Penentuan Gula Reduksi Secara Spektrofot

download Penentuan Gula Reduksi Secara Spektrofot

of 7

Transcript of Penentuan Gula Reduksi Secara Spektrofot

  • 8/19/2019 Penentuan Gula Reduksi Secara Spektrofot

    1/14

     Praktikum Biokimia

    Semester Ganjil 

    Tahun 2013/2014

    PENENTUAN GULA REDUKSI SECARA

    SPEKTROFOTOMETRI

    I.  PENDAHULUANI.1 Latar Belakang

    Belakangan ini, penentuan kadar gula reduksi banyak

    digunakan dalam aplikasi bidang kesehatan, terutama

    dalam bidang pemeriksaan kadar gula dalam darah dan

    dalam urin. Dengan pengembangan penentuan kadar gula

    reduksi dengan berbagai metoda diharapkan akanmempercepat penentuan kadar gula bagi seseorang.

    Penentuan kadar gula dalam darah dan urin digunakan

    untuk mengetahui penyakit diabetes mellitus.

    I.2 T!an1. Menentukan gula reduksi dari sampel.2. Memahami prinsip spektrofotometri dalam biokimia.

    I." A#l$ka%$1. Menentukan gula darah dalam penentuan penyakit

    diabetes.2. Menentukan kadar gula dalam sampel yang digunakan.

    II. TIN&AUAN PUSTAKA

    Karbohidrat adalah polihidroksi aldehida atau keton atau

    senyawa yang menghasilkan senyawasenyawa ini bila

    dihidrolisa. !ama karbohidrat berasal dari kenyataan bahwa

    kebanyakan senyawa dari golongan ini mempunyai rumus

    empiris , yang menun"ukkan bahwa senyawa tersebut adalah

    karbon #hidrat$, dan memiliki nisbah karbon terhadap hidrogen

     Penentuan Gula Reduksi Secara Spektrofotometri

  • 8/19/2019 Penentuan Gula Reduksi Secara Spektrofot

    2/14

     Praktikum Biokimia

    Semester Ganjil 

    Tahun 2013/2014

    dan terhadap oksigen sebagai 1%2%1. &ebagai contoh,rumus

    empiris Dglukosa adalah '()12*(, yang "uga dapat ditulis

    sebagai +')2*( atau '(+)2*(. -alaupun banyak karbohidrat

    yang umum sesuai dengan rumus empiris +')2*n, yang lain

    tidak memperlihatkan nisbah ini dan beberapa yang lain lagi

     "uga mengandung nitrogen, fosfor, atau sulfur.

    Karbohidrat dalam bentuk gula dan pati melambangkan

    bagian utama kalori total yang dikonsumsi manusia dan bagi

    kebanyakan kehidupan hewan,seperti "uga bagi berbagai

    mikroorganisme. Karbohidrat "uga merupakan pusat

    metabolisme tanaman hi"au dan organisme fotosintetik lainnya

    yang menggunakan energi solar untuk melakukan sintesa

    karbohidrat dari '*2 dan )2*. &e"umlah besar pati dan

    karbohidrat lain yang dibuat oleh fotosintesa men"adi energi

    pokok dsan sumber karbon bagi sel nonfotosintetik pada

    hewan,tanaman dan dunia mikrobial.

     erdapat tiga golongan utama karbohidrat % monosakarida,oligosakarida, dan polisakarida  +kata #sakarida$ berasal dari

    bahasa /unani yang berarti gula. Monosakarida  atau gula

    sederhana, terdiri dari hanya satu unit polihidroksi aldehida

    atau keton. Monosakarida yang paling banyak di alam adalah

    Dglukosa (karbon.

    Oligosakarida  +bahasa /unani oligos #sedikit$ terdiri dari

    rantai pendek unit monosakarida yang digabungkan bersama

    sama oleh ikatan ko0alen. Diantaranya, adalah disakarida yang

    mempunyai dua unit monosakarida. eristimewanya adalah

    sukrosa, atau gula tebu, yang terdiri dari gula Dglukosa (

    karbon dan Dfruktosa yang digabungkan dengan ikatan

    ko0alen. Kebanyakan oligosakarida yang mempunyai tiga atau

    lebih unit tidak terdapat secara bebas, tetapi digabungkan

     Penentuan Gula Reduksi Secara Spektrofotometri

  • 8/19/2019 Penentuan Gula Reduksi Secara Spektrofot

    3/14

     Praktikum Biokimia

    Semester Ganjil 

    Tahun 2013/2014

    seebagai rantai samping polipeptida pada glikoprotein  dan

     proteoglikan.Polisakarida  terdiri dari rantai pan"ang yang mempunyai

    ratusan atau ribuan unit monosakarida. Beberapa polisakarida

    seperti selulosa, mempunyai rantai linear,sedangkan yang lain

    seperti glikogen, mempunyai rantai bercabang. Polisakarida

    yang banyak di"umpai pada dunia tanaman, yaitu  pati  dan

    selulosa, terdiri dari unit berulang Dglukosa, tetapi senyawa

    senyawa ini berbeda dalam hal cara unit Dglukosa dikaitkan

    satu sama lain. !ama semua monosakarida dan disakarida

    yang umum dikenal berakhir dengan akhiran –osa.Monosakarida tidak berwarna, merupakan kristal padat yang

