BAB IPENDAHULUAN

1.1. LATAR BELAKANGDi zaman yang modern seperti sekarang ini, perkembangan Ilmu Pengetahuan dan Teknologi melaju dengan pesatnya. Tuntutan kebutuhan hiduplah yang menjadikan manusia giat mengembangkan ilmu pengetahuan dan teknologi. Berbagai ilmu dikembangkan, mulai dari ilmu sosial hingga ilmu eksak. Seperti salah satu ilmu eksak yaitu ilmu kimia. Dalam praktiknya secara umum ilmu kimia, yaitu ilmu yang mempelajari tentang sususnan, sifat, dan reaksi suatu unsur atau zat dalam berbagai jenisbenda material.Dalam ilmu kimia banyak aspek-aspek penelitian yang dilakukan. Seperti halnya, yang paling spesifik yaitu pemisahan molekul- molekul dari senyawa zat nya, atau yang disebut dalam ilmu kimia yaitu Kromatografi. Kromatografi terbagi menjadi berbagai macam lagi. Salah satunya yaituKromatografiCairKinerjaTinggiatau yang biasa di kenal HPLC.Kemajuan dalam teknologi kolom, sistem pompa tekanan tinggi, dan detektor yang sensitif telah menyebabkan perubahan kromatografi kolom cair menjadi suatu sistem pemisahan dengan kecepatan dan efisiensi yang tinggi. Metode ini dikenal sebagai kromatografi cair kinerja tinggi. Teknologi kolom didasarkan atas penggunaan kolom berlubang kecil (diameter dalam antara 2 mm hingga 5 mm) dan isi kolom berupa partikel kecil (3mm hingga 50mm), yang memungkinkan tercapainya keseimbangan secara cepat antara fase gerak dan fase diam. Teknologi kolom partikel kecil ini memerlukan sistem pompa tekanan tinggi yang mampu mengalirkan fasa gerak pada tekanan tinggi sampai 300 atmosfer, agar tercapai laju aliran beberapa ml per menit. Oleh karena sering digunakan jumlah zat uji yang kecil (umumnya lebih kecil dari 20mg) untuk isi kolom tersebut di atas, maka diperlukan detektor yang sensitif. Dengan teknologi ini kromatografi cair dalam banyak hal dapat menghasilkan pemisahan yang sangat cepat seperti pada kromatografi gas, dengan keunggulan zat-zat yang tidak menguap atau tidak tahan panas dapat dikromatografi tanpa peruraian atau tanpa perlunya membuat derivat yang dapat menguap.Fase diam dapat berupa cairan atau polimer, yang disalut atau terikat secara kimia pada permukaan penyangga sebagai lapisan tipis, yang mengurangi hambatan terhadap pemindahan masa, sehingga keseimbangan antara fase gerak dan fase diam dapat tercapai dengan cepat. Suatu fase diam cair harus mempunyai sifat praktis tak bercampur dengan fase gerak, umumnya fasa gerak perlu dijenuhkan terlebih dahulu dengan fase diam cair, agar fase diam tidak terbawa dari kolom. Fase diam berupa polimer yang disalutkan pada penyangga umumnya lebih dapat bertahan. Suatu fase diam yang terikat secara kimia pada penyangga lebih mudah pemakaiannya dengan beraneka ragam pelarut serta suhu yang lebih tinggi.Komposisi fase gerak berpengaruh nyata terhadap kinerja kromatografi dan harus dikendalikan dengan cermat. Komposisi dapat mempunyai pengaruh yang jauh lebih besar terdadap faktor kapasitas daripada suhu, (faktor kapasitas =kadalah perbandingan waktu yang diperlukan selama berada dalam fase diam terhadap waktu yang diperlukan selama berada dalam fase gerak).

1.2. RUMUSAN MASALAH

Adapun rumusan masalah dalam pembuatan makalah ini adalah sebagai berikut:1. Bagaimana sejarah ditemukannya HPLC-DAD (High Perform Liquid Chromatography- Diode Array Detector)?2. Apa itu HPLC-DAD (High Perform Liquid Chromatography- Diode Array Detector)?3. Bagaimana prinsip kerja HPLC-DAD (High Perform Liquid Chromatography- Diode Array Detector)?4. Apa saja intrumentasi dari HPLC-DAD (High Perform Liquid Chromatography- Diode Array Detector)?5. Bagaimana cara penggunaan HPLC-DAD (High Perform Liquid Chromatography- Diode Array Detector)?6. Apa saja kuntungan dan kerugian penggunaan HPLC-DAD (High Perform Liquid Chromatography- Diode Array Detector)?1.3. TUJUAN PENULISANTujuan penulisan makalah ini adalah untuk mengetahui dan memahami:1. sejarah ditemukannya HPLC-DAD (High Perform Liquid Chromatography- Diode Array Detector)2. Apa itu HPLC-DAD (High Perform Liquid Chromatography- Diode Array Detector)3. Prinsip kerja HPLC-DAD (High Perform Liquid Chromatography- Diode Array Detector)4. Intrumentasi dari HPLC-DAD (High Perform Liquid Chromatography- Diode Array Detector)5. Cara penggunaan HPLC-DAD (High Perform Liquid Chromatography- Diode Array Detector)6. Kuntungan dan kerugian penggunaan HPLC-DAD (High Perform Liquid Chromatography- Diode Array Detector)

