Teknik DNA Rekombinan Pada Pisang Abaka

21
7/23/2019 Teknik DNA Rekombinan Pada Pisang Abaka http://slidepdf.com/reader/full/teknik-dna-rekombinan-pada-pisang-abaka 1/21 BAB I PENDAHULUAN Perkembangan dan kemajuan yang dicapai dalam bidang biologi molekuler telah melahirkan dan berkembangnya teknologi rekombinan DNA atau yang dikenal dengan sebutan rekayasa genetik !ekayasa genetik atau rekombinan DNA adalah suatu kumpulan teknik " teknik eksperimental yang memungkinkan peneliti untuk mengisolasi# mengidenti$iksi dan melipatgandakan suatu $ragmen dari material genetik %DNA& dalam bentuk murninya 'anipulasi ( manipulasi tersebut dilakukan secara in )itro dengan menggunakan material ( material biologi %*hairul# +,,-& !ekayasa genetika tanaman merupakan suatu teknik untuk memperbaiki si$at" si$at tanaman dengan menambahkan si$at"si$at ketahanan antara lain ketahanan terhadap serangga hama .i$at"si$at ketahanan tersebut berasal dari gen"gen %materi genetik& yang diambil dari sumber yang berkualitas dan sangat beragam .umber materi genetik tersebut dapat berasal dari mikroba# he/an dan dari jaringan tanaman yang telah diketahui memiliki gen ketahanan tertentu *eunggulan rekayasa genetika adalah kemampuannya untuk dapat memindahkan materi genetik tersebut dengan ketepatan yang tinggi dan terkontrol serta dapat dilakukan dalam /aktu yang lebih singkat dimana hal ini tidak dapat dilakukan dengan cara pemuliaan tanaman !ekayasa genetik# dalam bidang pertanian# memiliki banyak man$aat diantaranya akan dapat memperbaiki karakter penting seperti si$at ketahanan tanaman terhadap serangga 0eknologi trans$ormasi juga akan memberikan /ahana bagi pemulia tanaman untuk memperoleh gen atau kelompok gen baru yang lebih luas .uatu gen yang tidak terdapat pada suatu spesies tanaman tertentu dimungkinkan untuk dapat diperoleh dari organisme lain seperti bakteri# )irus# binatang# dan tanaman lain %.antoso# dkk# +,,1& Perbaikan si$at karakter tanaman dapat dilakukan melalui modi$ikasi genetik baik dengan pemuliaan tanaman secara kon)ensional maupun dengan bioteknologi khususnya teknologi rekayasa genetik *adang"kadang dalam perakitan )arietas tanaman tahan serangga hama# pemulia kon)ensional menghadapi suatu kendala yang sulit dipecahkan# yaitu langkanya atau tidak adanya sumber gen ketahanan di dalam koleksi plasma nut$ah 2ontoh -

Transcript of Teknik DNA Rekombinan Pada Pisang Abaka

Page 1: Teknik DNA Rekombinan Pada Pisang Abaka

7/23/2019 Teknik DNA Rekombinan Pada Pisang Abaka

http://slidepdf.com/reader/full/teknik-dna-rekombinan-pada-pisang-abaka 1/21

BAB I

PENDAHULUAN

Perkembangan dan kemajuan yang dicapai dalam bidang biologi molekuler telah melahirkan

dan berkembangnya teknologi rekombinan DNA atau yang dikenal dengan sebutan rekayasa

genetik !ekayasa genetik atau rekombinan DNA adalah suatu kumpulan teknik " teknik 

eksperimental yang memungkinkan peneliti untuk mengisolasi# mengidenti$iksi dan

melipatgandakan suatu $ragmen dari material genetik %DNA& dalam bentuk murninya

'anipulasi ( manipulasi tersebut dilakukan secara in )itro dengan menggunakan material ( 

material biologi %*hairul# +,,-&

!ekayasa genetika tanaman merupakan suatu teknik untuk memperbaiki si$at" si$at

tanaman dengan menambahkan si$at"si$at ketahanan antara lain ketahanan

terhadap serangga hama .i$at"si$at ketahanan tersebut berasal dari gen"gen %materi genetik&

yang diambil dari sumber yang berkualitas dan sangat beragam .umber materi genetik 

tersebut dapat berasal dari mikroba# he/an dan dari jaringan tanaman yang telah diketahui

memiliki gen ketahanan tertentu *eunggulan rekayasa genetika adalah kemampuannya

untuk dapat memindahkan materi genetik tersebut dengan ketepatan yang tinggi dan

terkontrol serta dapat dilakukan dalam /aktu yang lebih singkat dimana hal ini tidak dapat

dilakukan dengan cara pemuliaan tanaman

!ekayasa genetik# dalam bidang pertanian# memiliki banyak man$aat diantaranya

akan dapat memperbaiki karakter penting seperti si$at ketahanan tanaman terhadap serangga

0eknologi trans$ormasi juga akan memberikan /ahana bagi pemulia tanaman untuk 

memperoleh gen atau kelompok gen baru yang lebih luas .uatu gen yang tidak terdapat padasuatu spesies tanaman tertentu dimungkinkan untuk dapat diperoleh dari organisme lain

seperti bakteri# )irus# binatang# dan tanaman lain %.antoso# dkk# +,,1&

Perbaikan si$at karakter tanaman dapat dilakukan melalui modi$ikasi genetik baik 

dengan pemuliaan tanaman secara kon)ensional maupun dengan bioteknologi khususnya

teknologi rekayasa genetik *adang"kadang dalam perakitan )arietas tanaman tahan serangga

hama# pemulia kon)ensional menghadapi suatu kendala yang sulit dipecahkan# yaitu

langkanya atau tidak adanya sumber gen ketahanan di dalam koleksi plasma nut$ah 2ontoh

-

Page 2: Teknik DNA Rekombinan Pada Pisang Abaka

7/23/2019 Teknik DNA Rekombinan Pada Pisang Abaka

http://slidepdf.com/reader/full/teknik-dna-rekombinan-pada-pisang-abaka 2/21

sumber gen ketahanan yang langka adalah gen ketahanan terhadap serangga hama# misalnya

 penggerek batang padi# penggerek polong kedelai# hama boleng ubi jalar# penggerek buah

kapas %cotton bol/orm&# dan penggerek jagung %3ulandari# +,,1&

Untuk menghasilkan tanaman transgenik melibatkan beberapa tahap dalam teknik 

 biologi molekuler atau seluler# salah satunya adalah karakterisasi atau identi$ikasi gen yang

telah diintroduksi ke dalam jaringan tanaman *eberhasilan teknik trans$ormasi ditandai

dengan keberhasilan menyisipkan rangkaian gen yang diintroduksi ke dalam genom tanaman#

dapat diekspresikan dan tetap terpelihara dalam seluruh proses pembelahan sel berikutnya

