Pengukuran kuantitatif lipid netral dengan metode reagen Nile red

Pengambilan sampel ke dalam mikroplate 96 sumur. Sebanyak 5 µL sampel mikroalga (konsentrasi 5 x 104 sampai 3 x 105 sel/mL) dipindahkan kedalam sumur dalam microplate. Kemudian kedalam sumur tersebut ditambahkan 3 µL reagen Nile red konsentrasi 0.5 µg/mL (aseton atau gliserin sebagai pelarut) dan 292 µL larutan DMSO konsentrasi 25 % (v/v). Campuran dikocok dengan vortex atau shaker dengan kecepatan 120 rpm dan diinkubasi selama 10 menit dengan suhu inkubasi sekitar 35 - 40oC.

Pengukuran fluoresensi dari sampel yang telah diwarnai. Setelah sampel berwarna, fluoresensi diukur dengan menggunakan various spektrofotometer untuk mikroplate 96 sumur dengan panjang gelombang eksitasi dan emisi dari fluoresensi sebesar 530 dan 575 nm.

Bagan Alir

1. Pengambilan sampel 2. Pengukuran fluoresensi

Masukkan 5 µL sampel ke dalam mikroplate (konsentrasi 5 x 104 sampai 3 x 105 sel/mL)

Tambah 3 µL reagen Nile red (konsentrasi 0.5 µg/mL)

Tambah 292 µL larutan DMSO 25% (v/v)

Vortex atau shaker 120 rpm

Inkubasi 10 menit pada suhu 35oC -40OC

Sampel berwarna

Sampel berwarna

Setting panjang gelombang pada spektrofotometer

Variouskan

Emisi : 575 nm

Eksitasi : 530 nm

Intensitas fluoresensi diperoleh