PROPOSAL PENELITIAN 2.doc

7/25/2019 PROPOSAL PENELITIAN 2.doc

1/42

BAB I

PENDAHULUAN

1.1 Latar Belakang

Dalam menjalankan kehidupannya, manusia tidak terlepas dari agen

kontaminasi dimanapun dan kapanpun. Bila terus-menerus terpapar oleh agen

kontaminasi tanpa didukung oleh sistem tubuh yang kuat, maka dapat

menimbulkan penyakit. Ada dua hal yang menjadi kontaminan, yang paling

berpengaruh pada kehidupan sehari-hari manusia, yaitu radikal bebas dan

mikroba. Indonesia sebagai negara berkembang mempunyai keterbatasan dalam

penanggulangan masalah kesehatan, yaitu penyakit infeksi masih tinggi, tetapi

prevalensi penyakit degeneratif makin meningkat (Werdhasari, !"#$. %enurut

hasil riset kesehatan dasar, penyebab kematian utama adalah stroke ("&,#'$,

diikuti tuberkulosis, hipertensi, dan idera (),&-*,&'$, serta diabetes melitus dan

tumor (masing-masing &,*'$ (Badan +itbangkes Depkes I, !!*$. emua

penyakit tersebut ialah hasil dari radikal bebas sehingga radikal bebas masih

menjadi kontaminan utama penyebab kematian di Indonesia.

adikal bebas merupakan hasil atau produk dari berbagai polutan, seperti

asap rokok, radiasi, pestisida, asap kendaraan, bahan-bahan kimia, dan makanan

yang beraun atau makanan epat saji yang sarat bahan pengaet (etiati, !!/0

ibuea, !!#$. adikal bebas ini sangat berbahaya terutama terhadap kesehatan,

karena sifatnya yang sangat tidak stabil. 1etidakstabilan disebabkan oleh adanya

atom yang memiliki satu atau lebih elektron yang tidak berpasangan. 2lektron

tunggal ini selalu berusaha untuk menari pasangan elektron dari molekul lain


2/42

2

sehingga sifatnya sangat reaktif. Dalam keadaan normal terdapat kesetimbangan

antara produk radikal bebas dengan netralisasi oleh suatu sistem antioksidan tubuh

(1aryadi, "33*$. 4ika jumlah radikal bebas melebihi kemampuan tubuh

menetralisirnya maka dapat menyebabkan stress oksidatif (itompul, !!/$ yang

dapat memiu kerusakan molekul makro pembentuk sel, seperti protein,

karbohidrat, lemak, dan deoxyribose nucleic acid (D5A$, akhirnya sel menjadi

rusak dan menyebabkan penyakit degeneratif seperti kanker (1aryadi, "33*0

uryohudoyo, !!!$.

6enegahan timbulnya penyakit yang disebabkan oleh radikal bebas ini

harus diperhatikan. Dengan kata lain, asupan antioksidan dari luar sangat

dibutuhkan. Antioksidan adalah 7at yang dapat menetralisir radikal bebas

sehingga elektron yang tidak berpasangan mendapat pasangan elektron dari

antioksidan sehingga radikal menjadi stabil (%8A, !!&$.

elain radikal bebas, maka tak kalah halnya mikroba ikut berperan

menjadi sumber yang sangat potensial penyebab penyakit pada manusia. 8al ini

dikarenakan mikroba berada dimanapun. Ada yang hidup di dalam tanah,

lingkungan akuatik, berkisar dari aliran air sampai pada lautan, atmosfir, kulit

manusia, hingga menjadi flora usus normal di dalam tubuh manusia, seperti hanya

Staphylococcus aureus dan Escherichia coli. %ikroba merupakan jasad hidup

yang ukurannya keil. Dikatakan mikroba karena bukan hanya karena ukurannya

yang keil, sehingga sukar dilihat dengan mata biasa, tetapi juga pengaturan

kehidupannya yang lebih sederhana dibandingkan dengan makhluk tingkat tinggi.

(umarsih, !!/$.


3/42

3

6ada saat sekarang ini, studi tentang mikroba lebih berfokus kepada

masalah resistensi. 8asil penelitian menunjukkan baha terjadi peningkatan

jumlah kasus bakteri patogen resisten antibiotik. 9ahun !!& lebih "3.!!! kasus

kematian di Amerika dan Inggris disebabkanMethicillin resistantstaphylococcus

aureus(%A$ (1ennedy, dkk., !!3$. 1asus kematian yang disebabkan %A

meningkat tajam dari &" kasus pada tahun "33/ sampai ")& tahun !!) di

Inggris. train Aeromonas hydrophyladanAeromonas veroniiyang diisolasi dari

air minum, pasien rumah sakit, dan daging menunjukkan resisten terhadap

ampisilin, amoksilin, sefasetril, klokasilin, linkomisin, spiramisin, dan penisilin :

(;ro7ova, dkk., !!b. (Guttiferae, Cluciaceae$, seara umum dikenal

dengan nama kandis di Indonesia atau asam kandih (umatera Barat$ dan cha

muang(9hailand$. 9anaman asam kandis telah banyak digunakan oleh masyarakat

pada hampir seluruh bagiannya, seperti batang, kulit batang, daun, bunga, buah,

akar, dan getah. Di Indonesia, buah kering asam kandis umumnya digunakan

sebagai bumbu masak, sedangkan di 9hailand air seduhan dari kulit batang asam

kandis telah digunakan untuk menurunkan panas (antipiretik$ (Darati, dkk.,

!!3$. Daun dan buah telah digunakan untuk memperlanar peredaran darah dan

pengener dahak pada batuk pilek (6anthong, dkk., !!)$.

9umbuhan :arinia ini kaya dengan metabolit sekunder, terutama

triterpenoid, flavonoid, >anton, dan florogusinol. ?anton dan florogusinol

merupakan penanda kemotaksonomi untuk genus ini. (Wahyuni, dkk., !"&$.

Beberapa penelitian yang telah dilakukan diketahui baha tanaman asam kandis


4/42

4

mengadung >anton, >anton terpenilasi, maupun >anton tetraoksigenasi pada

hampir semua bagiannya seperti pada akar, batang, kulit batang, daun, buah, dan

getahnya (Wahyuni, dkk., !!#0 %ahabusarakam, dkk., !!&0 hen dan @ang.,

!!&0 6anthong, dkk., !!)0 Darati, dkk., !!3$.

Dari kulit batang asam kandis berhasil diisolasi senyaa >anton

tetraoksigenasi ditetapkan sebagai koanin yang mempunyai aktivitas antikanker

payudara 9#*D (Dahriyanus, dkk., !!3$, dan telah diisolasi juga senyaa

rubraxanthone (+ee, dkk., "33*0 %ahabusarakam, dkk., "3


5/42

5

alam sangatlah banyak dan jarang digunakan bila dibandingkan bagian tumbuhan

lainnya sehingga perlu dieksplorasi lebih lanjut. 8asil peneltian sebelumnya, telah

dilaporkan beberapa senyaa potensial dari fraksi diklorometana dari daun G.

cowa, yakni methyl .!."#trihydroxy#$#($#methylbut##enyl$ben%oate0

garcinisidone#A0 dan $#(methyl##butenyl$#&,!#ben%o'uinone. enyaa-

senyaa ini memiliki aktivitas sebagai agen sitotoksik terhadap sel kanker

payudara (%-*$ dan paru-paru (8-#)!$ (Wahyuni, dkk., !"&$. 5amun, sejauh

ini belum ada penelitian tentang uji antioksidan dan antimikroba dari daun G.

cowa o>b. Dengan demikian, peneliti tertarik untuk menguji antioksidan dan

antimikroba sumber kandungan senyaa kimia aktif dari daun G. cowa namun

dari fraksi yang berbeda yaitu fraksi heksana. 8al ini dapat dilakukan karena

diklorometana dan heksana memiliki tingkat kepolaran yang berbeda.

