42

BAB IPENDAHULUAN

1.1. Latar BelakangHidup sehat merupakan hal penting yang memungkinkan seseorang dapat melakukan aktifitas secara efektif. Oleh karena itu perlu usaha-usaha untuk mencapai hidup sehat tersebut baik dari segi pelaksanaan dan pemeliharaan kesehatan, karena mencegah penyakit lebih baik dari pada mengobatinya (Wikipedia, 2009).Definisi sehat menurut WHO adalah suatu kondisi yang terbebas dari segala jenis penyakit, baik fisik, mental dan sosial. Timbulnya suatu penyakit disebabkan oleh beberapa faktor diantaranya asupan makanan, infeksi dan keturunan. Sehingga kesehatan merupakan harta yang sangat berharga dalam hidup ini. Untuk itu, pengawasan kesehatan secara rutin berguna untuk mendeteksi penyakit secara dini (WHO, 2005).Laboratorium klinik merupakan laboratorium yang dapat digunakan dalam mendiagnosis atau peramalan suatu penyakit. Laboratorium klinik terbaik adalah apabila tes tersebut akurat (tepat), persis (teliti), dan dapat membedakan orang normal dari abnormal (Kosasih, 2008).

1 Darah merupakan bagian penting dari tubuh kita. Darah termasuk cairan ekstraseluler, yang terletak di dalam saluran-saluran tersendiri yaitu pembuluh-pembuluh darah. Darah lebih berat dibandingkan air dan lebih kental. Cairan ini memiliki rasa dan bau yang khas, serta pH 7,4. Warna darah bervariasi dari merah terang sampai merah tua kebiruan, bergantung pada kadar oksigen yang dibawa sel darah merah (Wikipedia, 2009).Pemeriksaan darah di laboratorium pada umumnya melewati tiga tahap yaitu tahap pra analitik, analitik dan pasca analitik. Tahap pra analitik meliputi persiapan pasien, pengambilan, penampungan, penyimpanan, dan pengiriman. Hasil pemeriksaan laboratorium pada darah khususnya hematologi banyak diminta para dokter untuk membantu menegakkan diagnosis, menunjang diagnosis, membuat diagnosis banding, memantau perjalanan penyakit, menilai beratnya penyakit dan menentukan prognosis. Pemeriksaan hematologi meliputi parameter kadar hemoglobin, hitung leukosit, eritrosit, trombosit, hematokrit, laju endap darah (LED), apusan darah dan masih banyak lainnya (Wirawan, 1996).Pemeriksaan darah lengkap mampu mendeteksi berbagai macam gangguan yang bermanifestasi di dalam darah, oleh karena itu pemeriksaan ini biasanya menjadi rangkaian pemeriksaan awal saat pasien berobat di rumah sakit. Selain sebagai pemeriksaan awal, hitung darah lengkap juga kerap dilakukan pada pemeriksaan rutin atau medical check-up. Banyak gangguan yang dapat dideteksi melalui cek darah lengkap, diantaranya adalah pemeriksaan apusan darah (Wirawan, 1996).Apus darah adalah suatu sarana yang digunakan untuk menilai berbagai unsur sel darah tepi, seperti eritrosit, leukosit, dan trombosit. Selain itu dapat pula di gunakan untuk mengidentifikasi adanya parasit seperti malaria, mikrofilaria, dan terutama pada penyakit anemia. Sediaan apus darah yang dibuat dan dipulas dengan baik merupakan syarat mutlak untuk mendapatkan hasil pemeriksaan yang baik. Bahan pemeriksaan yang baik adalah darah segar yang berasal dari vena atau kapiler dengan EDTA sebagai antikoagulan. Sediaan yang disimpan tanpa difiksasi terlebih dulu tidak dapat dipulas sebaik sediaan segar. Kebanyakan cara memulas sediaan darah menggunakan prinsip Romanowski, seperti Wright, Giemsa (Yazhid, 2013).Namun Pengambilan sampel darah saat ini dilakukan oleh perawat, karena banyaknya pasien terkadang membuat penundaan pengiriman sampel lebih dari 2 jam ke laboratorium begitupun juga penggunaan antikoagulan seperti EDTA sebagai zat yang mencegah terjadinya penggumpalan darah yang tidak sesuai dengan standarisasinya. Hal ini dapat menyebabkan terjadinya kerusakan sel darah terutama pada pemeriksaan apusan darah yang memiliki batas waktu penyimpanan sampel didalam lemari es dengan suhu 4 0C selama 2 jam. Karena jika lebih dari batasan waktu eritrosit dapat mengkerut dan trombosit dapat mengalami disintegrasi. Setiap 1 mg EDTA menghindarkan membekunya 1 ml darah (Gandasoebrata, 2007).Berdasarkan latar belakang diatas, penulis melakukan penelitian tentang Analisis Pengaruh Kosentrasi EDTA Sebagai Antikoagulan Dan Waktu Penyimpanan Sampel Terhadap Bentuk Eritrosit Pada Apusan Darah.1.2. Rumusan MasalahBerdasarkan latar belakang diatas rumusan masalah penelitian ini adalah apakah ada pengaruh kosentrasi EDTA sebagai antikoagulan dan waktu penyimpanan sampel terhadap bentuk eritrosit pada apusan darah?

1.3. Tujuan PenelitianTujuan dari penelitian ini adalah untuk mengetahui ada tidaknya pengaruh kosentrasi EDTA sebagai antikoagulan dan waktu penyimpanan sampel terhadap bentuk eritrosit pada apusan darah.1.4. Manfaat PenelitianBeberapa manfaat yang biasa diambil dari penelitian ini adalah :1. Dapat mengetahui ada atau tidaknya pengaruh kosentrasi EDTA sebagai antikoagulan dan waktu penyimpanan sampel terhadap bentuk eritrosit pada apusan darah.2. Dapat meningkatkan pengetahuan di bidang laboratorium, terutama dalam pemeriksaan apusan darah dan pengaruh kosentrasi EDTA sebagai antikoagulan dan waktu penyimpanan sampel terhadap bentuk eritrosit pada apusan darah.3. Memberikan pengetahuan tambahan bagi peneliti selanjutnya mengenai teknik pemeriksaan apusan darah yang baik dan benar.1.5. Hipotesis PenelitianTerdapat pengaruh kosentrasi EDTA sebagai antikoagulan dan waktu penyimpanan sampel terhadap bentuk eritrosit pada apusan darah.

BAB IITINJAUAN PUSTAKA2.1. DarahDarah adalah jaringan cair yang terdiri atas dua bagian yaitu plasma darah dan sel darah. Sel darah terdiri dari tiga jenis yaitu eritrosit, leukosit dan trombosit. Volume darah secara keseluruhan adalah satu per dua belas berat badan atau kira-kira lima liter. Sekitar 55% adalah plasma darah, sedang 45% sisanya terdiri dari sel darah (Wikipedia, 2009).Fungsi utama darah dalam sirkulasi adalah sebagai media transportasi, pengaturan suhu, pemeliharaan keseimbangan cairan, serta keseimbangan basa eritrosit selama hidupnya tetap berada dalam tubuh. Sel darah merah mampu mengangkut secara efektif tanpa meninggalkan fungsinya di dalam jaringan, sedang keberadaannya dalam darah, hanya melintas saja. Darah berwarna merah, antara merah terang apabila kaya oksigen sampai merah tua apabila kekurangan oksigen. Warna merah pada darah disebabkan oleh hemoglobin, protein pernapasan (respiratory protein) yang mengandung besi dalam bentuk heme, yang merupakan tempat terikatnya molekul-molekul oksigen (Wikipedia, 2009).

