PendahuluanLupus eritematosus sistemik (LES)

adalah penyakit autoimun yang ditandai olehperadangan kronis dan akut pada berbagaijaringan tubuh seperti ginjal, hati, sendi, seldarah merah, leukosit dan trombosit.Berdasarkan Sudoyo (1), data dari YayasanLupus Indonesia, penderita LESdiperkirakan mencapai 5 juta orang diseluruh dunia. Komplikasi yang sering terjadipada LES dan sering menimbulkan akibatyang serius adalah nefritis lupus. Perkiraanprevalensi keterlibatan ginjal secara klinispada pasien LES berkisar antara 30-90%.Nefritis lupus lebih sering dijumpai padawanita, (rasio prevalensi LESwanita:pria=9:1) (2,3). Adanya pembentukanimun kompleks antara autoantibodi dantarget antigen (self-antigen) pada LES akanmemicu pelepasan mediator proinflamasiseperti MCP-1 akan merekrut monosit ataumakrofag dan sel efektor imun lainnya yangakan menyebabkan kerusakan jaringan(4,5).

Kemampuan untuk mengetahuikomplikasi nefritis lupus pada pasien LESsebelum nampak adanya gangguan organsangat diperlukan. Oleh karena itudiperlukan suatu biomarker yang dapatmenggambarkan aktivitas penyakit.

Salah satu biomarker yang dapatmenggambarkan aktivitas penyakit LES

khususnya nefritis lupus adalah urineMonocyte Chemoattractant Protein-1(uMCP-1). Monocyte chemoattractantprotein-1 (MCP-1) adalah polipeptidamonomerik yang memegang perananpenting dalam infiltrasi leukosit ke dalamginjal meningkatkan perlekatan leukosit keendotel serta meningkatkan permeabilitasendotel. MCP-1 juga dapat memediasirespon fibrogenik dan peningkatan kadarnyaberhubungan dengan temuan histologisberupa jaringan parut pada biopsi ginjal(6,7,8,9). Peningkatan uMCP-1 berperandalam terjadinya hiperseluler padaendokapiler glomerulus yang disebabkankarena infiltrasi leukosit, termasuk neutrofil,monosit dan limfosit serta adanya proliferasiendotelial glomerulus dan sel mesangial (10,11).

Meskipun beberapa penelitianmenunjukkan bahwa uMCP-1 sebagaibiomarker yang menjanjikan pada nefritislupus, namun masih terdapat kontroversidengan penelitian yang lain. Di Indonesiabelum ada penelitian yang dilakukan untukmelihat perbedaan kadar biomarker tersebutyang dihubungkan dengan klasifikasihistopatologis nefritis lupus.

Pendekatan ini diharapkan dapatmengganti biopsi ginjal dalam penentuankelas histopatologi nefritis lupus karena haltersebut sangat diperlukan dalam

1

Analisis Kadar Biomarker Urine Monocyte Chemoattractant Protein-1 TerhadapKlasifikasi Histopatologi Nefritis Lupus

Analysis Biomarker Levels of Urine MCP-1 Against Lupus Nephritis Classification

Histopathology Lupus Nephritis

Yuliana Salman*STIKES Husada Borneo Banjarbaru, Jl. A. Yani Km 30,5 No.4 Banjarbaru

*korespondensi : ulee_s1@yahoo.com

AbstractSystemic lupus erythematosus (SLE) is an autoimmune disease characterized by chronicand acute inflammation. The common of serious complications in SLE is lupus nephritis..Biomarker that showed high specificity for SLE especially in lupus nephritis is MonocyteChemoattractant Protein urine-1 (uMCP-1). In Indonesia, correlation between uMCP-1 withlupus nephritis still unknown. This approach is expected to replace renal biopsy inhistopathological classification of lupus nephritis. This study is an observational that wasconducted in cross-sectional study. The research will be conducted over a 11-month withurine sampling to determine levels of MCP-1 in patients with SLE, and renal biopsy wasperformed to determine the class of lupus nephritis according to WHO (1982) classification.The results showed no significant difference (p = 0,247>α) between mean rank levels ofurinary uMCP-1of control and cases group. In the Kruskal-Wallis test demonstrated thecomparison of mean rank urine MCP-1 levels among 3 groups are no significant difference(p = 0,197>α). It can be concluded that the levels of urinary MCP1 was not associated withincidence and histopathological classification of lupus nephritis.

Keyword: Lupus nephritis, uMCP-1, Histopathology class

Jurkessia, Vol. IV, No. 1, November 2013 Yuliana Salman.

penangangan yang tepat dari pasien nefritislupus, meningkatkan efesiensi terapi sehinggamengurangi efek toksisitas terapi.

