Penentuan Gula Reduksi Secara Spektrofot

8/19/2019 Penentuan Gula Reduksi Secara Spektrofot

1/14

Praktikum Biokimia

Semester Ganjil

Tahun 2013/2014

PENENTUAN GULA REDUKSI SECARA

SPEKTROFOTOMETRI

I. PENDAHULUANI.1 Latar Belakang

Belakangan ini, penentuan kadar gula reduksi banyak

digunakan dalam aplikasi bidang kesehatan, terutama

dalam bidang pemeriksaan kadar gula dalam darah dan

dalam urin. Dengan pengembangan penentuan kadar gula

reduksi dengan berbagai metoda diharapkan akanmempercepat penentuan kadar gula bagi seseorang.

Penentuan kadar gula dalam darah dan urin digunakan

untuk mengetahui penyakit diabetes mellitus.

I.2 T!an1. Menentukan gula reduksi dari sampel.2. Memahami prinsip spektrofotometri dalam biokimia.

I." A#l$ka%$1. Menentukan gula darah dalam penentuan penyakit

diabetes.2. Menentukan kadar gula dalam sampel yang digunakan.

II. TIN&AUAN PUSTAKA

Karbohidrat adalah polihidroksi aldehida atau keton atau

senyawa yang menghasilkan senyawasenyawa ini bila

dihidrolisa. !ama karbohidrat berasal dari kenyataan bahwa

kebanyakan senyawa dari golongan ini mempunyai rumus

empiris , yang menun"ukkan bahwa senyawa tersebut adalah

karbon #hidrat$, dan memiliki nisbah karbon terhadap hidrogen

Penentuan Gula Reduksi Secara Spektrofotometri


2/14

Praktikum Biokimia

Semester Ganjil

Tahun 2013/2014

dan terhadap oksigen sebagai 1%2%1. &ebagai contoh,rumus

empiris Dglukosa adalah '()12*(, yang "uga dapat ditulis

sebagai +')2*( atau '(+)2*(. -alaupun banyak karbohidrat

yang umum sesuai dengan rumus empiris +')2*n, yang lain

tidak memperlihatkan nisbah ini dan beberapa yang lain lagi

"uga mengandung nitrogen, fosfor, atau sulfur.

Karbohidrat dalam bentuk gula dan pati melambangkan

bagian utama kalori total yang dikonsumsi manusia dan bagi

kebanyakan kehidupan hewan,seperti "uga bagi berbagai

mikroorganisme. Karbohidrat "uga merupakan pusat

metabolisme tanaman hi"au dan organisme fotosintetik lainnya

yang menggunakan energi solar untuk melakukan sintesa

karbohidrat dari '*2 dan )2*. &e"umlah besar pati dan

karbohidrat lain yang dibuat oleh fotosintesa men"adi energi

pokok dsan sumber karbon bagi sel nonfotosintetik pada

hewan,tanaman dan dunia mikrobial.

erdapat tiga golongan utama karbohidrat % monosakarida,oligosakarida, dan polisakarida +kata #sakarida$ berasal dari

bahasa /unani yang berarti gula. Monosakarida atau gula

sederhana, terdiri dari hanya satu unit polihidroksi aldehida

atau keton. Monosakarida yang paling banyak di alam adalah

Dglukosa (karbon.

