Effect of vitamin E supplementation on lipid peroxidation in blood and lung of influenza virus...

11
Effect of vitamin E supplementation on lipid peroxidation in blood and lung of in¯uenza virus infected mice M. Mileva a , R. Bakalova a, * , L. Tancheva b , A. Galabov c , S. Ribarov a a Department of Medical Physics and Biophysics, Medical University, 2 Zdrave Str., So®a 1431, Bulgaria b Institute of Physiology, Bulgarian Academy of Sciences, Akad. G. Bonchev Str., So®a, Bulgaria c Institute of Microbiology, Bulgarian Academy of Sciences, Akad. G. Bonchev Str., So®a, Bulgaria Received 30 October 2000; received in revised form 2 January 2001; accepted 4 February 2001 Abstract The in¯uenza virus infection A/Aichi/2/68) was associated with development of oxidative stress in lung and blood of mice, accompanied by an increase in levels of lipid peroxidation products conjugated diens and total malondialdehyde) and a decrease in endogenous amounts of natural antioxidant vitamin E. These effects were most pronounced on the 5th day after virus inoculation, in comparison with those on the 7th. Supplementation of mice with exogenous vitamin E before virus inoculation lead to lung and blood protection against lipid peroxidation. A marked decrease in lipid peroxidation products and an increase in vitamin E content was established in blood and lung on the 5th and 7th day after virus inoculation. The stabilizing effect of vitamin E is dose-dependent in blood and dose-independent in lung, and was most pronounced on the 5th day after virus inoculation in comparison with the 7th day. q 2001 Elsevier Science Ltd. All rights reserved. Keywords: In¯uenza virus infection; Lipid peroxidation; Vitamin E; Lung; Blood Re Âsume  L'infection grippale virus de l'in¯uenza) est associe Âe au de Âveloppement de stress oxydant dans les poumons et le sang de la souris, et s'accompagne d'une e Âle Âvation des niveaux des produits de la peroxydation lipidique et d'une diminution de la quantite  endoge Áne de l'antioxydant naturel, la vitamine E. Ces effets ont e Âte  plus prononce Âs lors du 5ie Áme jour suivant l'inoculation du virus comparativement au 7ie Áme jour. L'administration exoge Áne d'un supple Âment de vitamine E a Á la souris avant l'inoculation du virus prote Áge les poumons et le sang de la peroxydation lipidique. Comparative Immunology, Microbiology & Infectious Diseases 25 2002) 1±11 0147-9571/00/$ - see front matter q 2001 Elsevier Science Ltd. All rights reserved. PII: S0147-957101)00010-8 www.elsevier.com/locate/cimid * Corresponding author. Tel./fax: 1359-2-5166-553. E-mail address: [email protected] R. Bakalova).

Transcript of Effect of vitamin E supplementation on lipid peroxidation in blood and lung of influenza virus...

������ �� ����� � � ����������� �� ���������������� �� ����� �� � �� �� ��� ���

��� � �������� ���

�� ������ �� �������� �� ��� ���� !� "������ #� ������

���������� ��� ��� ���� �� ��� � ���� ��� ��� ��� �� ���� ��� � ������ ����� ��� ����� � �!�� ��"��� � �� ���� �!�� � �!�� �� #������ �� ������ #$��� %� ������ ����� ���� � �!�� �

�"��� � �� � ��& �!�� � �!�� �� #������ �� ������ #$��� %� ������ ����� ���� � �!�� �

�������� $% &������ '%%%( �������� �� ������� ��� ' )� �* '%%+( ������� , -��� �* '%%+

��������

� � ��� ��� ��� � ��������� .!/!�� �/'/012 3� �������� 3�� ���������� �� �������� ������

�� � �� �� ����� �� ���� �������� �* � ������� �� ������ �� ����� ����������� ���� ���

.���4 ���� ����� �� ���� �������� *��2 �� ������� �� �������� � � ��� �� �� ��

��������� ����� �� � ��� ������� 3��� ��� ����� ���� �� � � 5� �* ���� ��� � ���� ������ ��

�������� 3�� � ��� �� � � 6� � # ����������� �� ��� 3�� ������� � ����� � ������ ��� �

���� ����� ��� �� � �� �� ����� ���������� ����� ����� ������������ ! ���� ������� �� �����

����������� ���� ��� �� � ������� �� ����� � ������� 3� ������� �� �� ����� �� � �� �� � �

5� �� 6� �* ���� ��� � ���� ������ � � ���������� ������ �� ����� � �� ����7��������� �� �����

�� ����7����������� �� � ��� �� 3� ��� ����� ���� �� � � 5� �* ���� ��� � ���� ����� ��

�������� 3�� � � 6� �*� � '%%+ �������� #������ ���� !�� ��� �� ���������

'��(���8 9�� ��� ��� � ���������( ����� �����������( :���� �( � ��( �����

����

�;��������� ������� .��� � �� �;��� ���2 ��� ������<� ��<���������� �� ������ ��*��� ���

��� �� ��� �� �� ��� �� � �� ���� �� �;������� �; �� �<��<����� ��� ���� � ��� ���� ��� �� �

�����*����� ������= � �� �; �� ���� ���� �� � = �����< ������>�� �� �;�����*��� �� ���� �

������ �� ?�� ������ ��� �<��< �� � ��������<� ���� � 5��>� 4� � � ���� �;���� ����� � ��� �

����������� 6��>� 4� �� �;����������� �����>�� �; � � ����<��� �� ������ � > �

�� ��� ��� �;���� ����� � ��� � �����>�� ��� �� ��� �� �� ��� �� � �����*����� ������= ��

�� � ���� �� ��� ) *��� "�� �� � ��& �� "����� � �� �+ ,�--�. �/�� +

?������� 9 �����*� �����������*@ 9������� � A������ '5 .'%%'2 +B++

%+,67C56+/%%/D 7 ��� ����� ���� � '%%+ �������� #������ ���� !�� ��� �� ���������

E998 #%+,67C56+.%+2%%%+%71

333������������/�����/����

� ?������������ � ��� ����/��8 �$5C7'75+00755$�

01�� � �������2 � �F���������� .�� �����2�

G�� ���� ���� �= �<� ��� ���� ��� �� � �����*����� ������= � �� �� �������� �� � ���� �

�� ������ � ��� �<��< �<������ ��� ��� �� � ������ 5��>� �� 6��>� 4� � � ���� �;���� ����� �

��� �� �;����� ��������� �� � ������ � ��� �������� �� � ���� ��� �� ��� �� ����<������ �� �

���� ��� ��� �� ���� �� ��9H� �� � ��������< �� 5��>� 4� � ���>� �;���� ����� � ��� � �����<

6��>� 4� �� � '%%+ �������� #������ ���� !�� ��� �� ���������

��� ���38 9�������� ������� .��� ���2( E����*����� ������= �( :����� �( E� ���( #��

� ������������

� � � �� ��� ��� ��� � ��������� 3� � �3� �� ��� �� �� �������� ������� ��������

�* � � �������� �� ���� ����� ��������� �� �� ����� �� ����� ����������� ���� ���

�� ����� �� ����� ����� I+B1J� � � � �� �� ����� �� ������� ������ ��� ��������

������8 � �* * �� ������� �� �� ������������� �� ��*��� I$�,�C�+%B+'J� � ��������

� �* �� ���������* � �� ���� �� ��4 �* ������ �* ��*���7������� ���� ������ ��

����� ������������ K����� ������ � � ����� �� ����� ����������� �� � � � �� �� ����� ��

�����* ���* ��3 I+B$J� ����� �� � �� ������ ���* ������ ����������� ���� �����7

����� � � ���� ��� ������7���� ������ ����������� �� � � �� �� ���� �� .���� ����� ��

����2 I+B$�C�+$J� � �� �� � �� ���������*� �� � ��� ��3��� � ��������� �*���� I+�'�+$J�

9� ������ ����������� � � � ���� ����������� � � �����* �� � � ��������� �������

�*��� �� ������ �� � �� ���������

������� 3�� ��������� ���*�� ��/�� ��������� � ������� 3� � �3� ��

������� �� ��������* �� ��� ��� ��� � I6�+,B'+J� ?����*� ��������� ��� � �� ����7

��� ��� ���������� �� ������ ����� ��� ���� � �� ���� �� �� ���� ����������� �� � ��

��������

9� � � ������� �� � �� ���� ������ � � � �� � � ������� 3��� 3� �� �������� � �

� �����������* �� � �� �� ����� �� ����� ����������� �� ��� �������� 3�� ��� ��� !/

!�� �/'/0' .L$K'2 ��� �� ������ �� ���� � ����������� 3�� ����� �� � 4��

�� �� �������� ��� ����������

�� �������� ��� ������

!����� �� ���� ���� 9?� .+,B+0 �2 3��� ����� ��� ', ������ � � �� �*� � �

���� 3��� ������� ���� M�� ��� ��� � �����3�8

� ��� � 9 .�� +02N������� ��� � . ��� * ����2(

� ��� � 99 .�� +02N��� �������� ��������* 3�� ��� ��� ��� � !/!�� �/'/01

.L$K'2 .+�5 �� �A5%2(

� ��� � 999 .�� +02 N��� ��4����� ��������������* .����2 3�� �� 7����� ����

.0% �/�� ��3�� 5 �*�2 �� � �� �������� 3�� ��� ��� ��� �(

� ��� � 9: .�� +02N��� ���� ��4����� 3�� �� 7����� ���� .+'% �/�� ��3�� 5 �*�2

�� �������� 3�� ��� ��� ��� �(

� ��� � : .�� +02N��� ���� ��4����� 3�� �� 7����� ���� .',% �/�� ��3�� 5 �*�2

�� �������� 3�� ��� ��� ��� ��

�� � ���� �� ��� ) *��� "�� �� � ��& �� "����� � �� �+ ,�--�. �/��'

