1IDENTIFIKASI ASAM AMINO PADA ALBUMIN TELUR DAN SAMPELUNKNOWN

Kadek Anggra SupraptaFakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam, Universitas Pendidikan Ganesha

Email: Dekanggra5@gmail.com

Abstract

This experiment aims to identify the amino acids contained in the protein solution through TestMillon, Hopkins-Cole Test, Test Ninhydrin; Identify the amino acid cysteine to test the Sistineand PbS and nitroprusside test; Identify the types of amino acids contained in the unknownsample through the test reaction of amino acids. Data from the observations obtained withexperimental methods in accordance with the working procedures, as well as analyzing the dataobtained from the experiments. The results of observations show that the solution of eggalbumin test positive to Millon, Hopkins-Cole Test and Test PbS, which means successive eggalbumin solution containing amino acids tyrosine, tryptophan, and Cysteine. Sample A solutionis then to test positive to Millon, Hopkins-Cole Test and Ninhydrin test which indicates thatsample A contains amino acids tyrosine and tryptophan. Samples B and C only positiveNinhydrin test which indicates that the samples B and C is an amino acid. While the Dsamples positive for Hopkins-Cole Test and Test Ninhydrin which indicates that the sample D isthe amino acid tryptophan.

Keywords: identification, amino acids, egg albumin.

1. PENDAHULUANProtein merupakan salah satu kelompok

bahan makronutrien. Tidak seperti bahanmakronutrien lainnya (karbohidrat, lemak),protein ini berperan lebih penting dalampembentukan biomolekul daripada sumberenergi. Setiap sel hidup mengandung proteinyang merupakan senyawa organik essensialbagi mahluk hidup tersusun atas sejumlahasam amino yang membentuk suatu untaian(polimer) dengan ikatan peptida.

Asam amino di dapatkan dari sumber-sumber protein. Protein adalah senyawaorganik yang terdiri dari satu atau lebih asam

amino. Protein yang di dapatkan melaluimakanan sehari-hari di urai dalam pencernaandalam bentuk asam amino. Asam aminoadalah molekul organik dengan massamolekul rendah (antara 100 200 Da) yangmengandung setidak tidaknya satu guguskarboksil (- COOH) dan satu gugus amino (-NH2). Gugus karboksil dalam asam aminomemberikan sifat asam dan gugus aminamemberikan sifat basa. Dalam bentuk larutan,asam amino bersifat amfoterik yaitucenderung menjadi asam pada larutan basadan menjadi basa dalam larutan asam (Tika,2008).

Gambar 1. Struktur umum Asam aminoAsam amino termasuk golongan senyawa

yang fungsinya sangat penting dalamorganisme, yaitu sebagai penyusun protein.Kedua puluh jenis asam amino standar

C CN

R

H

H

H

O

OH

Gugus??amino Gugus?-karboksil

2tersebut yang terdapat dalam protein adalahalanin, valin,leusin, isoleusin, tryptophan,metionin, prolin, fenilalanin, serin, glisin,treonin, sistein, asparagin, glutamin, tirosin,asam aspartat, asam glutamat, arginin, lisindan histidin. Variasi yang terjadi antara asamasam amino terletak pada gugus-R atau rantaisampingnya. Berdasarkan gugus-R nya akandapat diramalkan sifatifat suatu asam amino.Sebaliknya, berdasarkan sifat sifat yangteridentifikasi akan dapat diketahui gugus Ryang terkandung dalam asam amino tersebutatau jenis asam amino tersebut (Tika, 2008).

Identifikasi asam amino dapat dilakukandengan dua metode yaitu metode kualitatif

dan kuantitatif. Metode kualitatif dilakukanuntuk mengetahui keberadaan asam aminodalam suatu protein sedangkan lebih lanjutdilakukan analisis kuantitatif untukmengetahui jumlah suatu asam amino dalamsuatu protein. Analisis asam amino denganmetode kuanlitatif dapat dilakukan denganmetode seperti uji Millon, Uji HopkinsCole,Uji Ninhidrin, Uji PbS serta Uji Nitroprusida.Pada praktikum ini akan diuji larutan asamamino berupa sampel unknown melalui ujikualitatif. Adapun rancangan metode untukanalisis suatu asam amino tertentu dapatdisajikan seperti tabel berikut.

