INOKULASI BAKTERI

Diagnosis laboratoris secara mikrobiologis untuk menegakkan diagnosis etiologi pada

umumnya berdasarkan ditemukannya bakteri secara mikroskopis dan pemeriksaan biakan.

Tujuan dari pembiakan / kultur bakteri antara lain:

- Untuk isolasi mikroorganisme dari bahan pemeriksaan.

- Untuk membuat kultur murni, agar dapat dilakukan uji lebih lanjut.

- Untuk penyimpanan / stok bakteri.

- Untuk transport bahan pemeriksaan, sehingga mikroorganisme dapat tumbuh pada

saat pengiriman.

Berikut ini cara inokulasi / penanaman bakteri dari satu media ke media lainnya:

I. Inokulasi bakteri dari media cair ke media padat (lempeng agar datar pada cawan petri / plate) secara goresan (streaking).

Tujuan: untuk mendapakan koloni bakteri yang terpisah (isolated colony) dari suatu

bahan pemeriksaan (specimen), biakan kuman dalam media cair atau campuran berbagai

bakteri dalam media cair.

Caranya:

Dasar bagian luar dari lempeng agar yang akan ditanami dibagi 3 bagian: A, B

dan C dan ditandai dengan spidol dan kertas label.

Gunakan ose bulat. Satu mata ose (sengkelit) suspensi bakteri dari media cair

dipindahkan pada lempeng agar di bagian A, dengan ose tersebut buat goresan

(streaking) yang rapat pada bagian A.

Selesai di bagian A, ose disterilkan dulu dengan cara dipijarkan di atas api

spiritus. Dinginkan ose.

Penggoresan kedua melewati bekas goresan terakhir di bagian A, yang

selanjutnya dilakukan penggoresan yang tidak rapat di bagian B.

Selesai di bagian B, ose disterilkan dulu dengan cara dipijarkan di atas api

spiritus. Dinginkan ose.

Penggoresan ketiga melewati bekas goresan terakhir di bagian B, yang

selanjutnya dilakukan penggoresan yang tidak rapat di bagian C.

II. Inokulasi bakteri dari media padat (lempeng agar) ke media setengah padat.

Tujuan: mengetahui adanya pergerakan bakteri yang di tanam pada media setengah padat.

Pada media ini bakteri yang motil / bergerak akan tumbuh menyebar di sekitar tempat

penusukan penanaman.

Caranya:

Gunakan ose jarum yang disterilkan dahulu di atas api spiritus, kemudian

dinginkan.

Ambil satu koloni (inokulum) dari biakan bakteri Proteus vulgaris yang

disediakan pada media padat datar.

Ose jarum dengan inokulum ditusukkan secara tegak lurus ke dalam media

setengah padat yang tersedia (misalnya media MIO / Motility Indol Ornithin)

sampai sekitar 1 cm di bawah permukaan media.

Kemudian tarik ose jarum keluar media melalui arah penusukan semula

sedemikian rupa tanpa merusak media.

III. Inokulasi bakteri dari media padat datar ke media agar miring.

Tujuan: Untuk memperoleh biakan murni dan untuk menyimpan biakan bakteri dalam

waktu lama (stock culture).

Caranya:

Gunakan ose bulat steril, ambil satu koloni terpisah dari biakan bakteri yang

tumbuh pada media padat datar.

Inokulum tersebut digoreskan pada permukaan agar padat miring secara zigzag

dari bagian paling bawah ke arah mulut tabung.

IV. Inokulasi bakteri dari media padat (lempeng agar) ke media cair.

Tujuan: memperbanyak bakteri dari satu koloni terpisah untuk kemudian dilakukan uji

lanjutan, misalnya uji biokimiawi.

Caranya:

Gunakan ose bulat steril, ambil satu koloni terpisah dari biakan bakteri yang

tumbuh pada media padat datar.

Buatlah suspensi bakteri sedikit demi sedikit pada dinding tabung tepat di bawah

permukaan media cair, kemudian campurkan inokulum dengan media cair

tersebut.

Kocoklah media cair yang sudah ditanamai bakteri dengan hati-hati

(menggunakan Vortex mixer) agar suspensi bakteri dapat bercampur dengan

media cair.