'aka diperlukan upaya untuk mengkon$irmasi integritas gen yang diintroduksi dan

menentukan jumlah kopinya di dalam genom tanaman# serta menentukan apakah gen tersebut

dapat ber$ungsi dengan benar atau salah Identi$ikasi dari jaringan tanaman yang

tertrans$ormasi dapat dilakukan dengan sejumlah teknik di antaranya adalah penggunaan

teknik P2! dan analisis .outhern Blot %.antoso# dkk# +,,1&

Beberapa tanaman transgenik hasil rekayasa genetika diantaranya adalah4

- !ound Up !eady ! .oybean yaitu kedelai yang toleran terhadap senya/a akti$ gli$os$at

yang terdapat pada herbisida

+ 0omat yang dirancang agar proses pematangannya terhambat sehingga lebih tahan lama

5 *apas dan jagung Bt# yaitu kapas dan jagung yang dirancang mengandung protein

insektisida yang berasal dari bakteri Bacillus thuringiensis %Bt&

1 Beras yang mengandung )itamin A %golden rice&

6 0anaman pisang penghasil protein asing %baik untuk nutrien maupun obat&

+

Page 3: Teknik DNA Rekombinan Pada Pisang Abaka

7/23/2019 Teknik DNA Rekombinan Pada Pisang Abaka

http://slidepdf.com/reader/full/teknik-dna-rekombinan-pada-pisang-abaka 3/21

BAB II

PE'BAHA.AN

2.1 Rekayasa Genetika

Prinsip dasar teknologi rekayasa genetika adalah memanipulasi atau melakukan perubahan

susunan asam nukleat dari DNA %gen& atau menyelipkan gen baru ke dalam struktur DNA

organisme penerima 7en yang diselipkan dan organisme penerima dapat berasal dari

organisme apa saja 'isalnya# gen dari sel pankreas manusia yang kemudian diklon dan

dimasukkan ke dalam sel E 2oli yang bertujuan untuk mendapatkan insulin %.uryo# +,,8&

2.2 Penelitian tentang Rekayasa Genetika pada Tanaman Pisang

2.2.1 RK Pisang Abaka dengan Serat Berwarna

Industri tekstil di Indonesia merupakan industri yang berkembang cukup pesat Namun

 perkembangan yang terjadi memba/a dampak negati$ bagi kehidupan masyarakat# yaitu

meningkatkan risiko kerusakan lingkungan jika limbah yang dihasilkan tidak diolah dengan

 baik .alah satu masalah yang paling mengganggu dari limbah industri tekstil adalah 9at

/arna yang dikandungnya Untuk mengatasi masalah tersebut# terdapat suatu altemati$ baru

yang dapat dikembangkan# yakni melalui aplikasi salah satu bidang bioteknologi dalam upaya

 pe/arnaan serat# yaitu !ekayasa 7enetika Adapun serat yang menjadi subjek dalam karya

tulis ini adalah serat pisang Abaka % Musa textilis&# karena serat pisang Abaka ini merupakan

serat yang sering digunakan sebagai bahan baku tekstil berupa pakaian 'elalui langkah ini#

selanjutnya akan dihasilkan serat pisang Abaka yang memiliki /arna sesuai kebutuhan#

sehingga limbah /arna dalam industri tekstil dapat dikurangi

Dari pembahasan yang telah dipaparkan# didapatkan bah/a proses rekayasa genetika

untuk membuat pisang Abaka % Musa textilis& dengan serat ber/arna dapat dibagi menjadi tiga

tahap yaitu# pengklonan gen pemba/a /arna# persiapan tanaman yang dilakukan dengan

kultur jaringan %kultur in )itro&# dan trans$ormasi DNA ke sel dalam jaringan pisang Abaka

Adapun keunggulan serat yang dihasilkan pisang Abaka melalui teknologi rekayasa genetika

yaitu serat yang dihasilkan ber/arna alami sehingga ramah lingkungan dan lebih tahan lama

dengan keragaman si$at yang kompleks

5

Page 4: Teknik DNA Rekombinan Pada Pisang Abaka

7/23/2019 Teknik DNA Rekombinan Pada Pisang Abaka

http://slidepdf.com/reader/full/teknik-dna-rekombinan-pada-pisang-abaka 4/21

0anaman Abaka termasuk dalam pisang %'usacease& yang dikategorikan sebagai

 pisang jantan# karena pisang ini# tidak menghasilkan buah Produksi utama dari budidaya

tanaman pisang ini adalah berupa serat %$ibre& yang terkenal dalam perdagangan internasional

sebagai serat berkualitas tinggi# sebab serat pisang Abaka ini tahan terhadap air garam

sehingga banyak digunakan sebagai pembungkus kabel ba/ah laut atau tali temali pada

kapal Namun belakangan ini serat pisang Abaka juga banyak digunakan untuk bahan baku

kerajinan rakyat seperti bahan pakaian# anyaman topi# tas# peralatan makan# kertas rokok# dan

sachet teh celup %3ibo/o# -::8& .elain itu sebagai bahan baku pulp kertas bermutu tinggi

%kekuatan dan daya simpan tinggi& seperti kertas uang# cek# kertas $ilter# dan kertas

 pembungkus %0riyanto# 'uliah# dan Edi# -:8+&

'elihat $akta"$akta di atas# serat pisang Abaka memiliki potensi yang cukup besar 

sebagai bahan baku industri tekstil .erat yang dihasilkan pisang tersebut merupakan salah

satu serat yang menjadi bahan baku utama dan memiliki prospek yang bagus dalam

 perkembangan industri tekstil Namun# permasalahan pelik mengenai limbah cair 9at /arna

yang ditimbulkan dalam proses produksi pakaian# menjadikan suatu $enomena yang harus

segera diatasi *emajuan ilmu pengetahuan dan teknologi modern ini dapat diintegrasikan

dalam upaya mengatasi masalah tersebut !ekayasa genetika merupakan langkah yang tepat#

yang dapat dilakukan

!ekayasa genetika %Genetic Engineering & dalam arti paling luas adalah penerapan

genetika untuk kepentingan manusia !ekayasa genetika merupakan kegiatan pemuliaan

he/an atau tanaman melalui seleksi dalam populasi# demikian pula penerapan mutasi buatan

tanpa target %!usso dan 2o)e# -::6& 3alaupun demikian# masyarakat ilmiah sekarang lebih

 bersepakat dengan batasan pengertian !ekayasa 7enetika yang lebih sempit# yaitu penerapan

teknik"teknik biologi molekular untuk mengubah susunan genetik dalam kromosom atau

mengubah sistem ekspresi genetik yang diarahkan pada keman$aatan tertentu %!usso dan

2o)e# -::6& 0eknologi !ekayasa 7enetika merupakan inti dari bioteknologi yang dapat

dide$inisikan sebagai teknik in )itro asam nukleat# termasuk teknologi manipulasi molekul

DNA atau teknologi DNA rekombinan dan injeksi langsung DNA ke dalam sel atau organel