%etode yang digunakan untuk penelitian ini meliputi ekstraksi dengan

ara sokletasi menggunakan pelarut heksana. Alasan pemilihan ekstraksi dengan

ara sokletasi ialah agar terapainya ekstraksi senyaa seara sempurna dengan

pelarut yang sesuai sehingga akan didapatkan lebih banyak ekstrak bila

dibandingkan dengan ara ekstraksi lainnya. 2kstrak dari fraksi heksana yang

diperoleh diuapkan seara in vacuo hingga didapatkan ekstrak kental fraksi

heksana.

raksi yang didapatkan diuji aktivitas antioksidan dan antimikrobanya.

6engujian aktivitas antioksidan dilakukan dengan metode pengukuran serapan

radikal "," difenil--pikrihidra7il (D668$ (2lsyeida, !!&$. 6engujan aktivitas

antimikroba dilakukan dengan metode difusi agar melalui pengamatan terhadap

besar diameter daerah hambatan.


6/42

6

1.2. Rumusan Masalah

Berdasarkan latar belakang di atas, maka rumusan masalah penelitian

adalah C

". Bagaimana aktivitas antioksidan dari fraksi heksana daun Garcinia

cowa o>b.

. Bagaimana aktivitas antimikroba dari fraksi heksana daun Garcinia

cowa o>b.

1.3. Tujuan Peneltan

=ntuk menjaab rumusan masalah di atas, maka tujuan penelitian

adalahC

". %engetahui aktivitas antioksidan dari fraksi heksana daun Garcinia

cowa o>b.

. %engetahui aktivitas antimikroba dari fraksi heksana daun Garcinia

cowa o>b.

1.!. Man"aat Peneltan

%anfaat dari penelitian ini yaitu untuk mendapatkan informasi ilmiah

tentang aktivitas antioksidan dan antimikroba dari fraksi heksana daun Garcinia

cowao>b. sebagai sumber bahan obat baru yang potensial.


7/42

BAB II

TIN#AUAN PU$TA%A

2.1 Tnjauan B&tan Garcinia cowaR&'(.

2.1.1 %las"kas

9umbuhan Garcinia cowa o>b. dikategorikan sebagai berikut

(9jitrosoemo, "33/$ C

1ingdom C 6lantae

Divisi C permatophyta

ub Divisi C Angiospermae

1elas C Diotyledoneae

;rdo C :uttiferales

amili C :uttiferae

:enus C :arinia

pesies C Garcinia cowa o>b.

2.1.2 $n&nm )an Nama Daerah

Cuithe(era, )angach, )u*ithe(era, )au, Cowa (India$, +un an Shan

-hu -i, +un Shu (ina$, )owa Ganbo*i (4epang$, )andis (%alaysia$, )aphal

(5epal$, ildis, aninginen, /ilu(au (ilipina$, 0oc, 1ai Chua (Eietnam$ (+im,

!"$.


8/42

8

2.1.3 M&r"&l&g Tum(uhan

Garcinia cowa o>b. merupakan tumbuhan khas Asia yang banyak

tersebar di Asia 9enggara dan ina 9enggara (ong, dkk., !"/$. 9umbuhan ini

termasuk pohon keil hingga menengah, berabang, hijau, tinggi batang ,&-),! m, hijau mengkilap, tebal, meruning pada kedua ujung daun,

dengan "-"< pasang tulang daun. Daun muda lembut dan berarna kemerahan

hingga perunggu (+im, !"$. Bunga uniseksual dan buah bulat berukuran ,&-),!

m, hijau ketika muda, dan kusam, dan kuning ketika masak (itthiigrom, dkk.,

!"/$. %orfologi tumbuhan :.oa seara umum dapat dilihat pada gambar .".

:ambar ." Bagian tumbuhan Garcinia cowaC (a$ dahan, (b$ kulit kayu dan

getah, ($ susunan bunga ditangkai, (d$ daun, (e$ buah muda

(+aphookhieo, !""$

2.2. %an)ungan %ma

Garcinia cowa o>b. (Guttiferae$ di umatera Barat dikenal dengan

nama asam kandis. :arinia kaya dengan metabolit sekunder, terutama

triterpenoid, flavonoid, >anton dan florogusinol. ?anton dan florogusinol


9/42

9

merupakan penanda kemotaksonomi untuk genus ini. tudi aktivitas biologis pada

spesies ini menunjukkan baha daun memiliki aktivitas antitumor sementara kulit

kering memiliki aktivitas antimalaria (Wahyuni, dkk., !"&$.

1omposisi kimia dan aktivitas biologis dari berbagai bagian dari G.

cowatelah dilaporkan. +aporan sebelumnya pada daun segar, buah, dan kulit buah

kering dari G. cowatelah dilaporkan dan ditemukan baha (#$#hidroxycitric acid

dan konstituen laktonnya merupakan komponen utama (4ena, dkk., !!$.

6ada kulit batang terdapat FE,"E,&2EG#(3$!a#hydroxy#$#methyl#4a#

($,5,&&,&4#tetramethyl#,",&2,&!#hexadecatetraenyl# cyclohexen#one6 #($#

methyl##butenyl$#&,4,"#trihydroxy#$#methoxy#!#& (&,dimethyl##propenyl$#78#

xanthen#7one0 dan rubraxanthone (Wahyuni, dkk., !!#$, koanin (Darati,

dkk., !!3$, koanol, koasanton, dan norkoanin (5a 6attalung, dkk., "33#$.

Di samping itu juga terdapat #(#methyl##butenyl$#&,4,"#trihydroxy#$#methoxy#!#

(&,dimethyl##propenyl$#78#xanthen#7#one9 &,$,"#trihidroxy#5#methoxy#!#

(acetoxy#$#methyl##butenyl$#:#($,5#dimethyl#,"#octadienyl$xanthone(Wahyuni,

!!3$.

6ada kulit buah terdapat senyaa >anton tetraoksigenasi, yaitu

koa>anton A-2 (6anthong, dkk., !!)$. 6ada getah berhasil diisolasi lima

senyaa >anton, yaitu cowagarcinone A-2 (%ahabusarakam, dkk., !!&$,

senyaa >anton terpenilasi, yaitu &."#dihydroxy#$,5#dimethoxy##($,5#

dimethyloct#,"#dienyl$ xanthone ($#;#methylcowaxanthone$ (5a, dkk., !"/$.