    bebas larut di dalam air, tetapi tidak larut

    III. METODOLOGI PERCOBAANIII.1 Alat 'an Ba(an

    N). Alat Fng%$

    1. abu ukur 1

    m

    3ntuk mengencerkan larutan

    2. abung reaksi 3ntuk meletakkan sampel

    4. ermometer 3ntuk mengukur temperatur

    5. 6ak tabung

    reaksi

    3ntuk meletakkan tabung reaksi

    7. &pektrofotomete

    r

    3ntuk mengukur serapan +8bsorban

    (. Pipet takar 3ntuk memipet sampel secara akurat

    9. abu ukur 1 m 3ntuk mengencerkan larutan

    :. Ku0et 3ntuk meletakkan sampel yang akan

    diukur serapannya;. Beaker gelas 3ntuk meletakkan sampel

     Penentuan Gula Reduksi Secara Spektrofotometri

  • 8/19/2019 Penentuan Gula Reduksi Secara Spektrofot

    4/14

     Praktikum Biokimia

    Semester Ganjil 

    Tahun 2013/2014

    27 m

    N). Ba(an Fng%$1. arutan standar glukosa 1

    ppm

    &ebagai larutan induk

    2. 6eagen !elson &ebagai oksidator

    4. arutan sampel &ebagai sampel

    5. 8kuades &ebagai pelarut

    7. 6eagen

  • 8/19/2019 Penentuan Gula Reduksi Secara Spektrofot

    5/14

     Praktikum Biokimia

    Semester Ganjil 

    Tahun 2013/2014

    9. &erapan masingmasing larutan diukur pada pan"ang

    gelombang 75 nm.

    :. Dibuat kur0a larutan standar yang menun"ukkan

    hubungan konsentrasi glukosa dan absorban.

    B. Penentan Gla Re'k%$ Pa'a Sa*#el1. Diminta larutan sampel pada asisten2. Diambil 1 m larutan sampel tersebut dan

    ditambahkan 1 m 6eagen !elson dan selan"utnya

    diperlakukan seperti larutan diatas.

    4. >umlah gula reduksi dapat ditentukan berdasarkan

    serapan larutan sampel dan kur0a standar.

    III." Ske*a Ker!a

    A.Pe*+atan Kr,a Stan'ar

     Penentuan Gula Reduksi Secara Spektrofotometri

  • 8/19/2019 Penentuan Gula Reduksi Secara Spektrofot

    6/14

     Praktikum Biokimia

    Semester Ganjil 

    Tahun 2013/2014

    Dibuat 0ariasi larutan

    ,2,5,(,:,1,2,4,5 ppm Disiapkan ; tabung reaksi bersih Dimasukkan masingmasing 1

    m standar glukosa pada :

    tabung reaksi,tabung lain diisi

    akuades

    Ditambah 1 m 6eagen !elson Dipanaskan 2 menit Didinginkan +?27=' Ditambah 1 m 6eagen

  • 8/19/2019 Penentuan Gula Reduksi Secara Spektrofot

    7/14

     Praktikum Biokimia

    Semester Ganjil 

    Tahun 2013/2014

    larutan sampel dan kur0a

    standar.