Perhatikan gambar berikut ini:

Gambar 1. Inokulasi / menanam bakteri dari media cair ke media padat datar (lempeng agar)

secara goresan (streaking).

A

B C

A

B C

A

B C

A

B C

Gambar 2. Inokulasi / menanam bakteri dari media padat ke media setengah padat

Gambar 3. Inokulasi / menanam bakteri dari media padat datar ke media padat miring

Gambar 4. Inokulasi / menanam bakteri dari media padat ke media cair.

Safety (Keamanan Kerja di Lab. Mikrobiologi)

Pendahuluan

Keamanan Laboratorium merupakan hal yang penting, sebagai upaya keselamatan

dalam melaksanakan pemeriksaan/praktikum di laboratorium, dengan tujuan

melindungi pekerja/praktikan dan orang sekitarnya dari resiko terkena gangguan

kesehatan yang ditimbulkan laboratorium. Laboratorium Mikrobiologi adalah

laboratorium yang kegiatannya berhubungan dengan mikroorganisme. Khususnya

mikroorganisme penyebab infeksi.

Bekerja di Lab. Mikrobiologi

1. Melindungi petugas/ Praktikan

Hindari penyebaran percikan bahan infeksi dari spesimen (mis : saat penanaman

/pembakaran dengan sengkelit

Tempatkan spesimen pada wadah yang tahan bocor

Dekontaminasi permukaan meja dengan dekontaminan yang sesuai

Cuci tangan pada saat yang tepat dengan sabun/desinfektan, jangan menyentuh

mulut, hidung dan mata saat bekerja

Jangan makan/minum/merokok saat bekerja

Gunakan jas praktikum saat bekerja

Hindari luka/tertusuk pada saat bekerja (lakukan segala sesuatu dengan hati-

hati)

2. Melakukan sterilisasi yang cukup sebelum mencuci alat/membuang sisa spesimen

3. Menyediakan tempat tersendiri untuk peralatan yang digunakan dan telah

terkontaminasi dengan bakteri

4. Menyediakan tempat untuk sampah terkontaminasi dan tidak terkontaminasi

5. Gunakan sarung tangan dengan tepat

Penggunaaan alat-alat di laboratorium

1. Cara menggunakan pipet dan alat bantu pipet

Hindari memipet dengan mulut, gunakan alat bantu, masukkan sumbat kapas

untuk mengurangi kontaminasi.

Jangan mencampur bahan infeksi dengan menghisap/meniup pipet

Jangan mengeluarkan cairan dari dalam pipet secara paksa

Gunakan kapas yang telah diberi disinfektan bila ada tetesan spesimen yang

jatuh di meja, kemudian kapas di buang di tempat khusus untuk diautoclave

Rendam pipet habis pakai di disinfektan 18-24 jam

2. Cara menggunakan jarum suntik (kecelakaan penggunaan jarum suntik penyebab

umum infeksi yang terjadi di laboratorium dan fasilitas kesehatan lain)

Hindari gerakan cepat dan tergesa-gesa saat memegang jarum suntik

Gunakan sarung tangan

Buang kelebihan udara, cairan, gelembung secara vertikal ke kapas yang telah

ada desinfektan

Jangan membengkokkan atau memindahkan jarum dengan tangan

Buang jarum suntik pada tempat khusus sebelum steril

3. Cara pembukaan wadah

Pembukaan wadah botol atau cawan petri dan tabung biakan, memiliki potensi

terinfeksi, karena tak terlihat dapat menimbulkan aerosol atau kontaminasi pada kulit

atau daerah kerja. Pembukaan wadah di tempat kerja sering dilakukan, bila tidak hati-

hati, bahan terinfeksi yang ada dalam wadah dapat menularkan secara langsung atau

jatuh ke tempat kerja. Beberapa pencegahan yang dapat dilakukan untuk menghindari

resiko terinfeksi adalah sebagai berikut :

Buka tutup wadah di tempat kerja dengan hati-hati agar isi dalam wadah tidak

terpencar ke luar.

Gunakan jas lab. dan sarung tangan.

Hindari aerosol.

Spesimen yang bocor atau pecah hanya dibuka di dalam Safety Cabinet.