6ada bunga mengandung senyaa cowanone, H-mangostin, -mangostin,

cowanin, fuscaxanthone A, 7#hydroxycalabaxanthone, garcinianone A, dan

cowanol(9risuan, !"$.

6otensial daun G. cowa dari daerah umatera Barat, Indonesia telah

dilaporkan. 9iga senyaa, yaitu methyl .!."#trihydroxy#$#($#methylbut##


10/42

10

enyl$ben%oate ("$, garcinisidone-A ($, dan $#(methyl##butenyl$#&,!#

ben%o'uinone(/$ telah berhasil diisolasi (Wahyuni, dkk., !"&$.

2.3 %hasat )an %egunaan

Banyak dari bagian G. cowatelah dimanfaatkan pada obat tradisional.

6ada kulit, getah, dan akar telah digunakan sebagai agen antipiretik

(%ahabusarakam, dkk., !!&0 6athong, dkk., !!3$, sedangkan buah dan daun-

daun digunakan pada gangguan penernaan, meningkatkan sirkulasi darah, dan

sebagai ekspektoran (6athong, dkk., !!)$. Beberapa senyaa farmakologis

seperti promosi antitumor (%urakami, dkk., "33&$, penghambatan peroksidasi


11/42

11

(+ikhititayauid, dkk., "33

Bunga G. cowa o>b. aktif menghambat pertumbuhan bakteri

Staphylococcus aureus (A$ dan Methicillin resistant staphylococcus aureus

(%A$ (9risuan, !"$. Buah segar tumbuhan ini memiliki aktivitas

antibakteri terhadap Staphylococcus aureus A9 &3/ dsn %A 1"

(6anthong, dkk., !!)$. 1ulit buah G. cowa o>b. memiliki efek sitotoksik

terhadap sel kanker payudara 9#*D, menghambat pertumbuhan bakteri gram

positif, seperti /acillus cereus, /acillus coagulans, /acillus subtilis, dan

Staphylococcus aureus, dan bakteri gram negatif, sepertiEscherichia coli (5egi,

dkk., !!


12/42

12

9eknik ekstraksi senyaa organik bahan alam yang biasa digunakan

antara lain maserasi, perkolasi, infudasi, dan sokhletasi. 6emilihan jenis metode

biasanya dilakukan berdasarkan pengalaman peneliti maupun hasil penelitian

yang telah dilaporkan sebelumnya (8oestettman, 1., dkk., "3


13/42

13

ini tidak memerlukan tahapan penyarian perkolat, namun kerugiannya adalah

aktu yang dibutuhkan lebih lama dan jumlah penyari yang digunakan lebih

banyak (B6;%, !"/$.

2.!.2 Ekstraks Panas

2.!.2.1 Re"luks

efluks adalah ekstraksi dengan pelarut pada temperatur titik didihnya,

selama aktu tertentu dan jumlah pelarut terbatas yang relatif konstan dengan

adanya pendingin balik. =mumnya dilakukan pengulangan proses pada residu

pertama sampai /-& kali sehingga dapat termasuk proses ekstraksi sempurna

(Depkes I, !!!$.

2.!.2.2 $&kletas

okletasi adalah ekstraksi menggunakan pelarut yang selalu baru yang

umumnya dilakukan dengan alat khusus sehingga terjadi ekstraksi kontinu dengan

jumlah pelarut yang relatif konstan dengan adanya pendingin balik. Biomassa

ditempatkan dalam dalam adah soklet yang dibuat dengan kertas saring, melalui

alat ini pelarut akan terus direfluks. Alat soklet akan mengosongkan isinya ke

dalam labu dasar bulat setelah pelarut menapai kadar tertentu. etelah pelarut

segar melaati alat ini melalui pendingin refluks, ekstraksi berlangsung sangat

efisien dan senyaa dari biomasa seara efektif ditarik ke dalam pelarut karena

konsentrasi aalnya rendah dalam pelarut (Depkes I, !!!$.

2.!.2.3 Dgest

Digesti adalah maserasi kinetik (dengan pengadukan kontinu$ pada

temperatur ruangan (kamar$, yaitu seara umum dilakukan pada temperatur #!-

&!! (Depkes I, !!!$. %etode ini digunakan untuk simplisia yang 7at aktifnya

tahan terhadap pemanasan. 1euntungan dari metode ini adalah 7at aktif yang

tersari lebih banyak dan aktu ekstraksinya lebih singkat dibandingkan dengan

metode maserasi (B6;%, !"/$.


14/42

14

2.!.2.! In"us

Infus adalah ekstraksi dengan pelarut air pada temperatur penangas air

(bejana infus terelup dalam penangas air mendidih, temperature terukur 3)-3


15/42

15

menimbulkan senyaa yang tidak normal serta dapat merusak sel-sel penting

dalam tubuh (upari, "33#$.

adikal bebas dibentuk melalui dua ara, yaitu (etiati, !!/0 antoso,

!!"$C

". eara endogen sebagai respon normal dari rantai peristia kimia

dalam tubuh berupa hasil sampingan dari proses metabolisme tubuh.

2. eara eksogen radikal bebas didapat dari polusi udara, asap rokok,

radiasi sinar matahari, dan obat-obatan.

6ada kondisi normal radikal bebas dan antioksidan yang diproduksi oleh

tubuh berada dalam keadaan setimbang, akan tetapi pada keadaan tertentu

keseimbangan ini akan terganggu bila jumlah radikal bebas lebih banyak dari

antioksidan. 1ondisi ini disebut stress oksidatif. :agalnya antioksidan

mengendalikan keadaan ini diperkirakan akan menederai membran sel dan inti

sel sehingga akan mengakibatkan aatnya D5A yang ditandai dengan

diperepatnya proses penuaan jaringan serta menstimulasi pembentukan sel-sel

tumor selain itu keadaan ini juga bertanggung jaab memiu penyakit pada

kondisi patologis yang disebabkan oleh radikal bebas (upari, "33#$.

2.*.1 E"ek Ra)kal Be(as )alam Tu(uh

2.*.1.1 E"ek P&st"

adikal bebas mempunyai peranan fisiologis, diantaranya (uryohudoyo,

!!!0 upari, "33#$C

". enyaa radikal bebas harus terdapat pada saat sintesis D5A,

aktivitas ribonukleotida reduktase yang mengubah ribosa menjadi

deoksiribosa (gula D5A$.


16/42

16

. adikal bebas dibutuhkan oleh tubuh ketika kuman masuk ke dalam

tubuh. el darah putih (leukosit$ akan menghanurkan dan memakan

kuman dengan bantuan radikal bebas ini.

/. adikal bebas harus terdapat pada saat kapasitansi spermato7oa, jadi

berfungsi dalam reaksi fertilitas.

2.*.1.2 E"ek Negat"

adikal dalam jumlah besar dalam tubuh dapat menyebabkan berbagai

maam efek negatif antara lainC

". adikal bebas dapat menyebabkan agregasi platelet (5ia, "33*$

adikal bebas dapat menyerang membran sel endotel. %embran

sel dibentuk oleh komponen-komponen penting seperti protein,

fosfolipid, glikolipid, dan kolesterol. osofolipid dan glikolipid keduanya

merupakan asam lemak tak jenuh yang sangat rentan terhadap serangan

radikal bebas, sehingga keberadaan radikal bebas ini akan mengoksidasi

asam lemak membran sel, kemudian menimbulkan reaski berantai dan

seterusnya akan menghasilkan lipid peroksida,. elanjutnya lipid

peroksida yang terbentuk akan menimbulkan gangguan keseimbangan

prostaglandin dengan menghambat pembentukan prostasiklin di endotel

dan merangsang pembentukan tromboksan di platelet.