5Manusia memiliki sistem peredaran darah tertutup yang berarti darah mengalir dalam pembuluh darah dan disirkulasikan oleh jantung. Darah dipompa oleh jantung menuju paru-paru untuk melepaskan sisa metabolisme berupa karbondioksida dan menyerap oksigen melalui pembuluh arteri pulmonalis, lalu dibawa kembali ke jantung melalui vena pulmonalis. Setelah itu darah di kirimkan ke seluruh tubuh oleh saluran pembuluh darah aorta.Darah mengedarkan oksigen ke seluruh tubuh melalui saluran halus darah yang disebut pembuluh kapiler. Darah kemudian kembali ke jantung melalui pembuluh darah vena cava superior dan vena cava inferior. Darah juga mengangkut bahan bahan sisa metabolisme, obat-obatan dan bahan kimia asing ke hati untuk diuraikan dan selanjutnya ke ginjal untuk dibuang sebagai air seni (Wikipedia, 2009).Pada darah manusia umumnya unsur-unsur pembentuknya yaitu sel-sel darah, platelet, dan plasma. Sel darah terdiri dari eritrosit dan leukosit, platelet yang merupakan trombosit atau keping darah, sedangkan plasma darah pada dasarnya adalah larutan air yang mengandung air (90%), zat terlarut (10%) yang terdiri dari : protein plasma (albumin, globulin, fibrinogen) 7%, senyawa organik (asam amino, glukosa, vitamin, lemak) 2.1%, garam organik (sodium, pottasium, calcium) 0.9%.Untuk dapat melihat perbedaan dari sel darah dengan plasma dapat dilakukan dengan cara sentrifugasi tabung hematokrit berisi darah yang telah diberi bahan anti pembekuan. Darah terdiri dari beberapa jenis korpuskula yang membentuk 45% bagian dari darah. Bagian 55% yang lain berupa cairan kekuningan yang membentuk medium cairan darah yang disebut plasma darah (Wikipedia, 2009).2.2. EritrositSel darah merah (eritrosit) merupakan cairan bikonkaf dengan diameter sekitar 7 mikron. Bikonkavitas memungkinkan gerakan oksigen masuk dan keluar sel secara cepat dengan jarak yang pendek antara membran dan inti sel. Warnanya kuning kemerah-merahan, karena didalamnya mengandung suatu zat yang disebut hemoglobin. Sel darah merah tidak memiliki inti sel, mitokondria dan ribosom, serta tidak dapat bergerak. Sel ini tidak dapat melakukan mitosis, fosforilisasi oksidatif sel, atau pembentukan protein (Wiwik dan Andi, 2008).Komponen eritrosit adalah membran sel, sistem enzim (enzim Glukose 6-Phosphatedehydrogenase) G6-PD dan hemoglobin. Adapun komponen hemoglobin adalah heme yang merupakan gabungan protoporfirin dengan besi dan globin merupakan bagian protein yang terdiri atas 2 rantai alfa dan 2 rantai beta. Terdapat sekitar 300 molekul hemoglobin dalam setiap sel darah merah. Hemoglobin berfungsi untuk mengikat oksigen, satu gram hemoglobin akan bergabung dengan 1,34 ml oksigen. Oksihemoglobin yang bekombinasi/berikatan dengan oksigen. Tugas akhir hemoglobin adalah menyerap karbondioksida dan ion hidrogen serta membawanya ke paru tempat zat-zat tersebut dilepaskan dari hemoglobin (Wiwik dan Andi, 2008).Komposisi molekuler eritrosit menunjukan bahwa lebih dari separuhnya terdiri dari air (60%) dan sisanya berbentuk substansi padat. Secara keseluruhan isi eritrosit merupakan substansi koloidal yang homogen, sehingga sel ini bersifat elastis dan lunak. Eritrosit mengandung protein yang sangat penting bagi fungsinya yaitu globin yang dikonjugasikan dengan pigmen heme membentuk hemoglobin untuk mengikat oksigen yang akan diedarkan keseluruh bagian tubuh. Seperti halnya sel-sel yang lain, eritrositpun dibatasi oleh membran plasma yang bersifat semipermeable dan berfungsi untuk mencegah agar koloid yang dikandungnya tetap didalam (Wikipedia, 2009).Dalam keadaan normal, eritropoesis pada orang dewasa terutama terjadi didalam sumsum tulang, di mana sistem eritrosit menepati 20%-30% bagian jaringan sumsum tulang yang aktif membentuk sel darah. Sel eritrosit berinti berasal dari sel induk multipotensial dalam sumsum tulang. Sel induk multipotensial ini mampu berdeferensiasi menjadi sel darah sistem eritrosit, mieloid, dan megakariosibila yang dirangsang oleh eritroprotein. Sel induk multipotensial akan berdeferensiasi menjadi sel induk unipotensial (Wiwik dan Andi, 2008).Sel induk unipotensial tidak mampu berdeferensiasi lebih lanjut, sehingga sel induk unipotensial seri eritrosit hanya akan berdeferensiasi menjadi sel pronormoblas. Sel pronormoblas akan membentuk DNA yang diperlukan untuk 3-4 kali fase mitosis. Melalui 4 kali mitosis dari setiap sel pronormoblas akan terbentuk 16 eritrosit. Eritrosit matang kemudian dilepaskan dalam sirkulasi. Pada produksi eritrosit normal sumsum tulang memerlukan besi, vitamin B12, asam folat, piridoksin (vitamin B6), kobal, asam amino, dan tembaga (Wiwik dan Andi, 2008).Secara garis besar dapat disimpulkan bahwa perubahan morfologi sel yang terjadi selama proses deferensiasi sel pronormoblas sampai eritrosit matang dapat dikelompokkan kedalam tiga kelopok yaitu sebagai berikut :1. Ukuran sel semakin kecil akibat mengecilnya inti sel.2. Inti sel menjadi makin padat dan akhirnya dikeluarkan pada tingkatan eritroblas asidosis.3. Dalam sitoplasma dibentuk hemoglobin yang diikuti dengan hilangnya RNA dari dalam sitoplasma sel.Eritrosit hidup selama 74-154 hari. Pada usia ini sistem enzim mereka gagal, membran sel berhenti berfungsi dengan adekuat, dan sel ini dihancurkan oleh sistem retikuloendotilial (Wiwik dan Andi, 2008).Eritrosit merupakan sel yang paling banyak di bandingkan dengan 2 sel lainnya, dalam keadaan normal mencapai hampir separuh dari volume darah. Sel darah merah mengandung hemoglobin, yang memungkinkan sel darah merah membawa oksigen dari paru-paru dan mengantarkannya ke seluruh jaringan tubuh. Oksigen dipakai untuk membentuk energi bagi sel-sel, dengan bahan limbah berupa karbondioksida, yang akan diangkut oleh sel darah merah dari jaringan dan kembali ke paru-paru (Wikipedia, 2009).Eritrosit tidak mempunyai nukleus sel ataupun organela, dan tidak dianggap sebagai sel dari segi biologi. Eritrosit mengandung hemoglobin dan mengedarkan oksigen. Sel darah merah juga berperan dalam penentuan golongan darah. Orang yang kekurangan eritrosit menderita penyakit anemia (Wikipedia, 2009).Dari pengamatan eritrosit banyak hal yang harus diperhatikan untuk mengungkapkan berbagai kondisi kesehatan tubuh. Misalnya tentang bentuk, ukuran, warna dan tingkat kedewasaan eritrosit dapat berbeda dari normal. Jika dalam sediaan apus darah terdapat berbagai bentuk yang abnormal dinamakan poikilosit, sedangkan sel-selnya cukup banyak maka keadaan tersebut dinamakan poikilositosis. Eritrosit yang berukuran kurang dari normalnya dinamakan mikrosit dan yang berukuran lebih dari normalnya dinamakan makrosit (Wikipedia, 2009).Warna eritrosit tidak merata seluruh bagian, melainkan bagian tengah yang lebih pucat, karena bagian tengah lebih tipis dari pada bagian pinggirnya. Pada keadaan normal bagian tengah tidak melebihi 1/3 dari diameternya sehingga selnya dinamakan eritrosit normokhromatik. Apabila bagian tengah yang pucat melebar disertai bagian pinggir yang kurang terwarna maka eritrosit tersebut dinamakan eritrosit hipokromatik. Sebaliknya apabila bagian tengah yang memucat menyempit selnya dimanakan eritrosit hiperkhromati.