    I. HASIL 'an PEMBAHASANI.1 Ha%$l 'an Penga*atan

    A. Pengen/eran lartan %tan'ar glk)%a 1000 ##*1. Konsentrasi 5 ppm

    @1.!1 ? @[email protected] ppm ? 1 m.5 ppm@1 ? 5 m

    2. Konsentrasi 4 ppm@1.!1 ? @2.!2

    @1.5 ppm ? 1 m.4 ppm@1 ? 9,7 m

    4. Konsentrasi 2 ppm@1.!1 ? @[email protected] ppm ? 1 m.2 ppm@1 ? 7 m

    5. Konsentrasi 1 ppm@1.!1 ? @[email protected] ppm ? 1 m.1 ppm@1 ? 2,7 m

    7. Konsentrasi : ppm@1.!1 ? @2.!2

     Penentuan Gula Reduksi Secara Spektrofotometri

     >umlah gula

  • 8/19/2019 Penentuan Gula Reduksi Secara Spektrofot

    8/14

     Praktikum Biokimia

    Semester Ganjil 

    Tahun 2013/2014

    @1.5 ppm ? 1 m.: ppm@1 ? 2 m

    (. Konsentrasi ( ppm

    @1.!1 ? @[email protected] ppm ? 1 m.( ppm@1 ? 1,7 m

    9. Konsentrasi 5 ppm@1.!1 ? @[email protected] ppm ? 1 m.5 ppm@1 ? 1 m

    :. Konsentrasi 2 ppm@1.!1 ? @[email protected] ppm ? 1 m.2 ppm@1 ? ,7 m

    ;. Konsentrasi ppm@1.!1 ? @[email protected] ppm ? 1 m. ppm@1 ? m

    B. Ta+el Penga*atan

    Konsent

    rasi

    +ppm

    A 1 m

    6eagen

    !elson

    &etelah

    pemanas

    an

    A 1 m

    6eagen

  • 8/19/2019 Penentuan Gula Reduksi Secara Spektrofot

    9/14

     Praktikum Biokimia

    Semester Ganjil 

    Tahun 2013/2014

    2 ,99 ,175 55 ,; ,4( 1(( ,;2 ,772 4(

    : ,11 ,:: (51 ,115 1,15 12 ,125 2,5: 54 ,177 5,(7 ;5 ,1:9 9,5: 1(

    sampel ,142

     x ? 14,44   y ? ,175

    D. Per%a*aan Regre%$

      B =nΣxy- (Σx )(Σy)

    n Σx2- (Σ x)

    2  =

    9 (17,696 ) - (120)(0,949)

    9 (3120 ) - (120)2  =0,0033175

     A = y - Bx

      ? ,175 +   0,0033175 +14,44

      ? ,(12

     >adi, persamaan regresinya adalah %

    y ? 8 A B  ? ,(12 A ,44197

    E. Penentan k)n%entra%$ %a*#ely ? 8bsorban pada sampel

    y ? 8 A B

      ,142 ? ,(12 A ,44197  ? 21,5 ppm

    F. Penentan ,)l*e %a*#el

    @1 . !1 ? @2. !2@1. 5 ppm ? 1 m . 21,5 ppm@1 ? 7,47 m

    G. Per%en ke%ala(an

    E kesalahan ?V sebenarnya−V percobaan

    V sebenanya  x 100

     Penentuan Gula Reduksi Secara Spektrofotometri

  • 8/19/2019 Penentuan Gula Reduksi Secara Spektrofot

    10/14

     Praktikum Biokimia

    Semester Ganjil 

    Tahun 2013/2014

    ?6.0mL−5,35mL

    6.0mL x100

    ? 1,:4 E

    H. Grak (+ngan K)n%entra%$ 'engan A+%)r+an

    7 1 17 2 27 4 47 5 57

    .7

    .1

    .17

    .2

    f+ ? A .(

    6F ? .99

    Grak H+nganK)n%entra%$ S A+%)r+an

    K)n%entra%$ ##*3

    A+%)r+an

    I.2 Pe*+a(a%anPada percobaan yang telah dilakukan,yaitu penentuan gula

    reduksi secara spektrofotometri ,bertu"uan untuk menentukan

    gula reduksi dari sampel dan dapat memahami prinsip

    spektrofotometri dalam biokimia.Gula reduksi merupakan gula yang mampu mereduksi

    senyawa pengoksidasi,dengan kata lain gula ini sendiri

     Penentuan Gula Reduksi Secara Spektrofotometri

  • 8/19/2019 Penentuan Gula Reduksi Secara Spektrofot

    11/14

     Praktikum Biokimia

    Semester Ganjil 

    Tahun 2013/2014

    mengalami oksidasi. &ampel gula reduksi yang digunakan

    pada percobaan kali ini adalah glukosa. &ampel ini diperoleh

    dari larutan standar glukosa 1 ppm.

    Pada percobaan ini dilakukan penambahan reagen nelson.

