BIOMOLECULAR AND

RECOMBINANT TECHNOLOGY

GENETIC INFORMATION

Kromosom tanpa histon

RECOMBINANT(GENE CLONING)

PENGKLONAN:Perbanyakan suatu bahan (hayati) yang menghasilkan bahan yang identik dengan bahan asalnya

Klon:sekumpulan individu (bahan) identik yang diperbanyak dari individu (bahan) yang sama

PENGKLONAN GEN

TUJUAN KLONING GEN

1. Mendapatkan gen sebagai penelusur

2. Mendapatkan gen untuk dianalisa urutan

nukleotidanya

3. Mendapatkan gen untuk diekspresikan di sel

inang

TAHAPAN KLONING GEN

1. Isolasi asam nukleat (gen)

2. Penyisipan asam nukleat ke dalam sistem vektor vektor rekombinan

3. Introduksi vektor rekombinan yang membawa sisipan ke dalam sel inang

KROMOSOM EUKARIOTIKNucleus

Chromosome

ENZIM PENGKLONAN GEN

1. ENZIM RESTRIKSIenzim yang berfungsi untuk memotong DNA secara spesifik Enzim Restriksi Endonuklease

2. ENZIM LIGASEenzim yang berfungsi untuk menyambung potongan DNA

ENZIM RESTRIKSI (contoh)Hae III (Haemophilus aegyptius)5’…GGCC…3’3’…CCGG…5’

Hinf I (Haemophilus influenzae)5’…GANTC…3’3’…CTNAG…5’

Mbo I (Moraxella bovis)5’.…GATC….3’3’.…CTAG….5’

Sticky end

Blunt end

Situs pengenalan enzim restriksi

PALINDROM

bila kedua utas DNA tsb masing- masing

dibaca dengan arah yang berbeda akan

memberikan urutan nukleotida yang

sama

ISOLASI cDNA

cDNA (DNA komplementer) :DNA yang dibuat berdasarkan mRNA

sebagai hasil transkripsi gen yang akan ditranslasikan ke dalam bentuk protein

cDNA merupakan refleksi gen secara langsung

mRNA diisolasi ----- dipisahkan dari tRNA dan rRNA

Polyadenin [poly(A)] pada ujung 3’OH

Separasi oligo(dT)