Gambar 1 : Eritrosit NormalDikutip : http://drdjebrut.wordpress.com

2.3. Kelainan Morfologi EritrositEritrosit normal berukuran 6-8 m. Dalam sediaan apus, eritrosit normal berukuran sama dengan inti limposit kecil dengan area ditengah berwarna pucat. Kelainan morfologi eritrosit berupa kelainan ukuran (size), bentuk (shape), warna (staining characteristics) dan benda-benda inklusi.2.3.1. Kelainan Ukuran Eritrosit 1. MikrositSel ini dapat berasal dari fragmentasi eritrosit yang normal seperti pada anemia hemolitik, anemia megaloblastik dan dapat pula terjadi pada anemia defisiensi besi.2. MakrositMakrosit adalah eritrosit yang berukuran lebih dari 8 m. Sel ini didapatkan pada anemia megaloblastik.3. AnisositosisAnisositosis tidak menunjukkan suatu kelainan hematologik yang spesifik. Keadaan ini ditandai dengan adanya eritrosit dengan ukuran yang tidak sama besar dalam sediaan apus darah tepi. Anisositosis jelas terlihat pada anemia mikrositik yangada bersamaan dengan anemia makrositik seperti pada anemia gizi.2.3.2. Kelainan Bentuk Eritrosit 1. OvalositOvalosit adalah eritrosit yang berbentuk lonjong. Eritrosit memiliki sel dengan sumbu panjang kurang dari dua kali sumbu pendek. Evalosit ditemukan dengan kemungkinan bahwa pasien menderita kelainan yang diturunkan yang mempengaruhi sitoskelekton eritrosit misalnya ovalositosis heredeter.

Gambar 2 : Ovalosit (Eritrosit berbentuk oval)Dikutip : http://drdjebrut.wordpress.com

2. SperositSperosit adalah eritrosit yang berbentuk lebih bulat, lebih kecil dan lebih tebal dari eritrosit normal. Sperosit merupakan sel yang telah kehilangan sitosol yang setara. Karena kelainan dari sitoskeleton dan membrane eritrosit.

Gambar 3 : SperositDikutip : http://drdjebrut.wordpress.com

3. Schitosit atau fragmentositSel ini adalah pecahan eritrosit. merupakan fragmen eritrosit berukuran kecil dan bentuknya tak teratur, berwarna lebih tua. Terjadi pada enemia hemolitik karena combusco reaksi penolakan pada transplantasi ginjal.

Gambar 4 : SchitositDikutip : http://drdjebrut.wordpress.com

4. Sel target atau leptosit atau sel sasaranEritrosit yang mempunyai masa kemerahan di bagian tengahnya, disebut juga sebagai sel sasaran. Terjadi pada hemogfobinopati, anemia hemolitika dan penyakit hati.

Gambar 5 : Sel targetDikutip : http://drdjebrut.wordpress.com

5. Sel sabit atau sickle cellEritrosit yang berbentuk sabit terjadi pada reaksi tranfusi, sferositosis congenital, anemia sel sickle dan anemia hemolitik. Sel seperti ini didapatkan pada penyakit sel sabit yang homozigot. Untuk mendapatkan eritrosit yang berbentuk sabit, eritrosit diinkubasi terlebih dahulu dalam keadaan anoksia dengan menggunakan zat reduktor (Na2S2O5 atau Na2S2O3). Hal ini terutama dilakukan pada penyakit sel sabit heterozigot.

Gambar 6 : Sickle cellDikutip : http://drdjebrut.wordpress.com

6. KrenasiSel seperti ini merupakan artefak, dapat dijumpai dalam sediaan apus darah yang telah disimpan 1 malam pada suhu 20 0C atau eritrosit yang berasal dari washedpacked cell.

Gambar 7 : KrenasiDikutip : http://drdjebrut.wordpress.com

7. Sel BurrSel ini adalah eritrosit yang kecil atau fragmentosit yang mempunyai duri satu atau lebih pada permukaan eritrosit.

Gambar 8 : Sel BurrDikutip : http://drdjebrut.wordpress.com8. AkantositSel ini disebabkan oleh metabolisme fosfolipid dari membran eritrosit. Pada keadaan ini tepi eritrosit mempunyai tonjolan-tonjolan berupa duri.

Gambar 9 : AkantositDikutip : http://drdjebrut.wordpress.com

9. Teardrop cellsEritrosit yang mempunyai bentuk seperti tetesan air mata. Terjadi ketika ada fibrosis sumsum tulang diseritropoesis berat dan juga dibeberapa enemia hemolitik, anemia megaloblastik, thalasemia mayor, myelofibrosi idiopati karena metastatis karsinoma atau infiltrasi myelofibrosi sumsum tulang lainnya.

Gambar 10 : Teardrop cellsDikutip : http://drdjebrut.wordpress.com

10. PoiklositosisPoiklositosis adalah istilah yang menunjukkan bentuk eritrosit yang bermacam-macam dalam sediaan apus darah tepi. Gambar 11 : PoiklositosisDikutip : http://drdjebrut.wordpress.com

11. Rouleaux atau auto aglutinasiReuleaux tersusun dari 3-5 eritrosit yang membentuk barisan sedangkan autoaglutinasi adalah keadaan dimana eritrosit bergumpal.

Gambar 12 : RouleauxDikutip : http://drdjebrut.wordpress.com

2.3.3. Kelainan Warna Eritrosit1. HipokromEritrosit yang tampak pucat. Eritrosit hipokrom disebabkan kadar hemoglobin dalam eritrosit berkurang.2. PolikromEritrosit polikrom adalah eritrosit yang lebih besar dan lebih biru dari eritrosit normal. Polikromasi suatu keadaan yang ditandai dengan banyak eritrosit polikrom pada preparat sediaan apus darah tepi, keadaan ini berkaitan dengan retikulositosis. 2.4. Antikoagulan Untuk Pemeriksaan DarahAgar darah yang akan diperiksa jangan sampai membeku dapat dipakai bermacam-macam antikoagulan. Tidak semua macam antikoagulan dapat dipakai karena ada yang terlalu banyak berpengaruh terhadap bentuk eritrosit atau leukosit yang akan diperiksa morfologinya. Antikoagulan tersebut antara lain :1. EDTA ( Ethylene Diamine Tetra Acetate)Umumnya tersedia dalam bentuk garam sodium (natrium) atau potassium (kalium), mencegah koagulasi dengan cara mengikat atau mengkhelasi kalsium. EDTA memiliki keunggulan dibanding dengan antikoagulan yang lain, yaitu tidak mempengaruhi sel-sel darah, sehingga ideal untuk pengujian hematologi, seperti pemeriksaan hemoglobin, hematokrit, LED, hitung lekosit, hitung trombosit, retikulosit, apusan darah, dan sebagainya.EDTA bersifat sebagai pencekal kation bivalen (chelating agent). yang dipakai disini adalah garam natrium atau kaliumnya. Garam-garam ini mengubah ion kalsium dalamdarah menjadi bentuk bukan ion,dengan cara mengikat ion kalsium(Ca2+) sehinggaion kalsiumtidak lagi bermuatan(Ca).

