadap tekanan nadi baik untuk AGT-M235T atau ACE I/D polimorfisme.

Analisis stratifikasi menunjukkan Interaksi yang jelas di antara mereka yang sedang dalam pengobatan hipertensi(P = 0,05), tetapi tidak di antara mereka yang tidak dalam pengobatan (P = 0,55). Apa yang tampaknya mendorong interaksi antara peserta yang dalam masa pengobatan adalah bahwa pria dengan genotip D/D memiliki secara substansial memiliki SBP yang lebih rendah dibandingkan pria dengan alel I (129,6 mmHg vs 132,8 mmHg), sedangkan wanita dengan genotip D/D memiliki SBP rata-rata lebih tinggi daripada wanita dengan alel I (131,5 mmHg vs 129,8 mmHg). Ada kemungkinan bahwa SBP pada pria dengan D/D Genotipe

lebih responsif terhadap obat penurun tekanan darah daripada pria dengan genotip I/I atau I/D, sementara sebaliknya terjadi pada perempuan. Ini adalah temuan yang menarik sekaligus menguatkan sebuah laporan oleh Schwartz et al. (2002) yang menemukan suatu statistik yang signifikan terhadap efek dari ACE ID polimorfisme pada tekanan darah sebagai respon terhadap thiazide diuretik terkait dengan jenis kelamin: wanita dengan D/D genotipe mengalami respon terendah dalam penurunan tekanan darah untuk SBP dan DBP terhadap pengobatan yang dijalani (hidroklorotiazid, 25 mg per hari) bila dibandingkan dengan wanita bergenotip I/I atau I/D, sementara di kalangan pria, genotip D/D genotipe menghasilkan respon terbesar.

Ada kemungkinan bahwa hormon seks bekerja untuk mengubah aktivitas dari sistem renin-angiotensin, yang dapat menjelaskan kemungkinan interaksi gen seks pada sifat tekanan darah. Dalam ulasan artikel, Sandberg dan Ji (2003) menyimpulkan bahwa sementara ada banyak bukti bahwa steroid seks bertindak untuk mengubah aktivitas sistem renin-angiotensin,tetapi banyak yang masih belum diketahui tentang mekanisme molekuler dari estrogen dan androgen dalam pengaruhna terhadap sisem tersbut.

Hasil ini harus ditafsirkan dengan hati-hati untuk beberapa alasan: Dengan ukuran sampel yang terbatas, kekuatan untuk mendeteksi antar-tindakan juga terbatas. Mayoritas peserta direkrut dari sibships hipertensi, dan aplikabilitas untuk populasi normotensi tidak pasti. Perhatian lainnya adalah efek penggunaan obat anti-hipertensi pada pengukuran tekanan darah, yang mungkin telah menyebabkan distorsi dari fenotip tekanan nadi yang "benar", mengaburkan perbedaan yang sebenarnya antar satu individu. Data mengenai efek dari pengobatan antihipertensi pada tekanan nadi masih menjadi perdebatan. Sementara kebanyakan studi menunjukkan penurunan tekanan nadi dengan penggunaan antihipertensi, hal ini tidak selalu berlaku untuk semua usia kelompok, untuk semua obat-obatan, atau untuk semua kelompok etnis (Cushman et al, 2001;. Safar et al, 2000.) Untuk alasan ini, model obat yang disesuaikan merupakan dikotomis variabel. Sebagai konsern terhadap efek dari obat antihipertensi pada tekanan nadi, kami juga melaporkan hasil berdasarkan stratifikasi penggunaan obat antihipertensi. Di antara para peserta dalam penelitian ini, secara keseluruhan 73% diantaranya mengambil setidaknya satu obat antihipertensi. Kita juga harus mencatat bahwa gen ACE dan AGT terdiri dari 26 dan 5 ekson masing-masing, dan karena itu polimorfisme digunakan di sini hanya mewakili sejumlah kecil dari variasi yang ada dalam gen kandidat. Akhirnya, kami menyadari penyelidikan ini harus sesuatu yang alami, kami melakukan uji statistik ganda dan tidak menyesuaikan nilai P kami untuk beberapa pengujian. Oleh karena itu, kita tidak bisa mengesampingkan kemungkinan dari temuan positif palsu dari interaksi genotip terhadap jenis kelamin pada tekanan nadi. Karena kami melakukan total 21 statistik tes, jika seseorang lebih suka untuk menjadi konservatif, koreksi Bonferroni untuk beberapa pengujian akan menghasilkan ambang batas untuk signifikansi P = 0,002 (0.05/21). Meskipun penelitin ini memiliki keterbatasan, temuan interaksi gen terhadap jenis kelamin setidaknya telah

memberikan pengethuan kepada kita tentang dasar genetik yang berpengaruh terhadap penyakit yang komplek seperti kekakuan arteri. Di masa depan, upaya untuk memperhitungkan interaksi gen terhadap jenis kelamin, dan lebih luas lagi gen terkait lingkungan dan interaksi gen terhadap gen harus didorong. Ini akan membimbing kita untuk mengetahui lebih baik lagi dari model penyakit etiologi.