%.uryo# +,,8&

Berdasarkan kajian tersebut# rekayasa genetika dapat menjadi solusi dalam

 permasalahan limbah cair industri tekstil 0eknologi rekayasa genetika ini dapat digunakan

1

Page 5: Teknik DNA Rekombinan Pada Pisang Abaka

7/23/2019 Teknik DNA Rekombinan Pada Pisang Abaka

http://slidepdf.com/reader/full/teknik-dna-rekombinan-pada-pisang-abaka 5/21

dalam upaya pe/arnaan serat pisang Abaka 'elalui langkah ini# selanjutnya akan dihasilkan

serat pisang Abaka yang memiliki /arna sesuai kebutuhan# sehingga limbah /arna dalam

industri tekstil dapat dikurangi !ekayasa genetika untuk membuat pisang Abaka dengan

serat ber/arna dapat dibagi menjadi tiga tahap yaitu# pengklonan gen pemba/a /arna#

 persiapan tanaman yang dilakukan dengan kultur jaringan %kultur in )itro&# dan trans$ormasi

DNA ke sel dalam jaringan pisang Abaka

Gambar 1. Skema Pembuatan Serat Abaka ( Musa textilis) Berwarna

0ahap"tahap dalam pembuatan serat Abaka ber/arna melalui rekayasa genetika diuraikan

lebih lanjut sebagai berikut

A Pengklonan 7en

*lon gen merupakan teknik penggandaan gen yang menghasilkan keturunan dengan si$at

sama baik dari segi hereditas maupun penampakannya Dalam melakukan pengklonan suatu

gen diperlukan )ektor yang ber$ungsi sebagai /ahana atau kendaraan yang akan memba/a

suatu $ragmen DNA masuk ke dalam sel inang dan memungkinkan terjadinya replikasi dan

ekspresi $ragmen DNA asing tersebut %Pardal# +,,+& .alah satu )ektor yang sering

digunakan yaitu plasmid Plasmid adalah molekul DNA sirkular berukuran kecil yang

terpisah dari kromosom dan dapat bereplikasi sendiri %2ampbell# dkk# +,,+& Ukuran

 plasmid berkisar antara - kb hingga lebih dari +6, kb Agar dapat digunakan sebagai )ektor 

kloning# plasmid harus memenuhi syarat"syarat antara lain mempunyai ukuran relati$ kecil

 bila dibandingkan dengan pori dinding sel inang sehingga dapat dengan mudah melintasinya#

mempunyai sekurang"kurangnya dua gen marker yang dapat menandai masuk tidaknya

 plasmid ke dalam sel inang# mempunyai tempat pengenalan restriksi sekurang"kurangnya di

dalam salah satu marker yang dapat digunakan sebagai tempat penyisipan $ragmen DNA# dan

6

Page 6: Teknik DNA Rekombinan Pada Pisang Abaka

7/23/2019 Teknik DNA Rekombinan Pada Pisang Abaka

http://slidepdf.com/reader/full/teknik-dna-rekombinan-pada-pisang-abaka 6/21

mempunyai titik a/al replikasi %ori& sehingga dapat melakukan replikasi di dalam sel inang

%!ahma/ati# +,,;&

.ecara umum# proses penggunaan plasmid bakteri untuk mengklon gen meliputi tahap

isolasi DNA# penyelipan DNA ke dalam )ektor# pemasukan )ektor pengklon ke dalam sel#

 pengklonan sel beserta gen asing# dan identi$ikasi klon sel %2ampbell# dkk# +,,+& Isolasi

DNA bertujuan untuk mendapatkan DNA murni# pemasukan )ektor pengklon ke dalam sel

 bertujuan untuk membuat DNA rekombinan# pengklonan sel beserta sel asing bertujuan untuk 

mendapatkan sel dengan si$at yang sama# dan identi$ikasi klon sel bertujuan mengetahui sel"

sel yang memba/a gen yang diingikan DNA murni yang dimaksud dalam tahap isolasi yaitu

DNA tanpa protein dan !NA dari suatu sel dalam jaringan Proses isolasi DNA dia/ali

dengan proses ekstraksi DNA Hal ini bertujuan untuk memisahkan DNA dengan partikel lain

yang tidak diinginkan Proses ini harus dilakukan dengan hati"hati# sehingga tidak 

menyebabkan kerusakan pada DNA Untuk mengeluarkan DNA dari sel# dapat dilakukan

dengan memecahkan dinding sel# membran plasma dan membran inti baik dengan cara

mekanik maupun secara kimia/i %.usanto# +,,8&

.elanjutnya penyelipan DNA ke dalam )ektor dilakukan dengan pemotongan plasmid

dan DNA tumbuhan menggunakan en9im restriksi Ujung komplementer yang terbentuk 

akibat akti)itas en9im restriksi pada DNA maupun plasmid akan saling melengket satu sama

lain melalui ikatan hidrogen *emudian# en9im ligase mengkatalisis ikatan ko)alen yang

menyambung ujung"ujungnya *ombinasi tersebut disebut Plasmid rekombinan Plasmid

rekombinan memiliki pengertian yang sama dengan DNA rekombinan yaitu kombinasi materi

genetik baru yang diperoleh dengan cara penyisipan molekul DNA ke dalam suatu )ektor 

sehingga memungkinkannya untuk terintegrasi dan mengalami perbanyakan di dalam suatu

sel organisme lain yang berperan sebagai sel inang Plasmid rekombinan yang terbentuk 

kemudian masuk ke sel bakteri baik melalui konjugasi# trans$ormasi# maupun transduksi

%.usanto# +,,8& .el bakteri kemudian ditumbuhkan dalam kultur sehingga membentuk klon

sel .ampai pada tahap ini# telah dihasilkan banyak klon $ragmen DNA yang berbeda# tidak 

hanya $ragmen yang diinginkan Langkah berikutnya penyaringan koloni untuk gen yang

diharapkan yang merupakan tahap paling sulit Untuk mendeteksi DNA suatu gen secara

langsung tergantung pada pembuatan pasangan basa antara gen dan urutan komplementer 

 pada urutan asam nukleat lain Proses ini disebut hibridisasi asam nukleat 0eknik ini

 bergantung pada kenyataan bah/a urutan nukleotida komplementer akan berpasangan basa

;

Page 7: Teknik DNA Rekombinan Pada Pisang Abaka

7/23/2019 Teknik DNA Rekombinan Pada Pisang Abaka

http://slidepdf.com/reader/full/teknik-dna-rekombinan-pada-pisang-abaka 7/21

terikat menjadi satu oleh ikatan hidrogen %2ampbell# dkk# +,,+& 'engadaptasi proses kerja

tersebut# maka untuk mendapatkan produk pisang Abaka dengan serat ber/arna dapat

ditempuh melalui tahap"tahap sebagai berikut

- Pengisolasian <ektor dan DNA .umber 7en

Plasmid yang digunakan yaitu plasmid 0i %tumor inducing atau penginduksi tumor& dari

 bakteri  Agrobacterium tumefaciens strain liar %galur alami& Plasmid ini selanjutnya disebut

sebagai )ektor klon Pada plasmid 0i terdapat 0"DNA yang digunakan sebagai )ektor untuk 

trans$ormasi tanaman yang telah dihilangkan )irulensinya .edangkan DNA yang

mengandung gen yang diinginkan yaitu gen pengkode /arna# didapat dari tumbuhan lain

yang memiliki gen /arna yang diperlukan

Gambar 2. iagram Plasmid Ti (!eldt" 1###)