Gambar 13 : Rumus Bangun EDTA Dikutip : id.wikipedia.org

EDTA (Ethylene Diamine Tetra Acetate), sebagai garam natrium atau kaliumnya. Garam-garam itu mengubah ion kalsium dari darah menjadi bentuk yang bukan ion. Dalam pemeriksaan hematologi selain pemeriksaan apusan darah, antikoagulan EDTA tidak berpengaruh terhadap besar dan bentuknya eritrosit dan tidak juga terhadap bentuk leukosit. Namun untuk pemeriksaan apusan darah, sampel darah EDTA memiliki batasan waktu penyimpanan maksimal selama 2 jam didalam lemari es dengan suhu 4 0C, karena jika lebih dari batasan waktu eritrosit dapat mengkerut dan trombosit dapat mengalami disintegrasi. Tiap 1 mg EDTA menghindarkan membekunya 1 ml darah. EDTA sering dipakai dalam bentuk larutan 10%. Kalau ingin menghindarkan terjadi pengenceran darah, zat kering pun boleh dipakai. Akan tetapi dalam hal terakhir ini perlu sekali menggoncangkan wadah berisi EDTA dan darah selama 1-2 menit (Gandasoebrata, 2007).Ada tiga macam EDTA, yaitu dinatrium EDTA (Na2EDTA), dipotassium EDTA (K2EDTA) dan tripotassium EDTA (K3EDTA). Na2EDTA dan K2EDTA biasanya digunakan dalam bentuk kering, sedangkan K3EDTA biasanya digunakan dalam bentuk cair. Dari ketiga jenis EDTA tersebut, K2EDTA adalah yang paling baik dan dianjurkan oleh ICSH (International Council for Standardization in Hematology) Walaupun demikian tetapi sampai saat ini Na2EDTA dalam bentuk serbuk masih banyak digunakan di berbagai laboratorium. Umumnya untuk memudahkan pengukuran maka dibuat menjadi larutan 10%.Penggunaannya harus tepat. Bila jumlah EDTA kurang, darah dapat mengalami koagulasi. Sebaliknya, bila EDTA berlebihan, eritrosit mengalami krenasi, trombosit membesar dan mengalami disintegrasi yaitu trombosit membengkak sehingga tampak adanya trombosit raksasa yang pada akhirnya mengalami fragmentasi membentuk fragmen-fragmen yang masih dalam rentang pengukuran trombosit oleh alat hitung sel otomatis sehingga dapat menyebabkan peningkatan palsu jumlah trombosit.

2. HeparinHeparin berdaya seperti antitrombin, tidak berpengaruh terhadap bentuk eritrosit dan leukosit. Dalam praktek sehari-hari heparin kurang banyak dipakai karena mahal harganya. Tiap 1 mg heparin mencegah membekunya 10 ml darah. Heparin boleh dipakai sebagai larutan atau dalam bentuk kering (Gandasoebrata, 2007).3. Natriumsitrat dalam larutan 3,8% Yaitu larutan yang isotonik dengan darah. Dapat dipakai untuk beberapa macam percobaan hemoragik dan untuk laju endap darah cara westegren (Gandasoebrata, 2007).4. Campuran amoniumoxalat dan kaliumoxalat Menurut Paul dan Heller yang juga dikenal sebagai campuran oxalat seimbang. Dipakai dalam keadaan kering agar tidak mengencerkan darah yang diperiksa (Gandasoebrata, 2007).2.5. Batas Waktu Pemeriksaan Darah EDTADarah EDTA dapat dipakai untuk beberapa macam pemeriksaan hematologi seperti, eritrosit, trombosit, retikulosit, hematokrit, penetapan laju endap darah menurut westegren dan wintrobe tetapi tidak dapat dipakai untuk percobaan hemoragik dan pemeriksaan faal trombosit (Gandasoebrata, 2007).Pemeriksaan dengan memakai darah EDTA sebaiknya dilakukan segera, hanya kalau boleh perlu disimpan dalam lemari es dengan suhu 4 0C. Darah EDTA yang disimpan pada 4 0C selama 24 jam memberikan nilai hematokrit yang yang lebih tinggi. Untuk membuat apusan darah tepi dapat dapat dipakai darah EDTA yang disimpan paling lama 2 jam. Pada umumnya darah EDTA yang disimpan 24 jam didalam lemari es tanpa mendatangkan penyimpanan yang bermakna, kecuali untuk jumlah trombosit dan nilai hematokrit (Gandasoebrata, 2007).2.6. Darah EDTA untuk Pemeriksaan DarahDarah EDTA dapat dipakai untuk beberapa macam pemeriksaan hematologi, seperti penetapan kadar hemoglobin, hitung jumlah eritrosit, leukosit, trombosit, retikulosit, hematokrit, penetapan laju endap darah menurut Westergren dan Wintrobe. Pemeriksaan dengan memakai darah EDTA sebaiknya dilakukan segera karena eritrosit dapat mengkerut dan trombosit dapat mengalami disintegrasi bila pemeriksaan terlalu lama ditunda. Kalau terpaksa ditunda boleh disimpan dalam lemaries (4 0C). Untuk membuat sediaan apus darah tepi dapat dipakai darah EDTA yang disimpan paling lama 2 jam (Gandasoebrata, 2007).2.7. Apusan DarahApus darah adalah suatu sarana yang digunakan untuk menilai berbagai unsur sel darah tepi, seperti eritrosit, leukosit, dan trombosit. Selain itu dapat pula digunakan untuk mengidentifikasi adanya parasit seperti malaria, mikrofilaria, dan lain-lain. Sediaan apus yang dibuat dan dipulas dengan baik merupakan syarat mutlak untuk mendapatkan hasil pemeriksaan yang baik. Bahan pemeriksaan yang terbaik adalah darah segar yang berasal dari kapiler atau kapiler dengan atau tanpa EDTA. Sediaan yang disimpan tanpa difiksasi terlebih dulu tidak dapat dipulas sebaik sediaan segar. Kebanyakan cara memulas sediaan darah menggunakan prinsip Romanowski, seperti Wright, Giemsa.Pembuatan preparat sediaan apus darah adalah untuk menilai berbagai unsur sel darah tepi seperti eritrosit, leukosit, trombosit dan mencari adanya parasit seperti malaria, microfilaria dan lain sebagainya. Bahan pemeriksaan yang digunakan biasanya adalah darah kapiler tanpa antikoagulan atau darah vena dengan antikoagulan EDTA dengan perbandingan 1 mg/ml darah.2.7.1. Ciri Sediaan Apusan Yang Baika. Sediaan tidak melebar sampai tepi kaca objek, panjangnya1/2 sampai 2/3 panjang kaca.b. Mempunyai bagian yang cukup tipis untuk diperiksa, pada bagian itu eritrosit tersebar rata berdekatan dan tidak saling bertumpukan.c. Pinggir sediaan rata, tidak berlubang-lubang atau bergaris-garis.d. Penyebaran leukosit yang baik tidak berkumpul pada pinggir atau ujung sedimen (Gandasoebrata, 2007).

