Bab Iii_praktikum Biokimia Klinis_analisa Darah
description
Transcript of Bab Iii_praktikum Biokimia Klinis_analisa Darah
BAB III
METODOLOGI PRAKTIKUM
A. Tempat dan Waktu Praktikum
Tempat : Laboratorium FKIK UIN Syarif Hidayatullah Jakarta
Waktu : Jumat, 18 September 2015
B. Alat dan Bahan Praktikum
Alat :
- Tabung reaksi
- Mikropipet
- Tabung pengenceran
- Erlenmeyer
- Kertas saring
- Corong pisah
- Spektrofotometri UV-VIS
- Pipet tetes
- Gelas ukur
- Batang pengaduk
Bahan :
Pembuatan Darah Bebas
Protein (Folin-Wu)
Pengukuran Kadar Gula
Darah
Penetapan Kadar Kreatinin
Darah (Jaffe)
- Darah segar - Filtrat darah Folin-Wu - Darah bebas protein
- Aquades - Larutan Cu alkalis - Larutan asam pikrat jenuh
- Na-tungstat 10% - Asam fosfomolibdat - Standar kreatinin
- Asam sulfat 2/3 N - Standar glukosa 0,1 g/ml - Larutan NaOH 10%
- Pereaksi biiuret - Aquades - Larutan pikrat alkalis
C. Prosedur Kerja
Pembuatan filtrat daah bebas protein (Folin-Wu)
Masukkan 1 ml darah segar ke dalam tabung erlenmeyer.
Tambahkan aquades sebanyak 7 ml ke dalam erlenmeyer yang birisi darah segar.
Tambahkan Na-tungstat 10% dan H2SO4 2/3 N masing-masing senanyak 1 ml.
Campurkan dan aduk semua bahan sampai tercampur semua.
Diamkan selama 5 menit, kemudian saring menggunakan corong pisah.
Pisahkan filtrat darah bebas protein dan residunya. Uji filtrat dengan pereaksi
Biuret.
Uji Biuret
Ambil 0,5 ml filtrat darah bebas protein dan masukkan ke dalam tabung reaksi.
Tambahkan 5-10 tetes pereaksi biuret (CuSO4+NaOH 10%). Dan amati hasilnya.
Pengukuran kadar gula darah (kuantitatif)
Siapkan 3 tabung pengenceran ( Tabung A= sampel; Tabung B= standar; dan
Tabung C= blanko).
Tabung A Tabung B Tabung C
2 ml Filtrat Folin-wu 2 ml glukosa standar 2 ml aquades
2 ml Cu alkalis 2 ml Cu alkalis 2 ml Cu alkalis
2 ml As. fosfomolibdat 2 ml As. fosfomolibdat 2 ml As. fosfomolibdat
Sebelum penambahan as. Fosfomolibdat panaskan terlebih dahulu dalam air
100oC selama 8 menit, dan dinginkan selama 3 menit.
Encerkan sampai 25 ml, kemudian tentukan absorbansi menggunakan
spektrofotometri UV-VIS pada panjang gelombang 420 nm.
Hitung kadar gula darah dengan menggunkan rumus yang telah ditentukan.
Penetapan kadar kreatinin (Jaffe)
Siapkan 3 tabung pengenceran ( Tabung A= sampel; Tabung B= standar; dan
Tabung C= blanko).
Tabung A Tabung B Tabung C
1 ml Filtrat Folin-wu 1 ml glukosa standar 2 ml aquades
1 ml pikrat alkalis 1 ml pikrat alkalis 2 ml pikrat alkalis
0,25 ml NaOH 10% 0,25 ml NaOH 10% 0,5 ml NaOH 10%
- 1 ml aquades -
Campurkan semuanya dengan baik. Diamkan selama 15 menit. Warna yang
terbentuk akan stabil selama 30 menit. Lakukan pengenceran sampai 10 ml.
Tentukan absorbansi menggunakan spektrofotometri UV-VIS dalam waktu 30
menit pada panjang gelombang 520 nm.
Hitung kadar kreatinin dengan menggunkan rumus yang telah ditentukan.
Lampiran Foto
A. Pembuatan filtrat daah bebas protein (Folin-Wu)
B. Uji Biuret
C. Pengukuran kadar gula darah (kuantitatif)
D. Penetapan kadar kreatinin (Jaffe)