Fourier Analysis of Cytoplasmic Texture in Nuclear Fiber Cells from Transparent and Cataractous...

14
Fourier Analysis of Cytoplasmic Texture in Nuclear Fiber Cells from Transparent and Cataractous Human and Animal Lenses CHRISTOPHER D. FREEL a , KURT O. GILLILAND a , C. WESLEY LANE a , FRANK J. GIBLIN b AND M. JOSEPH COSTELLO a * a Department of Cell and Developmental Biology, University of North Carolina at Chapel Hill, Chapel Hill, NC, 27599-7090, U.S.A. and b Eye Research Institute, Oakland University, Rochester, MI, U.S.A. Received Norwich 30 July 2001 and accepted in revised form 3 December 2001) Comparisons were made of the cytoplasmic textures in electron microscope images of nuclear ®ber cells from a variety of human and animal lenses. The goals were to establish the optimal conditions for quantifying the textural features and for relating the extent of roughness with the observed extent of nuclear opaci®cation. Freshly cut Vibratome sections were ®xed and processed for thin-section electron microscopy. Normal human donor lenses, human age-related cataracts from surgery, and rat, guinea pig, and canine lenses were analyzed using density linescans, Fourier transforms, and autocorrelation analysis. Normal and control lenses were compared to lenses with varying degrees of scattering including fully opaque nuclear cataract. Images were recorded at 21 000, giving structural information in the critical range of 2±300 nm. Human normal and nuclear cataractous lens cytoplasm produce Fourier transforms with relatively high intensity in the range 10±50 nm equivalent spacing) and relatively low intensity greater than 100 nm. This is consistent with the smooth image appearance, linescans with small ¯uctuations and autocorrelation functions indicating that the images are nearly homogeneous. Images of the transparent animal lenses were very smooth and produced Fourier transforms that showed less intensity in the range 10±50 nm and less intensity greater than 100 nm compared to the human lenses. Animal lenses with progressively enhanced light scattering showed a strong correlation between increased textural roughness and increased Fourier intensity greater than 100 nm. These analytical image analysis techniques readily documented the wide range of cytoplasmic textural variations in human and animal lenses and cataracts. Consistent comparisons were possible only when well-preserved tissues were examined with high-resolution images. The cytoplasm with the greatest roughness correlated with the greatest light scattering suggests that redistribution and/or loss of cytoplasmic proteins contribute to cataract formation. # 2002 Elsevier Science Ltd. Key words: lens; cytoplasm; ®ber cells; cataracts; fourier analysis; hyperbaric oxygen; animal models. 1. Introduction Increased light scattering in human and animal lenses has been attributed in part to the modi®cation and redistribution of ®ber cell cytoplasmic components, such as the crystallins, ions and small molecules Benedek, 1997). Such proposals lead to the prediction that the cytoplasm is altered to produce ¯uctuations in refractive index suf®cient to scatter light. The scale of the suspected ¯uctuations, based on theoretical treat- ments, should be in the range of 20±200 nm or larger Debye and Bueche, 1949; Benedek, 1971; Bettelheim, 1985; Vaezy and Clark, 1994). These dimensions are readily accessible using thin-section transmission electron microscopy. However, because the cytoplasm of mature ®ber cells is relatively smooth and feature- less unlike cells that contain internal membranous organelles), supplemental techniques are often necess- ary to fully appreciate small variations in the texture of cytoplasm as it appears in electron micrographs Taylor and Costello, 1999). Fourier transforms and autocorrelation analysis have been employed to compare cytoplasmic texture of normal, transparent lenses to lenses that display a range of light scattering up to fully opaque cataracts. Emphasis was placed on the changes in the center of the lenses fetal and embryonic nuclei) because these regions are relevant to the formation of human age-related nuclear cataracts, the leading cause of blindness worldwide. The use of Fourier image analysis on high-magni- ®cation cyoplasmic micrographs may reveal the morphological representation of the changes in protein structure and composition with age, treatment, and disease that have been examined using biochemical techniques. Along with recent dynamic light scattering experiments Dierks et al., 1998; Ansari et al., 2001; Datiles et al., 2002), the use of Fourier analysis may prove to be a powerful image analysis tool in the quanti®cation of changes in ®ber cell cytoplasmic protein size and homogeneity. A main objective in this study is to test the hypothesis that changes in cytoplasmic texture can completely account for the observed light scattering and cataract formation. Exp. Eye Res. 2002) 74, 689±702 doi:10.1006/exer.2001.1166, available online at http://www.idealibrary.com on 0014-4835/02/$35.00/0 # 2002 Elsevier Science Ltd. * Author for correspondence. E-mail: [email protected]

Transcript of Fourier Analysis of Cytoplasmic Texture in Nuclear Fiber Cells from Transparent and Cataractous...

������� ������ � ��������� ������� �� ����� ����� ��� ������������ �� �������� ���� �� ���� ������

���������� � �� �� ���� �� �� � ���� �� �� � ���� ����� �� ��� ���

�� �� ����� ���� ���

����������� ���� �� ������������ ������ ���������� ���� ������� �� ������ ����� ������ �������� ����������� �� �!� �� �"�� #�����$� %�����&��� '�(��� ����������� #$������� )%� �� �!�

�#�$���� ��*�$� +� ,&�� ���- �� �$$���� �� ������ �� + ��$��.�� ���-�

�������� ���� �� � �� ��� ���������� ������� � ������� ��������� ����� �� ������ ���� �������� � ������� �� ���� � ����� ���� ��� ���� ���� �� ������� ��� ������� �� ���� ������������ ��� �������� ������� � ��� ������� ��� ����� �� ������ ���� ��� ������ ����� �������� ������������ ������ ��� ��������� ����� ���� ��� � ������ ��� ��������� ����������������� ����� ���� ��� ���! ���� ���������� �������� ���� ������! � ���! ����� ���!� ���� ��� ���� ����"� ��� ���� �����! ������� �������! � �������������� ������ ����� � ������ ��� ���� ������� �� ��� ���� ������ ����� �� �������� ���� �� ����������� ������ ��������� #���� ���� ����� � �� $% &&&�! ����� ��������� ��������� � ��� ������������ �� $'(&& �� )��� ����� � ������ ���������� �� �������� ��� ��� ������� ����������� ���������� ���� ������ � ��� ���� %&'*& � +��������� �����, � ���������� ��� ������������� ��� %&& �� ��� � ������ ���� ��� ����� ����� ���������! ����� ���� ����-�������� � �������������� ������ � ������ ���� ��� ����� ��� ����� ���������� #���� ����� �������� ����� ��� ���� ���� ����� � ��� ��� ������� ������� ���� ���� �������� � ��� ���� %&'*& � � �� ������ ������� ��� %&& � ������� �� ��� ���� ����.���� ��� ���� ����������� ����� ����� �������� ���� � ���� ���������� ������ ������ �������� ������ � ������ ������� ������ ������� ��� %&& �� ���� ��������� ����� ������������� ��� ��� ������� ��� �� � ���� �� ���������� �������� �������� � ���� � �������� � ��������� ������ �������� ���� ������ ��� ��� ������������ ���� ���������� ���� ������������� ������ ��� �������� ���� ��� ������� ������ ��������� ���� ���������� ����� �������� ����� ���� �� ��������� � /�� �� �� ���������� ������ ��������� ���������� ��������� � $&&$ 0������ 1����� 2� ���� ����� ��3 ��������3 ���� ����3 ��������3 ������� �����3 ���������� �����3 ����� �� ���

�� ����������

#����� ����� �������� � ���� � ����� ����� ��� ��������� � ���� �� ��� �� ������� � �� ��������� �� ���� ���� ���������� �������!��� � ��� ��������! �� � ���� ��������+4�� �5! %667,� 1��� ������� ��� �� ��� ��� ��������� ��� �������� � ������ �� ��� ��� -�������� ����������� � �� ������� �� ������ ������ ��� ���� ����� ������ -��������! ��� � ����������� ���������! ���� �� � ��� ���� �� $&'$&& � �� ������+8���� � 4�����! %6963 4�� �5! %67%3 4���������!%6:*3 ���"� � ����5! %669,� ���� �������� ��� ��� �������� ��� ��������� �������������� ���������� )������! ������ ��� ���������� ������ ���� ���� � ���������� ����� � ���������� +���5� ���� ���� ����� ������ ����������������,! ���������� �������� ��� ���� ������� �� ����� ���������� ���� �������� � ��� ��������� �������� � �� ������ � ������� ����������+������ � �������! %666,� ������� ������� �

�������������� ����� ���� ��� ������� ��������� ���������� ������� �� �����! ����������� �� ��� ���� ����� � ���� �� ����� ���������� �� ����� ������ ��������� 0����� �� ����� ���� ����� � ��� ����� �� ��� ��� +����� � �������� �����, ������ ���� ����� ��� ��������� ��� �������� �� ���� ���������� ��������������! ��� ��� �� ���� �� ��� � ���� �� ����� �� �� ������� ����� ����� � ����������

������ ��������� ���������� ��� ������ ���������������� ����������� �� ��� ����� � �������������� � ��������� ���� ���! ��������! � ���� ���� ���� ��� ������ ��� �������������������� .������� ����� ����� ����� ����������������� +8���5 �� ���! %66:3 .��� �� ���! $&&%38����� �� ���! $&&$,! ��� �� �� ������� �������� ����� �� �� � �������� ����� ����� ���� � �������������� �� ����� � ���� ���� ���������������� �"� � ����������� . ��� ��;������ ���� �� � � �� ��� ��� �������� ���� ����� ����������� ������� �� ���������� ������ ��� ��������� ����� �������� � �������� ���������

�� �� ��� +$&&$, � ! <:6'7&$ ��=%&�%&&</�����$&&%�%%<<! ��������� ���� �� ����=//����� ������������� �

&&%9�9:(*/&$/>(*�&&/& � $&&$ 0������ 1����� 2� �

� .����� ��� ������� ���� 0�����= �;�?�� ����� �

�� ��������� ��� �������

���� ���������

. ����� �� %7 ����� ��� ���� �� ��� ��� �� �=��� ����� +@����, � ����� ��� �����������+ABC1, ��� +9'< ����,! ������� �� 8� D�#� 1�����5+E ���)! ������ )���! �! E�1�.�3 1�����5 �� ���!%669,3 ��� ����� � ���� ���������� ����� +)4A,������� ����� ���! � ����� ����� +��� ('7 ����,� ����� ������� ���� +��� :'%% ����,! ��������� 8� D�2� F������ +E ���)! ������ )���! �! E�1�.�3������ �� ���! %667,� ��� ����� ��� �� ������� ������������� 7& �������� ���� )4A +$�* ��� ��%&&G A$ ��� $

�9 �� +4������ �� ���! $&&&,, ���� �<����� ����� +����� ���� ��� ���5,3 ������ � ����������� ����� ���� $ ���� �� � 1��� ���������� ���� ������ ���������� ��� +) �!��� <6':63 ������� �� @��� ������, ���� ������� �������� ������������ �������� ��������� ���� 8�5�E������� 0�� �����! 8�����! �! E�1�.� ���� ��������� ��� + )2! $$'7% ���� �� ���, ����������� ���� ��� ���� ������� 0�� � )������� 4�5 +8�����! �! E�1�.�,� .�� ��� ���������� ������ �������� ��������� � ���� ��������������� �� ������ � ��� ��� ����� ��������� ������ +������ �� ���! %66<,� .�� �������� ���� ������� ����� �� �� ��� .D�A 1�������

��� ��� E� �� .���� � A��������� � ����D������ � ���� ��� ���� ������ ����� ���� ��� ���� �� ��� 8��������� �� )���5��

������������ ������� ����������

1������ ���� ������� ��� ������� ���������������� ����� � ��������� ������ +.��H����� �������! %66<3 ������ �� ���! %66<,� # �����!����� �� $&& �� ����5 ��� ��� � ��� ����� ������� � ��������� +���� %3 �F# ��������� �� ��%&&&! 1�� 2���! IA! E�1�.�, � ���������� ��� �$�*G �������� ��� �! $G ���������� ��� �! � %G���� ��� � &�% I ���� ����� ������ +�) 7�$, ���%$'%: ��� # ��� ���! ��� ���� ��� ����� ���� ��� ��� ������ � %&G ������� ������� +�&�% I �������� ������! �) 7�$, ��� % �� �� ��������������� ���� ��5�� ����� �� ��������� ��������� �������� ������! ����� ��� ���� ����&�% I ���� ����� ������! ������ ��� % �� ���� ��� &�*G ����� ������� �! ���� ���� �����! ���� ��� ���� *&G ������! ���� � $G ����� �������� ��� ��5 ��� (& ��! � ��� ���� ������� ���� � ������ ����� 1����� ��� �������� � ���� � � � ����� ���� ��� ������ ���� � ����� ���� ������ ���� ��� ���������� � �������� � ����� ��� �������������� �������

�#H� %� 1�������! ���������! � ���������= +., $&& �� ����5 ��������� ����� ��� ������ ���� ��� ����� � ���������� ���� . �����"�� �� ��� +�, � ���� � ��� ��� ����� +�, � �������� +�, ������ ����� � 7& � �������� ��� ��� ���� � ���� 5��� +5,3 +4, ����� ��� �������� � ������ ��� +�,! ���� ! � ������ �� ��� � ���������������

��� �� � �� � � �

+���� %+.,,� ��� ���� �� ������ � � ���� ������������ ��� ������ �� ���� ���� ��������� ��� ������ . ��� �� ���� � ��� ��� ����� +�,� �������� +�, ������ ����� � 7& � �������� ���� ��� ���� � ���� 5��� +5,� �������� ���� �������� � ������ ��� � ���� ���� ����� ������� � ��� ������� +���� %+4,,� ��������� ���� � ��� �� ������ ��� ���F����� ����� %$ ������� ������� ���������+�0# ������! )�������! AD! E�1�.�, �� :& 5�� #������ ��� ��� ����� � �������� ������ ����� ������������ ��� ��� H��� 769 ������ ������ +H���#��! F������! �.! E�1�.�3 %&$9 � %&$9 ����� ��8������ ����� ��� ��� ����, � 8������ I���������������� +�� (�9! H��� #��,� ���������� ��������� ��5� �� $% &&&� ���������� � ��������� ������ ��� ����� �� 5��� ���5�

������� ���������

8���� ����� �� ���� �0I ����� ������������ � 8������ I��������� �� ��� � ��� ������� �� ���������� ����������� ��� ���������� ���� ����� ��� ������� �������� � ����� ������� ���� � ���� �����! �������� �� ��;��-�������� � ���������� ����� �����

������� ��������

��� ��� ��� ��� ���� ������� ������� ������� ������� ���������� � J�� 4������ �������K��� ����� ���� �� ���������� �������� �� �� ���5� �� ��� � ���� �� �� � ���� ���� ������������� ������� � � ����� ��� ��������������� ���� �������� �� ��� ������� ����������� ���������� ��������� ���� ���� �� �������� ��� ������ �����# ������������ ����! ��� ������� �����������

�� �+�, �� �� ������ � �+�,! ����� ������ �������� �� ���� �������� ���� ���� ��� �� � � �������� �� ������� ��� ������� ������ +D�!%666,� ��� ������� �� ��� ��� ���������� �� ��� ������ ������� ������� � � ���� �����!����� � � ��� ����� �� ����� ���� ���� �+�,! �� ������=

���� � %

�

���%

��&� ������$����� �

��� ���������� �� ��� ��� ������� ��������� ���� ��� � ����� � ��� �������� ������� ���������� ������ ��� ������� ���� ���� ����� ���� ������ ���� ��� �� � ���� �� �� ��������������� � ��� �������� ����� ��� ����������� ��� ������ � �� ��� ������� ����� ��� ������ �� ������ ��� ���� ����� ���� �� �������������� ��� ������ . �� ��� ���� ������� ���������� �� ��� ������� ���� �� ����� ���� (<&����� ������� ������ � �������� ���� ��5� ��

����� �� ������"� ��� -�������� � ����� ������"� � ��� ���! ����������� �������� �������������� # �������� ����! � ����� ���� ���������� �� ������������� ������� � �� �� �������� ���� �� ���� � ���� ������ . ��������� � ����� ����� �� ������������ �������� ����� ��� ��������� �� ���������� ������� � �������� +I������! %669,� # ��� ����������! ������������� ������� ��� �������� �� ��� ��������� ����� ������� � ���� � ����� ����� �� ������� ������ ���� �"� +���� ���� ������ ��������� ������,� # ��� ���! � ���� ���� ���5 �� ��������� +�%/%& ��%,! � � ��� ���5 �� ����������� � ���� �� ���������� �������� ����������� ������ � � ��� �� ��� ��� �� ���������� �� ��� ������ 2����������� ������� ����������� � ��� ����� �� ��� �������! � ���� ���� � ����� �� ����� �� ������� �"� +���� ����������� ��������� �� ����,� ��� ���� �� ��� �������� ����� ���� ������ ����� ����� +%/%& ��%

� �������,� ��� ������� �� � �� �������������������� ��� $& &&&� ���������� ����� ����� ������ ��� �� ����� ���� ����� � �������������� �� ������� �� %&& � �� ��������"�3 � ��� ��� ���� ���� �� �� � ����� �� ������������� +����5! %669,��� ���������� ����� �������� � ��� �� ��� ����

�� ��� �������! ��� ������� ������� �� � ��������������� ����� � �������� ���� �� ���� ������ � �������� ��� ������� ������� � �� ������� ������ �������� � ����� ����� ������ � �������� +���� ���������� ������ � ��� ��������������� ��� �����,�# ���� ���������! ������� ����� � ��������

� ���� ������ ����� ��� ��� ��� ������� �������� ��������� �� 8������ I���������� ������� �������������� ��� ��������� ��� ��� #���� F������� ����5�� +�� (�&! D�� ��� H���! #��! .�������! �! E�1�.�, ��� F����1��� +�� <�&! . ��� 1����#��! 1� J��! �.! E�1�.�,� ���������� ���5 ���������� ����� �� %&! $&! � *& � +���� ������������ �� ��� �����, ��� ������ �� ���� �������������� ���� ��� �� �� 8������ I����������

��������������� ��������

���������� � � �������� ���� ������ ��� ������� ������ �� ����� ��� ����� �������� .�������������� � �������� � � ���� ����� �� ������� �������� ���� ������ ��� ��������� ����� � ������������������ � ����� ���� �� ��������! � ������������������ ��� ��� ��� �� ��� ������� �� ���� ������ ������� ��� ����� �� ��� ����� �� � ��������������� ������ A� ����� � ��� ������ � �� ������� �� � ���� ����� � ��� �������������������� ��� ��� ��� ���� � ��� �������������������� ��� ����� � ������� ��� ���� ����� � ������� ������� ������ ��� ������� ����� � ������� � ���� ���� ���� �� � ������ ���5 �� ����

������ ��� ���� �� �� ����� ��� ��

������� � ���� �������� ���� ������"� ��� ����� ������� �� ��� ������ ��� � ����������� �� ������ ��� ������ � �� ��� ���������� ������ ��� �������� ������� ����� ���������� �� �� ���� ��� �������! �������������� �� ������ �� � ������� ����� ���� ���� ���5 ���� ������� �������� ��� ������� ���� ��� �������������� � ��� ����� ��� ������� �������� ������� �� ���� �� �� ���� .������������� ���������� ������� �� ������� �������� � ����� ���������� ������� �� � ����� � ��5� � ������������� �� ����� ��� ����� ����@�� �� �� ����"� ��� ������� �� � ��

��������� ������! ��� �������������� ����� ������ ���� �������� ���� ��� ������������� �� ��� ����� �������� ���! � ��������� �� �� ������+���������! ��������� �����, ���� � �������������� �������������� ����� ��������� ������� ��������� ��� � ����� �� �� ������������� ������ ���5 � ���� ����� ������ ��� ���������� �� ��� ���� ������� ������ ���� �� ���� � ��������� �� �� �� ��� ����� ��� �� �! � ��������� ��� �� ��� ������ ����� �� � �� ��������� . ���� ������� ������ �� � �� �� ��������� ����� ������� ���� �������� ��� ���� �������������� ����� ���� ������ ��� ������������ +�� ��,! ����� �"� � ���������� �������� � ������ �� ������� �-���� � ����������� +��� � 5��� ���5, ���� ��� �� ������� �� ������"� � ��� ������� ������ .����������� �� ��� ������� �"� �� ��� ��;�� �������� ��� �� �� �� ��� ������ ���5! ����� ���� �� ������� ����� �� ������ ������� �������.������� �� � �������� �� ������"� ���� ���

������ ��� �������������� ����� �� �� �� � ��������! ���������� ��� ��������� ������ ������ ������� ����� � # ��������! ��� �������������� �� ��� ������� ����� � ��������� �� ��������� ��;����� +������� ��� ���� �����������, � ����� �������� �� ���� ��� ����������� ����� +��� ��� #���� F������ ����5��,���� ���������� ����� ����� ��� �� ��� ��������������� � ��� ������� ������ ��� � ��������� �� ������� ���� ��� ������� ������� �� ����������������� ����� � � ����������� ���� �������� ������� +����� �� ��� ������� ������ �, ����� ������� ������ ���������! ��� ������� �����!������� ������� � �������������� ����� ��� ������� ������������ ����������� �� ��� ��� ���� ��� ������� � ������ �� ��� ������������������� ��� ���� +�, ��� ������� ��� ��� ��� ��� �� ��� ��� � ������ �� ����� �����! +�, ��������� �� ������� ������� �� ������ ����� ����� �� ������ �� ��� � ��� ������� ����� �� ���� ���������������� �����! +�, ����������� ���������� ����� ��� ������� �"� �� ��� ����� �������� � ��������� ���� ��� �� �� �� ��� ���������5! � + , ��� �������������� ����� �� �������

������ �� �� ������� � ���� �� ������� �� ������� ������������� ��� ����� �� �������

������ ����

D� ����� ������� ���� ��� ������� �� ������������������ ��� ������� �������! �� ��������������������! ��� � � ������ �� �� �� ��� 1����������� ���� ��� �������� � ��� ������� � �������������� ����� ��� #) #���� +�� %�<$! E�1� ������ #������ �� )�����! ����=//�������������/��������/,� D� ��� ���� ���� ���� ��� ���� ��������� ������ ����� ���� ����� ���� ������ ����� ��� ������� ����� ��� I������� 0����+�� $&&&! I������� ����������! D� �� ! @.!E�1�.�,� 1��������� ��� ������� ��� �� � �� ��������� ������� ������ ����� ���� ���� �� � ����������� ����� ��� ��� ��� �������� ������ .���� ���� � � ������� ����� �� � � ��� ����� �� �����! � ������� �� ����� ����� ������� + ��� �� ���,� )���! ��� ������ ������ ����� �� ����� ��� ���� ������� � �������� ������� ��� %/%&&! %/$&! � %/* ��% �����

!����������� �� ����"���� ���� �������

�� ��������� ��� �� �� ������� � ���������������������� � � ���� ������� ����! ��������������� ������ ����� ������� �� ����� ��������������� � �����"���� ���� ��������� � ����������������� ����� ������ �� �� �� ���!���� �������� ����! � ����� �������� ���� ������������ � F����1��� � ��;���� �� �������� ������ ��������

�� ������

�������� �� !�������#$�������� ���� �������

��� ��� ����� +���� $+.,, ��� ��� �� ����������� �������� � �� �� ��������� �� ��������� ����� ����� � � ��� �� �� ��� ������������ �!������������� ����� ������ +�� ���,� � ������� �� ��� ��� ����� � ��� ��������� ��������� ��� ������� ������� +���� $+4,, � ����������� ������� ������� ���5 � ��� ���������� �� ����� ������� ����� ���������! ����� ���� �������� ������ �� ��;��� �� ��� ��� ������� ��� �������� ���� ������������ ��� ���5����� ������ � ��� �������������� ������+���� $+�,, ������ ��� �� ������ ���� �� ��� ����� ������ � ��������� ���5���� � ���������!� ��� �� �� �� ��� ������ ���5 � ����� �� �����!����� �������� ������� ��� ������� �"� �� ��������� ������� ��� ������� ������# ���� $+8,! � ����� ������� �� ������ �� ����

�"� � �������� ������ �� ������ � E��5����� $+.,! ��� ��� ������� ��� ����� ���������� �������� � �����"����� ��� �����

��! �� � �� � � �

����� ������� ������������ � ������� ���� ��������� �� ��� �� �� ��� ������ ��� �������������� ����� ��� ���� � ���5� ��� ��� �������� ���� ��� ����� �� ��� ������� �� ������������ ��� � ��� �"� � �������� �� ��� ��������� �������� ��� �� ��� ���� ����� � ����������� � ������ ��� ��� �������� ���3 ��� ����� �� ��� ����� � ��� �� � ��� ����� � ��������� �� ������ �� ��� ������� �"�� ����������������� ������ +���� $+�,, ��� ��� � ���������5 ����� �� ��� ������� �"� �� ��� ����� ������ � ���5���� ���� ������� ��� ������� ��������������� ������ +�� ������� ������� ,���� ����� � ���� $+H, � ������ �� ���� $+8, ����

��� � ���� �� ����� ������ �� ��5�� ���� ������ ���

���� � ������ � ��� ������� ����� �"� � ������� �� ���� ����� ������� ������� �� ���� $+8,!������ �� �� ����� +������ ���5 ������ � �� ��,� ��� ������� ����� +���� $+),, ����� ����������� � ��� ������������ ������ ��� ������ �������! ��5 ������ � ���� $+H, � ��-���� � ��������� � ������ � ��� �� ��� ���� ��� ��� ������ � ������� ���� � �� ��� ����� �� � ��� %& ����������� ���5 ��� ��� �������� ��� � ���������� ���� $+0,� ��� ���5 ���5���� ������ � ���������� ������� � ���� $+0, � +), ��� �� ����� ���� ��� ������ ��� �������� ��;��� � ������������ �� ��� ���� ��� �������������� �����+���� $+#,, ������ � ������ ������� ���5���� � ������� �� ��� ������� ���� �������� � ���

�#H� $� .���� �� ��������� ��� ������� ���������� ����� ���� ��� ����� +���� �����,! ������� ����� +�� �������,! � �������������� ����� +����� �����, �� ����������� ��� ��� �����= �� �� ��� ++.,! +4,! � +�,,! ������������ ��;��� ���� �������� ������ ++8,! +0,! � +�,,! � ����� �������� ��;��� ���� �������� ������ ++H,! +),! � +#,,�

������ ��� ���� �� �� ����� ��� ��"

������� ������ ��� � ���� �� ����� ����� ����������� ��� �� �� �� ��� ������ ���5! � ������ �������� �������� ����� �"� ���� � ������� ��� ������ ���� $+�,� ��� ������� �� ��� ������ ��� � ����������������� ����� ���� � ����������� � �������� ��� ���������

�������� �� ������ ������

������ ��� %&'� ���� #���� �� ��� ������ ������������ �� ��� ����� ��� +���� (+.,, ������ ������ ��������� ��� ������� �� ��� ������������ �� ��� ABC1 ���� +���� (+8,,� 8���� ������ ������ ���� -�������� � ��� ����� ���������� �������� � ��� ABC1� ������� ����� �� ���ABC1 ��� �������� +���� (+0,, �������� � ���������� ���� ���� ������ ��� � ��� �������������� � ������� ������ � ��� �� ��� �����*& � � �������� �� ���� �� ��� �����+���� (+4,,� ��� �������������� ����� �� ��� �������� +���� (+�,, ������� ��������� � ���5���� ��������� � ������ �� �� �� ��� ������ ���5 � �� ������������ ����! ������ ��� ABC1 ��� +���� (+�,, ������� ����� ���5���� ������ � ������ ������ ���5�

������ ��� ()%#������� $����� ��$� ���� ������ ��������� �� �� ������ �� ��� ��� �������� �������� ������� �� ��� ����� ����� ��� +���� 9+.,, ������ �� ��� )4A ������ +���� 9+8,,� ����� �����

������ ������ ���� ���5 �� ������ ������� � � ���� ��������� F��5 ���� � ��� ����������������� �� ��� ������� ������� � ��� �� ��� ������� ������ ������ ��� �������� ��� �����+���� 9+4,, � ������ +���� 9+0,, ������ ��� ���������� ��� �������������� ������ +���� 9+�,, �������� ��� ���5���� � ���� �� �� �� ��������� ���5! ����� ��� )4A ������ +���� 9+�,, ������ ��� ���5���� ������� ���� � ������� ������������ ���5�

������ ��� ���*���� ������� # ��� ����! ��� ������������� ������ ��� �� ������� +���� *+.,,! �������� ������� ������� ������ �������� ���� ������������� � ����� ���� ��������� ��� ����� ������ ����� ����� ������ ���� ���� -��������� ��� ����� � �� �! �������� ���5 � ��� ����������� ������� ������� ��� ��� � ������������������ ���5 ���� � ���� ������ � ��� �������+���� *+0,, ��� ��� ����� +���� *+4,,� ��� �� ��� ������ ��� ����� ��� � �-����� +���� �� ���� ������ ���5! ���� *+4,, ���� � �� ����� � ��� ������� +���� *+0,, �� �� ������� ������ � ��� ������%&& � +��� ���������� ���5,� .������������������ �� ��� ����� ���� �������� ���5���� ����������� � ������ ������ ���5 ��� ���� ������ ���� ����� ��� �� ����� ��� +���� *+�,,� ��� ����������� �������������� ������ +���� *+�,, �� ������� ������� ���5���� � � ����� ������ ���5�

�#H� (� ������� ����� �� ����� +� � $, � ABC1 +� � (, ��� ��� +9'< ����,� ���������� ����� ���� �������� +���� �����,! ������� ����� +�� �� �����,! � �������������� ����� +����� �����, �� ����� ++.,! +4,! � +�,, � ABC1 ++8,! +0,! � +�,, ����

��# �� � �� � � �

�#H� 9� ������� ����� �� ����� +� � $, � )4A������� +� � 9, ����� ��� ��� +$ ���� �� ,� ���������� ����� ������� ����� +���� �����,! ������� ����� +�� �� �����,! � �������������� ����� +����� �����, �� ����� ++.,! +4,!� +�,, � )4A������� ++8,! +0,! � +�,, ����� ����

�#H� *� ������� ����� �� ���� ��� +���= ('7 ���� +�����3 � � (, � :'%% ���� + �������3 � � (,,� ��������������� ���� ��� ����� +���� �����,! ������� ����� +�� �� �����,! � �������������� ����� +����� �����, ������� ++.,! +4,! � +�,, � ������� ++8,! +0,! � +�,, �����

������ ��� ���� �� �� ����� ��� ��$

A� ��� �������� �� �� ���� ����� �����! ���

����� ��� �������� ��� ������� ������� �����

��� ����� ���� �� � ������ � ���� ���������A� ��� ������ �� ���� ������! ��� )4A�������

����� ��� � ��� ���� ������� ����� ��� �������

���� ������ ��� ��� �������� ��������� ����������������� ���5���� ������ ��������� ����

���� ��� ����� �� ������ ������������ ��� ����� ��

���� ���������� ����� �������� ������� ������� ��� ��������� �� ��� ���= ��� ����� ���

���� ��������! ��� )4A������� ����� ��� ����

� ���� ����� �� ��������� ����� �������� �� ������� +�������! ��� ��� ���� ���� ��������

+F� ���5�� �� ���! %666,,! � ��� ABC1 ��� �

������� ���� ������� ������� ������ +������ �� ���!%6673 ������� �� ���! $&&&3 I����� �� ���! $&&&,�

�������� �� (���� ������

!���������� ������� ��� ���������� ��� ��������� ��� +���= $$! ���� <+.,3 **! ���� <+8,3 � <7! ���� <+H,, ��� ������� ��� ���� ����������������� �������� ���� �� ��� ����� ����+���� *+.,,� .�� �� ��� ����� ��� ��� ����� ��������� ���� �������� � ����� 2�5����!��� ���������� ���� ���������� ��� +���= 7%!���� 7+., � 7(! ���� 7+8,, ��� ���������������� ���� ���� �������� ��������! ����� ���:% ���� �� +���� 7+H,, ����� � ��� ������ �������� �� ��������� ��� ����� �� ��� ��� 7%� 7( ���� �������� ������ � ����� ������ � ���� �������� ������� �� ��� ����� ��! � ��� :% ���� �� � ��� ���� �������� ���� ������������ ���� ��� ��� ��������� �� ���� ���=

�#H� <� ������� ����� �� ����� ���� ��� +� � *,� ���������� ����� ���� ��� ����� +���� �����,! ������������ +�� �� �����,! � �������������� ����� +����� �����, �� ����� ���� ���= ���= $$ ���� ++.,! +4,! � +�,,! ** ���� ++8,! +0,! � +�,,! � <7 ���� ++H,! +),! � +#,,�

��� �� � �� � � �

��� ����� ��� ���� ����� ��������! ����� ������������� ������ ������ ��� ����� �������� ����� �������� � ��� ���� �� $'( +� ����� �� &'9, ��� ��� ��� 7% � 7( �����! � ('9 ������ ��� :% ����� +������5 �� ���! %6:(,�

������� ���������� ��� �������� �+���$�� ������ .�� ����� ����� ��� +���� <+4,! +0,! � +),, ��� ����� ����� ������� ���� ���� ������ � ��� � ���������� %* � ���� � ������ � ���� ������ $&� %&& �� ��� ������ � ���� �� � ��� ���������5 �� ��� ������� ������� ���� ������� �������� ������ � ��� ���� �� %*'*& �� ��� ���������5 �%&& � ����� � ���������! ��� ��������������� ������� �� ��� ���� +���� 7+4,! +0,! � +),, ����� � ���� ��� � ������ ������ ��

%* �! ����� ��� ���� ��� ������� ������ ���������5 �%&& � ������� �� ��� ����� ����

��������������� �������� ��� �������� �+���$�� ������ #��� ��� �� ��� $$� � <7�������� �����+���� <+�, � +#,! �����������,! ��� ������������������� ��� ��� ���5���� ���� ���� ��� ��������� � � ����� ������ ���5� . ������� ����������� ���5���� � �� �� ������ ���5 ����� ��� � ��� ** ���� �� +���� <+�,,� ��� ����� �� ���7(�������� �������� +���� 7+�,, ������� ���� ����� $$� � <7�������� �����! ����� ��� 7%� � :%�������� �������� +���� 7+�, � +#,, ������� ����5���� �� ������ ������� � ����������� �� ������ ���5� .�� �� ��� ����� ��� ������������ ���� ����� ���5���� ���� ���� ����

�#H� 7� ������� ����� �� ���������� ���� ������ ���������� ��� +� � 7,� ���������� ����� ���� ��� �����+���� �����,! ������� ����� +�� �� �����,! � �������������� ����� +����� �����, �� ���������� ������ �������������� ���= ���= 7% ���� ++.,! +4,! � +�,,! 7( ���� ++8,! +0,! � +�,,! � :% ���� ++H,! +),! � +#,,�

������ ��� ���� �� �� ����� ��� ��%

��������� A� ��� ��������! ��� 7( ���� �� �� ������� ���������� �������� ����� ��� :% ���� �� ���� ��� ���������

������� ��*��������� ��� �+���$�� ����

1��������� ��� ������� ������� �� � ��������������� ����� ���� �� ���� � ����� � ���������� ��� � ������� � �� ��� ���� ���� ������ ��� �������� � ����� ����� ������� � ���������� ������ ��� ������ +���� :,� . ������� ��������� ��� � ��� ��� ������� �������! �������� ����� �� ��������� ��� ����� ��� ����������� ��� ABC1 ��� ��� ��� � ������� ����������� ������ ��� �� ����� +���� :+.,,� ���� ��� ��� ��� ��� ��� ������� � ����� ������������� ����� +���� :+�,,� 1��������� � ���������� ��� ���� � )4A������� ����� ����� � �������� ���� � ����! ��� ������� ������ ���5 ���� ����� �� %&& � � ������� +���� :+4,,� 4���������� � ���� ����� ���� �� +��� $$,���� �� ���� � ��� +<7 ����,! ��� �������������� ��� �� ����� �� �� ����� ���������� ����� ���� ����� ���� +���� :+8,,� . ���� ������ � ��������� ��� ��� ����� ���� � ����� �� � ������ � ��� %*'%&& � ������ ����������� ��� ��� ���� ������ �������� +��� :%, �� ���

������ ����� ������ � ���������� ����� ����� ������� ������ ������ +���� :+0,,� 1������������ ������� ����� �� ��� ������� �������� �� �� +����� ���, ���� ��� ��� ������� ��������+ ������� ����, ��� ��� � ������� ���� � �������� � ������ � ��� %* � � ������� �����+���� :+�,,� �� ������� ��� ��� � ��� ���������� ��� ���� ������ ��� ������ �����! ������� �� ��� ���� ����� ���� ��� ��� ��� ���� ���������� +���� 6 � %&,���� ����� ��������� � ����� ���������

������ ��� ABC1 ��� � ����� +���� 6+.,, � ��� ������� ���� � ����� +���� 6+�,, ������ ������ � ������� �� ��� ������ � ������! ���� ���� ����� ������! � ������ ������ ������������ ��� ������� � ������� �� ��� ����� ��� ���5�*& � � ��� �������� ����� ��������� ����� ���� � ���� �� ��� ��� ������ ������! ��������� �� ����� ������� ������ ��� �������������� ������ ������ # ��� ��� �� ��� )4A������� /����� ����� ��� �������� +���� 6+4,,!��� ���� ������ �� � �������� � ��� ��������������� ��� �������� � ������! ��������� � ���%&&'$&& � ������ ��� ������� ���� ��������� ������ ��� ! ���� ��� � ������� ������� ������ ���5�%&& � � ��� ���������� ������� �� �� ��� �������� ����� +���� 6+8,,! ������ ��

�#H� :� ������� ��������� ������ �� ������ ��������� ���� ����� ��� ����� �� ��������� ��� ������� ��������� ��� ������������ ������ +., ABC1 � ����� ���3 +4, )4A������� � ����� ����� ���3 +�, ������� � ���������3 +8, ��� +<7 ����, � ���� +$$ ����, ���� ����� ���3 +0, � ���� ���� ������ �������� +��� :%, � ���� ����� +��� $$, ���3 +�, ��� ��� ������� �������� �� �� + ������� ����, � ��� ���� ������� +����� ���,�

��& �� � �� � � �

��� ����� ��� ����� +���� 6+4,,� ��� ������ ����� %&+., � +4, ����� ���� �������� � ��� ������ %*'*& � ���� ��� ����� ���� +��� $$, ������� ���� ��� � �������� �������� ��� ���������� ������ � ��� %&&'$&& � ����� 1���������� ��� ����� ��� ���� ��� ����� ��������� +��� $$, � ���� %&+�, ������"� ��� �������� ��� ������� � ��� ���� � ��� ���� ��%*'*& �� . �������� �� ��� ������ ������� ������� ���� ���� ��� ��� ������� ������������ +���� %&+8,, �������� ���� ������ ���������! ���� � ���� ��� ��� ������ �*& � � ��� �������� �����

� ��������

������� ����� �������� �� � ���� ����������� ��� ��� ������� �� ����� ���� �� ����������� �������� �� �� � �������� ��������� #����

�� �� ��� ��������! ��� � � ��������� �����!��� ��� ������� � �� ��� ���� ���� ����� �������� � �������� ���� ���5 � ��� �"����� ������� �� �� ��� ������ � �� ��� ������������ ��� ����� � ����� ������ ��� � �� ������ � �������� ����� �� ����� ���� �����"����� ���� �������� � �� �� ���������� ���������� ������� ������ �� ���� ���� �� ��������� ��� ������� ���� ��� ������� � �����! �������� ���5 ���� ������� ��5�� ���� ������� ��������� �������� ��� ������� �� ������� ��������� ������ � ���� ��������� �� �� ��� ���������� �� ������� ������� ����������� �������� �� ��� �� ����� � � ����� �������

�� � ��� ��� ! ��������! � �����������������! ������ ��������� �� � ��� �� ������ � ������ . ���� ����� � � ���������� ����� � ����"� � �������� � � ������� �������! ����� ��������� ��5� �� ��� ��� ������ �� ���� ������� �������

�#H� 6� .������ � �������� ����� �� ������� �� ��� ����� ���� �������� � ������ ���� ��� ��� ��� ��� ������� ��� ���� ���� �� ������ ��� ���� ��� ������� ����� �� ��� ���� ������ ����! ����� ��� �������� ����� �� ��� �������� ����� ��� ������� ����� � ��� ��� �� ���������� ��� ������� ��������� ��� ���� � ��� ��� ������ +��� ����� ('%& �������, ������� �� ���������� ��� ������� ���� ��� ��� ������ ������ 1����� �"� � ��� ������� ������� �� ����� ��� ���� � �������� +�� %/%&&! %/$&! � %/* ��%! �����������,� +., ����� +� � $3 (�7! 7�%! 7�*, � ABC1 +� � (3 $�&! (�$! (�$, ���3 +4, ����� +� � $3 %%�%! %&�:! %&�:, � )4A������� +� � 93 $�6! :�$! %&�9, ����� ���3 +�,����� +� � (3 :�$! <�9! *�<, � ������� +� � (3 $�*! 9�%! *�$, ����3 +8, ����� +� � *3 (�(! *�9! *�9, � ���� ���������������� +� � 73 $�*! %�7! %�7, ���� #�� � +4, � +8, ����� ��� �������� � ������ �%/$& � � ������� ������

������ ��� ���� �� �� ����� ��� ���

�� ����� ������ ���� ��� ����������� +5������5! ��� �����,� 0��� ��������� �� ��������������� ���� ������� ������� ��������� �� ������� ��� ������� ���������� �� ��� ����� ��� ���� ������ ��� ����� �� ��� � ��� ��� ����� � ������ � ������ �� ��� ������� ����� �� ��� ��������������� # ���� �� ��! ����� ��� ���� ����������� ��� ��������� ���� ������! ���� ��������� �� �������� ������ �� ����� � ���������������� ���� ����� ���� � ����� ������������� E �� ���� �� ����! ��� ������� ��������� ���� � ���� ����5 ��� ������� �� ��� ��������� � ������ ������� ������� � � ���������������� ����� ���� ���� �� ����� D����������� ��������� ���� ��� ������� ����� � ������� �������� ���� �� ��� ����������� ������������ �� �� ������� � �������������� �����

�� �� � �� ���������� ������������� �� ������������ ����� ��������� � ������ ������ +����5!

%6693 ���"� � ����5! %66*3 ���"� �� ���! %66*3������ �� ���! %6673 ������ � �������! %666,� I���������! ����5 +$&&%, �� ������� ��� �� �� �������� ����� ��� ����� � ����� � ��� .������"� �� ����5 � ���� � � ��� �� �!����� � ���������� ���������� ���� ��� �������� �� ����� ������� �� ���������� �� �������� ��� ������� �������� �� ������� ������� � ��������� �������� �� ������ �� �������� �� �� ������� ������� ��������� ��5� �������� �� ������� ����� �������� � ������������ �������! ����� ��� ����� ����� ������� �� �� � ���5��� ��� �������! ��� ������������� �� ���� %&+., � +4, � ���� ���� ���������� ���� � �� � ������ � ��� %*'*& � ����� � ��� � ������ � ��� %&&'$&& � ��������� ����� ����� � ������ �� �� ����� � �"�+����������, �� ����� ������� %*'*& � ��"�! ���� � ������ � ����� �"� %&&'$&& �

�#H� %&� .������ � �������� ����� ��� ������ ���� ��������� E��5� ��� ���� � ���� 6! ���� �������������� ����� � ���� ������� H���� ����� �"� ��� ��� ����� �� ������ � ��� �����3 ���� ������ ����� �"���� ����� �� ��� ����� �� ������� ������� � 1����� �"� � ��� ������� ����� �� �� ����� ��� ���� � ��������+�� %/%&&! %/$&! � %/* ��%! �����������,� +., �������� �� ��� ����� ���� ���! ���= $$ +� � <3 :�6! %%�9! %$�&,� 7% +� � 93 %$�&! *�6! (�7,3 +4, �������� �� � ���� ������ �������� +��� :%3 � � 73 $�7! %�6! $�%, �� � ����� ������ +��� $$,3 +�, �������� �� � ����� ���� �� +��� $$, �� ��� ����� ��� �� +� � $3 (�7! 7�%! 7�*,3 +8, �������� ��� ������� ���� �� +� � (3 $�*! 9�%! *�$, �� � ���� ������ �������� +��� :%,� ��� ��� �������� � ������ �� ��� �������� ���� � ��� %&&'$&& � ����� +���,�

%�� �� � �� � � �

���� ��� � �������������� 1������ ���� ���������� �� ����5 � ������5�� +���"� �� ���! %66*,� ��� ��� ��� ���� ������� ����� ��� ��������� ������� ������ � ��� ������ +�� ��

��� , ����� �� �� ��� ���� ��� ������ �������� ��� ���� �� ���������� ������� � ������������������� ��� ������� �� ������ �����#���� �� ��� ABC1 ��� +���� $+8,, � ��� ����������� +���� 9+8,, ��� ��������� ������� � ������� � �������� �� ����� ����� ����������+���� $+., � 9+.,! �����������,� ��� � ��� ��� ���� ��� ��� ��������� �� ���� ��� � �����= ������������� ��� ���� ���������� ������ ����� ������ �� ��� �������� ����� ���� # ��� ����� ��� ����� ���! H���� � ������5�� +H���� �� ���!%66*3 F� ���5�� �� ���! %6663 4������ �� ���!$&&&, ���� ��� ��� ���� ��� ������ �������� ���� ��� �� )4A������� ������ 1�������� ����� ������ ������ ��� ������ �������� ��� ���� ����� ����� �� ��������� �������� ������ � ��������� ������ E�� ��������������� ����������� ��� �������� ���� ��� ����� � ������ �������� �� �����! ��� ���������� ������� +���� (+., � +8,! �����������, ��� ��������� � ����������� �� ���!� ����� ������� ��� ����� �������� � ������������ ������� +���� (+4, � +0,! �����������,�A ��� ��� �� ��� ������ ������ � �����

�������� � ��� )4A������� ����� ��� �� �������� �� ��� �����! � ��� ����! ��� ��������������� � ���������� ������� ������ �� �������! ���)4A������� ����� ��� ��� ���� � � �� �� ��� ����������"���� �� �������� ���� ���� # ��� ����� ! ����� ����� �������� ����� � ���� �� � ����� � ���� �� ��������� ������ � �� ������ �������������� �"� ��� )4A������� ����� ��� +.��� �� ���!$&&%,� 1�� �� ������� ��� ����� � ����� ����������������� � ������ ��������� �� ���� ������ ���� ��� � �������� ���� ������ ���� ������� ��� �� �� ����� �� �������� ������ ������ ���� ��������� ������ ��������� ��� ��� ������� �������� �������� �� $&'$&& � � �"� +1����� ���! %6:%3 ������ �� ���! %667! 4�� �5 �� ���!%666,� ���� �������� �������� ������ ���������� �� �� �������� ��� ��� ��������� ������������� ����� �� ��� ���� +�� � 4���!%6673�� � 4��� � 1��5���;�! %666,�D���� ������ �� ��� ����� ��� �������� ����

��� � ��� ���� ����� � ���������� �����@��� ���������� ��� ��������! ��� �������� ������� +���� <+.,! +8,! � +H,, � ����������+���� 7+.,! +8,! � +H,, ��� ������ ���� ���������� ���� �������� � ������� ��� ������� ��������� ������� ��� ������ ������ +�����=���� <+4,! +0,! � +),3 ��������= ���� 7+4,! +0,! � +),,� )������! ���5� ��� ����� ���! ��� ���������� ������ �������� ������ ���� ������� ��� �������� ��� ��� ��� ���������! ���� �������������� ������� �� �� � ��� � $'9 � � &'9���� +������5 �� ���! %6:(,�

���� �������� � ���������� �������������������"���� ������ ����� ����� ���� � ������� ������� ��� ��������� �� ��� ��������� �������������� � ��� )4A������� ����� ��� � ��� ����� ��;�� ������ � ����������� �� ��� ABC1 ��� � ������� ���� ���� ��� ���� ������ ������������ ���� ������� ������ �� ��� �����! ����������� ��� �� ������� �� ��� ������ ����������� �� �������� ��� ��� ������ ��� ������A���� ������� ���� �� ��� ��� ��� ����������������� D���� �� �� ���� ������� ��������������� ������� �� ������� �"� ���� ��� ���� �������� �������� ����� +H������ �� ���! $&&%,�8������ �� ������������ ���� ������ �� ���������� ���� �� ��� ������� ��� )4A������� ��������! � ��� ��� ��������� �� ��� �������������� � ��� �� �� +H���� �� ���! %66*,�# �������! ������� ����� ����� � � ��������

���� ��� ��� �������� �� �������� ������� �� ��� ������������ ������ �������� ���� ����� ��� � ��� ���� ������ ����� ��������� ��� �� ���������������� ����� ��� ��� � � ������������������ �� ������� � ����� ���� � ��������� �������� �� �� �� � �� ������� ������5���� ������ �� ��� �������������� �������#� ��� �� �� ������ �� ���� ��� ��� ����� ����� � ������� ������ ������ � ������5������ ��������� �������� ��� �� �� ��������������� �������� � � ������ ���� ��� ������� ����������������� ������ �� ��� ������ �� ������������� �� ����������"� ����� � ��� ���������������� �� ��� ���� ���� �� � ���� +�������� ���! %667,� ���� ����� ����! ���� ���� ��� ���� ������� ��������� � ��5��! ��� ��� �� ������� � ���� �� �� ��� �������"���� �� ��������� � ����� ���� ��� � ��������������

���������������

��� ������ ���5 I� )�� I�5��� ��� �� ����������������� � �������� ������� H���� ��� ���� ������ ���� )4A �� I���� )�� ���� �! L������ J���! �����L����! L�; 1�����! � L���� ����� ��� �� �� ����������� ���� 8� D����� 2� F������ � D� ���� #�1�����5! � ���� ���������� ����� �� 8� @� ����������� � ��� ���������� ��5���� �� � ��� ������� ��������� �� #)' 0# ���� 0C&:%9: +E �, � 0C&$&$7 +AE,! � ���� H��� 0C&*7$$ +8�5� E��������, � 0C&*$(& +AE,�

���������

.��H����! L� J� � �������! I� J� +%66<,� ����� �������������� � ���������� ������� � ����������� ����� ���� �� ������ �� �� ��� ��!*(('9$�

.���! D� D�! H����! �� J� � L��! J� �� +$&&%,� 0������ ������� � ���������� ������� ��� ����� ������ ��� ��� � ���� �� ����� ������������� +821,� M.D�A .������N� ,�+��� %�-�-����� .�� ��� �! 1%&&! ������� �� *9:�

������ ��� ���� �� �� ����� ��� %�

.���! D� D�! 1��! L� #�! 8�5��! 1�! L�����! � � 1����! J�+$&&%,� O���������� ��������� ����������"���� ������� ������� � �� ���� �������� ���������� ��������� �� �� ��� ��! :*6'<<�

4�� �5! H� 4� +%67%,� ������ �� ��������� �� ��� �������� %�� ��! 9*6'7(�

4�� �5! H� 4� +%667,� �������� � � ������ �� ����� ����� ��� F������ �������� ,�+��� %�-�-����� .�� ��� � ! %6%%'$%�

4�� �5! H� 4�! F� �! J�! ������! H� I� � ����5! J� #�+%666,� ����������� � ����������� ��� ��� ����������� �� ��������� ��$ ����� �� ��� � !(6%'9&$�

4���������! �� .� +%6:*,� F������ ��� �� �� ����������# �-� %����� ����� +I����! )�! 0 �,� I����� 8�55��= ��C��5! C! E�1�.� F�� $<*'(&&�

4������! 8�! H����! �� J�! 2�����"! �� D�! D� �! �� �! 2�!2� D�! C������! I� ��! ���! 8� � 2�! 2� +$&&&,� #������� ���� � ���������� ����� � ���� � ����� ����� ���� � ������ ����� ������� ,�+��� %�-�-����� .�� ��� �! (&<%'7(�

������5! 2� ��! J��! 2��! I� D�! ���! @� )� � ����! )� I�+%6:(,� ���������� �� ���� ���� ��������������� �� ��� .������ ����������� ��������D������ H���� +��DH, ����� #� #����������� ��������� ,�+��� %�-�-����� .�� ��� � ! 9$9'(%�

����5! J� #� +%669,� 8��������� � �������� �� ������������ # ��������� ��� ������� �� %�-�-������$��+.�����! 8� I� � J�5�����! �� .�! 0 �,� @�4� 1�� ����= F���� ������! F.! E�1�.� F�� %%9'$(�

����5! J� #� +$&&%,� ������� � ����� ��� ����� ����������� ���������� � ����� � ��� ������ ��!$(6'96�

�������! I� J�! I�����! 1�! 2��! �� @�! 1�����5! D� #�!.�������! �� 8� � F������! D� 2� +$&&&,� ���������������� � � ���� �� ��� ������ ��� ���� ��� ��������� ������� ��������� !! *6&'%�

8�����! I� 4�! ###! .���! D� D� � D�� ! H� �� +$&&$,� .������� �� � �� ��� ���� �� ���� � ����� ������������� ������ �� �� ��� � ! 6('%&$�

8����! F� � 4�����! .� I� +%696,� 1�������� �� ����������� ��� � / ���� -�� ��! *%:'$*�

8���5! L�! 8���5��! I�! �� �������! 8�! 1������"! D�� @�����! .� +%66:,� F����� �"� �������� ����� ��� ��� �� ����� ����� �������� ����� ����� ���������� 0����1� ���- !��� �� %�-�-����� ��!! %:'$(�

H����! �� J�! F� ���5��! �� .�! 2�����"! �� D�! 2�! 2��D�!2��! I� ��! E�5��! � J�! 8��! 2�! 8��5���! J� 0�! J��� D� �! �� � +%66*,� ������ ����� ��������! ���� � �������� � ������� ����� � ��� ���� �� ����� ��� ������ ���� ���������� ������ �� �� ��� !�! $%6'(*�

H������ ! L� A�! �����! �� 8�! 2��! �� @�! ������! @� �� � �������! I� J� +$&&%,� I������������ �� �� � ���������������� �������� � ���� ���������� ��������������� ��� .�� �! %$&'(&� ����=//���� ���������/�����/�7/�%:�

I������! 8� +%669,� 2-�� �� ���3������� ���� �� �� ���$�4�8�������� �� �������� 1�����! ��� ��� E�������=@���! E�L� ����=//�������������5/8���/����P��������

I�����! 1�! 1�����5! D� #�! .�������! �� 8�! F������! D� 2�! 2��!�� @� � �������! I� J� +$&&&,� �������� �������� � ����� ��� ����� ��� ��� �� �� M.D�A .������N� ,�+��� %�-�-����� .�� ��� �! 1$%%! ������� �� %%&*�

F� ���5��! �� .�! 2�! 2�! 2�����"! �� D�! D�5�! .�! D� �!�� � � H����! �� J� +%666,� )��������� ����� � �������������� ��� �� �� ����5������ ������ � I#F$<� ����� ��� �� ������ �� �� ��� ! ! 96('*&9�

D�! J� �� +%666,� �-� ,��$� ��������$ (���*��5! (� � ��D� F�� 22�= 4��� D���! �2! E�1�.��

1�����5! D� #�! 1��������! � .�! 8�5����! 1� #�! H�������!A� �! 1������! 2� .� � F����5�! .� �� +%669,�#������ �������� �� �� ����� �� ���� ��������� ���� ������ ���� � ��� 1 ���� ��� ����� � 8 .�����������! ���������� ����! � �������������� )���-�� )���-�� ��� !����� �""! 7$<'((�

1���! 0� 2�! A�����5�! 8� � 4���������! �� .� +%6:%,� 2������������ �� ����� ���� ��� ##� .�� ��� ����� ��� ����� �������� ���������� �� �� ��� ��!<&('%9�

������! �� 2�! .��H����! L� J�! 2��! �� @�! 8���! �� .�!L�"�5! J� D� � �������! I� J� +%66<,� I��������� ����� ����� ���� ��� ,�+��� %�-�-����� .�� ��� ��!%(6<'9%&�

������! �� 2� � �������! I� J� +%666,� ������� ����� ���������� �������� � ���� ����� � ������������ ������ ���� ���� ��������� �� �� ��� !"!%<('79�

������! �� 2�! F������! D� 2� � �������! I� J� +%667,�E������������� ����� �� ����� � ������� ����������� ���� ���� .�� !��� %�-�-����� �!%%7'$*�

������! H� I�! )�� �! 8� 2�! 4�����! F�! ����5! J� #�!�����! �� H�! L� ��! J�! �������! I�! F�������! J� .�!4���! I� 1�! I�����! 8�! 1������! L� I�! 1����! D�!1���! )� � 4�� �5! H� 4� +%667,� O��������� ������������� �� � �� ��� ����� ���� �� � � �������� ���� !��� �� ��� �!! %67'$&7�

���"�! 1� � ����5! J� #� +%669,� O���������� ����� �� ���������������� �� ��� ���� ����� � ����� ���$8 ������� ����� � / ������� ���! 6('6�

���"�! 1� � ����5! J� #� +%66*,� ����������"���� �� ����������� ������������� �� ������ �� ��� $8 �������� ������ ��� )����� �$ ��! 9:$'6&�

���"�! 1�! ����5! J� #� � ����5! J� I� +%66*,� O��������������� �� ��� �� ���� ������������� � ��������������� ��� ���� ������� ������� ������ �� �� ��� !�! $9*'**�

�� � 4���! �� J� �� F� +%667,� 2���� �������� �� ������ � � ������ �� ���� � ���������� ,�+��� %�-�-����� .�� ��� � ! %($%'($�

�� � 4���! �� J� � 1��5���;�! )� +%666,� 2������������ �� �� ��� ��� ��� � � ������ �� ����� .����� ��� �"! %9(7'9*�

%�! �� � �� � � �