Gambar 14 : Sediaan apusan yang baikDikutip : yayanakhyar.wordpress.com

2.7.2. Teknik Pemeriksaan ApusanDarahSediaan apus darah terdiri atas bagian kepala dan bagian ekor. Pada bagian kepala sel-sel bertumpuk-tumpuk terutama eritrosit, sehingga bagian ini tidak dapat dipakai untuk pemeriksaan morfologi sel. Eritrosit sebaiknya diperiksa di bagian belakang ekor, karena disini eritrosit terpisah satu sama lain.

2.8. Kerangka KonsepKerangka konsep pada penelitian yang dilakukan adalah sebagai berikut :

DARAH

Darah EDTA 1 ml + 0,5 mgDarah EDTA 1 ml + 1 mgDarah EDTA 1 ml + 1,5 mg

Waktu 0 JamWaktu 4 JamWaktu 2 Jam

Dibuat Apusan darah

Dilakukan pewarnaan dengan pewarna Giemsa

Dilakukan pengamatan terhadap kelainan bentuk eritrosit dalam 1000 eritrosit dengan menggunakan Mikroskop

Kesimpulan

BAB IIIMETODE PENELITIAN3.1. Jenis PenelitianJenis penelitian ini adalah eksperimen (Notoadmodjo, 2005).3.2. Desain PenelitianDalam penelitian ini perlakuan yang dilakukan adalah sebanyak 9. Pengulangan yang dilakukan berdasarkan rumus Gomes sebagai berikut :Rumus Gomes = (t 1) (r 1) 15(9 - 1) (r - 1) 15( 8 ) (r 1) 15 8r 8 158r 15 + 8 = 23r = = 5Dari hasil rumus Gomes diatas jadi pengulangan yang dilakukan adalah sebanyak 5 kali.3.3. Subjek PenelitianSubjek penelitian yang digunakan dalam penelitian ini adalah darah orang normal.3.4. Teknik Pengambilan SampelTeknik pengambilan sampel dalam penelitian ini adalah purposive random sampling. Metode yang diambil dengan tujuan tertentu. Sampel yang akan di diambil dari suatu populasi dikelompokkan atas dasar dan ciri-ciri tertentu (Notoatmodjo, 2005).

243.5. Lokasi dan Waktu Penelitian3.5.1. LokasiTempat penelitian dilakukan di Laboratorium Kampus Akademi Analis Kesehatan Harapan Bangsa Bengkulu3.5.2.Waktu PenelitianPenelitian dilakukan pada tanggal 1 sampai 10 November 2013 di Laboratorium Kampus Akademi Analis Kesehatan Harapan Bangsa Bengkulu.3.6. Alat, Bahan Dan Cara kerja3.6.1. Alata. Alat suntik/spuitb. Kapas sterilc. Tabung reaksid. Mikroskope. Objek glassf. Cover glass/kaca penutupg. Pipet 3.6.2. Bahan a. Darah vena b. K2EDTAc. Larutan Giemsad. Metanole. Aquadestf. Alkohol 70%g. Imersi oilh. Tisu3.6.3. Cara kerja1. Pengambilan Sampela. Dilakukan pesrsiapan alat dan bahan.b. Disiapkan 3 tabung reaksi yang masing-masing tabung reaksi diberi label tabung 1, tabung 2 dan tabung 3, yang telah dimasukkan antikoagulan EDTA pada tabung 1 dimasukkan sebanyak 0,5 mg, tabung 2 sebanyak 1 mg dan tabung 3 sebanyak 1,5 mg.c. Dilakukan pengambilan sampel darah vena.d. Kemudian mencampurkan darah tersebut kedalam masing masing tabung reaksi sebanyak 1 ml.e. Dihomogenkanf. Setelah itu dilakukan pembuatan apusan darah.2. Membuat Sediaan Apus Daraha. Memakai Kaca ObjekKaca objek yang akan dipakai harus yang kering, bebas debu dan bebas lemak. Untuk menggeserkan darah kepada kaca itu pakailah kaca objek lain yang sisi pendeknya rata sekali. Adapun caranya sebagai berikut : Disentuh tanpa menyentuh kulit setetes darah kecil (garis tengah tidak melebihi 2 mm) dengan kaca itu, kira-kira 2 cm dari ujungnya, dan letakkanlah kaca itu diatas meja dengan tetes darah sebelah kanan. Dengan tangan kanan diletakkan kaca objek lain disebelah kiri tetes darah tadi dan digerakkan ke kanan hingga mengenai tetes darah. Tetes darah akan menyebar pada sisi kaca penggeser itu. Tunggulah sampai darah itu mencapai titik kira-kira cm dari sudut kaca penggeser. Segeralah geserkan kaca itu kekiri sambil memegangnya miring dengan sudut antara 30 dan 45 derajat. Jangan lah menekan kaca penggeser itu ke bawah. Dibiarkan sediaan itu kering di suhu ruangan (Gandasoebrata, 2007).3. Memulas Sediaan Apus Daraha. Pulasan Giemsa Diletakkan sediaan yang akan dipulas diatas rak pewarnaan tempat memulas dengan lapisan darah ke atas. Diteteskan sekian banyak metilalkohol keatas sediaan itu, sehingga bagian yang terlapis darah tertutup seluruhnya. Biarkan selama 5 menit atau lebih lama. Dituang kelebihan metilalkohol dari kaca. Liputilah sediaan itu dengan Giemsa yang telah diencerkan dengan larutan penyangga dan biarkan selama 20 menit. Bilas dengan air suling. Diletakkan sediaan dalam posisi vertikal dan biarkan mengering di suhu ruangan (Gandasoebrata, 2007).

4. Pemeriksaan Sediaan Apus Daraha. Teteskan satu tetes minyak emersi pada bagian sediaan apus yang baik untuk diperiksa.b. Lihat sediaan dengan pembesaran lemah (lensa objektif 10x dan lensa okuler 10x) untuk mendapat gambaran menyeluruh.c. Perhatikan penyebaran sel-sel darah yang telah cukup merata. Selanjutnya lihat dengan lensa objektif 40x dengan pembesaran ini diberikan penilaian terhadap bentuk eritrosit, leukosit, trombosit, dan ke lain-lain yang ada.d. Bila diperlukan melakukan penilaian lebih lanjut pada sediaan apus dengan menggunakan lensa objektif 100x menggunakan minyak emersi dengan menyingkirkan kaca penutup, mendorongnya ke tepi dan mengangkatnya. meneteskan 1 tetes minyak emersi pada sediaan apus, menggunakan objektif yang sesuai.e. Melakukan penilaian terhadap bentuk eritrosit. f. Dihitung bentuk eritrosit pada 10 lapang pandang yang abnormal pada 1000 sel eritrosit.g. Penilaian dilakukan pada daerah pandangan dimana eritrosit terletak saling berdekatan tetapi tidak saling menumpuk, jangan menilai pada tempat dimana eritrositnya jarang-jarang (Gandasoebrata, 2007).