4. Penerimaan spesimen di Laboratorium

Laboratorium mempunyai loket khusus penerimaan spesimen. Jika jumlah

spesimen tidak banyak, maka tempat pemeriksaan spesimen dapat dilakukan

pada meja khusus dalam areal laboratorium.

Spesimen harus di tempatkan dalam wadah yang tertutup rapat untuk mencegah

tumpahnya/bocornya spesimen.

Wadah harus dapat didisinfeksi atau diautoklaf.

Wadah terbuat dari bahan tidak mudah pecah/bocor.

Wadah diberi label tentang identitas spesimen.

Wadah diletakkan pada baki khusus yang terbuat dari logam atau plastik yang

dapat didisinfeksi atau diautoklaf ulang.

Baki harus didisinfeksi / diautoklaf secara teratur setiap hari.

Jika mungkin, wadah diletakkan di atas baki dalam posisi berdiri.

5. Petugas pembawa spesimen dalam Laboratorium

Mengenakan jas laboratorium yang tertutup rapat pada bagian depan saat

membawa spesimen.

Membawa spesimen di atas kaki

Mencuci tangan dengan disinfektan jika terkena tumpahan/percikan dari

spesimen.

Jika spesimen bocor / tumpah di atas baki, dekontaminasi baki dan sisa

spesimen diautoklaf.

Lapor pada petugas/panitia keamanan kerja laboratorium jika terluka saat

bekerja.

6. Tindakan khusus terhadap darah dan cairan tubuh

Tindakan di bawah ini dibuat untuk melindungi petugas laboratrorium terhadap infeksi

yang ditularkan melalui darah seperti Virus hepatitis B, HIV (Human

Immunodeficiency Virus) dan lain-lain.

a. Mengambil, melabel dan membawa spesimen

Gunakan sarung tangan

Hanya petugas lab yang boleh melakukan pengambilan darah.

Setelah pengambilan darah, lepaskan jarum dari sempritnya dengan alat

khusus yang sekaligus merupakan wadah penyimpanan jarum habis pakai.

Pindahkan darah ke dalam tabung spesimen dengan hari-hati dan tutup rapat

mulut tabung spesimen. Jarum suntik habis pakai sebaiknya dibakar dalam

alat insinerasi. Jika fasilitas insinerasi tidak tersedia, jarum suntik dan

sempritnya diautoklaf dalam kantong yang terpisah.

Tabung spesimen dan formulir permintaan harus diberi label BAHAYA

INFEKSI.

Masukkan tabung ke dalam kantung plastik untuk dibawa ke laboratorium.

Formulir permintaan dibawa secara terpisah.

b. Membuka tabung spesimen dan mengambil sampel

Buka tabung spesimen dalam kabinet keamanan biologis Kelas I dan Kelas

II.

Gunakan sarung tangan

Untuk mencegah percikan, buka sumbat tabung setelah dibungkus kain kasa.

c. Kaca dan benda tajam

Jika mungkin, gunakan alat terbuat dari plastik sebagai pengganti

kaca/gelas. Bahan kaca/gelas dapat dipakai jika terbuat dari borosilikat.

Sedapat mungkin, hindari penggunaan alat suntik selain untuk mengambil

darah.

d. Sediaan darah pada kaca objek

Pegang kaca objek dengan forsep

e. Peralatan otomatis

Sebaiknya gunakan alat yang tertutup (enclosed type)

Cairan yang keluar dari alat/effalut harus dikumpulkan dalam tabung/wadah

tertutup atau dibuang ke dalam sistem pembuangan limbah.

Jika memungkinkan, alirkan hipoklorit atau glutaraldehid ke dalam alat

disinfektan hanya pada keadaan tertentu.

f. Melakukan sentrifus

Gunakan tabung sentrifus yang mempunyai tutup

Gunakan selongsong/rotor yang dilengkapi penutup

g. Jaringan

Fiksasi jaringan dengan formalin. Spesimen berukuran kecil, seperti dari

biopsi jarum, dapat difiksasi dan didekontaminasi dalam waktu kurang lebih

2 jam, tetapi spesimen berukuran besar membutuhkan waktu beberapa hari.

Setelah melakukan potong beku (frozensection), alat (cryotome) haru

didekontaminasi.