Untuk mendapatkan DNA baik dari sel bakteri maupun dari sel tumbuhan# dia/ali

dengan perusakan dan atau pembuangan dinding sel# yang dapat dilakukan dengan pemberian

en9im liso9im Langkah berikutnya adalah lisis sel Bahan"bahan sel yang relati$ lunak dapat

diresuspensi di dalam medium bu$$er nonosmotik# sedangkan bahan"bahan yang lebih kasar 

 perlu diperlakukan dengan deterjen yang kuat seperti triton ="-,, atau dengan sodium

>

Page 8: Teknik DNA Rekombinan Pada Pisang Abaka

7/23/2019 Teknik DNA Rekombinan Pada Pisang Abaka

http://slidepdf.com/reader/full/teknik-dna-rekombinan-pada-pisang-abaka 8/21

dodesil sul$at %.D.& Pada sel tumbuhan yang akan diambil DNAnya# langkah ini disertai

dengan perusakan membran nukleus .etelah sel mengalami lisis# remukan"remukan sel

dibuang dengan melakukan sentri$ugasi Protein yang tersisa dipresipitasi menggunakan $enol

atau pelarut organik seperti kloro$orm untuk kemudian disentri$ugasi dan dihancurkan secara

en9imatis dengan proteinase DNA yang telah dibersihkan dari protein dan remukan sel masih

tercampur dengan !NA sehingga perlu ditambahkan !NAse untuk membersihkan DNA dari

!NA 'olekul DNA yang telah diisolasi tersebut kemudian dimurnikan dengan penambahan

amonium asetat dan alkohol atau dengan sentri$ugasi kerapatan menggunakan 2s2l %.usanto#

+,,8&

+ Penyelipan DNA ke dalam <ektor

.elanjutnya# plasmid maupun DNA dicerna dengan en9im restriksi endonuklease En9im

tersebut memotong DNA plasmid pada tempat restriksi tunggalnya En9im ini juga

memotong DNA tumbuhan dan menghasilkan ribuan $ragmen yang salah satunya merupakan

$ragmen pemba/a gen /arna .aat membuat potongan# en9im restriksi menciptakan ujung

lengket % stiky ends& pada $ragmen DNA tumbuhan maupun plasmid %2ampbel# dkk# +,,+&

Ujung lengket pada plasmid akan berpasangan basa dengan ujung lengket berkomplementer 

 pada DNA tumbuhan 7abungan yang dibentuk dengan cara tersebut hanya bersi$at

sementara karena hanya sedikit ikatan hidrogen yang menyatukan $ragmen"$ragmen DNA itu

Penggabungan DNA tersebut dapat dibuat permanen dengan en9im DNA ligase yang

menyegel untai itu dengan mengkatalisis pembentukan $os$odiester .etelah tahap ligasi

dilalui maka terbentuklah gabungan antara plasmid bakteri dengan DNA tumbuhan yang

disebut plasmid rekombinan %2ampbell# dkk# +,,+&

5 Pemasukan Plasmid !ekombinan ke dalam .el Bakteri

Plasmid rekombinan masuk ke dalam sel  Agrobacterium tumefaciens melalui trans$ormasi

Dalam trans$ormasi# sel bakteri akan menyerap plasmid dari larutan di sekelilingnya Proses

 perpindahan genetik dengan sel resipien membutuhkan molekul DNA bebas %DNA yang

 berada diluar sel atau yang telah dimurnikan& Pada prinsipnya trans$ormasi akan terjadi bila

sel resipien mampu menerima DNA yang telah diisolasi dari sel donor %.etyati# dkk# +,,>&

8

Page 9: Teknik DNA Rekombinan Pada Pisang Abaka

7/23/2019 Teknik DNA Rekombinan Pada Pisang Abaka

http://slidepdf.com/reader/full/teknik-dna-rekombinan-pada-pisang-abaka 9/21

1 Pengklonan .el".el Bakteri beserta Plasmid !ekombinan

Bakteri ditempatkan pada nutrient agar 7en plasmid diman$aatkan untuk memilih koloni sel

yang memba/a plasmid rekombinan %Ba/ekes# +,-+& .elanjutnya sel bakteri beserta

 plasmid akan memperbanyak diri sehingga dihasilkan banyak klon sel

6 Identi$ikasi *lon .el yang 'emba/a 7en 3arna

Pada tahap ini dilakukan identi$ikasi untuk mengetahui sel yang memba/a gen /arna

'enurut 2ampbel# dkk %+,,+&# identi$ikasi dia/ali dengan menekan koloni bakteri terhadap

kertas $ilter khusus yang memindahkan sel ke dalam $ilter tersebut ?ilter kemudian diberi

 perlakuan untuk memecahkan sel dan mendenaturasi DNA sehingga molekul DNA untai

tunggal yang dihasilkan akan melekat pada $ilter .uatu larutan yang berisi molekul probe

diinkubasi dengan $ilter# selanjutnya DNA probe akan berhibridisasi %berpasangan basa&

dengan DNA komplementer pada $ilter sedangkan untuk DNA sisanya dibilas .etelah itu

$ilter diletakkan pada $ilm $otogra$ik untuk membuat semua area radioakti$ terpapar $ilm

tersebut %autoradiogra$i& ?ilm yang telah jadi dibandingkan dengan pelat kultur induk untuk 

menentukan koloni yang memba/a gen /arna

0ahap klon sel selesai dan telah diperoleh  Agrobacterium yang berisi plasmid

rekombinan dengan gen pemba/a /arna Agrobacterium tume$aciens yang dihasilkan

selanjutnya diaplikasi"kan untuk membuat tanaman Abaka dengan serat ber/arna Untuk 

lebih jelas mengenai tahap pengklonan sel dapat dilihat pada skema berikut

Gambar $. Skema Ta%ap Pengkl&nan Sel

:

Page 10: Teknik DNA Rekombinan Pada Pisang Abaka

7/23/2019 Teknik DNA Rekombinan Pada Pisang Abaka

http://slidepdf.com/reader/full/teknik-dna-rekombinan-pada-pisang-abaka 10/21

B Penyiapan .el 0anaman

.el tanaman yang ditrans$ormasi dengan plasmid Agrobacterium tumefaciens adalah jaringan

tanaman kultur in )itro pada tahap eksplan .eperti pisang pada umumnya# jenis kultur 

 jaringan yang digunakan pada pisang Abaka yaitu kultur pucuk yang dilakukan dengan cara

mengkulturkan eksplan yang mengandung meristem pucuk dengan tujuan perangsangan dan

 perbanyakan tunas"tunas atau cabang"cabang aksilar 0unas"tunas aksilar tersebut selanjutnya

diperbanyak melalui prosedur yang sama seperti eksplan a/alnya dan selanjutnya diakarkan

dan ditumbuhkan dalam kondisi in)i)o %3ang# dkk -::5&

Gambar '. Skema Pr&ses Penyiapan Tanaman

Persiapan penanaman eksplan dia/ali dengan pembuatan media tanam dan sterilisasi

alat 'edia tanam berupa media agar yang ditambahkan unsur mineral makro# mineral mikro#

dan 9at pengatur tumbuh .etelah dilakukan sterilisasi alat# selanjutnya dilakukan

 pengambilan eksplan dari tanaman yang sehat 0anaman indukan  sumber eksplan harus

dikondisikan dan dipersiapkan secara khusus di rumah kaca atau greenhouse agar eksplan

yang akan dikulturkan sehat dan dapat tumbuh baik serta bebas dari sumber kontaminan pada

/aktu dikulturkan secara in")itro Lingkungan tanaman induk yang lebih higienis dan bersih

dapat meningkatkan kualitas eksplan %3ang# dkk -::5& Penanaman eksplan dilakukan di

ruangan tertutup yang telah disterilkan dengan menggunakan alkohol atau $ormalin .etelah

itu# eksplan disterilkan menggunakan larutan hipoklorit dan dipotong"potong kecil kemudian

diinokulasi dalam media tanam %3ang# dkk -::5&

-,

Page 11: Teknik DNA Rekombinan Pada Pisang Abaka

7/23/2019 Teknik DNA Rekombinan Pada Pisang Abaka

http://slidepdf.com/reader/full/teknik-dna-rekombinan-pada-pisang-abaka 11/21

.etelah eksplan disiapkan# selanjutnya dilakukan trans$ormasi gen /arna ke dalam sel

eksplan tersebut kemudian kultur jaringan dapat diteruskan untuk menghasilkan tanaman

Abaka dengan serat ber/arna

Gambar . ksplan Abaka ( Musa textilis)

(Sumber* %ttp*++bl&ggerpuluk.bl&gsp&t.,&m)

2 0rans$ormasi 7en 3arna ke dalam .el Abaka

0rans$ormasi DNA pemba/a kode /arna ke dalam sel pisang Abaka yang dikultur dilakukan

dengan menggunakan  Agrobacterium tumefaciens Bakteri ini merupakan $itopatogen tanah

yang menyebabkan penyakit tumor %crown gall & di dalam jaringan luka pada berbagai macam

tanaman dikotil dan mempunyai kemampuan untuk memindahkan DNA ke dalam sel

tanaman %Herman# +,,+& 0rans$ormasi DNA menggunakan  Agrobacterium tumefaciens

umumnya digunakan pada tumbuhan dikotil karena tumbuhan tersebut lebih rentan terhadap

in$eksi  Agrobacterium %2ampbel# dkk# +,,+& Namun menurut penelitian yang dilakukan

'ay# dkk %-::6&# penggunaan  Agrobacterium  juga telah berhasil dilakukan pada tanaman

monokotil termasuk pisang .train onkogenik  Agrobacterium tumefaciens mengandung

 plasmid  single copy  berukuran besar %-6,"+6, kb& yang disebut Plasmid 0i %tumour 

inducing & .ebagian dari DNA plasmid ini yaitu 0"DNA %trans$er DNA& dipindahkan ke

dalam sel tanaman yang terluka dan disisipkan ke dalam genom tanaman 3alaupun gen"gen

0"DNA berasal dari bakteri# tetapi mampu diekspresikan pada sel tanaman Ekspresi gen"gen

tersebut adalah sintesis $itohormon seperti auksin dan sitokinin serta sintesis opin Akibatnya

 jaringan yang terin$eksi akan mengalami proli$erasi sel yang tidak terkendali dan

--

Page 12: Teknik DNA Rekombinan Pada Pisang Abaka

7/23/2019 Teknik DNA Rekombinan Pada Pisang Abaka

http://slidepdf.com/reader/full/teknik-dna-rekombinan-pada-pisang-abaka 12/21

menghasilkan jaringan tumor Pada biakan jaringan# pertumbuhan tumor ini dapat tumbuh

terus /alaupun dalam media tidak ditambahkan auksin dan sitokinin# yang biasanya kedua

senya/a ini diperlukan untuk pertumbuhan jaringan tumbuhan secara in vitro %Pardal# dkk#

+,,1&.

Adapun 'ekanisme in$eksi  Agrobacterium ke dalam sel tanaman menurut Day dan

Lichtenstein %-::+& dalam 'anuhara %+,,;&# meliputi tiga tahap sebagai berikut

- Pengenalan  Agrobacterium tumefaciens dengan molekul sinyal yang dihasilkan oleh sel

tanaman yang terluka# kemudian secara kemotaksis Agrobacterium tumefaciens bergerak dan

menempel pada sel tanaman

+ 7en"gen vir pada plasmid 0i merespon molekul sinyal yang dihasilkan oleh sel tanaman

dan selanjutnya menginduksi ekspresi gen"gen vir untuk memotong rantai tunggal 0"DNA

dan memindahkannya ke dalam inti sel tanaman

5 0"DNA terintegrasi ke dalam genom tanaman dan gen"gen pada 0"DNA diekspresikan

dalam sel tanaman Ekspresi gen"gen onc %oncogen& menyebabkan sel berproli$erasi#

sedangkan ekspresi gen"gen opin bertanggungja/ab untuk sintesis deri)at asam amino opin

-+

Page 13: Teknik DNA Rekombinan Pada Pisang Abaka

7/23/2019 Teknik DNA Rekombinan Pada Pisang Abaka

http://slidepdf.com/reader/full/teknik-dna-rekombinan-pada-pisang-abaka 13/21

Gambar -. ekanisme trans/&rmasi T0A dari plasmid Ti ke dalam gen&m inti sel

tanaman dengan perantara Agrobacterium.

B * left border " RB* right border " P3 * nuclear pore complex . (4iemien&wi,5" dkk."

