Prinsip Pemeriksaan Polimorfisme Panjang Fragmen restriksi (RFLP)

Analisis RFLP (polimorfisme panjang fragmen) pengukuran fragmen restriksi DNA yang

mengandung urutan pendek yang bervariasi dari satu orang ke orang lain, yang disebut SRTNV.

Setelah mengekstrak DNA dari sampel dan memperkuat itu dengan teknik yang dikenal sebagai

Polymerase Chain Reaction, seorang teknisi menambahkan enzim restriksi yang memotong

DNA pada titik-titik speci Fragmen yang dihasilkan dapat diurutkan menurut panjangnya

menggunakan teknologi elektroforesis gel untuk menentukan seberapa sering suatu pengulangan

VNTR diberikan.

RFLP adalah salah satu aplikasi pertama analisis DNA untuk penyidikan forensik. RFLP

adalah salah satu aplikasi pertama analisis DNA forensik untuk penyidikan. Dengan

perkembangan baru, teknik DNA-analisis yang lebih efisien, RFLP tidak digunakan sebanyak

dulu karena membutuhkan jumlah yang relatif besar DNA. Selain itu, sampel rusak oleh faktor

lingkungan, seperti kotoran atau cetakan, tidak bekerja baik dengan RFLP.

Source : www.dnatech.com/ rflp .htm

Polimorfisme Panjang Fragmen restriksi (RFLP) analisis ukuran fragmen DNA yang

mengandung urutan pendek yang bervariasi dari orang ke orang, disebut VNTRs.

Polimorfisme Panjang Fragmen restriksi (RFLP) adalah teknik di mana organisme

dapat dibedakan dengan analisis pola yang berasal dari pembelahan DNA mereka. Jika dua

organisme berbeda dalam jarak antara situs pembelahan pembatasan tertentu

endonuklease, panjang fragmen yang dihasilkan akan berbeda ketika DNA dicerna

dengan enzim restriksi. Kesamaan pola yang dihasilkan dapat digunakan untuk

membedakan spesies (dan bahkan jenis) dari satu sama lain.

Polimorfisme diwarisi perbedaan ditemukan di antara individu-individu di lebih dari 1%

dari populasi normal.

Aplikasi RFLP:

RFLPs dapat digunakan dalam pengaturan yang berbeda untuk mencapai tujuan yang berbeda.

1. RFLPs dapat digunakan dalam kasus-kasus ayah atau kasus kriminal untuk menentukan

sumber sampel DNA. (Yakni memiliki aplikasi forensik).

2. RFLPs dapat digunakan menentukan status penyakit individu. (Mis. bisa

digunakan dalam deteksi mutasi muations terutama dikenal)

3. RFLPs dapat digunakan untuk mengukur tingkat rekombinasi yang dapat menyebabkan

genetik peta dengan jarak antara lokus RFLP diukur dalam centiMorgans.

Endonuklease pembatas adalah enzim-enzim yang memotong DNA molekul pada nukleotida

spesifik urutan tergantung pada enzim tertentu yang digunakan. Pengenalan enzim biasanya 4

sampai 6 basis pasangan panjangnya. Umumnya, semakin pendek urutan pengakuan, semakin

besar jumlah fragmen yang dihasilkan. Jika molekul berbeda dalam urutan nukleotida, fragmen

ukuran yang berbeda dapat dihasilkan. Fragmen dapat dipisahkan dengan elektroforesis gel.

enzim restriksi terisolasi dari berbagai bakteri dan diperkirakan

menjadi bagian dari pertahanan sel terhadap invasi virus bakteri. Enzim ini

dinamai dengan menggunakan huruf pertama dari genus, dua huruf pertama dari spesies, dan

urutan penemuan.

Isolasi DNA yang cukup untuk analisis RFLP memakan waktu dan tenaga.

Namun, PCR dapat digunakan untuk memperkuat jumlah yang sangat kecil DNA, biasanya

dalam 2-3 jam, ke tingkat yang diperlukan untuk analisis RFLP. Oleh karena itu, lebih banyak

sampel dapat dianalisa dalam waktu pendek.

Contoh penggunaan RFLP di Mengetik DNA:

1. Ekstraksi

Langkah pertama dalam mengetik DNA ekstraksi DNA dari sampel, baik itu darah, air

liur, air mani atau beberapa sampel biologis lainnya.

2. Pembatasan Produksi Fragmen DNA dimurnikan kemudian dipotong menjadi

fragmen oleh enzim pembatas.

3. Elektroforesis

Fragmen restriksi memiliki muatan negatif dan dapat dipisahkan oleh

teknik yang disebut Gel Elektroforesis, yang memisahkan potongan-potongan DNA

berdasarkan ukuran mereka.  Sampel DNA yang telah diperlakukan dengan enzim

restriksi yang ditempatkan di jalur yang terpisah pada slab gel elektroforesis di seluruh

yang menempatkan sebuah medan listrik. Fragmen bermigrasi ke arah elektroda positif,

fragmen yang lebih kecil bergerak lebih cepat daripada fragmen yang lebih besar,

sehingga memisahkan DNA sampel ke band berbeda.

4. Deteksi Band-band dapat divisualisasikan menggunakan pewarna luminescent;

Pendekatan DNA yang diperlukan cukup mencetak sampel bahan biologis

dalam rangka untuk mendapatkan hasil yang wajar. Untuk forensik yang lebih modern,

RFLP telah digantikan oleh metodologi berdasarkan reaksi berantai polimerase yang

hanya memerlukan waktu dalam hitungan menit saja.