1etidakseimbangan seara prostasiklin yang rendah dan tromboksan

yang tinggi mengakibatkan gangguan fungsi platelet berupa peningkatan

adesivitas dan agregasi platelet.

. adikal bebas dapat menyebabkan penyakit kardiovaskular (5ia,

"33*$


17/42

17

6roses oksidasi lipid pada endotelial arteri koronaria dan sel-

sel miokardia merupakan penyebab utama timbulnya penyakit jantung

koroner.

/. adikal bebas dapat menyebabkan aterosklerosis (5ia, "33*$

adikal bebas akan mengoksidasi +D+ kolesterol darah

sehingga menimbulkan plak yang akan menyumbat dinding bagian dalam

pembuluh darah dan akan menimbulkan aterosklerosis.

#. adikal bebas dapat menyebabkan kanker (%arlinda$

eara pasti belum dibuktikan adanya pengaruh langsung

antara radikal bebas dengan terbentuknya kanker. adikal bebas merusak

D5A sehingga menyebabkan rantai D5A terputus di berbagai tempat,

kerusakan ini dapat mengganggu pembelahan sel bahkan terjadi

perubahan abnormal yang mengenai gen tertentu dalam tubuh. 4ika

menyerang gen khusus yaitu protoonkogen maka akan menimbulkan

mutasi sel dan dapat menimbulkan kanker.

&. adikal bebas dapat merusak protein (%arlinda$

9erjadinya kerusakan protein akibat serangan radikal bebas ini

termasuk oksidasi protein yang mengakibatkan kerusakan jaringan

tempat protein itu berada. ontohnya, kerusakan protein pada lensa mata

yang mengakibatkan katarak.

). adikal bebas dapat menyebabkan diabetes


18/42

18

1erusakan sel beta-pankreas oleh radikal bebas yang

dihasilkan melalui respon autoimun pada akhirnya dapat menyebabkan

penyakit diabetes.

*. adikal bebas terhadap kulit (%arlinda$

adiasi sinar ultraviolet mengakibatkan timbulnya radikal

bebas. 6ada suatu penelitian dibuktikan baha hidrogen peroksida

terbentuk pada kulit tikus setelah terkena paparan sinar matahari.

ejumlah penelitian menunjukkan baha pasa penyinaran =E akan

menurunkan jumlah peroksida dismutase dan aktivitas en7im katalase.

6roduksi hidrogen peroksida menurun jika sebelum penyinaran diberikan

antioksidan.

2.*.2 Ra)kal (e(as DPPH

D668 atau ","-dimetil--pikrilhidra7il adalah radikal bebas yang stabil

pada suhu kamar dengan bentuk serbuk violet kehitaman, epat teroksidasi oleh

temperatur dan udara (disimpan pada suhu di baah !;, mudah larut dalam

metanol, dan berat molekul (B%$ sebesar /3#,/ grJmol (8ossettman, "33&$.

%etode radikal D668 ini merupakan metode pengukuran aktivitas

antioksidan yang hanya menggunakan sampel dalam jumlah sedikit dan aktu

yang singkat. Aktivitas antioksidan dari suatu senyaa ditunjukkan oleh hambatan

serapan D668 pada panjang gelombang &"* nm dengan absorpsi yang kuat dan

berarna violet gelap. 1arena memiliki elektron sunyi menyebabkan D668

sangat reaktif untuk menangkap elektron atau radikal hidrogen lainnya untuk

menjadi molekul diamagnetik yang stabil. 6ada saat reaksi, terjadi pengurangan

serapan yang disebabkan oleh agen pereduksi dan menyebabkan elektron sunyi


19/42

19

menjadi berpasangan, yang seara stoikiometri dapat diamati melalui perubahan

arna larutan dari violet gelap menjadi larutan tidak berarna (8ossettman,

"33&$. eaksi penghambatan antioksidan terhadap radikal D668 dapat dilihat

pada gambar ..

:ambar . eaksi penghambatan antioksidan terhadap radikal D668

(6arkash,!!"$

2.+. Ant&ks)an

Antioksidan adalah senyaa yang dapat menegah atau memperlambat

terjadinya kerusakan oleh radikal bebas. Antioksidan bertindak melalui

mekanisme pemutusan rantai radikal bebas, detoksifikasi, serta mengaktifkan

en7im-en7im antioksidan (Belleville-5abet, "33#$

2.+.1 Pem(agan Ant&ks)an

eara umum, antioksidan dapat dibedakan menjadi sebagai berikut,

yaitu (uryohudoyo, !!!$ C

2.+.1.1 Ant&ks)an Eks&gen )an En)&gen


20/42

20

Antioksidan eksogen umunya bekerja dengan ara menangkap radikal

dan menegah reaksi berantai, ontohnyaC vitamin , vitamin 2, dan betakaroten.

edangkan antioksidan endogen terdiri dari en7im-en7im dan berbagai senyaa

yang disintesis tubuh yang bekerja dengan menegah pembentukan radikal bebas,

ontohnyaC superoksida dismutase (;D$, glutation peroksidase (:6>$, dan

katalase.

2.+.1.2 Ant&ks)an $,es"k )an N&n $,es"k

Antioksidan spesifik bekerja dengan ara menegah pembentukan radikal

bebas baru atau mengubah radikal bebas yang ada menjadi molekul yang kurang

memiliki dampak negatif, ontohnya ;D dan :6>. edangkan antioksidan non

spesifik bekerja dengan ara menangkap radikal bebas, ontohnyaC asam askorbat

dan alfa-tokoferol.

2.+.1.3 Ant&ks)an Alam )an $ntets

Antioksidan alami umumnya adalah senyaa fenolik atau polifenolik

yang dapat berupa golongan asam sinamat, kumarin, tokoferol, ontohnyaC asam

askorbat dan alfa-tokoferol. edangkan antioksidan sintetis yaitu antioksidan yang

diperoleh dari hasil sintesis reaksi kimia, ontohnyaC Butil 8idroksi Anisol (B8A$

dan Butil 8idroksi 9oluen (B89$.

2.+.1.! Ant&ks)an L,&"lk )an H)r&"lk

Antioksidan lipofilik adalah antioksidan yang larut dalam lemak,

ontohnyaC alfa-tokoferol, beta-karoten. edangkan antioksidan hidrofilik adalah

antioksidan yang larut dalam air, ontohnya asam askorbat.