7. Kecelakaan di Laboratorium

Di laboratorium mikrobiologi, infeksi bakteri merupakan resiko yang sering terjadi

sebagai penyebab penularan utama pada petugas pemeriksa laboratorium.

Oleh sebab itu perlu diupayakan tindakan pencegahan dengan urutan prioritas sebagai

berikut :

a. Perlindungan petugas pemeriksa

Batasi kontaminasi

Dekontaminasi pegawai

Dekontaminasi areal yang berhubungan

b. Dekontaminasi kulit

detergen tidak boleh digunakan, perawatan harus dilakukan dengan tidak merusak kulit

c. Dekontaminasi mata = dilakukan dengan perawatan air untuk mencegah penyebaran

kontaminasi dari satu area ke area lainnya.

d. Dekontaminasi pakaian

pakaian yang terkontaminasi harus dipindahkan secepatnya dan diletakkan pada wadah

tertentu. Harus dipindahkan dari lokasi tumpahan sampai kontaminasi dapat termonitor.

e. Dekontaminasi daerah kerja

Basahi semua daerah yang terkena tumpahan termasuk wadah yang rusak dengan

disinfektan. Diamkan 10 menit. Bersihkan dengan tissue atau lap dengan menggunakan

sarung tangan.

Dianjurkan disinfektan yang digunakan adalah Hypochlorite. Bila terjadi kecelakaan

diruang kerja laboratorium, batasi orang yang masuk di daerah tersebut sampai dilakukan

monitor terhadap kontaminasi oleh petugas. Kotak peralatan P3K yang lengkap harus

tersedia di laboratorium dan diletakkan di tempat yang diketahui oleh semua staf

laboratorium. Sebaiknya kotak peralatan tersebut disertai dengan petunjuk lengkap tentang

pertolongan pada kecelakaan, terpotong/tersengat, luka bakar, keracunan, shock/collapse

serta terbaca oleh semua staff.

II. Sterilisasi

Hampir semua tindakan yang dilakukan dalam diagnosa mikrobilogi, sterilisasi

sangat diutamakan baik alat-alat yang dipakai maupun medianya. Bila penanaman spesimen

dalam media, petri, ose maupun media yang digunakan tidak steril, maka sangat tidak mungkin

untuk membedakan apakah kuman yang berhasil diisolasi tersebut berasal dari penderita atau

merupakan hasil kontaminasi dari alat-alat atau media yang digunakan.

Suatu alat atau bahan dikatakan steril bila alat/bahan tersebut bebas dari mikroba baik

dalam bentuk vegetatif maupun sopra. Tindakan untuk membebaskan alat atau media dari jasad

renik disebut sterilisasi. Ada beberapa cara sterilisasi, untuk pemilihannya tergantung dari

bahan/alat yang akan disterilkan. Secara garis besar sterilisasi dapat dibagi sebagai berikut :

a. pemanasan

b. filtrasi

c. penyinaran dengan sinar gelombang pendek (radiasi)

d. kimia (khemis)

A. Sterilisasi dengan Pemanasan

1. Dengan pemanasan kering

Pembakaran

Alat yang digunakan adalah lampu spiritus/bunsen. Pembakaran dapat dilakukan dengan cara

:

- Memijarkan

Pembakaran dengan cara ini hanya cocok untuk alat-alat logam (ose, pinset, dll), yang

dibiarkan sampai memijar. Dengan cara ini seluruh mikroorganisme, termasuk spora,

dapat dibasmi.

- Menyalakan

Dapat diartikan suatu pelintasan alat gelas (ujung pinset, bibir tabung, mulut erlenmeyer,

dll) melalui nyala api. Cara ini merupakan hal darurat dan tidak memberikan jaminan

bahwa mikroorganisme yang melekat pada alat dengan pasti terbunuh.

Cara mensterilkan ose :

Ose disterilkan dengan cara dibakar pada nyala api lampu spiritus atau lampu gas. Pada

waktu memanaskan ose, dimulai dari pangkal kawat dan setelah terlihat merah berpijar

secara pelan-pelan pemansan dilanjutkan ke ujung ose. Hal ini dimaksudkan untuk mencegah

terloncatnya kuman akibat pemanasan langsung dan terlalu cepat pada mata ose. Nyala api

pada sterilisator mempunyai perbedaan dalam derajat panas.