Oligosakarida +bahasa /unani oligos #sedikit$ terdiri dari

rantai pendek unit monosakarida yang digabungkan bersama

sama oleh ikatan ko0alen. Diantaranya, adalah disakarida yang

mempunyai dua unit monosakarida. eristimewanya adalah

sukrosa, atau gula tebu, yang terdiri dari gula Dglukosa (

karbon dan Dfruktosa yang digabungkan dengan ikatan

ko0alen. Kebanyakan oligosakarida yang mempunyai tiga atau

lebih unit tidak terdapat secara bebas, tetapi digabungkan



3/14

Praktikum Biokimia

Semester Ganjil

Tahun 2013/2014

seebagai rantai samping polipeptida pada glikoprotein dan

proteoglikan.Polisakarida terdiri dari rantai pan"ang yang mempunyai

ratusan atau ribuan unit monosakarida. Beberapa polisakarida

seperti selulosa, mempunyai rantai linear,sedangkan yang lain

seperti glikogen, mempunyai rantai bercabang. Polisakarida

yang banyak di"umpai pada dunia tanaman, yaitu pati dan

selulosa, terdiri dari unit berulang Dglukosa, tetapi senyawa

senyawa ini berbeda dalam hal cara unit Dglukosa dikaitkan

satu sama lain. !ama semua monosakarida dan disakarida

yang umum dikenal berakhir dengan akhiran –osa.Monosakarida tidak berwarna, merupakan kristal padat yang

bebas larut di dalam air, tetapi tidak larut

III. METODOLOGI PERCOBAANIII.1 Alat 'an Ba(an

N). Alat Fng%$

1. abu ukur 1

m

3ntuk mengencerkan larutan

2. abung reaksi 3ntuk meletakkan sampel

4. ermometer 3ntuk mengukur temperatur

5. 6ak tabung

reaksi

3ntuk meletakkan tabung reaksi

7. &pektrofotomete

r

3ntuk mengukur serapan +8bsorban

(. Pipet takar 3ntuk memipet sampel secara akurat

9. abu ukur 1 m 3ntuk mengencerkan larutan

:. Ku0et 3ntuk meletakkan sampel yang akan

diukur serapannya;. Beaker gelas 3ntuk meletakkan sampel



4/14

Praktikum Biokimia

Semester Ganjil

Tahun 2013/2014

27 m

N). Ba(an Fng%$1. arutan standar glukosa 1

ppm

&ebagai larutan induk

2. 6eagen !elson &ebagai oksidator

4. arutan sampel &ebagai sampel

5. 8kuades &ebagai pelarut

7. 6eagen


5/14

Praktikum Biokimia

Semester Ganjil

Tahun 2013/2014

9. &erapan masingmasing larutan diukur pada pan"ang

gelombang 75 nm.

:. Dibuat kur0a larutan standar yang menun"ukkan

hubungan konsentrasi glukosa dan absorban.

B. Penentan Gla Re'k%$ Pa'a Sa*#el1. Diminta larutan sampel pada asisten2. Diambil 1 m larutan sampel tersebut dan

ditambahkan 1 m 6eagen !elson dan selan"utnya

diperlakukan seperti larutan diatas.

4. >umlah gula reduksi dapat ditentukan berdasarkan

serapan larutan sampel dan kur0a standar.

III." Ske*a Ker!a

A.Pe*+atan Kr,a Stan'ar



6/14

Praktikum Biokimia

Semester Ganjil

Tahun 2013/2014

Dibuat 0ariasi larutan

,2,5,(,:,1,2,4,5 ppm Disiapkan ; tabung reaksi bersih Dimasukkan masingmasing 1

m standar glukosa pada :

tabung reaksi,tabung lain diisi

akuades

Ditambah 1 m 6eagen !elson Dipanaskan 2 menit Didinginkan +?27=' Ditambah 1 m 6eagen


7/14

Praktikum Biokimia

Semester Ganjil

Tahun 2013/2014

larutan sampel dan kur0a

standar.