    6eagen nelson merupakan reagen yang akan mengalami

    reduksi oleh gula reduksi, reagen ini berperan sebagai

    oksidator. 6eagen nelson yang digunakan merupakan

    gabungan dari reagen nelson 8 dan reagen nelson B dengan

    perbandingan 0olume 27 % 1 +m. -arna dari reagen nelson ini

    adalah biru. Gula pereduksi +glukosa akan mereduksi senyawa

    pengoksidasi +'u&*5.7)2* men"adi endapan berwarna merahbata +'u2*. Pada saat penambahan reagen nelson, maka akan

    terlihat adanya endapan pada dasar tabung reaksi yang

    diasumsikan sebagai endapan merah bata 'u2*. Dengan

    reaksi sbb %Glukosa +aldehid asam karboksilat

    +oksidasi6eagen nelson+'u&*5.7)2* 'u2*

    +reduksi

  • 8/19/2019 Penentuan Gula Reduksi Secara Spektrofot

    12/14

     Praktikum Biokimia

    Semester Ganjil 

    Tahun 2013/2014

    Pada percobaan ini dapat disimpulkan bahwa semakin

    besar konsentrasi dari larutan maka semakin besar pula

    intensitas warna yang dihasilkan, dan semakin banyak pula

    gula reduksi yang mengalami oksidasi.&etelah dilakukan perhitungan maka didapatkan 0olume

    dari sampel sebesar 7,47 ml dengan E kesalahan 1,:4E.

    )asil yang didapatkan ini sudah cukup memuaskan karena E

    kesalahannya tidak terlalu besar.

    . KESIMPULAN.1 Ke%$*#lan

    Berdasarkan percobaan yang telah dilakukan, maka dapat

    disimpulkan %

    1. Glukosa merupakan gula reduksi karena mempunyai gugus

    aldehid bebas yang dapat teroksidasi men"adi asam

    karboksilat2. !ilai absorban berbanding lurus dengan konsentrasi4. &emakin besar nilai konsentrasi,maka akan semakin pekat

    intensitas warna yang dihasilkan dikarenakan semakin

    banyak gula reduksi yang teroksidasi.5. 6eaksi yang ter"adi adalah reaksi redoks7. E kesalahan yang didapatkan sebesar 1,:4E

    .2 Saran

     Penentuan Gula Reduksi Secara Spektrofotometri

  • 8/19/2019 Penentuan Gula Reduksi Secara Spektrofot

    13/14

     Praktikum Biokimia

    Semester Ganjil 

    Tahun 2013/2014

    8gar praktikum ber"alan lancar dan mendapatkan hasil yang

    lebih baik lagi maka diharapkan agar %

    1. Pahami terlebih dahulu prinsip dan prosedur penger"aansebelum melakukan percobaan.

    2. eliti dan berhatihati dalam melakukan proses

    pengenceran.4. Ku0et yang akan digunakan untuk pengukuran

    spektrofotometer harus benarbenar bersih.5. 'ermat dalam menggunakan dan membaca nilai dari alat

    spektrofotometri.

     &A4ABAN PERTAN5AAN

    1. Berdasarkan gugus yang dipunyai,sebutkanpembagian

    karbohidratH

    1. 8ldosa % Karbohidrat yang mempunyai gugus aldehid2. Ketosa % Karbohidrat yang mempunyai gugus keton

    2. &ebutkan kelompok karbohidrat berdasarkan

    penguraiannyaH

    1. Monosakarida % atau gula sederhana

    adalah karbohidrat yang tidak dapat

    diuraikan lagi.2. Polisakarida % Karbohidrat rantai pan"ang yang

    mempunyai ratusan atau ribuan unit monosakarida.4. *ligosakarida % Karbohidrat yang dapat diuraikan

    men"adi duaMonosakarida.

    4. Mengapa sukrosa termasuk gula nonpereduksiI&ukrosa termasuk gula nonpereduksi disebabkan sukrosa

    tidak mengandung aton karbon anomer bebas,karena

    karbon anomer kedua komponen unit monosakarida pada

    sukrosa berikatan satu dengan yang lain.5. &ebutkan contohcontoh gula pereduksiH

    Glukosa

  • 8/19/2019 Penentuan Gula Reduksi Secara Spektrofot

    14/14

     Praktikum Biokimia

    Semester Ganjil 

    Tahun 2013/2014

    Gliseraldehid

    7. 8pa fungsi reagen fosfomolibdatI6eagen fosfomolibdat berfungsi sebagai reagen

    pengompleks atau pewarna yang dapat memberikan warna

    pada larutan sehingga dapat diukur menggunakan metode

    spektrofotometri.(. uliskan prinsip ker"a spektrofotometriH

    Prinsip ker"a metode spektrofotometri adalah pengukuran

    berdasarkan serapan sinar monokromatis oleh suatu

    larutan berwarna pada pan"ang gelombang tertentu.9. >elaskan perbedaan metoda D!& dengan &omogi !elson

    dan owryH

    • Metoda D!& %

    • Metoda &omogi !elson dan owry %

    DAFTAR PUSTAKA

     Penentuan Gula Reduksi Secara Spektrofotometri