EL COSTO METABOLICO DEL MOVIMIENTO FLAGELAR EN Pseudomonas
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Katerin Corrales Bravo Norvey Vega Cortés EL COSTO METABÓLICO DEL MOVIMIENTO FLAGELAR EN Pseudomonas putida KT2440.
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Katerin Corrales Bravo Norvey Vega Cortés
EL COSTO METABÓLICO DEL MOVIMIENTO FLAGELAR EN
Pseudomonas putida KT2440.
Pseudomonas putida KT2440.
Pieper y Nelson.
Miltiflagelada tiene de 5 a 7
flagelos en un polo.
No patógena
Amplia capacidad
metabólica
Oxida compuestos
orgánicos
tóxicos.
Modelo especial para las aplicacio
nes biotecnológica
Los flagelos filamentos helicoidales externos que impulsan a la bacteria en medios líquidos.
papel importante en la adhesión, formación de biopeliculas, colonización e invasión.
Impulsado por un motor rotatorio.
La ausencia de flagelos compensa a
las bacterias con mayor
disponibilidad de
energía y poder
reductor
Mas de 50 genes esta
involucrado en la producció
n de flagelos.
Rotación flagelos
nos esta a cargo del ATP, sino de fuerzas protónicas
.
Rotan antidotario
horario, y
reversa.
Para tener en cuenta: Las células que no tienen
flagelos pueden manejar mejor el estrés
oxidativo. Mejor carga metabólica
Se inspecciono y cuantifico la carga
metabólica asociada al ensamblaje
de los flagelos.
Comparación del
rendimiento en bacterias con flagelos isogenicos y sin ellos.
En varios escenarios fisicoquimicos que sean capaces de
medirse con la carga metabólica del desplazamiento.
Condiciones Cepas, plásmidos, los medios de comunicación y de
crecimiento.cultivadas rutinariamente en medio LB (10gl-1 de triptona, 5 gl -1 de extracto de levadura y 5 gl-1de
NaCl), a 30 ° C.
morfología
de las colonias
2μl de cultivos overnight 1% de placas de agar ,este contiene 10 g L -1 de triptona y modificado con 40μgml-1 de rojo Congo y 20μgml-1 de Azul Brillante de Coomassie.
producción de
polisacáridos
2μl overnight se cultivo en agar LB, con25μgml-1 de calcoflúor blanco, posteriormente se observaron durante 3, 5 y 7 días bajo luz UV. Solución salina tamponada con fosfato.Pruebas
morfológicas y físicas.
Microscopia electrónica
evaluar la motilidad
hidrofobicidad superficial
técnicas
Manipulado procedimientos descrito por Sambrook y et al (1989).del plásmido se obtuvo mediante el Asistente PlusKit SV Miniprep.
Amplificación PCR se purificó usando el extracto de NucleoSpin II.
Determinación de la ATP / ADP, AEC
y proporcio
nes rédox.
Resistencia al
estrés
La citometría de
flujo.
AEC = ([ATP] + 0,5 [ADP]) ([ATP] + [ADP] + [AMP]) (1)(se calcularon de acuerdo a el contenido de ATP, ADP y AMP en los extractos de desproteinizadas a partir de las cepas en estudio.)
resultados Genes involucrados en la síntesis de
flagelos.
Regio de 69 genes, elementos
regulatorios y genes
quimiotaxicos
Genes involucrados en la síntesis de
flagelos.
cystathionine β-lyase aminotransferase
β-ketoacyl/acyl-carrier-protein
synthase
Se evaluó la capacidad natatoria de cepas mutantes y salvajes, en un medio M9 con glucosa, sucinato y fructosa.
Cepa mutante incapaz de nadar independientemente de la fuente de carbono.
Tinción negativa para confirmar la ausencia de flagelos.
microscopía
electrónica de transmis
ión
Los resultados mostraron que las células no flagelados sedimentan más rápido que las células de tipo salvaje.
para P. putida KT2440 (un aerobio estricto) , perdiendo la capacidad de posicionarse dentro de un gradiente de oxígeno puede tener un costo importante medio ambiente.
se incubaron con un cultivo saturado de células sin agitación durante 24 h .
Las células no flageladas forman más de biopeliculas que las de tipo salvaje
la cepa de tipo salvaje adhiere a las superficies más que las células no flagelados en todos los medios ensayados
La cepa mutante forma más biopelícula que la cepa de tipo salvaje.
La perdida del operon flagelar podría
activar la producción
de EPSse estimó la producción de EPS de
cada uno de las cepas.
A través de una prueba de la placa de agar de fijación de colorante.
2 l de cultivos de cualquiera de las
cepas.fueron vistos en placas de agar.
Triptona que contienen una mezcla de rojo
Congo y Azul Brillante de Coomassie.
Estos colorantes de unión
son directament
e proporciona
l a la producción de EPS.
Determinar los
niveles relativos
de exopolímer
os.
La mejora de EPS
incluyen la producción de un
polímero de celulosa
comparando la capacidad de ambas cepas se unen a
calcofluor blanco en placas de agar
LB.
no se observó ninguna
diferencia.
la persistencia de las biopeliculas cuando los alimentos se habían agotado tras la incubación prolongada.
células no móviles
La cepa no flagelados se mantuvo adherida a la superficie de las placas después de 4 días de incubación.las células de tipo salvaje separan completamente de la superficie durante el mismo período de tiempo.
Influencias de los flagelos en la fase de retardo cuando crecen en
diferentes fuentes de C.
Efecto de la carencia total de
movimiento.
Tasa de crecimiento de mutantes mas baja.
En fructosa, la cepa mutante creció mas rápido.
FruB (EI-HPr-EIIA)
FruA (EIIBC
Conversión de fructosa más eficiente en no
flagelados.
Caracterización fenotípica.Se utilizaron 20
placas para examinar diferentes fuentes de carbono, nitrógeno, fósforo
y azufre y determinar el efecto de los nutrientes
Suplementarios: osmolitos, pH y un
amplio panel químico
sensibilidad.
Cepa mutante no utilizó la alanina como fuente de C.
Cepas mutantes sensibles a
betalactámicos.
Estado de los impactos de movimiento flagelar de energía y la reducción de disponibilidad de energía.
El principal componente
proteínico del flagelo es PP4366.
Alta energía.
ATP-sintasa.
Se evaluó la cantidad de energía y el poder reductor
en cepas flageladas y no
flageladas.
Compensación entre el estrés físicoquimico y la motilidad.
Habilidad de las cepas mutantes.
El paraquat cataliza la formación de oxígeno reactivo y disminuye
NADPH.Diamida agente tiol-oxidante que oxida al
glutatión, lo que afecta el estado redox de el
citoplasma.
Bacterias sometidas a luz ultravioleta.Bacterias sometidas a
agentes oxidantes.
Reparación del ADN.
NADPHATP
Beneficio para afrontar las condiciones adversas.
Mejora de la viabilidad de la cepa no flagelado en
fase estacionaria
Tinción con
yoduro de
propidio.
Células con
membranas
dañadas.
Cultivos LB.
Cultivos con glucosa.
Mortalidad menor en cepas
no flagelada
s.Ackermann,
2008Castillo et al
. , 2007 pH
ácido en M9.
>ATP.
Conclusiones.