I. HASIL 'an PEMBAHASANI.1 Ha%$l 'an Penga*atan

A. Pengen/eran lartan %tan'ar glk)%a 1000 ##*1. Konsentrasi 5 ppm

@1.!1 ? @[email protected] ppm ? 1 m.5 ppm@1 ? 5 m

2. Konsentrasi 4 ppm@1.!1 ? @2.!2

@1.5 ppm ? 1 m.4 ppm@1 ? 9,7 m

4. Konsentrasi 2 ppm@1.!1 ? @[email protected] ppm ? 1 m.2 ppm@1 ? 7 m

5. Konsentrasi 1 ppm@1.!1 ? @[email protected] ppm ? 1 m.1 ppm@1 ? 2,7 m

7. Konsentrasi : ppm@1.!1 ? @2.!2


>umlah gula


8/14

Praktikum Biokimia

Semester Ganjil

Tahun 2013/2014

@1.5 ppm ? 1 m.: ppm@1 ? 2 m

(. Konsentrasi ( ppm

@1.!1 ? @[email protected] ppm ? 1 m.( ppm@1 ? 1,7 m

9. Konsentrasi 5 ppm@1.!1 ? @[email protected] ppm ? 1 m.5 ppm@1 ? 1 m

:. Konsentrasi 2 ppm@1.!1 ? @[email protected] ppm ? 1 m.2 ppm@1 ? ,7 m

;. Konsentrasi ppm@1.!1 ? @[email protected] ppm ? 1 m. ppm@1 ? m

B. Ta+el Penga*atan

Konsent

rasi

+ppm

A 1 m

6eagen

!elson

&etelah

pemanas

an

A 1 m

6eagen


9/14

Praktikum Biokimia

Semester Ganjil

Tahun 2013/2014

2 ,99 ,175 55 ,; ,4( 1(( ,;2 ,772 4(

: ,11 ,:: (51 ,115 1,15 12 ,125 2,5: 54 ,177 5,(7 ;5 ,1:9 9,5: 1(

sampel ,142

x ? 14,44 y ? ,175

D. Per%a*aan Regre%$

B =nΣxy- (Σx )(Σy)

n Σx2- (Σ x)

2 =

9 (17,696 ) - (120)(0,949)

9 (3120 ) - (120)2 =0,0033175

A = y - Bx

? ,175 + 0,0033175 +14,44

? ,(12

>adi, persamaan regresinya adalah %

y ? 8 A B ? ,(12 A ,44197

E. Penentan k)n%entra%$ %a*#ely ? 8bsorban pada sampel

y ? 8 A B

,142 ? ,(12 A ,44197 ? 21,5 ppm

F. Penentan ,)l*e %a*#el

@1 . !1 ? @2. !2@1. 5 ppm ? 1 m . 21,5 ppm@1 ? 7,47 m

G. Per%en ke%ala(an

E kesalahan ?V sebenarnya−V percobaan

V sebenanya x 100



10/14

Praktikum Biokimia

Semester Ganjil

Tahun 2013/2014

?6.0mL−5,35mL

6.0mL x100

? 1,:4 E

H. Grak (+ngan K)n%entra%$ 'engan A+%)r+an

7 1 17 2 27 4 47 5 57

.7

.1

.17

.2

f+ ? A .(

6F ? .99

Grak H+nganK)n%entra%$ S A+%)r+an

K)n%entra%$ ##*3

A+%)r+an

I.2 Pe*+a(a%anPada percobaan yang telah dilakukan,yaitu penentuan gula

reduksi secara spektrofotometri ,bertu"uan untuk menentukan

gula reduksi dari sampel dan dapat memahami prinsip

spektrofotometri dalam biokimia.Gula reduksi merupakan gula yang mampu mereduksi

senyawa pengoksidasi,dengan kata lain gula ini sendiri



11/14

Praktikum Biokimia

Semester Ganjil

Tahun 2013/2014

mengalami oksidasi. &ampel gula reduksi yang digunakan

pada percobaan kali ini adalah glukosa. &ampel ini diperoleh

dari larutan standar glukosa 1 ppm.

Pada percobaan ini dilakukan penambahan reagen nelson.

6eagen nelson merupakan reagen yang akan mengalami

reduksi oleh gula reduksi, reagen ini berperan sebagai

oksidator. 6eagen nelson yang digunakan merupakan

gabungan dari reagen nelson 8 dan reagen nelson B dengan

perbandingan 0olume 27 % 1 +m. -arna dari reagen nelson ini

adalah biru. Gula pereduksi +glukosa akan mereduksi senyawa

pengoksidasi +'u&*5.7)2* men"adi endapan berwarna merahbata +'u2*. Pada saat penambahan reagen nelson, maka akan