BAB IVHASIL PENELITIAN DAN PEMBAHASAN4.1. Hasil Penelitian

Dari hasil pengamatan penelitian tentang Analisis Pengaruh Kosentrasi EDTA Sebagai Antikoagulan dan Waktu Penyimpanan Sampel Terhadap Bentuk Eritrosit Pada Apusan Darah adalah sebagai berikut :Tabel 1 : Hasil Pengamatan Kelainan Bentuk Eritrosit Abnormal Dalam 1000 Eritrosit Pada Apusan DarahPengulanganERITROSIT ABNORMAL PER 1000 ( 0/00 )

EDTA 0,5 mg EDTA 1 mgEDTA 1,5 mg

0 Jam2 Jam4 Jam0 Jam2 Jam4 Jam0 Jam2 Jam4 Jam

1614256112281426

281326682391329

37103081520111427

46923792291225

58152861021101429

Rata-rata7,012,226,46,610,621,69,413,427,2

Pada kosentrasi EDTA 0,5 mg dari tabel diatas merupakan gambaran hasil pengamatan kelainan bentuk eritrosit yang abnormal dalam 1000 eritrosit. Rata-rata kelainan bentuk eritrosit yang diperiksa secara langsung sebesar 7,0 0/00, rata-rata kelainan bentuk eritrosit yang sampelnya disimpan selama 2 jam sebesar 12,2 0/00 dan yang disimpan selama 4 jam sebesar 26,4 0/00.

29Pada kosentrasi EDTA 1 mg dari tabel diatas merupakan gambaran hasil pengamatan kelainan bentuk eritrosit yang abnormal dalam 1000 eritrosit. Rata-rata kelainan bentuk eritrosit yang diperiksa secara langsung sebesar 6,6 0/00, rata-rata kelainan bentuk eritrosit yang sampelnya disimpan selama 2 jam sebesar 10,6 0/00 dan yang disimpan selama 4 jam sebesar 21,6 0/00.Dan pada kosentrasi EDTA 1,5 mg dari tabel diatas merupakan gambaran hasil pengamatan kelainan bentuk eritrosit yang abnormal dalam 1000 eritrosit. Rata-rata kelainan bentuk eritrosit yang diperiksa secara langsung 9,4 0/00, rata-rata kelainan bentuk eritrosit yang sampelnya disimpan selama 2 sebesar 13,4 0/00 dan yang disimpan selama 4 jam sebesar 27,2 0/00.4.2. Analisa Data4.2.1. Perbandingan kosentrasi EDTA sebagai antikoagulan dan waktu penyimpanan sampel terhadap kelainan bentuk eritrosit pada apusan darah4.2.1.1. Uji HomogenitasDalam pengujian perbedaan dua rata-rata sampel tidak berpasangan (independen), dibutuhkan uji homogenitas varians terlebih dahulu agar dapat menentukan statistik uji yang tepat untuk pengujian hipotesis tersebut. Pengujian homogenitas varians dilakukan untuk menyimpulkan apakah kedua populasi memiliki varians yang homogen atau tidak.Ho : Varians populasi homogenH1 : Varians populasi heterogen = 5%Tabel 2 : Uji Homogenitas

Test of Homogeneity of Variances,140212,8702,405212,1321,910212,191Waktu 0Waktu 2Waktu 4LeveneStatisticdf 1df2Sig.Berdasarkan tabel diatas, dapat dilihat bahwa sig lebih besar dari 0,05, maka Ho diterima. Oleh karena itu, dapat disimpulkan bahwa varians populasi homogen.4.2.1.2. Hasil ANOVA Rata-Rata Kelainan Bentuk EritrositPengujian ini dilakukan untuk membandingkan rata-rata bentuk eritrosit pada minimal sepasang kelompok perlakuan. Karena hasil pengujian sebelumnya menunjukkan bahwa varians kedua populasi homogen, maka dilakukan analisis statistik ANOVA yang hasilnya disajikan sebagai berikut:Ho :Tidak terdapat perbedaan bentuk eritrosit pada minimal sepasang kelompok perlakuan. H1 :Terdapat perbedaan rata-rata kelainan bentuk eritrosit pada minimal sepasang kelompok perlakuan.

Tabel 3 : Hasil ANOVA Rata-Rata Kelainan Bentuk EritrositWaktuSampelSum of squaredfMean squareFhitungSig

Waktu 0 JamBetween Groups22,933211,46711,0970,002

Within Groups12,400121,033

Total35,33314

Waktu 2 JamBetween Groups19,73329,8672,0000,178

Within Groups59,200124,933

Total78,93314

Waktu 4 JamBetween Groups91,733245,86711,6610,002

Within Groups47,200123,933

Total138,93314

Hasil analisis statistik ANOVA dengan uji F pada rata-rata kelainan bentuk eritrosit waktu 0 jam menunjukkan bahwa Fhitung (11,097) > Ftabel (3,885), dan nilai p < 0,05, berarti terdapat perbedaan rata-rata kelainan bentuk eritrosit yang sangat signifikan pada minimal sepasang kelompok perlakuan.Hasil analisis statistik ANOVA dengan uji F pada rata-rata kelainan bentuk eritrosit waktu 2 jam menunjukkan bahwa Fhitung (2,000) < Ftabel (3,885), dan nilai p > 0,05, berarti tidak terdapat perbedaan rata-rata kelainan bentuk eritrosit yang sangat signifikan pada minimal sepasang kelompok perlakuan.Hasil analisis statistik ANOVA dengan uji F pada rata-rata kelainan bentuk eritrosit waktu 4 jam menunjukkan bahwa Fhitung (11,661) > Ftabel (3,885), dan nilai p < 0,05, berarti terdapat perbedaan rata-rata kelainan bentuk eritrosit yang sangat signifikan pada minimal sepasang kelompok perlakuan.Untuk melihat konsentrasi EDTA mana yang menyebabkan efek berbeda tehadap bentuk eritrosit yang dihasilkan, maka dilakukan uji lanjut. Berikut adalah hasil uji lanjut Tukey HSD dengan menggunakan bantuan software SPSS 13.0.Tabel 4 : Uji Lanjut Tukey HSD Kosentrasi EDTA