� � ��� ����� �� ��� ��� ��� � �� ��� 3��� ��������� �� � � 5B0� �* ���� ��� �

���� ����� I,�5�'%J� � �������� � � ���� .�� 1 ��� �� �*� ��� ��� �2 3��� ����M��

�� � � 5� �� �� � � 6� �*� �����������*� � ��� 3��� ���� ��� 3�� ���7���� +�+5O P?�

�� 3��� ��������� � ,�? �� %�+ � P�K7� ��� �� � ����� �L 6�,� +8$ .38�2� � �

����� 3� ���������� � � ���� � �������� �� � � ����� 3��� ���� � ,�? �� 3���

��� �������* ���� ��������� �� ������ ���M��� ����� ������������

���� �������� *�� .�A!2 3� ��*�� �* LE�?� ��� ������� � �� ��7

����� �� 5% � P�K7� ��� �� � ����� �L 6�, .,�?2 3� ��� ��� �� �������

������������ �� ' �/�� � ��� $5% �� + � L?� 3� ���� �� +�% � �� ��7

����� �����3�� �* ������� ����� � +%%% � ! ��� 5 ��� ����� ����� �� ������

����� 3��� ������ �� � � �� ����� � � ������ ��� �� LE�?7��*��� ��

��������� �� ����� �� ���� I''J� ? ������� �� ����������8 ! ������ '%% �?

� �� �?7C5 G:/:9# �������� �� ���� +%'% ������� ��������� ��� E�����

���� .K��3��� ?�������� �� G#!2� �� ���� 6+'5 ��4����� ��� � ���*�� .?��7

������ G#!2 3�� '% �� ���� 3��� ���� � � LE�? �������� 3� �������� ��

# �����#�� ?7+1 +'5 � '�+ .5 �2 ��� � �� ����� � �� ��������� ���7

��������/%�%+5 � 7� ��� ���� ��� .,5855� �8�2 � ��3 ��� �� %�$ �/��� � �

��4����� ��� � 3� +% ��� � � ��������� 3������� 3� $%% ��

:���� � 3� �������� ��� � �� �� ����� � ��������� �* ��� �� �� I'$J �� 3�

��*�� �* LE�? ���� ?7+1 ��� � .'5 � ,�+ 2� � � �� ��� 3� �� ���7�� ���

+8C .�8�2� '% ��/� ��� � ���� ������ � � ��3 ��� 3� + �/��� �� � � ��4�����

��� � 3� '% ��� � � �� �� 3� �������� �* �������� �������� ��������N

���� 'C' �� ��� $'5 ��

���� ������ 3��� �������� ��� ����� �� � �� �������� �� � � �� �� �� -��� �� ��

I',J� !� ��= �� �� � � � ����� �� � �� 3� ��������� � � ����� � 3� ��������� ��

�*��� ���� �� ��� ��� ����������� �� ���4 ���� ������ -�� � �� � ������ � � ������

������* � � � '$' � 3� �� ��� ����� �*��� ���� �����

E������ ������������ 3� �� ��� �* � � �� �� �� ��3�* �� �� I'5J 3�� ������

��� �� ��� � ������� ����� ������������ 3� ��������� �* � � �� �� ��

��� �� �� �� I'0J�

!�� ������� �� ��*���� ���� 3��� ������� ��� !����� ? �� ?��� L����� ?���

������ #�� ? �� ?��

&��73* ��*��� �� ������ .!K&:!2 3� ���� �����3�� �* ����������;� ���� ���

�����M��� ������������ #�������� �����M���� 3� ��M��� � �� %�%5� � � ���������

������ ��� 3��� �������� 3�� "�� E� 9�#�� ����3�� .G#!2� A� 3��� ���������

� ��� #���

�� ������

����� ����������� �� ������ �������� ���� ���� � � ��������� �� ��������� ���� ��

���� ���� ���� ������ ���� ��� � � � ���4���� ����� �� ��� ���� ��� � � � �A! I+B

$J�

� � ��� ��� �� � � �������� � ���4 ���� ����� �� � � ����� �� ��� ��� ��� � ��������

��� �� � �3� �� -��� +� #����M��� ������� �� � ��� ���* ���� ��� �� ����� �����������

�� � ���� �� ��� ) *��� "�� �� � ��& �� "����� � �� �+ ,�--�. �/�� $

3� �� �� �� � � 5� �� 6� �* ���� ��� � ���� ������ �����������*�'�57���� ���'7

���� �� �� � � � � �� ������� �����

:���� � � ����������� ���� �� �����M��� ������� �� ���4 ���� ����� �� ������

� � ������ �� ����7���������� 9� ���� ',% �/�� ��3� � � ������ �� ����� � �� � � ���

3��� ���������� 9� � �� ���� � � ������ �� ���4 ���� ����� �� ����� 3��� ��� ��� �����M7

����* �� �������� 3�� ���7� ��������� �� ��� ���7�������� ���� � � � �* 3���

�����M����* �� �� � � � � �� ������� ����� � � ��� ��� �� ����� �� � � 5� �� 6�

�* ���� ��� � ���� ������

� � �� ������ �� ����� � �� � � ����� ������ �� ���� �A! 3� ��� �� ��� � �

����� ������ �� ���� �A! 3��� �������� �� � 5% �� $%O �� � � 5� �� 6� �*�

�����������* .-��� '2� :���� � � ����������� ��� �� �����M��� ������� �� ���� �A!