Tabel 1. Rancangan Metode Analisis Asam AminoReaksi Uji Reaksi/Reagen Asam amino yang

dideteksiWarna

Uji Millon HgNO3 dalam asam nitratdengan sedikit asam nitrit

Tirosin Merah

Uji Hopkins-Cole Asam glioksilat dalam H2SO4pekat

Triptophan Ungu

Uji Ninhidrim Triketohidrin Hidrat Asam ? amino danpeptida yang memilikigugus ?-amino yangbebas

Biru

Uji PbS PbS (timbal sulfida) Asam amino yangdapat melepaskanunsur S

Hitam

Uji Nitroprusida Natrium nitroprusida dalam NH3encer

Sistein Merah

(Redhana, 2010)

2. METODEEksperimen identifikasi asam amino ini

dilakukan pada tanggal 28 Februari 2014 yangbertempat di Lab Kimia Organik Undiksha.Dalam eksperimen ini digunakan alat-alat danbahan sebagai berikut: 1 rak tabung reaksi,pipet tetes, corong, gelas kimia 25 mL, gelaskimia 100 mL, gelas ukur ukuran 5 mL, 1buah labu erlenmeyer ukuran 100 mL, spatula,batang pengaduk, pembakar spritus, korek api,kaca arloji, dan heater. Sedangkan bahan yangdigunakan terdiri dari larutan albumin telur,sampel A, B, C dan D, larutan Pb(CH3COO)2,reagen Millon, reagen Hopkins-Cole, reagenNinhidrin, larutan natrium nitroprusida,

larutan amonia, NaOH, asam sulfat pekat,larutan NH4OH dan aquades.

Uji MillonDitambahkan 5 tetes reagen Millon ke

dalam 3 mL larutan protein, campurandipanaskan sampai mendidih. Jika reagenyang digunakan terlalu banyak, warna akanhilang. Hal yang sama juga dilakukanterhadap larutan asamasam amino.

Uji HopkinsColeKe dalam 2 mL larutan protein

ditambahkan 2 mL reagen Hopkins-Cole.Ditambahkan sedikit demi sedikit H2SO4pekat sampai kirakira 5 mL melalui sisi

prililHighlight

tabung. Diamati warna yangpertemuan kedua cairan. Bperlahanlahan tabung teterbentuk cincin berwarna untuk larutan asamasam amino y

Uji NinhidrinDitambahkan 0,5 mL la

0,1% ke dalam 3 mL lDipanaskan hingga mendpercobaan dengan larutan aslain.

Uji Pb(CH3COO)2Ke dalam 5 mL l

ditambahkan 2 mL larutan NaPb-asetat,kemudian dipanaspemanas air. Jika positif, larberwarna kuning kemudiaakhirnya hitam

Uji NitroprusidaDilarutkan beberapa

hidroklorida ke dalam 5 mL a0,5 mL larutan natrium niKemudian ditambahkan 0,5 hidroksida.

Gambar 2. (a) Larutan album(c) Sampel B + R(e) Sampel D + R

Perubahan warna larutanpada larutan protein albumin tD setelah ditetesi reagen Millon dapemanasan dikarenakan padaalbumin telur dan sampel D tamino tirosin. Dimana mengandung fenolfenol membentuk senyawa merkurhidroksifenil yang menghamerah. Kemudian pada larut

(a)

ng terbentuk padaBila perlu putartersebut sampai

a ungu. Diulangimino yang lain.

larutan Ninhidrin larutan protein.ndidih. Diulangiasam amino yang

larutan protein NaOH dan 2 tetesnaskan di ataslarutan mulamuladian coklat dan

kristal sistein air. Ditambahkannitroprusida 1%.