2.+.1.* Ant&ks)an Ber)asarkan -ara %erjana


21/42

21

Berdasarkan ara kerjanya, antioksidan dapat dibagi menjadi antioksidan

primer, sekunder, dan tersier. Antioksidan primer bekerja dengan memberikan

atom hidrogen seara epat ke radikal bebas sebelum radikal bebas sempat

bereaksi, ontohnyaC ;D. Antioksidan sekunder bekerja dengan ara menangkap

senyaa radikal serta menegahnya terjadi reaksi berantai, ontohnyaC asam

askorbat, alfa-tokoferol, dan beta-karoten. edangkan antioksidan tersier bekerja

memperbaiki kerusakan sel-sel dan jaringan yang disebabkan radikal bebas,

ontohnyaC metionin sulfoksida reduktase, yang bekerja memperbaiki D5A pada

inti sel untuk menegah terjadinya penyakit kanker.

2.+.2. -ara %erja Ant&ks)an

Antioksidan bekerja menangkap radikal bebas dengan ara menjadi

sumber hidrogen labil yang akan berikatan dengan radikal bebas. Antioksidan

mengikat energi yang digunakan untuk pembentukan radikal bebas baru sehingga

oksidasi berhenti. Antioksidan ini akan lebih aal mengalami oksidasi sehingga

akan melindungi sel.

2.+.3 Met&)e Pengujan Ant&ks)an

%etode uji aktivitas antioksidan dapat dilakukan dengan ara (etiati,

!!/0 Belleville-5abet, "33#$

2.+.3.1 Menggunakan Mater B&l&gs

%etode ini berdasarkan kultur sel. Aktivitas antioksidan dapat diketahui

dengan mengukur viabilitas sel. adikal bebas umumnya dapat menurunkan

viabilitas sel sedangkan antioksidan mengembalikan viabilitas kembali normal.


22/42

22

istem ini mempunyai keuntungan karena lebih mendekati proses yang terjadi

seara in vivo namun kelemahannya adalah hanya dapat dilakukan pada senyaa-

senyaa yang dapat masuk ke dalam sel.

2.+.3.2 Menggunakan Reaks %ma

%etode ini berdasarkan hasil reaksi antara radikal bebas dengan

antioksidan kemudian diukur dengan ara spektrofotometri dan dilihat dengan

adanya perubahan arna. enyaa seperti ferri thiosianat dan D668 dapat

menghasilkan radikal seara terkontrol.

6engujian aktivitas antioksidan dengan metode penangkapan radikal

D668 ini menggunakan standar antioksidan alami yaitu vitamin yang meakili

antioksidan yang larut air dan viatmin 2 yang meakili antioksidan yang larut

dalam lemak.

2./. Mkr&(a

%ikroba atau mikroorgsnisme adalah organisme yang berukuran sangat

keil, yang dapat diamati menggunakan mikroskop. %ikroba terdiri atas bakteri,

virus, dan jamur (uhartono, "3


23/42

23

2./.1.1 Nutrs

1ebutuhan nutrisi mikroba meliputi bahan makanan seara umum,

seperti air, garam organik, ion logam, karbondioksida, dan asam amino.

2./.1.2 $uhu

Berdasarkan aktivitas terhadap suhu, mikroba dibedakan atasC mikroba

psikrofilik, yaitu mikroba yang dapat tumbuh pada suhu !-/!; dan optimum

pada suhu "&

;

0 mikroba mesofilik, yaitu mikroba yang dapat tumbuh pada suhu

"&-&&; dan optimum pada suhu /*;0 sedangkan mikroba termofilik, yaitu

mikroba yang dapat tumbuh pada suhu #!-*&; dan optimum pada suhu &&;0

serta mikroba yang dapat tumbuh pada suhu ekstrem stenotermal yaitu pada suhu

2./.1.3 ,H Me)um

Berdasarkan p8 yang dibutuhkan oleh mikroba untuk pertumbuhannya,

maka dibagi atasC mikroba asidofilik, yaitu mikroba yang tumbuh pada p8 antara

",!-&,&0 mikroba neutrofilik, yaitu mikroba yang tumbuh p8 antara &,&-


24/42

24

2./.1.* at %ma

Kat kimia yang bersifat dapat menghambat pertumbuhan mikroba tanpa

membunuhnya disebut bakteriostatik, sedangkan 7at kimia yang dapat

membunuhnya disebut sebagai bakterisida. Beberapa senyaa kimia yang bersifat

sebagai antimikroba adalah fenol, formaldehida, alkohol, dan senyaa kimia

alam.

2./.2 Pem(akan Mkr&(a

9erdapat dua ara yang dapat membiakkan mikroba, yaituC

2./.2.1 $earaIn vivo

6ada pembiakan ini digunakan hean perobaan seperti marmut, kelini,

dan tikus putih. 8ean perobaan ini penting artinya karena mikroba tertentu

dapat menyebabkan penyakit dan memberikan gejala-gejala yang khas pada

hean perobaan, kemudian mikroba diisolasi dari tubuh hean tersebut.

2./.2.2 $earaIn vitro

6ada pembiakan ini diperlukan medium, yaitu tempat tumbuh yang

mengandung makanan untuk mikroba sehingga mikroba dapat berkembang biak.

Berdasarkan konsistensinya, bahan medium dapat dibedakan menjadi tiga maam,

yaitu medium padat, semi padat, dan air. 6ada pembiakan seara in vitro, media

ditanami dengan mikroba lalu diinkubasi dalam inkubator pada suhu /&-/*;.

2./.3 Bakter


25/42

25

Bakteri adalah makhluk hidup yang berukuran sangat keil, terdiri dari

suatu sel, berkembang biak dengan membelah diri atau aseksual, dan hanya dapat

dilihat dengan mikroskop (8adiutomo, "33!$.

Berdasarkan bentuk morfologinya, bakteri dapat dibagi atas

(Didjoseputro, "3


26/42

26

2./.! #amur

4amur adalah organisme yang tidak mengandung pigmen fotosintesis dan

bersifat heterotrof. 4amur tumbuh pada kondisi aerob dan memperoleh energi

dengan mengoksidasi bahan organik. 4amur mempunyai ukuran yang beragam

dengan lebar antara "-& mikron dan panjang &-/! mikron. 1ebanyakan jamur

berbentuk bulat telur tetapi beberapa spesies ada yang memanjang atau berbentuk

bulat bola dan biasanya setiap spesies mempunyai bentuk yang khas (6ele7ar,

"3


27/42

27

. 4amur pada permukaan kulit

4amur golongan ini biasanya hanya menyerang jaringan keratin

tetapi tidak menyerang jaringan yang lebih dalam. 4amur-jamur yang

penting dari golongan ini seperti jamur golongan desmatophyta, yaitu

jamur yang hidup pada jaringan yang mengandung 7at tanduk seperti

kuku, rambut, dan kulit, dan termasuk ke dalam kelas

Deuteromyetes, seperti 1richophyton mentagrophytes dan

Microsporum canis.

/. 4amur di baah kulit

4amur ini biasanya menyebabkan mikosis subkutan. 9umbuh

dalam tanah atau pada tanaman yang membusuk, seperti Sporothrix

schenc(iidan Clasdosporium carrionii.

#. 4amur opportunistik

4amur golongan ini biasanya tidak menimbulkan penyakit,

tetapi dapat menyebabkan penyakit pada orang yang mekanisme

pertahanan tubuhnya terganggu, seperti Candida albicans dan

Cryptococcus neoformans.