ABCD (diarsir) : merupakan ruang oksidasi

ABCD : merupakan ruang reduksi

AB : dasar api

a : ruang oksidasi atas

b : ruang oksidasi bawah

c : ruang reduksi atas

d : ruang reduksi bawah

e : bagian yang paling tidak panas

Tempat yang paling panas adalah ruang oksidasi bawah yang letaknya kira-kira sepertiga

bawah dari tingginya nyala api. Yang perlu diperhatikan :

- jangan memegang mata ose dengan tangan sebelum ose disterilkan

- jangan meletakkan ose di atas meja, tetapi letakkan pada tempat yang disediakan setelah

disterilkan.

Dengan udara panas (hot air oven)

Cara ini menggunakan udara yang dipanaskan dan kering, serta berlangsung dalam

sterilisator udara panas (oven). Pemanasan dengan udara panas dugunakan untuk sterilisasi alat-

alat laboratorium dari gelas misalnya : petri, tabung gelas, botol pipet dll, juga untuk bahan-

bahan minyak dan powder misalnya talk. Bahan dari karet, kain, kapas dan kasa tidak dapat

ditserilkan dengan cara ini.

Setelah dicuci alat-alat yang akan disterilkan dikeringkan dan dibungkus dengan kertas tahan

panas, kemudian dimasukkan dalam oven dan dipanaskan pada temperatur antara 150 - 170C,

selama kurang lebih 90 120 menit. Hal yang perlu diperhatikan adalah bahwa di antara bahan

yang disterilisasi harus terdapat jarak yang cukup, untuk menjamin agar pergerakan udara tidak

terhambat.

2. Dengan pemanasan basah

Dengan merebus

Digunakan untuk mensterilkan alat-alat seperti gunting, pinset, skalpel, jarum, spuit injeksi

dan sebagainya dengan cara direbus dalam suasana mendidih selama 30-60 menit.

Dengan uap air panas

Digunakan terutama untuk mensterilkan media-media yang akan mengalami kerusakan bila

dikerjakan dengan sterilisasi uap air panas dengan tekanan (autoklav) ataupun untuk alat-alat

tertentu. Cara ini dijalankan dengan pemanasan 100C selama 1 jam. Perlu diingat bahwa dengan

cara ini spora belum dimatikan, dan ada beberapa media yang tidak tahan pada panas tersebut

(misalnya media Loewenstein, Urea Broth). Media tersebut disterilkan dengan cara sterilisasi

bertingkat ataupun filtrasi. Alat yang digunakan adalah sterilisator, autoklav, dimana tekanan

dalam autoklav dijaga tetap 1 atmosfer (klep pengatur tekanan dalam keadaan terbuka).

Dengan uap air bertekanan (Autoklav)

Dengan cara pengatur tekanan dalam autoklav, maka dapat dicapai panas yang diinginkan.

Cara ini dipakai untuk sterilisasi media yang tahan terhadap pemanasan tinggi. Sterilisasi

biasanya dijalankan dengan menggunakan panas 120C selama 10 70 menit tergantung

kebutuhan. Hal yang perlu diperhatikan bila mengerjakan sterilisasi dengan menggunakan

autoklav :

- harus ditunggu selama bekerja

- hati-hati bila mengurangi tekanan dalam autoklav (perubahann temperatur dan tekanan

secara mendadak dapat menyebabkan cairan yang disterilkan meletus dan gelas-gelas

dapat pecah).

Pada sterilisasi dengan pemanasan kering, bakteri akan mengalami proses oksidasi putih telur,

sedang dengan sterilisasi panas basah, akan mengakibatkan terjadinya koagulasi putih telur

bakteri. Dalam keadaan lembab jauh lebih cepat menerima panas daripada keadaan kering

sehingga sterilisasi basah lebih cepat dibanding oksidasi).

Pasteurisasi

Digunakan untuk mensterilkan susu dan minuman beralkohol. Panas yang digunakan 61,7C

selama 30 menit.

