Oleh: Purwadi, M.Si.

Universitas Tulang Bawang, Bandar Lampung, 2009

Kromatografi Kolom TerbukaKromatografi Kolom Terbuka

ColorColorSistem pemasukan sampel: manual, tidak volumetrik Injector

Waktu analisis lama, mengandalkan gaya grafitasi dan kapiler pompa

Hasil pemisahan kurang baik pengemasan kolom

Kesulitan Pengamatan hasil pemisahan untuk analit tidak berwarna Detektor

Kesulitan penghitungan kadar integrator

KCKT dikembangkan dari kromatografi kolom terbuka untuk menjawab kekurang-kekurangan tersebut

Injector: Sistem pemasukan sampel: sample loop dan robotik injektor, sangat volumetrik

Pompa: Waktu analisis singkat, pengulangan/presisi baik

Kolom: baja, packing kompak, partikel sangat kecil, tekanan dapat dibuat besar Hasil pemisahan baik

Detektor: semua zat dapat diamati (tidak harus berwarna)

Integrator:dilengkapi komputer, bisa menghitung AuC mudah penghitungan kadar

Sehingga disebut: Kinerja Tinggi

BAGAN SISTEM KCKT

pompainjektor

kolom

oven

detektor

Wadahsolven

integrator

WADAH FASE GERAK

Merupakan tandon berisi fase gerakMempunyai sistem penyaring

POMPAMerupakan sistem agar fase gerak mengalir.Kinerja pompa yang diinginkan :Tekanan yang dihasilkan tinggi

Fluktuasi tekanan rendah

Kecepatan aliran fase gerak tepat

Column

Column

Pump

[LOAD][LOAD][INJECT][INJECT]

Pump

INJEKTOR: Alat untuk pemasukan sampel ke dalam sistem KCKT

kolom

posisi load Posisi injectpompa pompa kolom

sample loop

Sistem sample loop injektor

OVEN KOLOM – instrumen pemanas

Syarat :1. Keseragaman temperatur yang baik2. Kestabilan temperatur yang baik3. Ketepatan kontrol temperatur yang baik

Kolom pada KCKT

> Penampang: baja tahan karat, tahan tekanan tinggi

Ukuran partikel sangat kecil: pengepakan lebih kompak, hasil pemisahan lebih baik

Dapat dipakai berulang

Yang umum dipakai Detektor Ultraviolet / Visible (UV/VIS) Detektor Photodiode Array (PDA) Detektor Fluorescence (RF) Detektor Konduktivitas (CDD) Detektor Refraktive Indeks (RID) Detektor Elektrokimia (ECD) Detektor spektrometer massa

DETEKTOR HPLC

Ein

ACl= - log (Eout / Ein)

lHk.Lambert-Beer

kuvetkuvet

DETEKTOR SPEKTROFOTOMETER UV/VIS

Eout

Prinsip: penyerapan sebagian energi (hv) oleh molekul pada panjang gelombang tertentu => tereksitasi elektronik

Eksitasi elektronik

ACl= - log (Eout / Ein)

abso

rban

si

konsentrasi

Kisaran linear 1

275 nm275 nm

208 nm208 nm275 nm275 nm

208 nm208 nm

Pemilihan pjg gelb.: quantitative / preparative?

Detektor Photodiode Array

Sample Cell

512 Elements Photodiode Array

Grating

D2 / W lamp

satu elemen dapatMendeteksi absorban Pada satu pjg gelb..

Detektor Photodiode Array : Kromatogram 3D

waktu

Panj

ang

gelb

.

Ab

sorb

ans

i

kromatogramSpektrum

Detektor Photodiode Array

Puncak dapat di identifikasi dengan spektrum UV. Pemeriksaan kemurnian puncak dapat dilakukan.

--overlap 3 spektrum

--rasio kromatogram

--perbandingan threshold dan similarity index.

Detektor Spektrofluoresen

+ h1

h2+

*

A

A*

A

h1 h2

Excitation Wavelength

Emission Wavelength

FluorescenceFluorescence

*

Rancangan Cell untuk detektor Fluorescence

Reagen derivatisasiReagen OPA untuk amine primer

Reagen ADAM untuk asam lemak

CHN29-anthryldiazomethane(ADAM)

+ R-COOH

CH2OCOR

CHO

CHOo-phthalaldhyde(OPA)

+ R-NH2 N-R

A

A

Detektor Refraktive Indeks

Sistem optik

Detektor Refraktive Indeks

Kromatogram gula Analytical Conditions

Column : Shim-pack CLC-NH2

Mobile phase : Acetonitrile / water

= 7 / 3 Flow rate : 1.0 mL/min Temperature : Ambient

Peaks

1. Glycerol

2. Xylose

3. Fructose

4. Glucose

5. Sucrose

6. Manose

7. Lactose

BAGIAN DARI SISTEM HPLC

Detektor Konduktifitas

I

V

L

A A

K (conductivity) = I [A] / E [V] =A [cm2] / L [cm] * k (k : specific conductivity)

k= (I/E)*(L/A)k= (I/E)*(L/A)

elektroda

Detektor Konduktifitas Konduktifitas sangat dipengaruhi temperatur. Cell harus diletakkan pada kondisi temperatur

terkontrol

Kromatogram anion dalam air laut Analytical Conditions

Column : Shim-pack IC-A3 Mobile phase :

8.0 mM p-hydroxybenzoic acid

3.2 mM Bis-Tris * Flow rate : 1.5 mL/min Temperature : 40 C Injection Volume : 100 uL

Peaks 1. F (1.4 ppm) 2. Cl (10200 ppm) 3. NO2 (10 ppm) 4. Br (43 ppm) 5. NO3 (44 ppm) 6. SO4 (431 ppm)

Bis-Tris : bis (2-hydroxyethyl) iminotris (hydroxymethyl) methane

Perbandingan detektor

LOD : Limit deteksi (S/N=3)GC : Gradient Compatibility

UV/ VIS RF RID CDD ECD

LOD 10 ppb 10 ppt 100 ppb 10 ppb 100 ppt

GC Yes Yes No No No