2666)

*etika plasmid rekombinan dimasukkan ke dalam sel tumbuhan yang dikultur# 0"DNA

 berintegrasi ke dalam DNA kromosom tumbuhan tersebut .elanjutnya# sel tumbuhan akan

membelah dan setiap turunannya akan menerima satu salinan 0"DNA tersebut beserta gen

asing yang diba/anya @ika seluruh tumbuhan itu diregenerasi# setiap selnya akan memba/a

dan mungkin mengekspresikan gen pemba/a /arna tersebut %2ampbell# dkk# +,,+&

sehingga akan dihasilkan tanaman pisang Abaka dengan serat ber/arna

-5

Page 14: Teknik DNA Rekombinan Pada Pisang Abaka

7/23/2019 Teknik DNA Rekombinan Pada Pisang Abaka

http://slidepdf.com/reader/full/teknik-dna-rekombinan-pada-pisang-abaka 14/21

*eunggulan .erat yang Dihasilkan Pisang Abaka % Musa Textilis& 'elalui 0eknologi

!ekayasa 7enetika yaitu usaha untuk mendapatkan tanaman dengan si$at"si$at tambahan

yang berguna dilakukan dengan metode trans$ormasi genetik# yaitu dengan cara menyisipkan

gen tertentu ke dalam genom tanaman 0ujuan pengembangan metode trans$ormasi genetik 

tanaman secara umum antara lain 4

%-& untuk meningkatkan nilai agrikultural# nilai hortikultural# dan ornamental tanaman#

%+& menjadikan tanaman transgenik sebagai pabrik biologi untuk memproduksi protein atau

metabolit lainnya yang mempunyai nilai komersial tinggi dan#

%5& menjadikan tanaman transgenik sebagai obyek untuk mempelajari proses biologi

tanaman# termasuk di antaranya biologi perkembangan

'etode trans$ormasi genetik pada pisang Abaka merupakan metode alternati$ yang

sesungguhnya bertujuan untuk menghasilkan pisang Abaka yang memiliki si$at"si$at unggul#

diantaranya menghasilkan serang pisang Abaka yang telah ber/arna sebagai bahan baku

industri tekstil sehingga memiliki nilai komersial yang tinggi Hal ini telah menjadi bukti

 bah/a penggunaan serat pisang Abaka produk bioteknologi memberikan kontribusi yang

nyata bagi peningkatan kesejahteraan hidup manusia# yaitu meningkatkan hasil# mengurangi

 biaya produksi# membantu melindungi lingkungan serta meningkatkan keuntungan# baik bagi

 petani maupun konsumen Petani memperoleh hasil yang lebih tinggi dan peningkatan

keleluasaan dalam pengelolaan tanaman pisang# sedangkan kosnsumen memperoleh hasil

yang memuaskan dari keunggulan"keunggulan yang dimiliki pisang Abaka dari hasil

rekayasa genetika

Adapun keunggulan dari serat pisang Abaka yang dihasilkan melalui teknik rekayasa

genetika adalah sebagai sebagai berikut

- 'enghasilkan serat ber/arna alami yang ramah lingkungan

+ 3arna .erat Pisang Abaka Lebih 0ahan Lama dengan *eragaman .i$at yang *ompleks

*eunggulan yang selanjutnya diperoleh dari upaya pe/arnaan serat pisang Abaka

melalui teknik rekayasa genetika adalah memperoleh /arna serat yang tahan lama dengan

keragaman si$at yang kompleks Hal tersebut dikarenakan /arna serat secara langsung

diperoleh dari pohon pisang Abaka# sehingga tidak memerlukan proses pe/arnaan sintetis

-1

Page 15: Teknik DNA Rekombinan Pada Pisang Abaka

7/23/2019 Teknik DNA Rekombinan Pada Pisang Abaka

http://slidepdf.com/reader/full/teknik-dna-rekombinan-pada-pisang-abaka 15/21

atau buatan 'elalui teknik rekayasa genetika ini juga akan dihasilkan serat pisang Abaka

yang memiliki si$at yang penuh keuletan %tenacity&# daya mulur %elongation&# kehalusan

% fineness&# kebersihan %cleanliness&# panjang %length&# dan serat alam pisang Abaka yang

 bersi$at non-abrasif serta memiliki si$at mampu bentuk % formability& yang baik dengan berat

yang lebih ringan dibandingkan serat sintesis %kerapatan massa serat alam setengah dari

kerapatan massa serat gelas&

Disamping itu# intensitas /arna serat yang dihasilkan# jauh lebih rendah dibandingkan

dengan /arna sintetis# sehingga pengaruh dimata selalu menimbulkan kesan yang sejuk dan

menyehatkan mata 3arna serat Abaka akibat teknik rekayasa genetika cenderung

menampilkan kesan lu/es# lembut# dan menghasilkan nada /arna yang unik .ehingga nilai

ekonomis serat Abaka menjadi lebih tinggi daripada memakai /arna sintetis# sebab pe/arna

alam akan menghasilkan /arna"/arna elegan# bercitarasa tinggi# dan mengurangi

 pencemaran lingkungan Pemakaian 9at /arna alam di beberapa negara masih diyakini lebih

aman dari pada 9at /arna sintetis karena si$atnya yang non karsinogen .elain itu# dilihat dari

segi budidaya pisang Abaka# relati$ sederhana# dibanding dengan rami# jute# kena$# dan

canabis !ami yang dibudidaya sekali# bisa untuk lebih dari -, tahun# hanya cocok pada

ketinggian di atas 6,, meter dpl .edangkan jute# kena$# dan canabis merupakan tanaman

semusim yang sekali tanam harus dibongkar Pisang Abaka cocok dibudidayakan mulai dari

dataran rendah# sampai ketinggian -6,, meter di permukaan air laut .ekali tanam# pisang

Abaka bisa terus menerus dipanen selama kurang lebih +, tahun Pisang Abaka juga akan

 banyak menyerap tenaga kerja# baik untuk budidaya maupun prosesnya .ehingga# hal ini

dapat memberikan imbas positi$ serta pilihan alternati$ bagi masyarakat karena bisa menjadi

 penghasilan sampingan jika dapat dikembangkan secara baik %.uratman# -:8+&

Aplikasi metode trans$ormasi genetika pada pe/arnaan serat pisang Abaka

merupakan suatu hal yang menarik untuk dikembangkan# mengingat beragam keunggulan

yang dimiliki Namun# dalam upaya tersebut# tidak luput dari kendala"kendala Adapun

kendala"kendala yang dihadapi dalam pengembangan rekayasa genetika pada pe/arnaan

serat pisang Abaka# antara lain sulitnya menentukan gen pemba/a /arna yang tepat untuk 

digunakan dalam pe/arnaan serat Abaka karena setiap organisme mengekspresikan gen

dengan cara berbeda .elain itu# gen /arna yang masuk ke tubuh suatu organisme akan

 berinteraksi dengan gen yang telah ada dalam organisme tersebut sehingga menyebabkan

/arna yang dihasilkan tidak sama dengan /arna sumber gen 'asalah penentuan gen /arna

-6

Page 16: Teknik DNA Rekombinan Pada Pisang Abaka

7/23/2019 Teknik DNA Rekombinan Pada Pisang Abaka

http://slidepdf.com/reader/full/teknik-dna-rekombinan-pada-pisang-abaka 16/21

 juga berimbas pada en9im retriksi yang digunakan sebab en9im restriksi bersi$at spesi$ik 

terhadap substratnya *endala"kendala tersebut muncul mengingat rekayasa genetika

merupakan salah satu teknik yang kompleks dan memerlukan penelitian yang lebih

mendalam .ehingga sebelum serat ber/arna pisang Abaka produk bioteknologi dipasarkan#

setidaknya harus diuji secara teliti terlebih dahulu oleh pengembang dan secara terpisah diuji

oleh para pakar dari berbagai aspek Pengkajian keamanan tersebut didasarkan pada pedoman

yang telah disusun oleh badan pengaturan yang kompeten dari setiap negara sehingga tidak 

menimbulkan pro dan kontra dalam masyarakat seperti menerapkan prinsip kehati"hatian