�� ����7��������� ����� 9� ���� ',% �/�� ��3� � � ������ �� ���� �A! 3��� � �

�� � �� � � ���������

:���� � ��*� 4�� ���� �� ���������� �� �������� ����� ����� ������������

�� � � ������� �� ��� �������� � ����� * �� ��� � � �������� �������� �� �����

����������� I+B$�0�+$�+6�+CJ� A� ���������� � � ������� �� ����� � �� ����� �� ���

�������� 3�� ��� ��� ��� � �� � �3� �� -��� $� Q� �� �� �����M��� ��� �� � � �����

������� �� ����� � ���� ��� � ���� ������ &� � � 5� �� 6� �*� � � ����� ������ ��

����� � 3��� ��� ��� �� �'7 �� �+�57����� �����������*� �� �������� 3�� �������

����� 9� ��� � ��������� 3�� ����� �� � � ����� ������� �� ��������� ��������

�����M����* �� ����7��������� ���� ������ �� ���7� ��������� ��������

����� �� ���7�����M����* �� �������� 3�� � � ���������

& � � �� �� ���������� 3��� �������� �� ���������� � � � ���� �� ����� �����������

���� ��� �� ����� � �� � ��� �� ��� �������� 3�� ��� ��� ��� ��

�� � ���� �� ��� ) *��� "�� �� � ��& �� "����� � �� �+ ,�--�. �/��,

-��� +� ������ �� ��� ��� ��� � ��������� �� � � ����� �� ���4 ���� ����� �� � � ����� �� ��� ������ �� ����

� ����������� 3�� ����� �� 9� �������( 99� ��� ��� ��� � ���������( 999� ����� � .0% �/�� ��3�2�

��� ��� ��� � ���������( 9:� ����� � .+'% �/�� ��3�2� ��� ��� ��� � ���������( :� ����� � .',% �/

�� ��3�2� ��� ��� ��� � ���������� ��� %�%5 �� ��� 9( ���� %�%+ �� ��� 9( ����� %�%%+ �� ��� 9( ��� ���

�����M��� �� ��� 9( ��� %�%5 �� ��� 99( ���� %�%+ �� ��� 99( ����� %�%%+ �� ��� 99( ��� ��� �����M��� �� ��� 99�

� � ��� � ���� ����� � ��� �����M��� �������� �� ���4 ���� ����� �� � �� ��

� � 5� �� 6� �*N � '7 �� �+�57����� �����������*� �� �������� 3�� � �

�������� .-��� ,2� :���� � � ����������� ��� �� �����M��� ������� �� ���4 7

���� ����� �� � � 5� �*N � 5%O� �� �������� 3�� ���7� ��������� ��

��� � �������� ���� 9� �� ����������� �� ���� � � � � ������ �� ����� � �� ���

����7��������� �� � �� ����� ����� &� � � 6� �* ���� ��� � ���� ������ �����

� � ����������� ��� ��� ��� �� ��� ����� �� ���4 ���� ����� �� �������� 3��

���7� ��������� �� ��� � �������� �����

9� 3� ��� ������� �� � � ��� ��� ��� � ��������� � ����� ������ �� � � � ��

������ �� ���� �A! .-��� 52� #����M��� ������� �� ���� �A! �� � �� 3� �������� ��

�� � ���� �� ��� ) *��� "�� �� � ��& �� "����� � �� �+ ,�--�. �/�� 5

-��� '� ������ �� ��� ��� ��� � ��������� �� � � ����� �� ���� �������� *�� .�A!2 �� � � ����� �� ��� ������

�� ���� � ����������� 3�� ����� �� #�� -��� + ��� ��* ����������

-��� $� ������ �� ��� ��� ��� � ��������� �� � � ������� �� ����� � �� � � ����� �� ��� ������ �� ����

� ����������� 3�� ����� �� #�� -��� + ��� ��* ����������

��� ����

�����)*���"�

� ��� ��

& ��"�����

� ��

�+,�--�.�/��

0

-��� ,� ������ �� ��� ��� ��� � ��������� �� � � ����� �� ���4 ���� ����� �� � � � �� �� ��� ������ �� ���� � ����������� 3�� ����� �� #�� -��� + ��� ��*

����������

�������� 3�� ��������N � ,%O �� � � 5� �* �� �'5O �� � � 6� �* ���� ��� �

���� ������ :���� � � ����������� ��� ���� �� �����M��� ������� �� ���� �A! ��

�������� 3�� ���7� ��������� �� ��� � �������� ����� � � �A! 3� ��� ��� ��

� � ������� ������ �� ��� � �� � � 5� �� 6� �* �� ��� ��� ��� � ���������� � � ������ ��

����� � 3� ��� ����7������������

A� ���������� � � ������� �� ����� � �� � � � �� ����� �������� �* ��� ��� ��� � ��

� �3� �� -��� 0� ! �����M��� ������� �� ����� � ������� �� � �� 3� �� �� �� � � 5� �*

���� ��� � ���� �����N � '%O �� ��������3�� � � ���������:����� � �����������

��� �� �����M��� ������� �� � �� ������ �� ��������� �� �������� 3�� ���7� ����7

����� �� �������� ����� �� � � 5� �* ���� ��� � ���� ������ L�3����� �� � � 6� �*

�� �����M��� � ���� �� � � ������ �������3��� �� �� �� � � � ��� ���3��� � ���������

�� � ���� �� ��� ) *��� "�� �� � ��& �� "����� � �� �+ ,�--�. �/�� 6

-��� 5� ������ �� ��� ��� ��� � ��������� �� � � ����� �� ���� �������� *�� .�A!2 �� � � � �� �� ��� ������

�� ���� � ����������� 3�� ����� �� #�� -��� + ��� ��* ����������

-��� 0� ������ �� ��� ��� ��� � ��������� �� � � ������� �� ����� � �� � � � �� �� ��� ������ �� ����

� ����������� 3�� ����� �� #�� -��� + ��� ��* ����������

�� ���7� ������������ ��� � � � �� ������ �� ������ ����� ��� ��3��� � � ��� ��

� � ������� �����

�� ����������

� � ��� ������� �� ���� ���� �� ���� �� � �� � ��� 5 �� 6 �*� ���� ���� �7

���� 3�� ��� ��� ��� � !/!�� �/'/01 .L$K'2 �� � ������� � � � �� ���� �� ������7

���� ��� ��� ��� � ��������� � ��� ����������� ��� �� � � ������ ������ 3��

� �� ������* ������� �� ���������� �� ����� ����� ���� �� ��� ���

I$�5�'%�'1J� L�3����� � � �� ���� �����*��� � � ��� ����� �� � �� �� �����

���� � ���� ��� ��� ��� � ��������� ���� ������ � �� ��������� * �� ���������

�*8

� ����� ��M������� �� �� ���*���� ���* ���*��� �� ���� �� ���*���� ���� � �

������ ����� ���� ��� ��� ��� � ���� ����� I$�5�0�1�+%J(

� ���������� �� ��� ��� �� *�������� �� ��� ��� ������ I'6�'1J(

� ������� �� E&' �� ���������� �� *���� I$�0BCJ(

� ������� �� E?&' �� ���������� �� ������� ������� I$�0BCJ(

� ������ �� �*�������� ���������� �� ����������� �' �� �� ���� � �� ��������

I$�0�1�+6�'CJ�

!�� � ��� �� ���� �� �������� �* �������� ������ �� � �� ���� � �� ����� I+B

$�0�1�'%�'1J� 9� 3� ��� �������� � � �� ����� �� �� �������� �� ����� �� ������

����� �� � �� ���� ���� �� ��� ��� �������� ���� I$�,�6�'1J� � ��� �3� ���� ��� �� ���

3��� ���3� �� ���� �� ���� ������ I$�,�6�'1J� E��� ��* � � ���* ����� �� ��� ��� ��� �

��������� �� �������� 3�� � � ���������� �� �������� ������ �� � �� �� ������

& � ��� ��� �� �� ���� ������� 3�� � �� �� ������ 9� � � ������� �� �* �� 3�

���������� � � � � ��� ��� ��� � !/!�� �/'/01 .L$K'2 � ��� ���� ������� ��

����� ����������� ���� ��� �� � �� ���� � �� ������ � � ����� �� ���4 ���� �����

�������� �� � +�5B'�%7���� �� � ��� �� �� � 'B'�57���� �� ����� �� ��������

3�� ������� ���� � � ����� �� ���� �A! �������� �� � '5B,%O �� � ��� �� �� �

$%B5%O �� ������ � � �� ������ �� ����� ����������� ����� �� ������ ��������� �� � �

5� �* ���� ��� � ���� ����� �� �������� 3�� � � �� � � 6� �*� E�����* � �� �� � �

�� � � ��� � � �� � � 5� �* ���� ��� ��� ��� � ��������� � � ��� ������� ��

���� ���� ��������� �� ����� �� � �� �� ������ ��������� �� �������� 3�� � �

�� � � 6� �* I,�5�'%�'1J� � � �� ������� � ������ � � �������� ���� �� � � �����

���� ��� �� ���� ����� ��������� �� ����� ����������� �� � � ���������� �� � �

��������� �� ����� �� � �� ���� � �� ��� ��� ��� � ����������

9� �� 3���7���3� � � ����� � �� �������� ��� ���������� �� � � ���� ������ �����

����� ����������� I+�'�1�+$J� 9�� ��������� ����� �� � � ��� �� �� �������� 3�� ����

����� ������������ �� �� ��� �� �� ������ �� ����� ���*��� I+�'�1�+$�'C�$%J� 9� 3� ���

������� �� � � ����� � � ����������� ���� �� �����M��� ������� �� ��� ���7

���� �� ���� ���� ��������� �� � �� ���� �������� ������7��� ��� ��� ��� I$+B

$$J�

�� � ���� �� ��� ) *��� "�� �� � ��& �� "����� � �� �+ ,�--�. �/��1

9� � � ������� �� �* 3� �� �� �����M��� ��� �� � � ����� ������� �� ����� � ����

��� � ���� �����N � 5%O �� � � 5� �* �� �$%O �� � � 6� �* .-��� $2� 9� � ��� � �

������ �� � � ��� ��� ��� � �� � � �������� � ����� � 3� �����* ��������� .-��� 02� 9�

� �� ���� ����� � �������� �����M����* .�� � '%O2 �� � � 5� �* �� � ��� 3��� ���

�����M��� � ���� �� � � 6� �* ���� ��� � ���� ����� �� �������� 3�� ���7��������

�����

& � ����������� ���M� ������ ��* � ���� �� �� I0�1�+5�+6J� 9� 3� ������� �� � �

����� � �����* �������� �� ����� �� � �� �� ���� �������� 3�� ��� ��� ��� �

�*�� ! .!/E�1/$, �� !/E��� ? ����/+/6$2� 9� 3� �������� ���� � � � � ��� ��� ��� �

������ ��� ���* ����� � �������� � � ��� �� �����7 �� 3���7��� ��� ����������� �

3��� � ��������� ���*�� I0�1�+5J� 9� 3� �������� � � � � ������ �� ����� ? ��

�� � ����� ."#L2 �� ����� ������� ���� �� � �� ���� � ������� �����M����* � ����

� � ���* ���� �� � � ��� ��� ��� � ��������� �� ��� ��� �� ���� ������ ��� �� ���������

I6�+5J� Q ���� � ����* ��������� �� "#L7��������� �� ��� ���� ���� ��������

��������� �� � ����������� ��� .#&A2 �� ����� ������� �����M����* ���� ��� ���

��� � ��������� I,�0�1�+5�+1J� � � ��������� �� �� ��������� ���*�� ������� �����M7

����* �� � � ����� �� ���� �������� 3�� ��� ��� ��� � I,�1�+5�+1J� E�����*� � �� ��

� � �� � � ����� ��������� �� � �������� ������ �� L'&' �� ����� �� � �� ���� ��

� � ��������� �� � � ��������� �� ��������� ���*�� �� � � M��� ��������� �������

����� �������� �������

� � �� �� � � � ����� �� ����� ����������� ���� ��� �� ��������� ��� � � �����

� � � ��������� ��������� �� ���� ������ ���� ���� �� � � ���* ���� �� ��� ��� ��� �

��������� �� ����� �� � �� ���� ��

Q� ������� �� � � � � ��������� ����� �� ��� ��� ��� � �� ����� �� � �� 3�

�����M����* �� ������ �����3��� � ����������� �� ���� 3�� ������� � ����� �

.-���� +� '� , �� 52� :���� � � ����������� ��� ���� �� �����M��� ������� ��

��������� ������� �� ����� �� � �� �� �������� 3�� ��� ���7�������� �� ��������

���� � 3��� � �� �����M��� ������� �� ����� ����������� ���� ��� �� �������� 3��

�������� ���� � � ������ �� ����� � �� � � ����� �� ���4 ���� ����� �� ���� �A! ��

����7��������� �� ����� �� ����7����������� �� � ��� � �� ���������� �� ��� ������ *

�� ��������� � ���� �� ���� �* � ��� ��������� ���* ��� �� � ��� ������ ����������� 9�

�� 3���7���3� � � � � � �� �� ���* ��� ���� ���* ���� �� � ��� ������� �� � �� ��

��3�� �� �������� 3�� � � �� ����� I+B$J� :���� � �� ������ ����������� ��

����� ��� �� ��� 3�� �� ������ �� ���*����� ���* ���� �� � ��� �������N� �

4�� � ������� �� ����� ����������� I+B$�$,J� E�����*� ���� 0% �/�� ��3� �� ��� �

�� �� ��� � �� ������ 3�� ����� �� � � ��� ��� � �� �� ��� ����� ��� �7

� ��� �� ������ 9� 3� ��� �������� � � � � � ����������� �� ��� 3�� ����� � ��

����7��������� �� ����� �� ����7����������� �� � �� .-���� $ �� 02� E�����*� � �

��������������* ����������� �� ����� � �� ��� �� � � �������� ������ ��� � � ������7

����� ���3��� ��� ������� �� ��� �������

��*��* �� L*�� I$5J ���������� � � ����� � � ����������� �� ��� ���7

�������� ��� �� ���� ����7������ � ���* �� �������� ����������� �' ���� �7

���� �� ��� ����� ����������� ������� E�����*� � �� ������ �� ����� � �� � � ��

�*�����*����� � ��������� I$0�$6J� L*�� �� �� I+6J �� L� �� �� I$1J ��� �� ��

� � ����� � � ����������� ��� �� ������� �� ��� ��� ���� ����� �� � �* � ������

�� � ���� �� ��� ) *��� "�� �� � ��& �� "����� � �� �+ ,�--�. �/�� C

� � � �� ������ �� ������ � �� � �� ������ �� � ����� + �*�������� 3 �� * �� � �

��� �� �� ��� ��� ����������� �' ���� ����� � ��� �* ����� �� � �� � � ����M���

������ �� ����� � �� � �� ������ ��� ���* � �� � � ��������� �� ����� ������������

� � ��� � �� � �� ����� �� �*������ �� ����������� ���� ����� �������� �� � �

�� �������� �� ��� ��� ��� �� !������� ���������� �� ����� � * ��� �� ������ ��

� � ���������� �� ��������� 3�� ���� ������� 3 �� �� ����� ��� � ���������� ����

� � � �� ������ � 3��� � � ����� �� � � ���� �������� � � � ���� ����� ��

��������� �� ��� ��� ��� � �� � � � �� I$CJ�

?����*� ��������� ��� �� �� ����� ���* ����� �� �� ������� ��� ���������� �� � ��

�� ����� ����� ��� ��� ��� � ����������

������

I+J #���� �-� -���7����� �� ���� �� ���� � ��4 �*� ���� � ) +C1,('''8+B+5�

I'J P�� :�� ����� ����������� �� ���������� ��� ����� -�8 ?�? E����� +C11�

I$J ?��� )� A���� !� !�� �� &�*��� ������ �� � �� �� ����*� -��� �� ���� ��� +CC+(C8$1+B,%%�

I,J "��� ��� K:� :������ !:� ��������� 9: ������ K&� !���� K-� P������ &9� � � �������� �� ����

����� ������� �� �� ����� �� ��������� ������* �� ����� ���� ����� ���������� ��� ��� �����7

����� � �� ��� ���� ��� +CC'(++,.628,'B,,�

I5J ? �� !�� P����� P� &�������� #�� ���� A!� )����� &����� ������ ��������� �� ��� ��� ��� �

��� ���8 ���� ���������� �� ������������ ����� ��������� ! ) E *���� +CC0('6+.$ �� +28�$1$B

�$C+�

I0J E���� �� �� &������ �� ���������� �� ���� �������8 A����� �� ���� �� ������� ��� ������

��� ���� .Q� ������ A?2 +CC0(+68C0'5BC055�

I6J E���� �� �� ������� ��*��� ������� �� ������ ����� �� ���� �������� ���� ���� ������ ���

+CC6(508+%6B++5�

I1J #� 3�� P�� &������� ������ � ���� ���� ���������8 �����3� -��� �� ���� ��� +CC0('+.5280,+B0,C�

ICJ P����� �� A� ���� A� ������� � �����������* �� �������� ��� � ��� ���� ������ �����*� ���� ��

������ �� ����� ������������ ������ +C1%(+58$+5B$''�

I+%J � �M���� "A� ? ������ #� E���� �� �� #������ �� &������� ������ �� � ��� �� ��� �������� 3�� ��� ���

! ��� �� -��� �� ��� ?� � +CC'(+0.'28CCB++%�

I++J R�� ��3 �� ���� L� �� � � #� 9� ��3 L� P���� �� ? ���� �� ���� � ��������� ���*�

��������� �� ����� ��������� �� ���������7��� ��� ������ ���� ��� ��� ?��� # ��� +CC,(,'.+285$B51�

I+'J P��3 L� # �4� #� R�� ��3 �� L��� P� R�� ��3 )� 9������� ���� ����� �� �������� � ������

����� �� ������� 3�� ����� �� �� �� � ����� ����� ����� � ����* ������� ?��� ��� !�����*

+CC1('1.+%28+',,B+'5%�

I+$J E���� �� - � )� :���� �8 ���� �����* �� ��� ����������� K�3 R���8 ����� A������ +CC'�

I+,J ? ������ #� E���� �� �� #������ �� !��������� ��������� �� ��� ��*���� � ���������8 �������� ����7

����� ��� ������* �������� E��� K�� !�� #�� G#! +CC%(168'5%0B'5+%�

I+5J L����� �� E���� �� �� #������ �� !��������� �� ��������� ������� �� � �� �� ����� �� ��� �������� 3��

��� ��� ! ��� �� ) "�� :���� +CC'(6$.�� +28$CB,0�

I+0J )���* A�� ? �� !�� 9�� ��� ��� � ��� ��� ���������� �� ��������� ����� �� � ���� ���� ������

-��� �� ���� ��� +CC,(+0.0281'+B1',�

I+6J L*�� �"� �*��� -#� ������ �#� L� #K� ��*��� �� #�� A�� �� ���� #� ��*��� #K� :���� �

� ����������� �������� � �� ��� � ������ �� ��� �������� 3�� ��� ���� ) 9���� A�� +CC6(+608'6$B'60�

I+1J �*��� �� #����� �� ���� �������8 ���� �� *��� ����� ) &�� ��� +CC6(+'.,28''6B'$C�

I+CJ ����� �� ��� �� �� ����� �� "���� !� #��� :� ������ #� ������ �� ����� � �� �����

����������� �� ����� �����*����� ������* �� ���������� ��� ��� ��� � ���������� ������� ����

'%%%(++,8$CB,5�

�� � ���� �� ��� ) *��� "�� �� � ��& �� "����� � �� �+ ,�--�. �/��+%

I'%J &� �� !���� �� L��� �� # � �� -� L���� �� ��� L� &�*��� ������ �� ��� ���7��� ���

�� �������� �� ������� 3�� �*�� ���*��7���4 ���� #&A� #������ +C1C(',,8C6,BC60�

I'+J #��3��� �Q� L ��� )L� ����* PQ� Q��� �L� K���� !� E��� !� 9� ������* ������� �� ���������

������ � �������� ��� ��� �� ��� ��� ��� � ���������� �� ���� !�������� !����� ? ��� ��

+CC0(,%.++28'0'0B'0$+�

I''J ����� �� ������� P����� ? � ������ :� ������ #� A���������� �� �������� *�� �� ���������

����� �* �����7� �� ��������� �� �� 7��������� ��= �� � ������� *� ��� ��� -��� ��� ?���

E ���� '%%%(''.528'06B'0C�

I'$J ��� )� "� �� �� E���� �� #� ����� � ����������� �� ����� ������ ��= ������ �� ������ ���� ���� �

��������� �� � ����� �� ��������� !�� ���� � +C10(+568+%0B++0�

I',J -��� )� ���� �� # ���7#����* L?� ! ����� �� �� ��� � � �������� �� � ��M����� �� ���� ����� ���

��� ���� ��� ) ���� ? � +C56(''08,C6B5%6�

I'5J ��3�* &� �������� � K� -�� !� ����� �� E������� �� ����� 3�� � � -���� � ���� ������� ) ����

? � +C5+(+C$8'50B'6'�

I'0J ��� �� )� L���* �A� A���� ?� ?������ � �����*8 E��������� �� ��� ��= ��� '�� ��� K�3 R���8 L����

�� ��3� +C6, ��� +,01B+,6+�

I'6J !���� �� !��� �� &� �� A�� �� 94��� #� !��� #� ��� L� A��������� �� � �������� ��������� �*

��� ��� ������ �� �� �������� �� ��� ��� ��� � ��������� �� ���� ) ?��� 9����� +CC%(15.$286$CB6,5�

I'1J !���� �� K�� � � R� 94��� #� #���� � � P� # � �� S ��� R�� A������ ��� �� ��� L� E� �������� ��

��� ��� ��� �7��� ��� ��� ���8 9��������� �� ��� ������ ����� �� ��*��� ������� E��� K�� !��

#�� G#! +CC0(C$8',,1B',5$�

I'CJ E � L�� �� ���� E!� ���������� �� ��� ��� ��� � ��� ����� ������� ������������ ����� K-7���

�� ) :���� +CC5(0C.$28+,1%B+,1,�

I$%J P�� :� E���� �� #������� �� ����� �� #��*�����* A� S ���� S� L��� � �� P����� #� ����7

��� A� ��� ���� �� ����� � ������� �� ����� �����������8 ������������ �*������� �*���*�

������� �� ��� � ������� 9�8 ����* ?� ������� ������*�� �������� �*����� K�3 R���8 !�����

E����� +CC%� �� 5B+$�

I$+J P��� �� #� ����� �� ������ #� 9���������� ������ �� ���� ����� ����������� �� � � �� � ����

"�� E *���� ���� *� +CC,(+$8,0CB,1'�

I$'J !�4��� � �� ����7P���� �� ����� E� !� � L� 9� � ��� � �������M�� ������� �� ��� �����

��������� �� � ���T� -��# ���� +CC0($1,.'28+'1B+$%�

I$$J �� �� �P� )������ ?� ����� ����������� �� � �� � ������ �* ������� � �� +CCC(+66.'28+%+B++%�

I$,J P�� :� #������� �� ����� �� #��*�� �� �� ���� !� E������� �� ���������� �� ��� ��� ��

����������� �� ��������� �* �� 7����� ����� ���� � E ���� +CC%(,%.++28',%$B',+$�

I$5J P�� :� ����� �� S ���� S� #������� �� ������ #� E���� �� 9��������� ������� �� �� 7

����� ���� �� ��� ����� ��� 9�8 E� �� �� - � � )� �������� :���� �8 ���� �����* �� ��� �����7

������ K�3 R���8 ����� A������ +CC'� �� +6+B+61�

I$0J ��*��* #K� L*�� �� :���� � �� � �� ��������� 9�8 ? ��� �P� ������� E���������� �� � �

9���������� ?������� �� K ������� �� 9 ���* ? ���� #�� )� ��� ?��8 !��# �������� E ���� 7

��� �� A������ ����� +CC'� �� +%5B+'1�

I$6J ��*��* #K� ��*��* �� :����� ?E� # ��� !?� �� ���� )�� L*�� P?� :���� �� � �����������

� �������� ����������� �' �*�� ���� �� �� ���� � � � �� �������� �� ��� ���� ��� !����� A��

+C10($,8+C+B'%+�

I$1J L� #K� Q A� L QP� �� �� !� #�� A�� ������ �#� ��*��* #K� :���� �� � �����������

�������� � ����� + �*������ ���� ����� �� ��� ��� �������� 3�� ��� ��� ��� �� 9 �����*

'%%%(+%%.,28,16B,C$�

I$CJ ���������� :!� P��� � #� � � �� A)� S������� )!� P ���������� 9"� 9��������� �� ��� ��� ��� �

�������� 3�� ���� ���*�� ����� ������� ���� � ���� *� !�� +C1,(661.'28'60B'1%�

�� � ���� �� ��� ) *��� "�� �� � ��& �� "����� � �� �+ ,�--�. �/�� ++