Dyah Ayu Widyastuti

Rekombinasi antara molekul DNA dari organisme

berbeda fenomena umum di alam

Duplikasi fenomena alam di laboratorium manipulasi genetik

Kumpulan teknik atau metode yang digunakan untuk mengkombinasikan gen-gen secara buatan

Proses rekombinasi

Hasil rekombinan

Teknologi DNA Rekombinan

Plasmid

Enzim restriksi (endonuklease restriksi)

Enzim ligase

Bakteri vektor (sel kompeten)

Perangkat Utama

Terdapat pada bakteri

DNA ekstrakromosomal

Berbentuk sirkuler

Umumnya berukuran kecil (lebih kecil dari ukuran kromosom)

Jenis, jumlah, dan ukurannya bervariasi antar sel dan antar jenis bakteri

Plasmid

Sebagai vektor untuk mengklon gen atau mengklon

fragmen DNA mengubah sifat bakteri

Untuk memperbanyak gen (copy gene) yang telah disisipkan dengan bantuan sel bakteri sel vektor/sel kompeten

Fungsi Plasmid (dalam pembentukan DNA rekombinan)

Untuk memotong rantai DNA sticky end atau

blunt end

Contoh: enzim EcoRI diisolasi pertama kali oleh Herbert Boyer pada 1969 dari E. coli

EcoRI memotong pada bagian antara basa G dan A pada sekuen GAATTC

Enzim Endonuklease Restriksi

Setiap enzim endonuklease restriksi mengenali sekuen pemotongan yang khas dan memotong DNA pada situs pemotongan yang khas

Untuk menyambung DNA

Enzim Ligase

DNA rekombinan Jackson, Simon, dan Berg 1972

DNA/ Plasmid

Rekombinan

Apa yang bisa dilakukan?

DNA Rekombinan

Pada Tanaman??

Transformasi

…cont…

Sel kompeten

ditumbuhkan pada media selektif

Plasmid rekombinan koloni putih

Seleksi

Untuk mendeteksi keberadaan DNA sisipan

Bisa dilakukan dengan

- Analisis migrasi

- Analisis restriksi

- PCR (Polymerase Chain Reaction)

Penentuan urutan DNA sisipan (sequencing)

Deteksi

Elektroforesis

Elektroforesis Gel Agarosa

…cont…

Sequencing

…cont…