7/23/2019 Instru Pcr

1/17

KELOMPOK 3

Lestari Dwi Damayanti

Melisa Dwi P

Mira Agustina HMiyanda Dwi Savira P

Mutiara Putri Rahmawati

Oktinisa Rosida

Rakhmah ur RamdhaniaRatna Prihartanti

Re!a A"rianto

Ria #ohana Pus"asari

7/23/2019 Instru Pcr

2/17

P$R dan

Elektro%oresis

7/23/2019 Instru Pcr

3/17

POLYMERASE CHAIN

REACTION

Reaksi berantai polymerase (Polymerase ChainReaction,PCR) adalah suatu metode enzimatisuntuk amplifkasi DNA dengan cara in itro! PCR inipertama kali dikembangkan pada tahun "#$% oleh

&ary '! ullis!Produk PCR dapat diidentifkasi melalui ukurannyadengan menggunakan elektrooresis gel agarosa!

Prinsip ker*a PCR (Polymerase Chain Reaction)

adalah memperbanyak segmen spesifk DNA yangdia+ali dengan perletakan dNP-dNP dalam reaksitermal mengikuti acuan primer PCR (Russsel,"##.)!

7/23/2019 Instru Pcr

4/17

Kegunaan P$R

Amplifkasi urutan nukleotida!

enentukan kondisi urutan

nukleotida suatu DNA yangmengalami mutasi!

'idang kedokteran orensik!

elacak asal-usul sesorang denganmembandingkan /fnger print0!

7/23/2019 Instru Pcr

5/17

7/23/2019 Instru Pcr

6/17

&AHAPA

7/23/2019 Instru Pcr

7/17

Denaturasi

1elama proses denaturasi, DNA untaiganda akan membuka men*adi duauntai tunggal! 2al ini disebabkankarena suhu denaturasi yang tinggimenyebabkan putusnya ikatan

hidrogen diantara basa-basa yangkomplemen!

7/23/2019 Instru Pcr

8/17

Penem"elan "rimer

Pada tahap penempelan primer(annealing), primer akan menu*udaerah yang spesifk yangkomplemen dengan urutan primer!Pada proses annealing ini, ikatan

hidrogen akan terbentuk antaraprimer dengan urutan komplemenpada template!

7/23/2019 Instru Pcr

9/17

Reaksi "olimerisasi 'extension(

3mumnya, reaksi polimerisasi atauperpan*angan rantai ini, ter*adi padasuhu 45 oC dilakukan selama 67detik! Primer yang telah menempeltadi akan mengalami perpan*angan

pada sisi 89nya dengan penambahandNP yang komplemen dengantemplat oleh DNA polimerase!

7/23/2019 Instru Pcr

10/17

&riteria PCR

1uhu annealing primer biasanya %C lebihrendah dari hasil perhitungan suhu lebur

(melting temperature:m) 3kuran primer antara "$-5$ basa

&andungan ;ligonukleotida < dan C harusantara .7-67=

1uhu maksimal annealing antara %7C-67C, tetapi ada beberapa kondisi yangmemiliki suhu annealing diba+ah atau

diatas suhu tersebut!

7/23/2019 Instru Pcr

11/17

7/23/2019 Instru Pcr

12/17

?arm 3P

Denaturation

Annealing

>@tentio

ninal

>@tentio

>P

#.oC#7 oC B

#6 oC.% oC B

67o

C45 oC45 oC

8 inute87

1econd87

1econd

" inute"7

inute

>

7/23/2019 Instru Pcr

13/17

Elektro%oresis

>lektrooresis adalah teknik pemisahan komponenatau molekul bermuatan berdasarkan perbedaantingkat migrasinya dalam sebuah medan listrik!

edia yang umum digunakan adalah gel agarosa

atau poliakrilamid! >lektrooresis gel agarosadigunakan untuk memisahkan ragmen DNA!

Eokasi ragmen DNA yang terbentuk seperti pita-pita pada elektrooresis dapat diamati secara

spesifk dengan menggunakan pe+arna etidiumbromida!

7/23/2019 Instru Pcr

14/17

Alat dan )ahan

'uGer elektrooresis

Eoading dye

>tidium bromida3F transiluminator

'aki gel agarosa

Asam Asetat DA (>tylen Diamine etra Asetic Acid)

1isir elektrooresis

ikropipet

&ertas Paraflm

7/23/2019 Instru Pcr

15/17

Pem*uatan +el

Agarose"! imbang agarose sebanyak 5 gram5! uang ke dalam tabung >rlenmeyer

8! ambahkan "77 A> atau '> buGer

.! Didihkan sampai larut dalam micro+aeselama H . menit

%! Dinginkan sampai suhu 67C dalam suhukamar

6! uang ke dalam try yang sebelumnya telahdipasang sisir

4! 1etelah gel padat, angkat sisir dengan hati-hati! Eetakkan gel yang masih ada di dalam try

secara horizontal ke elektrooresis chamber

7/23/2019 Instru Pcr

16/17

7/23/2019 Instru Pcr

17/17