0,5 mL ammonium

3. HASIL DAN PEMBAHPada eksperimen ini dil

amino terhadap larutan albumlarutan sampel unknown APengujian yang dilakukan paantara lain : uji Millon, uji HNinhidrin, uji PbS dan uDengan dilakukan pengtersebut maka asam amino pada sampel dapat diidentifik

Uji MillonPereaksi Millon pada da

untuk uji spesifik asam amiuji Millon ini, sebanyak 3 malbumin telur diteteskan sebanyak 5 mL. Reagen MillHgNO3 dalam asam nitrat danitrit. Setelah diteteskadilakukan pemanasan hinggalarutan albumin telur berubah Hal yang sama juga terjasampel D. Pada sampel A, terjadi perubahan warna mentetapi tetap bening tidak berw

lbumin telur + Reagen Millon; (b) Sampel A + Reag + Reagen Millon; (d) Sampel C + Reagen Millon; + Reagen Millon

tan menjadi merahin telur dan sampelillon dan dilakukanda larutan protein terkandung asam

dalam Tirosinl yan nantinyauri dengan gugusnghasilkan warnarutansampel A, B,

dan C tidak memberikan pemenjadi merah ketika ditaMillon dan dilakukan pemanatidak terdapat gugus fenol paamino ini sehingga tidak senyawa merkuri dengan guyang nantinya memberikan wlarutan. Reaksi yang terjadiberikut:

(b) (c) d) (e)

3

AHASAN dilakukan uji asamalbumin telur danA, B, C, dan D.

n pada larutan sampelji Hopkins-Cole, uji uji Nitroprusida.pengujian-pengujianno yang terkandungifikasi.

dasarnya digunakanmino Tirosin. Pada

3 mL larutan larutann reagen Millonillon adalah larutant dan sedikit asam

skan, Selanjutnyaga mendidih. warna

ubah menjadi merah.rjadi pada larutanA, B dan C tidakenjadi merah, akan

berwarna.

eagen Millon;on;

n perubahan warnaditambahkan reagen

anasan dikarenakanl pada struktur asamk bisa membentukgugus hidroksifenil

n warna merah padajadi adalah sebagai

(e)

HO CH2CH

NH2

C

Gam

Pereaksi Millon pada dasuntuk uji spesifik asam amino larutan yang akan dianalisissuasana basa, maka harus dinetralisasi dengan asam namJika hal ini tidak dilakukan mdari pereaksi akan mengHg(OH)2 sedangkan jika digunaion Cl- dapat bereaksi dengmembentuk Cl. yang nantinyakompleks berwarna.

Gambar 4.

Terbentuknya cincin pertemuan kedua cairan padaalbumin telur dan sampel D bahwa dalam larutan protein mengandung asam amino trasam amino triptophan terdapada strukturnya. Maka cincterbentuk pada pertemuan merupakan hasil kondensdengan gugus aldehida yang beglioksilat (pada reagen Hopkinsstruktur dari asam glioksilat

(a)(a) Larutan albumReagen Hopkins CSampel C + ReagenH2SO4

COH

O+ Hg2

2+HO CH2C

O2N

N

ambar 3. Persamaan reaksi pada uji Millon

dasarnya digunakanmino Tirosin. Jikaisis berada dalam

us terlebih dahulunamun bukan HCl.

n maka ion merkuringendap sebagai

gunakan HCl makaengan asam nitratnya dapat merusak

Uji HopkinsColePada uji Hopkins Cole ini

larutan sampel albumin telurputih keruh ditambahkan Hopkins-Cole. Kemudiditambahkan beberapa tetemelalui dinding tabung, terbepada pertemuan kedua cairan. juga terjadi pada larutan sampel A, B dan C tidakungu, akan tetapi tetap bening

n ungu padaada larutan proteinD ini menandakanin telur ini positif

no triptophan. Padadapat cincin indolcincin ungu yang

uan kedua cairanensasi triptophan

ng berasal dari asamkinsCole) dimana

lat adalah HOOC

CHO. Sedangkan fungsi pesulfat adalah mengkondisikberjalan pada suasana asam. A, B dan C memberikan hasiHopkins-Cole yaitu tidak ungu, ini disebabkan tidak acincin indol pada strukturamino ini sehingga tidak kondensasi dengan aldehida asam glioksilat ini sehingga tidak terbentuk. Reaksi yangsebagai berkut:

(b) (c) d) (bumin telur + Reagen Hopkins Cole + H2SO4; (

Cole + H2SO4; (c) Sampel B + Reagen Hopkins Cgen Hopkins Cole + H2SO4; (e) Sampel D + Reagen