% precautionary approach& yang sesuai dengan rotokol !artagena tentang *eamanan Hayati

dan *eselamatan *eanekaragaman Hayati dari .uatu Negara %.oemar/oto# +,,-&

2.2.2 RK Pisang sebagai 7aksin

Boleh jadi tidak lama lagi kita akan diberi )aksin untuk penyakit"penyakit seperti hepatitis B

dan kolera dengan cara memakan segigit pisang Para peneliti telah berhasil merekayasa

 pisang# tomat# selada# /ortel# dan tembakau untuk memproduksi )aksin# namun mereka

mengatakan pisang merupakan kendaraan pengangkut dan produksi yang ideal@ika sebentuk 

)irus yang telah diubah disuntikkan ke dalam sebatang pohon anak pisang# maka material

genetik dari )irus tersebut dengan cepat menjadi sebuah bagian permanen dari sel"sel

tanaman tersebut Dan ketika tanaman tersebut tumbuh# sel"selnya memproduksi protein"

 protein dari )irus tersebut namun tidak memproduksi bagian )irus tersebut yang bisa menular 

%infectious& *etika kita memakan segigit pisang yang direkayasa secara genetik# yang sudah

 penuh dengan protein"protein )irus# maka sistem imun kita akan menciptakan antibodi"

antibodi untuk memerangi penyakit tersebutsama seperti )aksin tradisional

-;

Page 17: Teknik DNA Rekombinan Pada Pisang Abaka

7/23/2019 Teknik DNA Rekombinan Pada Pisang Abaka

http://slidepdf.com/reader/full/teknik-dna-rekombinan-pada-pisang-abaka 17/21

2.2.$ RK Pisang sebagai Agen elawan Kebutaan

Pisang dikenal sebagai makanan yang mengandung )itamin A yang baik untuk tubuh

 Namun# agar kandungannya lebih banyak# Pro$esor @ames Dale dari ueensland Uni)ersity#

Australia# melakukan rekayasa genetika agar pisang bisa mere)olusi kesehatan anak"anak di

 berbagai negara berkembang yang kekurangan )itamin A Penelitian yang didukung oleh

yayasan milik Bill 7ates# Bill and 'elinda 7ates ?oundation# ini merekayasa pisang dari

Uganda# yang diberi kandungan al$a dan beta karotena untuk diubah menjadi )itamin A

Pisang yang dikemas dengan mikronutrien ini sedang menjalani pengujian pertama pada

manusia di Amerika .erikat Uji coba ini untuk membuktikan bah/a kandungan )itamin A

yang banyak pada pisang akan membantu mela/an kebutaan dan penyebab kematian bayi

 pada masyarakat berpenghasilan rendah di seluruh dunia CAkibat kekurangan )itamin A#

sekitar ;6,">,, ribu anak di dunia meninggal setiap tahun .etidaknya 5,, ribu di antaranya

mengalami kebutaan#C kata Dale seperti dilaporkan T"ME#$ .enin# -; @uni +,-1

Dale memilih pisang Uganda karena buah ini adalah makanan pokok dan memberikan

 penghasilan untuk masyarakat A$rika 0imur# tapi masih rendah nutrisi seperti 9at besi dan

)itamin A Dale menjelaskan ilmu pengetahuan yang maju akan memperkaya tanaman pokok 

seperti pisang Uganda dengan pro")itamin A untuk nutrisi yang berman$aatPercobaan ini akan berlangsung selama enam pekan dan diharapkan membuahkan hasil yang

 baik pada akhir tahun ini @ika sudah disetujui oleh badan kesehatan# rencananya pisang

rekayasa ini bisa tumbuh dan tersebar di Uganda# !/anda# 0an9ania# dan *enya pada +,+,

mendatang

->

Page 18: Teknik DNA Rekombinan Pada Pisang Abaka

7/23/2019 Teknik DNA Rekombinan Pada Pisang Abaka

http://slidepdf.com/reader/full/teknik-dna-rekombinan-pada-pisang-abaka 18/21

BAB III

*E.I'PULAN DAN .A!AN

$.1 Kesimpulan

- Proses rekayasa genetika untuk membuat pisang Abaka dengan serat ber/arna dapat

dibagi menjadi tiga tahap yaitu# pengklonan gen pemba/a /arna# persiapan tanaman

yang dilakukan dengan kultur jaringan %kultur in vitro&# dan trans$ormasi DNA ke sel

dalam jaringan pisang Abaka

+ *eunggulan serat yang dihasilkan pisang Abaka % Musa textilis Nee& melalui teknologi

rekayasa genetika yaitu serat yang dihasilkan ber/arna alami sehingga ramah

lingkungan dan lebih tahan lama dengan keragaman si$at yang kompleks

5 !ekayasa genetika pada pisang sebagai )aksin dilakukan dengan cara menyuntikkan

)irus yang telah dirombak untuk menghasilkan protein antibodi%imun& dalam

mela/an )irus itu tersendiri sehingga ber$ungsi sebagai )aksin ketika kita

mengkonsumsi pisang tersebut

1 !ekayasa genetika pada pisang untuk mela/an kebutaan dapat dilakukan dengan cara

memberikan al$a dan beta karoten serta nutrisi lebih lainnya kedalam pisang tersebutsehingga dapat dihasilkan kadar )itamin A yang tinggi pada pisang

$.2 Saran

- *epada pemerintah# agar dapat memberikan dukungan baik moral maupun materiil

dalam pelaksanaan penelitian lebih lanjut mengenai aplikasi rekayasa genetika dalam

menciptakan bahan baku industri tekstil sehingga potensi serat Abaka ber/arna

sebagai bahan baku tekstil yang ramah lingkungan tidak hanya terbatas dalam tataran

/acana semata

+ *epada peneliti khususnya yang berkecimpung dalam bidang bioteknologi# agar dapat

membuat penelitian dan ino)asi lebih lanjut# baik mengenai )ariasi /arna serat Abaka

yang dapat dihasilkan maupun si$at"si$at unggul serat Abaka yang dapat diperoleh

melalui penerapan bioteknologi

5 *epada masyarakat terutama pemilik industri tekstil# agar dapat meman$aatkan bahan

 baku ramah lingkungan hasil rekayasa genetika sehingga akan tercipta lingkunganyang bersih dan sehat karena limbah industri yang dihasilkan dapat dimimalisir