B. Sterilisasi dengan Filtrasi

Sterilisasi dengan cara ini dilakukan dengan mengalirkan cairan atau gas pada saringan

berpori kecil sehingga dapat menahan mikroorganisme dengan ukuran tertentu. Kegunaan:

- untuk sterilisasi media yang tidak tahan terhadap pemanasan, misalnya Urea Broth

ataupun untuk sterilisasi vaksin, serum, enzim, vitamin.

- Meminimalkan kuman udara masuk untuk ruangan kerja secara aseptis

Virus seperti mikroorganisme tanpa dinding sel (mikroplasma) umumnya tidak dapat ditahan

oleh filter.

C. Sterilisasi dengan Penyinaran (radiasi)

Sterilisasi dengan cara ini diperlukan jika sterilisasi panas maupun dinding tidak dapat

dilakukan. Beberapa macam radiasi mengakibatkan letal terhadap sel-sel jasad renik dan

mikroorganisme lain. Jenis radiasi termasuk bagian dari spkterum elektromagnetik, misalnya :

sinar ultraviolet, sinar gamma, sinar x dan juga sinar katoda elektro kecepatan tinggi. Sinar

ultraviolet mempunyai panjang gelombang 15-390 nm. Lampu sinar ultraviolet dengan panjang

gelombang 260 270 nm, dimana sinar dengan panjang gelombang sekitar 265 nm mempunyai

daya bakterisid yang tinggi. Lampu ultraviolet digunakan untuk mensterilkan ruangan, misalnya

di kamar bedah, ruang pengisian obat dalam ampul dan flakon di industri farmasi, juga bisa

digunakan diperusahaan makanan untuk mencegah pencemaran permukaan.

Sinar x mempunyai daya penetrasi lebih besar dibanding dengan sinar ultraviolet. Sinar

gamma mempunyai daya penetrasi lebih besar dibandingkan dengan sinar x dan digunakan untuk

mensterilkan material yang tebal, misalnya bungkusan alat-alat kedokteran atau paket makanan.

Sinar katoda biasa dipakai menghapus hama pada suhu kamar terhadap barang-barang yang telah

dibungkus.

D. Cara Kimia (Khemis)

Merupakan cara sterilisasi dengan bahan kimia. Beberapa istilah yang perlu difahami:

- Desinfektan adalah suatu bahan kimia yang dapat membunuh sel-sel vegetatif dan jasad

renik. Biasanya digunakan untuk obyek yang tidak hidup, karena akan merusak jaringan.

Prosesnya disebut desinfeksi.

- Antiseptik adalah suatu bahan atau zat yang dapat mencegah, melawan maupun

membunuh pertumbuhan dan kegiatan jasat renik. Biasanya digunakan untuk tubuh.

Prosesnya disebut antiseptis.

- Biosidal adalah suatu zat yang aksinya dipakai unhtuk membunuh mikroorganisme, misal

: bakterisid, virosid, sporosid.

- Biostatik adalah zat yang aksinya untuk mencegah/menghambat pertumbuhan organisme,

misal : bakteriostatik, fungistatik.

Ada beberapa zat yang bersifat anti mikroba.

1. Fenol dan derivatnya

Zat kimia ini bekerja dengan cara mempresipitasikan protein secara aktif atau merusak

selaput sel dengan penurunan tegangan permukaan. Fenol cepat bekerja sebagai desinfektan

maupun antiseptik tergantung konsentrasinya. Daya antimikroba fenol akan berkurang pada

suasana alkali, suhu rendah, dan adanya sabun.

2. Alkohol

Alkohol beraksi dengan mendenaturasi protein dengan jalan dehidrasi dan melarutkan

lemak sehingga membran sel rusak dan enzim-enzim akan diinaktifkan oleh alkohol. Etil

alkohol (etanol) 50-70% mempunyai sifat bakterisid untuk bentuk vegetatif. Metanol daya

bakterisidnya kurang dibandingkan etanol, dan beracun terhadap mata.

3. Halogen beserta gugusannya

Halogen beserta gugusannya ini mematikan mikroorganisme dengan cara mengoksidadi

protein sehingga merusak membran dan menginaktifkan enzim-enzim. Misalnya :

- Yodium dipakai untuk mendesinfeksi kulit sebelum dilakukan pembedahan

- Hipoklorit digunakan untuk sanitasi alat-alat rumah tangga. Yang umum dipakai adalah

kalsium dipoklorit dan sodium hipoklorit.