2./.* Uj Akttas Antmkr&(a Tum(uhan Tngkat Tngg

Aktivitas antimikroba suatu tumbuhan tingkat tinggi dapat dideteksi

melalui respon pertumbuhan berbagai jenis mikroba yang berkontak dengan

ekstrak tumbuhan. Berdasarkan hal ini, dapat dilakukan suatu uji aktivitas

antimikroba dari esktrak tumbuhan tersebut (Elietink, "333$.


28/42

28

Dalam mendeteksi aktivitas antimikroba suatu tumbuhan, ada beberapa

kondisi yang harus dipenuhi, yaitu ekstrak tumbuhan harus berkontak langsung

dengan dinding sel mikroba uji sehingga pengaruh pemberian ekstrak tumbuhan

dapat terlihat nyata sebagai antimikroba. 1edua, kondisi diatur sedemikian rupa

sehingga mikroba dapat tumbuh dengan baik. 1etiga, adanya parameter untuk

menilai pertumbuhan mikroba selama pengujian.

Dalam uji aktivitas antimikroba, mikroba uji yang digunakan tergantung

pada tujuan penelitian, tetapi pada umumnya mikroba uji yang digunakan adalah

mikroba yang bersifat patogen pada manusia serta meakili strain yang

dianjurkan pada skrining aal dalam pengujian antibiotik baru, meliputi bakteri

aerob :ram positif dan :ram negatif, bakteri anaerob, serta jamur (Dermatofita

atau ragi$.

Ada tiga metode yang sering digunakan dalam uji aktivitas antimikroba

terhadap ekstrak tumbuhan tinggi, yaituC

2./.*.1 D"us atau -ara Lem,eng

6ada metode ini, penadang atau reservoir yang mengandung ekstrak

tumbuhan berdifusi ke dalam medium agar yang telah diinokulasikan dengan

mikroba uji. etelah masa inkubasi, diameter daerah bening yang mengelilingi

penadang (diameter daerah hambat$ diukur. 6enadang yang sering digunakan

adalah kertas akram, silinder porselen atau logam, yang diletakkan di atas

permukaan agar dan lubang dietak dalam medium.

2./.*.2 Dlus

6ada metode ini, ekstrak tumbuhan berampur dengan medium air yang

telah diinokulasikan dengan mikroba uji. 1ekeruhan yang disebabkan oleh


29/42

29

pertumbuhan mikroba uji dibandingkan seara visual dengan alat turbidimetri

antara kultur uji dengan kontrol.

2./.*.3 B&aut&gra"

Bioautografi adalah metode untuk mengetahui lokasi aktivitas

antimikroba pada kromatogram. %etode ini berdasarkan pada metode dilusi,

dengan substan akan berdifusi dari kromatogram ke medium yang telah

diinokulasikan dengan mikroba uji. Daerah hambat terlihat tepat pada berak

kromatogram. %etode ini sangat membutuhkan perlengkapan mikrobiologi yang

kompleks, masalah perbedaan difusi senyaa dari kromatogram ke medium agar,

konsentrasi berak pada kromatogram yang tidak teratur, dan mudahnya

kontaminasi oleh mikroba udara, membuat metode ini sangat rumut dalam

pengerjannya.


30/42

BAB III

PELA%$ANAAN PENELITIAN

3.1 4aktu )an Tem,at Peneltan

6enelitian ini dilaksanakan selama lebih kurang satu bulan di

+aboratorium 6enelitian akultas armasi =niversitas Andalas.

3.2 Alat )an Bahan

3.2.1 Alat

Alat-alat yang digunakan untuk pengerjaan ekstraksi-fraksinasi dan

pemeriksaan kandungan kimia adalah mesin penggiling (grinder$, peralatan

sokhlet, peralatan rotary evaporator, erlenmeyer berbagai ukuran, gelas ukur

berbagai ukuran, penangas air, labu ukur, pipet gondok, timbangan analitik,

timbangan, vial, botol "!! ml, aluminium foil, gelas ukur, piket ukur, gelas beker,

pipet tetes, plat tetes, batang pengaduk kaa, pinset, spatula, orong, kertas saring,

tabung reaksi, dan kapas.

Alat-alat yang digunakan untuk pengujian aktivitas antioksidan adalah

Alat-alat yang digunakan dalam penelitian ini adalah orong, gelas ukur, labu

ukur (6yre>L$, bola hisap, pipet ukur, erlenmeyer (6yre>L$, vorte> (8eidolphL$,

spektrofotometer uv-vis (himad7uL$, kuvet, dan alat gelas lainnya.

Alat-alat yang digunakan untuk pengujian aktivitas antimikroba adalah

pinset, pipet mikro, timbangan analitik, aan petri, jarum ose, kertas akram,

kertas perkamen, kapas, kain kasa, lampu spiritus, otoklaf, inkubator, lemari


31/42

32

aseptis, +aminar Air lo, erlenmeyer, tabung reaksi, vorteks, magnetik stirer,

hotplate, jangka sorong, plat titer mikro, utton buds, spektronik ", dan shaker.

3.2.2 Bahan

Bahan-bahan yang digunakan untuk pengerjaan ekstraksi dan

pemeriksaan kandungan kimia adalah daun kering tanaman G. cowa o>b.,

heksana, plat silika )! :#& nm, pereaksi %ayer, pereaksi Dragendorff, asam

sulfat 5, asam klorida pekat, kloroform, serbuk logam magnesium, larutan

besi(III$klorida, dan asam asetat anhidrat.

Bahan-bahan yang digunakan untuk pengujian aktivitas antioksidan

adalah metanol (%erkL$, kuersetin (igma$ , dan D668 (%erkL$.

Bahan-bahan yang digunakan untuk pengujian aktivitas antimikroba

adalah metanol, larutan 5al fisiologis, 5utrient Agar (5A$, abouraud De>trose

Agar (DA, air suling, dan mikroba uji yang terdiri dari Staphylococcus aureus,

seudomonas aeruginosa, dan Candida albicans.

3.3 -ara %erja

3.3.1 Pengam(lan $am,el

ampel daun G. cowao>b. diambil di Batu Busuk-+imau %anih, 6auh,

6adang, umatera Barat.

3.3.2. I)ent"kas Tum(uhan

ampel G. cowao>b. diidentifikasi di 8erbarium =niversitas Andalas

(A5DA$ 4urusan Biologi akultas %atematika dan Ilmu 6engetahuan Alam.

3.3.3. Pemerksaan %an)ungan %ma


32/42

33

6emeriksaan kandungan metabolit sekunder dilakukan terhadap ekstrak

kental metanol daun kering G. cowao>b. 2kstrak kental metanol diperoleh dari

& gram daun kering G. cowao>b. 6ada & ml ekstrak kental metanol tersebut

ditambahkan masing-masing &-"! ml air suling dan kloroform lalu dikook kuat

dan dibiarkan beberapa saat sampai terbentuk dua lapisan. +apisan air digunakan

untuk uji senyaa flavonoid, fenolik, saponin, dan alkaloid. +apisan kloroform

digunakan untuk uji senyaa terpenoid, streroid, dan alkaloid.