-8

Page 19: Teknik DNA Rekombinan Pada Pisang Abaka

7/23/2019 Teknik DNA Rekombinan Pada Pisang Abaka

http://slidepdf.com/reader/full/teknik-dna-rekombinan-pada-pisang-abaka 19/21

1 Perlu diadakannya deseminasi# sosialisasi atau penyuluhan yang jelas kepada

masyarakat luas mengenai penerapan teknik rekayasa genetika Hal tersebut

dilaksanakan guna menja/ab kekha/atiran masyarakat akan pengembangan metode

trans$ormasi genetika pada tanaman khsusnya pada pisang Abaka

DA?0A! PU.0A*A

-:

Page 20: Teknik DNA Rekombinan Pada Pisang Abaka

7/23/2019 Teknik DNA Rekombinan Pada Pisang Abaka

http://slidepdf.com/reader/full/teknik-dna-rekombinan-pada-pisang-abaka 20/21

Ba/ekes# 'irtanina .isyelin +,-+ Bioteknologi DNA Plasmid pada bakteri A)ailable at4

http4elinba/ekesblogspotcom+,-+,+bioteknologi"dna"plasmid"pada"

 bakterihtml pened4 ++,1+,-+

7us/andhi# @ames .P P# .ri H .# 3ardono N and 0jandra . +,,> Penghilangan 3arna

Limbah 0ekstil Dengan 'arasmius sp dalam Bioreaktor Unggun 0etap 0ermodi$ikasi

%'odi$ied Packed Bed& I0B Bandung

Hakim# EH# A A .jamsul# ' Lukman# . Fang 'aolana# and Didi ' -::: Gat 3arna

Alami4 !etrospek dan Prospek Disampaikan pada .eminar Bangkitnya 3arna"3arna

Alam Fogyakata# 5 'aret -::: @urusan *imia ?'IPA I0B Bandung

Heldt# H3 -::: Plant Biochemistry and 'olecular Biology $ord Uni)ersity Press Inc

 Ne/ Fork

Herman# 'uhammad +,,+ Perakitan 0anaman 0ahan .erangga Hama melalui 0eknik

!ekayasa 7enetik Buletin AgroBio <olume 6 Nomor -# halaman -"-5

http4endi$errysblogblogspotcom+,----tanaman"transgenikhtml

http4no)enriueblogspotcom+,-+,8-+"contoh"rekayasa"genetik"yang"anehhtml

http4teknotempocoreadne/s+,-1,;->,;-686>-;!ekayasa"7enetik"Pisang"untuk"

La/an"*ebutaan

*hairul# U# +,,-# Peman$aatan Bioteknologi Untuk 'eningkatkan Produksi Pertanian#

Institut Pertanian Bogor

'anuhara# F .ri 3ulan +,,; Pengembangan 'etode 0rans$ormasi 7enetik 0anaman

untuk 'eningkatkan *esejahteraan Hidup 'anusia 'akalah .eminar Nasional

Biodi)ersitas Isbn 4 :>: ( :8-,: ( - ( 1 Biologi ?'IPA# UNAI! .urabaya# ++ @uli

+,,;

'athur# N# Bhatnagar# P# and Bakre# P +,,6 Assessing 'utagenicity o$ 0etile Dyes ?rom

Pali %!ajasthan& Using Ames Bioassay# Applied ecology and en)ironmental research1%-& halaman ---"--8

 Neil A 2ampbell# @ane B !eece# and La/rence 7 'itchell +,,+ Biologi Edisi *elima @ilid

- Erlangga @akarta

Pardal# .apto/o @ +,,+ Perkembangan Penelitian !egenerasi dan 0rans$ormasi pada

0anaman *edelai Buletin AgroBio <olume 6 Nomor +# halaman 5>"11

Pardal# .apto/o @# 7A 3attimena# As/idinoor# Hajrial# Herman# '# Listanto# Edi# dan

+,

Page 21: Teknik DNA Rekombinan Pada Pisang Abaka

7/23/2019 Teknik DNA Rekombinan Pada Pisang Abaka

http://slidepdf.com/reader/full/teknik-dna-rekombinan-pada-pisang-abaka 21/21

.lamet +,,1 0rans$er gen proteinase inhibitor II pada kedelai melalui )ector 

 Agrobacterium tumefaciens untuk ketahanan terhadap hama pengerek polong % Etiella

 %inckenella 0r& @urnal Bioteknologi Pertanian <olume : Nomor -# halaman +,"+8

!aharjo -::: Abaca *ini4 Pesimis dan ptimis 0rubus === %56:&4 ;;";8

!ahma/ati# .yamsidah +,,; .tatus Perkembangan Perbaikan .i$at 7enetik Padi

'enggunakan 0rans$ormasi Agrobacterium @urnal AgroBiogen <olume + Nomor -#

halaman 5;"11

!usso# E# and D 2o)e -::6 7enetic Engineering4 Dreams and Nightmares 3H ?reeman

 Ne/ Fork

.antoso# 0@# +,,1# E)aluasi Di)ersitas 7enetik 0anaman Padi 0ransgenik# Balai Penelitian

Bioteknologi dan .umberdaya 7enetik Pertanian

.etyati# .ri# kta)iandari# Purnama# Ha9mi# 'uhammad# and Bambang .ugiharto +,,>

.tudi Perbandingan 'etode 0rans$ormasi DNA 'enggunakan <ektor Agrobacterium

0ume$aciens Pada 0anaman 0ebu %.acharum Hybrid& Berkas Penelitian Hayati4 -5

Halaman 5:(11

.oemar/oto# tto +,,- Ekologi# Lingkungan Hidup dan Pembangunan Djambatan

@akarta

.uratman -:8+ Bercocok 0anam Abaca % Musa textillis Nee& Balai Penelitian 0anaman

Industri Bogor

.uryo +,,8 7enetika4 .trata - 7adjah 'ada Uni)ersity Press Fogyakarta

.usanto# Agus Heri +,,8 0eknologi DNA !ekombinan A)ailable at4

http4biomol/ordpresscombahan"ajardasar"tek"dna"rek pened4 +-,1+,-+

0riyanto# H.# 'uliah# and ' Edi -:8+ Batang Abaca % Musa textillis Nee& .ebagai Bahan

Baku *ertas Berita .elulosa <olume =<II Nomor + Halaman -"+>

3ang# H# i# '# and 2utler# A@ -::5 A simple method o$ preparing plant samples $oe

P2! Nucleic acids !es +- Nomor -> Halaman 1-65 ( 1-61

3ibo/o# A -::8 Abaca % Musa textillis Nee& Penghasil .erat Duta !imba <olume ==I<

 Nomor +++ Halaman 5-"5>

3ulandari# I# +,,1# 0eknik !ekayasa 7enetika Untuk 'enghasilkan 0anaman 0ahan

.erangga Hama# PP0 Ahli Pertama pada BBU.*P

Giemieno/ic9# A# 0inland# B# Bryant# @# 7loecker# < and Hohn# B %+,,,& Plant en9ymes

 but not Agrobacterium <irD+ mediate 0"DNA ligation in )itro 'ol 2ell Biol

<olume +, Halaman ;5->";5++

+-