4. Logam berat dan gugusannya

Logam berat dapat memprestasikan enzim-enzim atau protein esensial lain dalam sel

sehingga dapat berfungsi sebagai anti mikroba.

Contoh :

- Merkurokrom, merthiolat sebagai antiseptik.

- Perak nitrat sebagai tetes mata guna mencegah penyakit mata pada bayi (Neonatol

gonococcal ophthalmitic).

5. Deterjen

Dengan gugus hipofilik dan hidrofilik, deterjen akan merusak membran sitoplasma.

i. Aldehid

Aldehid mendesinfeksi dengan cara mendenaturasi protein. Contoh : formalin (formaldehid)

ii. Gas sterilisator

Digunakan untuk bahan/alat yang tidak dapat disterilkan dengan panas tinggi atau dengan

zat kimia cair. Pada proses ini material disterilkan dengan gas pada suhu kamar. Gas yang

dipakai adalah ethilen oksida.

Kebaikannya : ethilen oksida mempunyai daya sterilisasi yang besar dan daya

penetrasinya besar

Kejelekannya : ethilen oksida bersifat toksis dan mudah meledak.

FLORA NORMAL

Manusia normal memiliki sistem imun yang adekuat, sehingga jaringan di dalam tubuh

seperti otak, darah dan otot normalnya tidak terdapat mikroorganisme. Pada jaringan tubuh yang

ada di permukaan seperti kulit dan mukosa yang selalu kontak dengan lingkungan maka selalu

ada banyak mikroorganisme yang menempel dan membentuk koloni. Populasi mikroorganisme

yang mendiami kulit dan mukosa manusia yang normal dan sehat inilah yang dinamakan sebagai

mikroorganisme flora normal (normal flora microbes).

Populasi flora normal yang terdapat di kulit dan mukosa dapat dibagi lagi menjadi dua

kelompok, yaitu:

1. Flora menetap (residents flora).

Terdiri atas bakteri yang menetap dan jenisnya relatif sama pada lokasi anatomi tertentu

dan pada umur tertentu. Apabila terganggu maka mikroorganisme itu akan segera tumbuh

kembali seperti semula.

2. Flora sementara (trancients flora).

Terdiri atas bakteri yang mendiami kulit dan mukosa hanya beberapa jam, hari atau minggu

saja akibat kotak dengan lingkungan sekitar, tidak menetap permanen di lokasi tubuh

tersebut (Brooks, 2004).

Flora normal yang menghuni kulit, mukosa orofaring, gastrointestinal dan urogenitalia,

tidak berbahaya bagi kesehatan manusia, bahkan bermanfaat bagi manusia. Meskipun demikian

pada keadaan tertentu misalnya sistem imun yang lemah maka flora normal dapat menimbulkan

penyakit pada manusia, seperti menimbulkan caries gigi, abses ataupun infeksi lainnya.

Tabel 1. Bakteri flora normal di permukaan tubuh manusia (Todar, 2007).

BAKTERI Kuli

t

Konjun

g tiva

Hidun

g

Pharyn

g

Mulu

t

Usus

besa

r

Uretraanterio

r

Vagin

a

S. epidermidis ++ + ++ ++ ++ + ++ ++

Staphylococcus aureus* + +/- + + + ++ +/- +

Streptococcus mitis + ++ +/- + +

Streptococcus

salivarius

++ ++

Streptococcus mutans* + ++

Enterococcus faecalis* +/- + ++ + +

Streptococcuspneumoni

a

+/- +/- + + +/-

Streptococcus

pyogenes*

+/- +/- + + +/- +/-

Neisseria sp. + + ++ + + +

Neisseria meningitides* + ++ + +

Enterobacteriaceae *

(Escherichia coli)

+/- +/- +/- + ++ + +

Proteus sp. +/- + + + + + +

P. aeruginosa* +/- +/- + +/-

Haemophilus

influenzae*

+/- + + +

Bacteroides sp. * ++ + +/-

Bifidobacterium bifidum ++

Lactobacillus sp. + ++ ++ ++

Clostridium sp. +/- ++

Clostridium tetani * +/-

Corynebacteria ++ + ++ + + + + +

Mycobacteria + +/- +/- + +

Actinomycetes + +

Spirochetes + ++ ++

Mycoplasmas + + + +/- +

Ket :++ = Hampir 100 %; + = Sering (sekitar 25%); +/- = Jarang (< 5%); * = potensial patogen.