Multiple ComparisonsTukey HSD.40000.64291.811-1.31522.1152-2.40000*.64291.007-4.1152-.6848-.40000.64291.811-2.11521.3152-2.80000*.64291.002-4.5152-1.08482.40000*.64291.007.68484.11522.80000*.64291.0021.08484.51521.600001.40475.510-2.14775.3477-1.200001.40475.678-4.94772.5477-1.600001.40475.510-5.34772.1477-2.800001.40475.156-6.5477.94771.200001.40475.678-2.54774.94772.800001.40475.156-.94776.54774.80000*1.25433.0061.45368.1464-.800001.25433.803-4.14642.5464-4.80000*1.25433.006-8.1464-1.4536-5.60000*1.25433.002-8.9464-2.2536.800001.25433.803-2.54644.14645.60000*1.25433.0022.25368.9464(J) kelompokEDTA 1 mgEDTA 1.5 mgEDTA 0.5 mgEDTA 1.5 mgEDTA 0.5 mgEDTA 1 mgEDTA 1 mgEDTA 1.5 mgEDTA 0.5 mgEDTA 1.5 mgEDTA 0.5 mgEDTA 1 mgEDTA 1 mgEDTA 1.5 mgEDTA 0.5 mgEDTA 1.5 mgEDTA 0.5 mgEDTA 1 mg(I) kelompokEDTA 0.5 mgEDTA 1 mgEDTA 1.5 mgEDTA 0.5 mgEDTA 1 mgEDTA 1.5 mgEDTA 0.5 mgEDTA 1 mgEDTA 1.5 mgDependent VariableWaktu 0 jamWaktu 2 jamWaktu 4 jamMeanDifference(I-J)Std. ErrorSig.Lower BoundUpper Bound95% Confidence IntervalThe mean difference is significant at the .05 level.*. Berdasarkan tabel diatas dapat dilihat pada waktu 0 jam, konsentrasi EDTA 0,5 mg tidak berbeda nyata dengan EDTA 1 mg namun berbeda nyata dengan EDTA 1,5 mg. Hal ini menunjukan bahwa bentuk eritrosit konsentrasi EDTA 0,5 mg tidak berbeda dengan EDTA 1 mg namun berbeda dengan EDTA 1,5 mg. Pada konsentrasi EDTA 1 mg tidak berbeda nyata dengan EDTA 0,5 mg namun berbeda nyata dengan EDTA 1,5 mg. Hal ini menunjukan bahwa bentuk eritrosit pada konsentrasi EDTA 1 mg tidak berbeda dengan EDTA 0,5 mg namun berbeda dengan EDTA 1,5 mg. Pada konsentrasi EDTA 1,5 mg berbeda nyata dengan konsentrasi EDTA lainnya. Hal ini menunjukan bahwa bentuk eritrosit pada konsentrasi EDTA 1,5 mg berbeda dengan konsentrasi EDTA lainnya.Pada waktu 2 jam, konsentrasi EDTA 0,5 mg tidak berbeda nyata dengan konsentrasi EDTA lainnya. Hal ini menunjukan bahwa bentuk eritrosit masing-masing konsentrasi EDTA tidak berbeda satu sama lain.Pada waktu 4 jam, konsentrasi EDTA 0,5 mg berbeda nyata dengan EDTA 1 mg namun tidak berbeda nyata dengan EDTA 1,5 mg. Hal ini menunjukan bahwa bentuk eritrosit konsentrasi EDTA 0,5 mg berbeda dengan EDTA 1 mg namun tidak berbeda dengan EDTA 1,5 mg. Pada konsentrasi EDTA 1 Mg berbeda nyata dengan konsentrasi EDTA lainnya. Hal ini menunjukan bahwa bentuk eritrosit pada konsentrasi EDTA 1 mg berbeda dengan konsentrasi EDTA lainnya. Pada konsentrasi EDTA 1,5 mg tidak berbeda nyata dengan konsentrasi EDTA 0,5 mg namun berbeda nyata dengan EDTA 1 mg. Hal ini menunjukan bahwa bentuk eritrosit konsentrasi EDTA 1,5 mg tidak berbeda dengan konsentrasi EDTA 0,5 mg namun berbeda dengan EDTA 1 mg.Untuk melihat perbandingan kelainan bentuk eritrosit setiap waktu antara konsentrasi EDTA yang dihasilkan, maka dilakukan uji lanjut. Berikut adalah hasil uji lanjut Duncan dengan menggunakan bantuan software SPSS 13.0.Tabel 5 : Uji Lanjut Tukey HSD Pada waktu 0 jam

Waktu 0 JamTukey HSDa56.600057.000059.4000.8111.000KelompokEDTA 1mgEDTA 0.5 mgEDTA 1.5 mgSig.N12Subset for alpha = .05Means for groups in homogeneous subsets are displayed.Uses Harmonic Mean Sample Size = 5.000.a. Hasil statistik Tukey menunjukkan bahwa pada kelompok penelitian waktu 0 jam terdapat pada dua subset. Pada subset 1 terdapat grup dengan kelompok EDTA 0,5 mg dan EDTA 1 mg. Artinya bentuk eritrosit pada masing-masing kelompok tersebut tidak terdapat perbedaan namun berbeda dengan EDTA 1,5 mg. Pada subset 2 terdapat EDTA 1,5 mg. Artinya terdapat perbedaan kelainan bentuk eritrosit EDTA 1,5 mg dengan konsentrasi EDTA lainnya.

Tabel 6 : Uji Lanjut Tukey HSD Pada waktu 2 jam

Waktu 2 JamTukey HSDa510.6000512.2000513.4000.156KelompokEDTA 1 mgEDTA 0.5 mgEDTA 1.5 mgSig.N1Subsetfor alpha= .05Means for groups in homogeneous subsets are displayed.Uses Harmonic Mean Sample Size = 5.000.a. Hasil statistik Tukey menunjukkan bahwa pada kelompok penelitian waktu 2 jam terdapat pada satu subset. Artinya tidak terdapat perbedaan kelainan bentuk eritrosit yang dihasilkan oleh setiap konsentrasi EDTA.Tabel 7 : Uji Lanjut Tukey HSD Pada waktu 4 jam