4

2

CH

NH2

CO

O-Hg2

2+

e ini sebanyak 2 mLelur yang berwarnaan 2 mL reagenudian setelah

tetes H2SO4 pekatrbentuk cincin unguiran. Hal yang saman sampel D. Padaak terbentuk cincinning tidak berwarna.

penambahan asamondisikan reaksi agar

m. Uji pada sampelhasil negatif pada ujik terbentuk cincin adanya kandungantur keempat asamk bisa mengalami

da yang berasal dariga cincin ungu punyang terjadi adalah

(e) (b) Sampel A +

ns Cole + H2SO4; (d)gen Hopkins Cole +

Gambar

Uji NinhidrinUji ini merupakan uji

asam amino. Pada uji

sebanyak 3 mL larutan sampeditambahkan dengan 0,5 Ninhidrin. Kemudian dilakuhingga mendidih. Sebelumterbentuk larutan bening taksetelah dilakukan pemanaendapan warna merah dan warna ungu. Pada sampel Aterjadi perubahan warna secar

Gambar 6.

Perubahan warna larutan pada larutan sampel setelah dilarutan Ninhidrin dan dilakukmenandakan bahwa seluruh sterdapat kandungan asam -amyang memiliki gugus -amiPembentukan larutan komplungu ini terjadi karena

NH

CH 2

CHN H 2 C O H

O

+

(a)(a) Larutan album(c) Sampel B + lD + larutan Ninh

Triptophan

bar 5. Persamaan reaksi pada Uji Hopkins Cole

ji universal untukuji Ninhidrin ini

pel albumin telur,5 mL larutankukan pemanasan

elum dipanaskantak berwarna, dananasan terbentukn sedilit terdapat

l A, B, C dan Dcara jelas dari tidak

berwarna menjadi unguji iniuniversal untuk asam aNinhidrin ini sebanyak 3 malbumin telur ditambahkan larutan Ninhidrin. Kemudipemanasan hingga mendidipanaskan terbentuk larutberwarna, dan setelah dilakterbentuk endapan warna mterdapat warna ungu. Pada dan D terjadi perubahan wdari tidak berwarna menjadi ung

utan menjadi ungu diteteskan dengan

akukan pemanasanh sampel tersebut-amino dan peptidamino yang bebas.

ompleks berwarnana dekarboksilasi

oksidatif dari asam amino ninhidrin tereduksi, NH3 dan terjadi reaksi antara ninhidengan molekul ninhidrin dengan molekul NH3 ysehingga terbentuk kompleksReaksi yang terjadi dalam prsebagai berikut:

+ CO O H

CH O H 2SO 4

NH

H

(b) (c) d) (ebumin telur + larutan Ninhidrin; (b) Sampel A + lar+ larutan Ninhidrin; (d) Sampel C + larutan Ninhidinhidrin

Asam-2,3,4,5karbolin-4-

(cincin

5

ini merupakan ujiamino. Pada uji

3 mL larutan sampelan dengan 0,5 mLmudian dilakukanendidih. Sebelumarutan bening taklakukan pemanasan merah dan sedilit

da sampel A, B, Cn warna secara jelas

di ungu.

ino dan produksidan CO2. Kemudianninhidrin tereduksiin yang lain dan

yang dibebaskaneks berwarna ungu. proses ini adalah

H

H H

COOH

H

NHH H

(e)larutan Ninhidrin;

nhidrin; (e) Sampel

2,3,4,5-tetrahidro- --4-karboksilatcin ungu)

OO

OH

OH

+ -H2NCHR

Ninhidrin

O

O-

+NH CHR+

O

O

N

HO

Gamba

Uji PbSUntuk uji ini dilakuka

menambahkan 2 mL NaOH asetat pada 5 mL larutan Kemudian dilakukan pema

Gambar 8.