Praktikum ini dilakuan untuk membuktikan keberadaan flora normal di permukaan kulit

dan mukosa manusia. Selain itu juga dilakukan praktikum untuk melihat fungsi bahan pembersih

dan bahan desinfektan.

Alat dan Bahan

1. Petri dish

2. Media Nutien agar padat datar

3. Ose bulat

4. Api spiritus

5. Lidi kapas steril

6. Bahan pembersih (sabun mandi)

7. Bahan desinfektan (alcohol 70% dan povidone iodine)

8. Spidol

9. Kertas label

Cara Kerja

1. Praktikum keberadaan bakteri flora normal di kulit dan mukosa manusia yang sehat:

Siapkan media Nutrient agar dalam petri dish.

Bagilah dasar bagian luar dari petri dish yang akan ditanami menjadi 4 bagian: A, B, C

dan D. Tandai dengan spidol non permanent dan kertas label.

Buka lidi kapas steril baru, kemudian usapkan (swab) pada kulit tangan. Selanjutnya

tanam hasil usapan tersebut pada media Nutrien agar di bagian A.

Buka lidi kapas steril baru, kemudian usapkan (swab) pada kulit wajah. Selanjutnya

tanam hasil usapan tersebut pada media Nutrien agar di bagian B.

Buka lidi kapas steril baru, kemudian usapkan (swab) pada mukosa hidung. Selanjutnya

tanam hasil usapan tersebut pada media Nutrien agar di bagian C.

Buka lidi kapas steril baru, kemudian usapkan (swab) pada mukosa mulut. Selanjutnya

tanam hasil usapan tersebut pada media Nutrien agar di bagian D.

Kemudian inkubasi media yang sudah ditanami pada 37C, selama 24 jam.

Setelah 24 jam amati adanya pertumbuhan koloni bakteri.

2. Praktikum fungsi bahan pembersih dan bahan desifektan.

Siapkan media Nutrient agar dalam petri dish.

Bagilah dasar bagian luar dari petri dish yang akan ditanami menjadi 4 bagian: A, B C

dan D dan ditandai dengan spidol non permanent dan kertas label.

Tempelkan jari telunjuk tangan yang belum dicuci pada media Nutrien agar di bagian A,

secara hati-hati jangan sampai merusak media.

Cucilah jari telunjuk tangan menggunakan sabun mandi. Tunggu sampai kering.

Kemudian tempelkan jari telunjuk tangan tersebut pada media Nutrien agar di bagian B,

secara hati-hati jangan sampai merusak media.

Cucilah jari telunjuk tangan menggunakan alkohol 70%. Tunggu sampai kering.

Kemudian tempelkan jari telunjuk tangan tersebut pada media Nutrien agar di bagian C,

secara hati-hati jangan sampai merusak media.

Cucilah jari telunjuk tangan menggunakan Povidone iodine. Tunggu sampai kering.

Kemudian tempelkan jari telunjuk tangan tersebut pada media Nutrien agar di bagian D,

secara hati-hati jangan sampai merusak media.

Kemudian inkubasi media yang sudah ditanami pada 37C, selama 24 jam.

Setelah 24 jam amati adanya perbedaan pertumbuhan koloni bakteri.

Tugas mahasiswa :

1. Lakukan langkah-langkah seperti petunjuk dan amati !

2. Gambarlah alat dan media yang ada dalam demonstrasi (warna gambar sesuai dengan

asli)!

3. Buat laporan praktikum masing-masing kelompok satu laporan dengan ketentuan sebagai

berikut :

Ditulis di folio bergaris (tulis tangan)

Terdiri dari :

o Judul praktikum

o Tujuan praktikum

D C

B A

D C

B A

o Dasar teori

o Alat dan bahan

o Hasil pengamatan

o Pembahasan

o Kesimpulan dan

o Daftar pustaka

Laporan dikumpulkan paling lambat seminggu setelah pelaksanaan praktikum