3.3.3.1 Uj 5la&n&)

ekitar "- tetes lapisan air pada plat tetes ditambahkan beberapa tetes

asam sulfat pekat dan sedikit serbuk logam magnesium. 9erjadinya arna merah

muda sampai merah menunjukkan adanya senyaa flavonoid.

3.3.3.2 Uj 5en&lk

ekitar "- tetes lapisan air pada plat tetes ditamahkan "- tetes larutan

besi(III$klorida "'. Bila terbentuk arna biru, berarti terdapat senyaa fenolik.

3.3.3.3 Uj $a,&nn

+apisan air dalam tabung reaksi dikook. Apabila terbentuk busa yang

bertahan hingga "& menit, berarti positif adanya saponin.

3.3.3.! Uj Alkal&)

+apisan air atau lapisan kloroform (-/ tetes$ ditambah " tetes asam

sulfat pekat dan "- tetes pereaksi %ayer atau pereaksi Dragendorff. 6ositif

adanya alkaloid bila terbentuk endapan putih dengan pereaksi %ayer atau arna

jingga dengan pereaksi Dragendorff.

3.3.3.* Uj Ter,en&) )an $ter&)


33/42

34

+apisan klorofom disaring melalui norit. 8asil saringan dipipet -/ tetes

dan dibiarkan mengering pada plat tetes. etelah kering, ditambahkan tetes asam

asetat anhidrat dan " tetes asam sulfat pekat. 9erbentuknya arna merah berarti

positif adanya terpenoid dan arna biru atau hijau berarti positif adanya steroid.

3.3.! Pem(uatan $m,lsa6 Ekstraks6 )an 5raksnas.

Daun segar G. cowao>b. sebanyak # kg dikumpulkan, dibersihkan, dan

disortasi basah setelah itu dijemur selama beberapa hari hingga kering. etelah itu,

sampel yang sudah kering disortasi kering dan dirajang hingga berbentuk seperti

serbuk halus dengan menggunakan grinder. erbuk halus tersebut dimasukkan ke

dalam alat soklet lalu dialiri dengan menggunakan pelarut heksana yang

ditampung dengan labu alas bulat dan proses ekstraksi dimulai dengan

memanaskannya menggunakan penangas air sampai pelarut heksana di dalam alat

soklet tepatnya pada sifon jernih. 2kstraksi dikatakan selesai jika tidak ada lagi

noda pada plat 1+9 yang dilihat di baah lampu =E nm pada hasil ekstraksi

terakhir yang diteteskan pada plat 1+9 atau juga menggunakan reagensia. etelah

itu, hasil sokletasi berupa ekstrak diuapkan seara in vacuodengan menggunakan

alat rotary evaporator hingga didapatkan ekstrak kental fraksi heksana.

3.3.* Pengujan Akttas Ant&ks)an )engan Met&)e Pem(entukan

Ra)kal DPPH 74llams an) -ueler6 188*9


34/42

35

3.3.*.1 Pem(uatan Larutan DPPH

+arutan D668 "!! ppm dibuat dengan ara menimbang D668 sebanyak

" mg dilarutkan dengan "! m+ etanol p.a. dalam labu ukur. +arutan D668

selanjutnya disimpan dan dihindari dari ahaya.

3.3.*.2 Pem(uatan Larutan $am,el Uj

Dibuat larutan stok "!!! ppm dengan ara menimbang fraksi heksana

daun G. cowao>b. sebanyak "! mg dan dilarutkan dengan "! m+ etanol p.a.

sambil diaduk dan dihomogenkan.

3.3.*.3 Pengukuran Daa Ant&ks)an Blank&

6engujian dilakukan dengan memipet # m+ D668, kemudian divorte>

dan diinkubasi pada /*M pada ruangan gelap. elanjutnya diukur absorbansinya

pada panjang gelombang &"& nm.

3.3.*.! Pengukuran Daa Ant&ks)an $am,el Uj

=ji aktivitas antioksidan sampel uji dilakukan dengan menggunakan

metode penangkapan radikal D668 (&, diphenyl##picryl hydra%yl$ oleh

microplate reader two fold delution pada panjang gelombang &"& nm. late

terdiri dari baris A-8 masing-masing berjumlah " sumur. Baris A dimasukkan

sampel uji sebanyak "!! N+. 1emudian, sebanyak &! N+ etanol p.a. dimasukkan

ke dalam sumur pada baris B-. Baris A dipipet sebanyak &! N+ dan dimasukkan

ke baris B. etelah itu, baris B dipipet &! N+ dimasukkan ke baris dan

seterusnya dilakukan sampai baris . elanjutnya, baris dipipet &! N+ dan

dibuang, sehingga diperoleh konsentrasi "!!!0 &!!0 &!0 "&0 ),&0 dan /",&

ppm. edangkan pada baris : (sebagai blanko$ dimasukkan etanol p.a sebanyak

"!! N+. +alu sumur A- ditambahkan etanol p.a &! N+. elanjutnya, baris A-:


35/42

36

ditambahkan D668 sebanyak "!! N+ sehingga volume larutan dalam tiap-tiap

sumuran sebesar !! N+. 1emudian dimasukkan ke alat microplate reader dan

diinkubasi selama /! menit. Aktivitas penangkapan radikal D668 diukur sebagai

penurunan absorbansi D668.

3.3.*.* Analss Data

Aktivitas antioksidan sampel ditentukan oleh besarnya hambatan serapan

radikal D668 melalui perhitungan persentase inhibisi serapan D668 dengan

menggunakan rumusC

' inhibisi O ? "!!'

elanjutnya ditentukan nilai I&! yaitu konsentrasi larutan uji yang memberikan

peredaman D668 sebesar &!' dengan menggunakan persamaan regresi.

3.3.+ Pengujan Akttas Antmkr&(a )engan Met&)e D"us Agar

6engujian aktivitas antimikroba dengan metode difusi agar dengan ara

sebagai berikut (Didjoseputro, "3


36/42

37

(+A$ yang telah dibersihkan disterilkan dengan menyalakan lampu =E-nya

selama & menit.

3.3.+.2 Pem(uatan Me)a Dasar

". 5utrient Agar (5A$

ebanyak ! gram serbuk 5A dilarutkan dengan " liter air

suling dalam erlenmeyer dan dipanaskan di atas hot platemenggunakan

magnetik stirer sampai terbentuk larutan jernih. 1emudian disterilisasi di

dalam otoklaf pada suhu ""

;

dan tekanan "& lbs selama "& menit.

. abouraud De>trose Agar (DA$

ebanyak )& gram serbuk DA dilarutkan dengan " liter air

suling dalam erlenmyer dan dipanaskan di atas hot platemenggunakan

magnetik stirer sampai terbentuk larutan jernih. 1emudian disterilisasi di

dalam otoklaf pada suhu ""; dan tekanan "& lbs selama "& menit.

3.3.+.3 Pem(uatan Me)a Peremajaan

%edia dasar yang telah berisi 5A dan DA dituangkan ke dalam tabung

reaksi seara terpisah seukupnya kemudian dimiringkan dan dilakukan seara

aseptis.