terlihat adanya endapan pada dasar tabung reaksi yang

diasumsikan sebagai endapan merah bata 'u2*. Dengan

reaksi sbb %Glukosa +aldehid asam karboksilat

+oksidasi6eagen nelson+'u&*5.7)2* 'u2*

+reduksi


12/14

Praktikum Biokimia

Semester Ganjil

Tahun 2013/2014

Pada percobaan ini dapat disimpulkan bahwa semakin

besar konsentrasi dari larutan maka semakin besar pula

intensitas warna yang dihasilkan, dan semakin banyak pula

gula reduksi yang mengalami oksidasi.&etelah dilakukan perhitungan maka didapatkan 0olume

dari sampel sebesar 7,47 ml dengan E kesalahan 1,:4E.

)asil yang didapatkan ini sudah cukup memuaskan karena E

kesalahannya tidak terlalu besar.

. KESIMPULAN.1 Ke%$*#lan

Berdasarkan percobaan yang telah dilakukan, maka dapat

disimpulkan %

1. Glukosa merupakan gula reduksi karena mempunyai gugus

aldehid bebas yang dapat teroksidasi men"adi asam

karboksilat2. !ilai absorban berbanding lurus dengan konsentrasi4. &emakin besar nilai konsentrasi,maka akan semakin pekat

intensitas warna yang dihasilkan dikarenakan semakin

banyak gula reduksi yang teroksidasi.5. 6eaksi yang ter"adi adalah reaksi redoks7. E kesalahan yang didapatkan sebesar 1,:4E

.2 Saran



13/14

Praktikum Biokimia

Semester Ganjil

Tahun 2013/2014

8gar praktikum ber"alan lancar dan mendapatkan hasil yang

lebih baik lagi maka diharapkan agar %

1. Pahami terlebih dahulu prinsip dan prosedur penger"aansebelum melakukan percobaan.

2. eliti dan berhatihati dalam melakukan proses

pengenceran.4. Ku0et yang akan digunakan untuk pengukuran

spektrofotometer harus benarbenar bersih.5. 'ermat dalam menggunakan dan membaca nilai dari alat

spektrofotometri.

&A4ABAN PERTAN5AAN

1. Berdasarkan gugus yang dipunyai,sebutkanpembagian

karbohidratH

1. 8ldosa % Karbohidrat yang mempunyai gugus aldehid2. Ketosa % Karbohidrat yang mempunyai gugus keton

2. &ebutkan kelompok karbohidrat berdasarkan

penguraiannyaH

1. Monosakarida % atau gula sederhana

adalah karbohidrat yang tidak dapat

diuraikan lagi.2. Polisakarida % Karbohidrat rantai pan"ang yang

mempunyai ratusan atau ribuan unit monosakarida.4. *ligosakarida % Karbohidrat yang dapat diuraikan

men"adi duaMonosakarida.

4. Mengapa sukrosa termasuk gula nonpereduksiI&ukrosa termasuk gula nonpereduksi disebabkan sukrosa

tidak mengandung aton karbon anomer bebas,karena

karbon anomer kedua komponen unit monosakarida pada

sukrosa berikatan satu dengan yang lain.5. &ebutkan contohcontoh gula pereduksiH

Glukosa


14/14

Praktikum Biokimia

Semester Ganjil

Tahun 2013/2014

Gliseraldehid

7. 8pa fungsi reagen fosfomolibdatI6eagen fosfomolibdat berfungsi sebagai reagen

pengompleks atau pewarna yang dapat memberikan warna

pada larutan sehingga dapat diukur menggunakan metode

spektrofotometri.(. uliskan prinsip ker"a spektrofotometriH

Prinsip ker"a metode spektrofotometri adalah pengukuran

berdasarkan serapan sinar monokromatis oleh suatu

larutan berwarna pada pan"ang gelombang tertentu.9. >elaskan perbedaan metoda D!& dengan &omogi !elson

dan owryH

• Metoda D!& %

• Metoda &omogi !elson dan owry %

DAFTAR PUSTAKA


Penentuan Gula Reduksi Secara Spektrofot

Documents

Transcript of Penentuan Gula Reduksi Secara Spektrofot