BAB IIPEMBAHASAN

2.1.SEJARAHKromatografi sebagai metode pemisahan secara fisikokimia telah ditemukan sejak awal abad ke 20 oleh seorang botanist keturunan Rusia-Italia, M.S. Tswet. Ia memaparkan penomena pemisahan yang berdasarkan pada absorpsi pada 21 maret 1903 pada Warsaw Society of Natural Sciences, yang kemudian dia beri nama Chromatography, merupakan transliterasi dari bahasa Yunani (greek) yang artinya penulisanwarna.Sejarah Kromatografi berkembang, Sepuluh tahun setelahnya, L.S. Palmer di US dan C. Dhere di Eropa secara independen mempublikasikan proses pemisahan yang mirip dengan Tswet. Pad 1931, Lederer bersama dengan Kuhn dan Winterstein mempublikasikan paper tentang purifikasi xantofil pada kolom absorpsi CaCO3 berdasarkan prosedur Tswet. Pada tahun 1941, A. J. P. Martin and R. L. M. Synge dari Cambridge University menemukan kromatografi partisi, dan mendapatkan nobel pada tahun 1952.Kromatografi yang ditemukan oleh Tswet dalam bentuk kromatografi cair-padat (liquid-solid chromatography) mengalami perkembangan selama lebih dari 50 tahun ke dalam bentuk kromatografi gas (gas chromatography), kromatograafi lapis tipis (Tin Layer chromatography) dan kromatografi cair-cair (liquid-liquid chromatography). Adalah prof. Horvath dari Yale university, mendesain instrumen yang memiliki kolom yang kecil, yang sangat resisten terhadap aliran fase gerak, inilah HPLC, dan nama HPLC diperkenalkan oleh Prof. Horvart pada tahun 1970 pada the Twenty-first Pittsburgh Conference in Cleveland, kemudian beberapa tahun setelah nya HPLC berkembang dengan pesat dengan berbagai detector,salah satu HPLC yang paling sering digunakan adalah HPLC-DAD (High Perform Liquid Chromatography- Diode Array Detector).2.2.PENGERTIANKromatografi Cair Tenaga Tinggi dilengkapi dengan detektor diode array (KCKT-DAD) atau biasa juga disebut dengan High Performance Liquid Chromatography-Diode Aray Detector (HPLC-DAD) merupakan metode yang tidak destruktif dan dapat digunakan baik untuk analisis kualitatif dan kuantitatif.HPLC-DAD secara mendasar merupakan sebuah perkembangan tingkat tinggi dari kromatografi kolom. Selain dari pelarut yang menetes melalui kolom di bawah pengaruh gravitasi, HPLC didukung oleh pompa yang dapat memberikan tekanan tinggi sampai dengan 400 atm. Hal ini membuat HPLC-DAD dapat memisahkan komponen sampel lebih cepat. HPLC-DAD pada pinsipnya adalah sama dengan HPLC, Akan tetapi HPLC-DAD ini dilengkapi oleh sebuah detector yang dapat bekerja pada panjang gelombang tertentu yaitu disebut Diode Array Detector, HPLC-DAD ini bekerja pada panjang gelombang UV-VIS yaitu 190-850 nm. Saat ini, HPLC-DAD merupakan teknik pemisahan yang diterima secara luas untuk analisis dan pemurnian senyawa tertentu dalam suatu sampel dalam berbagai bidang, antara lain : farmasi, lingkungan, bioteknologi, polimer, dan industri-industri makanan.

2.3.PRINSIP KERJAPrinsipkerja HPLC-DAD adalah sebagai berikut: KerjaHPLC DAD pada prinsipnya adalah pemisahan analit-analit berdasarkan kepolarannya, dengan bantuan pompa,fasegerak cair dialirkan melalui kolom ke detector. Cuplikan dimasukkan ke dalaminjektordengan cara penyuntikanlalu menujualiran fasegerak.Bersama fase gerak mengalir menuju kolom.Di dalam kolom terjadi pemisahan komponen-komponen campuran. Karena perbedaan kekuatan interaksi antara solute-soluteterhadapfasediam.Solute-soluteyang kurang kuat interaksinya dengan fasediam akan keluar dari kolom lebih dulu. Sebaliknya, solut-solut yang kuat berinteraksi dengan fasediam maka solute-solut tersebut akan keluar kolom dideteksi oleh detector diode array, kemudian direkam dalam bentuk kromatogram kromatografi gas. Seperti pada kromatografi gas, jumlah peak menyatakan konsentrasi komponen dalam campuran. Computer dapat digunakan untuk mengontrol kerja sistem HPLC DAD dan mengumpulkan serta mengolah data hasil pengukuran HPLC DAD.