7/23/2019 Instru Pcr
1/17
KELOMPOK 3
Lestari Dwi Damayanti
Melisa Dwi P
Mira Agustina HMiyanda Dwi Savira P
Mutiara Putri Rahmawati
Oktinisa Rosida
Rakhmah ur RamdhaniaRatna Prihartanti
Re!a A"rianto
Ria #ohana Pus"asari
7/23/2019 Instru Pcr
2/17
P$R dan
Elektro%oresis
7/23/2019 Instru Pcr
3/17
POLYMERASE CHAIN
REACTION
Reaksi berantai polymerase (Polymerase ChainReaction,PCR) adalah suatu metode enzimatisuntuk amplifkasi DNA dengan cara in itro! PCR inipertama kali dikembangkan pada tahun "#$% oleh
&ary '! ullis!Produk PCR dapat diidentifkasi melalui ukurannyadengan menggunakan elektrooresis gel agarosa!
Prinsip ker*a PCR (Polymerase Chain Reaction)
adalah memperbanyak segmen spesifk DNA yangdia+ali dengan perletakan dNP-dNP dalam reaksitermal mengikuti acuan primer PCR (Russsel,"##.)!
7/23/2019 Instru Pcr
4/17
Kegunaan P$R
Amplifkasi urutan nukleotida!
enentukan kondisi urutan
nukleotida suatu DNA yangmengalami mutasi!
'idang kedokteran orensik!
elacak asal-usul sesorang denganmembandingkan /fnger print0!
7/23/2019 Instru Pcr
5/17
7/23/2019 Instru Pcr
6/17
&AHAPA
7/23/2019 Instru Pcr
7/17
Denaturasi
1elama proses denaturasi, DNA untaiganda akan membuka men*adi duauntai tunggal! 2al ini disebabkankarena suhu denaturasi yang tinggimenyebabkan putusnya ikatan
hidrogen diantara basa-basa yangkomplemen!
7/23/2019 Instru Pcr
8/17
Penem"elan "rimer
Pada tahap penempelan primer(annealing), primer akan menu*udaerah yang spesifk yangkomplemen dengan urutan primer!Pada proses annealing ini, ikatan
hidrogen akan terbentuk antaraprimer dengan urutan komplemenpada template!
7/23/2019 Instru Pcr
9/17
Reaksi "olimerisasi 'extension(
3mumnya, reaksi polimerisasi atauperpan*angan rantai ini, ter*adi padasuhu 45 oC dilakukan selama 67detik! Primer yang telah menempeltadi akan mengalami perpan*angan
pada sisi 89nya dengan penambahandNP yang komplemen dengantemplat oleh DNA polimerase!
7/23/2019 Instru Pcr
10/17
&riteria PCR
1uhu annealing primer biasanya %C lebihrendah dari hasil perhitungan suhu lebur
(melting temperature:m) 3kuran primer antara "$-5$ basa
&andungan ;ligonukleotida < dan C harusantara .7-67=
1uhu maksimal annealing antara %7C-67C, tetapi ada beberapa kondisi yangmemiliki suhu annealing diba+ah atau
diatas suhu tersebut!
7/23/2019 Instru Pcr
11/17
7/23/2019 Instru Pcr
12/17
?arm 3P
Denaturation
Annealing
>@tentio
ninal
>@tentio
>P
#.oC#7 oC B
#6 oC.% oC B
67o
C45 oC45 oC
8 inute87
1econd87
1econd
" inute"7
inute
>
7/23/2019 Instru Pcr
13/17
Elektro%oresis
>lektrooresis adalah teknik pemisahan komponenatau molekul bermuatan berdasarkan perbedaantingkat migrasinya dalam sebuah medan listrik!
edia yang umum digunakan adalah gel agarosa
atau poliakrilamid! >lektrooresis gel agarosadigunakan untuk memisahkan ragmen DNA!
Eokasi ragmen DNA yang terbentuk seperti pita-pita pada elektrooresis dapat diamati secara
spesifk dengan menggunakan pe+arna etidiumbromida!
7/23/2019 Instru Pcr
14/17
Alat dan )ahan
'uGer elektrooresis
Eoading dye
>tidium bromida3F transiluminator
'aki gel agarosa
Asam Asetat DA (>tylen Diamine etra Asetic Acid)
1isir elektrooresis
ikropipet
&ertas Paraflm
7/23/2019 Instru Pcr
15/17
Pem*uatan +el
Agarose"! imbang agarose sebanyak 5 gram5! uang ke dalam tabung >rlenmeyer
8! ambahkan "77 A> atau '> buGer
.! Didihkan sampai larut dalam micro+aeselama H . menit
%! Dinginkan sampai suhu 67C dalam suhukamar
6! uang ke dalam try yang sebelumnya telahdipasang sisir
4! 1etelah gel padat, angkat sisir dengan hati-hati! Eetakkan gel yang masih ada di dalam try
secara horizontal ke elektrooresis chamber
7/23/2019 Instru Pcr
16/17
7/23/2019 Instru Pcr
17/17
Top Related