3.3.+.! Peremajaan Mkr&(a Uj

%ikroba uji dari stok kultur murni ditanam pada media peremajaan yaitu

agar miring 5A dan DA lalu diinkubasi selama "


37/42

38

1oloni mikroba uji sebanyak "- ose disuspensikan dalam &-3 m+

larutan 5al fisiologis dalam tabung reaksi, kemudian dihomogenkan dengan

vorteks. 1ekeruhan suspensi diukur dengan membandingkannya dengan standar

!.&Mc =arland.

3.3.+.+ Pem(uatan Larutan $am,el Uj

raksi heksana ditimbang sebanyak "! mg lalu dilarutkan dengan larutan

D%; dan diukupkan hingga " ml sehingga didapatkan konsentrasi "'bJv.

1emudian dibuat beberapa konsentrasi menjadi '0 "'0 !,&'0 !,&'0 dan

!,"&'.

3.3.+./ Pengujan Akttas Antmkr&(a

ebanyak !," ml suspensi mikroba uji dimasukkan ke dalam aan petri

terpisah. 1emudian ke dalam masing-masing aan petri dituangkan media 5A

untuk bakteri dan DA untuk jamur seukupnya hingga menutupi permukaan

baah aah petri, lalu dihomogenkan. etelah media memadat, diletakkan kertas

akram steril dan dielupkan ke dalam tiap-tiap konsentrasi larutan uji. Dibiarkan

beberapa lama untuk pradifusi. +alu diinkubasi selama # jam pada suhu /*;

untuk bakteri (dalam inkubator$ dan selama /-& hari pada suhu kamar (&-*;$

untuk jamur. Diamati adanya pertumbuhan mikroba uji dan diukur diameter

daerah hambatan dengan jangka sorong. 1ontrol positif yang digunakan ialah

1loramfenikol / mgJm+ dan 1etokona7ol " mgJm+ sedangkan kontrol negatif

digunakan larutan D%;.


38/42

39

DA5TAR PU$TA%A

Agoes, :. (!!*$. 9eknologi Bahan Alam (-$ 2disi evisi. BandungC 6enerbitI9B.

Badan +itbangkes Depkes I. (!!*$. +aporan iset 1esehatan Dasar. 4akarta0

!!urnal Matemati(a dan ?lmuengetahuan Alam, &$($, ""#-""b. >urnal /ionatura,

&&($, "3-"/).

Departemen 1esehatan epublik Indonesia. ("33&$. armakope Indonesia 2disi

IE. 4akartaC Departemen 1esehatan I.

Departemen 1esehatan epublik Indonesia. (!!!$. 6arameter tandar =mum

2kstrak 9umbuhan ;bat. 4akartaC Departemen 1esehatan I.Didjoseputro, D. ("3


39/42

40

8arborne, 4.B. (!!)$. %etode itokimiaC 6enuntun ara %odern %enganalisis

9umbuhan (alih bahasaC 1osasih 6admainata P Iang oediro$.

BandungC 6enerbit I9B.

8ostettman, 1.%., 8ostettman, %., dan %arston, A. ("3idant Ativities of :arinia 2>trats.?nt. >.

=ood Microbiol, &2&, "&/-")!.

1aryadi, 2. "33*. AntioksidanC esep Aet %udat dan =mur 6anjang dari =ji

Aktivitas Antiradikal dengan %etode D668 dan 6enetapan 1adar enol

9otal 2kstrak Daun 1eladi 9ikus (1hyponium divaricatum(+inn$ Dene$.harmacon, "($, &"-&).

+ee 8. P han 8. ("33*$. ",/,)-trihydro>y-*-metho>y-


40/42

41

%8A, 2rik 9apan. Dr. (!!&$. 1anker, Antioksidan, dan 9erapi 1omplementer.

4akartaC 6enerbit 2le> %edia 1omputindo.

%urakami, A., 4iajiinda, ., 1oshimi7u, 1., dan ;higashi, 8. ("33&$. reening

for In vitro Antitumor 6romoting Ativities of 2dible 6lants from9hailand. Cancer idant.

%edallion +aboratories.

6ele7ar 4r., %.4., dan .D. eid. ("3i Ativities. harma%ie, ",

-&&".


41/42

42

ibuea, 6. (!!/$. Antioksidan enyaa Ajaib 6enangkal 6enuaan Dini. inar

8arapan. @ogyakarta.

ilverstein .%., dan Webster .?. ("33th 2dition. 5e @orkC 4ohn Wiley P ons, In.

itompul, B. (!!/$. Antioksidan dan 6enyakit Aterosklerosis.Medi(a. BB?B()$,

/*/-/**.

umarsih, . (!!/$. %ikrobiologi Dasar. @ogyakartaC =65 Eeteran.

ong, Q., 5a, K., dan 8u, 8. (!"/$. A 5e 6renylated ?anthone from +ate> of

Garcinia cowao>b.Academy of Chemistry of Globe ublications. 5(/$,

!-#.

upari, . ("33#$. adikal Bebas dan 6atofisiologi Beberapa 6enyakit, rosiding

SeminarC enyaa adikal Daun %akanan serta esponnya dalam

istem Biologis. Bogor.

uryohudoyo, 6. (!!!$. 1apita elekta Ilmu 1edokteran %olekuler. 4akartaC E.

Infomedika. /"-#).

9jitrosoeomo, :. ("33/$. 9aksonomi 9umbuhan (permatophyta$. @ogyakartaC

:adjah %ada =niversity 6ress.

9risuan, 1. Dan itthiigrom 9. (!"$. Ben7ophenone and ?anthone

Derivatives from 9he Infloresent of Garcinia cowa. Arch harm @es,

$4, "*//-"*/ Chem.

Wahyuni, .. (!!3$. Isolation, harateri7ation, and 6reliminary

6harmaologial 2valuation of onstituents of Garcinia cowa o>b.

Disertasi. %alaysiaC =niversiti 6utra %alaysia.

Wahyuni, .., haari, 1., tanslas, 4., +ajis, 5., dan Dahriyanus. (!"&$.

ytoto>i ?anthones from 9he tem Bark of Garcinia cowa o>b.

>ournal of Chemical and harmaceutical @esearch, 5("$, *-/!.

Werdhasari, A. (!"#$. 6eran Antioksidan Bagi kesehatan. 6usat Biomedis dan

9eknologi Dasar 1esehatan Balitbangkes, 1emenkes I. >urnal /iote(

Medisiana ?ndonesia, /($, &3-)


42/42

43

Lam,ran 1. $kema %erja

Daun segar asam kandis

(# kg$

implisia berupa daun

kering ( kg$

erbuk halus simplisia

(!! g$

2kstrak simplisia fraksi

heksana

2kstrak kental simplisia

fraksi heksana

Dikumpulkan, dibersihkan, disortasi

basah, dan dijemur

Disortasi kering dan dihaluskan dengan

grinder

2kstraksi (sokletasi$

menggunakan heksana

6enguapan pelarut dengan

rotary evaporator

6emeriksaan 1andungan

1imia

=ji Alkaloid, 9erpenoid,

teroid, lavonoid,

aponon, dan enolik

6engujian Aktivitas

Antioksidan Antimikroba

%etode 6enangkapan

D668

%etode

Difusi Agar

ara 9uangMicroplate

reader

PROPOSAL PENELITIAN 2.doc

Documents

Transcript of PROPOSAL PENELITIAN 2.doc