Terbentuknya endapanlarutan protein albumin telbahwa pada larutan protein

(a)(a) Larutan albumiasetat; (d) Sampel C

+O

O

OH

NH CHR

COH -HROO2H -H2O100oC

RH2O RCHO

+O

O

NH2

O

O

O

-H2O

O

O-

N

O

O

mbar 7. Persamaan reaksi pada Uji Ninhidrin

ukan dengan caraH dan 2 tetes Pb-an albumin telur.manasan di atas

pemanas air. Setelah dipanaendapan berwarna hitam diSedangkan pada sampel A, Bterbentuk endapan hitam.

pan hitam padatelur menandakanein albumin telur

terdapat asam amino yang unsur S (metionin atau sistruktur asam amino sistein

diketohidrindilidendiketohidrindamida

(pigmen warna biru-ung

(b) (c) d) (e)umin telur + Pb asetat; (b) Sampel A + Pb asetat; (cpel C + Pb asetat; (e) Sampel D + Pb asetat

6

+C O

-CO2-H2O

+2

Ninhidrin

O

O

panaskan terbentuk di dasar larutan., B, C dan D tidak

ng mampu melepasu sistein) dan pada

in terdapat unsur S.

dena-midau-ungu)

e); (c) Sampel B + Pb

7Endapan hitam itu merupakan endapan hitamPbS yang terbentuk dari reaksi antara ionsulfida yang dibebaskan oleh asam amino danion Pb2+ yang berasal dari larutan Pb-asetat.Reaksi yang terjadi adalah sebagai berikut :

Pb2+ + S2- PbSEndapan Hitam

Penambahan NaOH dalam hal ini adalahuntuk mendenaturasikan protein sehinggaikatan yang menghubungkan atom S padaasam amino dapat terputus. Kemudian padalarutan asam amino glisin, tirosin, fenilalanindan tryptophan tidak terjadi endapan hitam

setelah ditambahkan Pb-asetat dan dilakukanpemanasan hal ini dikarenakan pada strukturkeempat asam amino ini tidak terdapat unsurS sehingga tidak bisa melepaskan ion sulfida.

Uji NitroprusidaPada uji Nitroprusida larutan sampel

ditambahkan larutan natrium nitroprusida danNH4OH. Uji akan positif terhadap ujinitroprusida apabila terbentuk larutanberwarna merah yang merupakan kompleksdari hasil reaksi berikut.

Gambar 9.

4. SIMPULANBerdasarkan hasil percobaan yang

diperoleh dapat disimpulan bahwa padaalbumin telur mengandung asam amini tirosin,triptopan, asam -amino bebas, asam aminoyang dalam struktur asam aminonyamengandung belerang. Untuk sampelunknown D menghasilkan uji positif pada ujiMillon, Hopkins-Cole, dan Ninhidrin yangmenandakan adanya tirosin, tiptopan danasam -amino bebas. Pada sampel unknownA,B,C hanya menghasilkan uji positifNinhidrin yang mendakan adanya asam -

amino bebas seperti fenilalanin, glisin,triptopan, tirosin dan lain-lain kecuali prolin.

5. UCAPAN TERIMA KASIHUcapan terima kasih penulis sampaikan

kepada Dr. I Nyoman Tika, M.Si., sebagaidosen pengampu mata kuliah PraktikumBiokimia, Kadek Dewi Wirmandianthy, S.Pd

selaku asisten dosen, dan I Dewa Subamiaselaku laboran di Jurusan Pendidikan Kimiaatas masukan dan sarannya sehinggapercobaan ini dapat dilaksanakan dengan baik.

6. REFERENSITika, I Nyoman. 2010. Penuntun praktikum

Biokimia. Singaraja: UniversitasPendidikan Ganesha

Chairil Anwar, dkk. 1994. PengantarPraktikum Kimia Organik.Yogyakarta: Departemen Pendidikandan Kebudayaan

Thenawijaya, Maggy. 1982. Dasar-DasarBiokimia jilid 1. Jakarta: Erlangga

Redhana. 2010. Penuntun Pratikum Biokimia.Singaraja: Universitas PendidikanGanesha

(a) (b) (c) (d)(a) Larutan sampel A ditambahkan larutan nitroprusida dan NH4OH; (b) Larutansampel A ditambahkan larutan nitroprusida dan NH4OH; (c) Larutan sampel Aditambahkan larutan nitroprusida dan NH4OH; (d) Larutan sampel A ditambahkanlarutan nitroprusida dan NH4OH