Waktu 4 JamTukey HSDa521.6000526.4000527.20001.000.803KelompokEDTA 1 mgEDTA 0.5 mgEDTA 1.5 mgSig.N12Subset for alpha = .05Means for groups in homogeneous subsets are displayed.Uses Harmonic Mean Sample Size = 5.000.a. Hasil statistik Tukey menunjukkan bahwa pada kelompok penelitian waktu 4 jam terdapat pada dua subset. Pada subset 1 terdapat EDTA 1 mg. Artinya terdapat perbedaan kelainan bentuk eritrosit EDTA 1 mg dengan konsentrasi EDTA lainnya. Pada subset 2 terdapat grup dengan kelompok EDTA 0,5 mg dan EDTA 1,5 mg. Artinya kelainan bentuk eritrosit pada masing-masing kelompok tersebut tidak terdapat perbedaan namun berbeda dengan EDTA 1 mg.4.3. PembahasanBerdasarkan analisis data diatas setelah dilakukan dengan menggunakan uji analisis statistik ANOVA dengan uji F pada rata-rata kelainan bentuk eritrosit waktu 0 jam menunjukkan bahwa Fhitung (11,097) > Ftabel (3,885), dan nilai p < 0,05, berarti terdapat perbedaan rata-rata kelainan bentuk eritrosit yang sangat signifikan. Sedangkan pada rata-rata kelainan bentuk eritrosit waktu 2 jam menunjukkan bahwa Fhitung (2,000) < Ftabel (3,885), dan nilai p > 0,05, berarti tidak terdapat perbedaan rata-rata kelainan bentuk eritrosit yang sangat signifikan. Dan pada rata-rata kelainan bentuk eritrosit waktu 4 jam menunjukkan bahwa Fhitung (11,661) > Ftabel (3,885), dan nilai p < 0,05, berarti terdapat perbedaan rata-rata kelainan bentuk eritrosit yang sangat signifikan pada minimal sepasang kelompok perlakuan. Artinya dari setiap kosentrasi EDTA 0,5 mg, 1 mg, dan 1,5 mg terhadap sampel yang diperiksa langsung dan sampel yang disimpan 2 jam dan 4 jam terdapat perbedaan kelainan bentuk eritrosit.Salah satu hal yang perlu diperhatikan adalah penggunaan antikoagulan dalam pengambilan darah untuk pemeriksaan laboratorium. Didalam pemeriksaan hematologi ada beberapa antikoagulan yang biasa dipakai yakni Ethylene Diamine Tetra Acetate (EDTA), Heparin, dan Natrium Sitrat. Antikoagulan adalah zat yang mencegah penggumpalan darah dengan cara mengikat kalsium atau dengan menghambat pembentukan trombin yang diperlukan untuk mengkonversi fibrinogen menjadi fibrin dalam proses pembekuan. Pada penelitian ini antikoagulan yang digunakan adalah EDTA (K2EDTA). Ada tiga macam EDTA, yaitu dinatrium EDTA (Na2EDTA), dipotassium EDTA (K2EDTA) dan tripotassium EDTA (K3EDTA). Dari ketiga jenis EDTA tersebut, K2EDTA adalah yang paling baik dan dianjurkan oleh ICSH (International Council for Standardization in Hematology) dan CLSI (Clinical and Laboratory Standards Institute).Menurut (Labkesehatan, 2009) Pemakaian antikoagulan tidak boleh kurang atau lebih dari jumlah yang telah ditentukan. Pada penggunaan EDTA kering, wadah yang berisi darah dan EDTA harus digoyang (homogenkan) selama 1-2 menit karena EDTA kering lambat larut. Penggunaan EDTA kurang atau lebih dari ketentuan seharusnya dihindari. Penggunaan EDTA yang kurang dari ketentuan dapat menyebabkan darah membeku. Sedangkan penggunaan antikoagulan yang lebih dari ketentuan dapat menyebabkan eritrosit mengkerut disebabkan karena kosentrasi zat diluar sel eritrosit lebih tinggi sehingga kandungan H2O dari eritrosit keluar, Apabila sel darah merah terdapat di dalam plasma hipertonis (lebih pekat dari pada sitoplasma sel) maka akan melepaskan air ke dalam plasma dan menjadi berkerut. Sel darah merah yang berkerut disebut krenasi.Menurut (Syamsuri, 2000) Pada kondisi cairan hipertonis, maka air akan berpindah dari dalam eritrosit ke luar sehingga eritrosit akan mengalami penyusutan (krenasi). Sebaliknya pada kondisi larutan hipotonis, maka air akan masuk ke dalam sitoplasma eritrosit sehingga eritrosit akan menggembung yang kemudian pecah (lisis). Kecepatan hemolisis dan krenasi eritrosit diperngaruhi oleh konsentrasi larutan.Menurut (Nurrachmat R, 2005) Antikoagulan yang sering dipakai pada pemeriksaan hematologi adalah Ethylene Diamine Tetra Acetate (EDTA), EDTA yang digunakan tergantung dari jenis garam, konsentrasi garam EDTA, dan lamanya penundaan pemeriksaan. EDTA yang lazim digunakan adalah garam natrium EDTA (Na2EDTA) atau Kalium (K2 EDTA/K3EDTA. Perbandingan jumlah darah dengan antikoagulan harus tepat. Penggunaan garam EDTA sebagai Antikoagulan dapat mempengaruhi morfologi eritrosit. Hal ini tergantung pada konsentrasi garam EDTA yang dipakai, lamanya sediaan hapus telah dibuat dan konsentrasi EDTA yang dipakai. Ethylene Diamine Tetra Acetate (EDTA sangat baik dipakai sebagai antikoagulan. EDTA sering dipakai dalam bentuk kering dan larutan 10%. Tapi jika ingin menghindarkan pengenceran darah, maka zat kering pun bisa digunakan akan tetapi perlu sekali menggoncangkan wadah berisi darah dan EDTA tersebut selama 1 - 2 menit, karena EDTA kering lambat larut.Dari hasil penelitian yang ada menunjukkan bahwa ketepatan kadar EDTA dan waktu penyimpanan sampel berpengaruh pada bentuk eritrosit hal ini terlihat pada pada EDTA 0,5 mg dan 1,5 mg dalam 1 ml darah yang kelainan bentuk eritrosit abnormal dalam per 1000 eritrosit yang meningkat sangat signifikan dibandingkan EDTA 1 mg terutama pada waktu penyimpanan sampel 2 jam dan 4 jam.BAB VKESIMPULAN DAN SARAN5.1. KESIMPULANBerdasarkan penelitian tentang Analisis Pengaruh Kosentrasi EDTA Sebagai Antikoagulan dan Waktu Penyimpanan Sampel Terhadap Bentuk Eritrosit Pada Apusan Darah yang telah dilakukan dan perhitungan data secara statistik maka dapat disimpulkan bahwa:Terdapat pengaruh kosentrasi EDTA sebagai antikoagulan dan waktu penyimpanan sampel terhadap bentuk eritrosit pada apusan darah.5.2. SARANBerdasarkan penelitian diatas tentang Analisis Pengaruh Kosentrasi EDTA Sebagai Antikoagulan dan Waktu Penyimpanan Sampel Terhadap Bentuk Eritrosit Pada Apusan Darah maka disarankan:1. Penggunaan EDTA sebagai antikoagulan kosentrasinya harus sesuai dengan ketentuan.2. Untuk pemeriksaan morfologi sel darah sebaiknya langsung dikerjakan.3. Perlu dilakukan penelitian lebih lanjut terhadap morfologi eritrosit dan sel darah lainnya degan antikoagulan yang berbeda.

40DAFTAR PUSTAKA

Akhyar, Yayan, 2009.Sedian Apus Darah Tepi, http://yayanakhyar.wordpress.com/ Sedian Apus Darah Tepi/, diakses 1 juli 2013

Gandasoebrata, R. 2007. Penuntun Laboratorium Klinik. Jakarta : Dian Rakyat.

Handayani, Wiwik, Hariwibowo, Andi Sulistyo, 2008. Asuhan Keperawatan pada Klien dengan Gangguan Sistem Hematologi. Jakarta : Salemba MedikaKosasih, E.N. 2008.Tafsiran Hasil Pemeriksaan Laboratorium Klinik. Tangerang : Karisma Publishing Group.

Labkesehatan, 2009, Antikogulan. http://labkesehatan.blogspot.com/ antikoagulan, diakses tangga 1 Juli 2013

Notoadmodjo.2002. Metode PenelitianKesehatan : Jakarta

Nurrachmat, R. 2005. Perbedaan jumlah eritrosit, leukosit, dan trombosit pada pemberian antikoagulan EDTA konvensional dengan EDTA vacutainer (tesis). Semarang: Bagian Patologi Klinik FK Undip,

Sloane, Ethel. 2003. Anatomi dan Fisiologi Untuk Pemula. Jakarta: EGC.

Sunyuto, Danang, Setiawan, Ari, 2013. Statistik Kesehatan. Yogyakarta : Nuha Medika

Syamsuri, 2000, Eritrosit Pada Manusia, http://id.wikipedia.org/wiki/. Eritrosit Pada Manusia, Diakses tanggal 3 Mei 2014Unpad, 2010.Histologi Darah ,http://blogs.unpad.ac.id/Histologi Darah, diakses tanggal 1 Juli 2013

WHO, 2005.Penggunaan Klinis Darah.Jakarta : Kedokteran EGC

Wirawan, R. 1996. Pemeriksaan Laboratorium Hematologi Sederhana Edisi. Jakarta : Balai Penerbit FKUI

Yazhid,2013.Pembuatan Dan Pewarnaan Sediaan Apus. Html//pembuatan dan pewarnaan sediaan apus/. Diakses 1 Juli 2013.

41Zakariadardin, 2012, Morfologi Sel Darah Merah, http://zakariadardin.wordpress.com/. Morfologi Sel Darah Merah, diakses tanggal 1 Juli 2013