Metode PenelitianPenelitian ini merupakan studi

observasional yang dilakukan secara cross-sectional study. Penelitian ini akan dilakukanselama 11 bulan berupa studi observasionaldengan pengambilan sampel urin pada 31responden untuk mengetahui kadar uMCP-1pada pasien lupus, serta dilakukan biopsi ginjaluntuk menentukan kelas nefritis lupusberdasarkan klasifikasi WHO. Variabel bebaspenelitian ini yaitu kadar uMCP-1, sedangkanvariabel terikat yaitu gambaran klasifikasihistopatologis nefritis lupus.

Prosedur KerjaPemeriksaan kemokin urine MCP-1

Pemeriksaan urine MCP-1 dilakukandengan metode ELISA menggunakan RayBioELISA Kit. Sampel urin yang diperoleh, disimpandalam -80oC sampai cukup jumlahnya untukdiperiksa. Pada sumur mikrotiter yang telahdilapisi antibodi anti-human MCP-1 ditambahkansampel urin 100µl. Inkubasi selama 3 jam padasuhu ruang, tambahkan antibodi biotin daninkubasi kembali selama 1 jam. TambahkanStreptavidin solution (inkubasi selama 45 menit).Tambahkan Tetramethyl benzidine (TMB)solution dan inkubasi selama 1 jam, Reaksidihentikan dengan penambahan stop solution,kemudian dibaca dengan spektrofotometer pada450 nm.

Biopsi ginjal Biopsi ginjal dilakukan oleh dokter Ahli

Penyakit Dalam konsultan Ginjal Hipertensi diseksi Ginjal-Hipertensi Laboratorium IlmuPenyakit Dalam RSSA dengan tuntunanUltrasonografi (USG-Guided). Pengambilanjaringan dilakukan sebanyak 2 kali. Jaringanpertama diawetkan dalam formalin 10%,sedangkan yang kedua dengan OCT compound.Jaringan ginjal yang diperoleh segera dikirim keLaboratorium Patologi Anatomi FakultasKedokteran Universitas Brawijaya Malang.

Analisis data kuantitatif berupa kadar antibodianti-dsDNA dan urine MCP-1 akan di analisa

dengan bantuan program SPSS versi 19. Ujistatistik yang digunakan adalah statistik nonparametrik, yaitu uji Mann-Whitney, uji Kruskal-Wallis dan uji korelasi Spearman rho dengantaraf signifikansi p≤ 0,05 serta uji diagnostik. Datakualitatif berupa gambaran histopatologis darinefritis lupus untuk menetapkan kelas nefritislupus berdasarkan klasifikasi WHO tahun 1982(12).

Hasil Penelitian1. Karakteristik subyek penelitian

Penelitian ini menggunakan 31 sampelpasien biopsi, yang terdiri atas 6 pasien LEStanpa nefritis lupus (kontrol) dan 25 pasien LESdengan nefritis lupus. Karakteristik dari subyekpenelitian yang digunakan pada penelitian inidisajikan pada tabel 1 di bawah ini : Tabel 1. Karakteristik subyek penelitian

Kategori Subyek penelitianJenis KelaminLaki-lakiPerempuan

6,45%93,55%

Usia (tahun)10-20 21-3031-40

29,03%48,38%38,71%

SukuJawa 100%Lama Sakit<1 tahun1-2 tahun>2 tahun

16,13%32,26%51,61%

Gejala KlinisNefritis OdemaNyeri sendiRashSeroritis

80,64%29,03%54,83%41,93%9,68%

Silent lupusnephritis

25,80%

Berdasarkan Tabel 1 di atas, terlihat bahwasebagian besar subyek penelitian dari jeniskelamin perempuan dengan persentase sebesar93,55%. Rentang usia yang memiliki persentaseterbesar antara 21-30 tahun sebesar 48,38%.Suku dari subyek penelitian 100% suku Jawa.Lama sakit subyek penelitian yang paling banyaksudah berjalan >2 tahun, yaitu sebesar 51,61%dan gejala klinis yang paling banyak muncul

2

Jurkessia, Vol. IV, No. 1, November 2013 Yuliana Salman.

adalah nefritis lupus, yaitu 80,64%. Adanya silentlupus nephritis sebesar 25,80%.

2. Gambaran klasifikasi histopatologimenurut WHO

Pada penelitian ini, telah diamati gambaranhistopatologi ginjal yang diambil dari 31 pasienLES yang telah dibiopsi untuk menentukan kelasnefritis lupus. Berikut hasil gambaran klasifikasihistpatologi ginjal dari pasien LES menurut WHOtahun 1982.

Gambar 1. Gambaran histopatologi kelas I & II(kontrol)

Keterangan: Tampak jaringan biopsi ginjal yang padaumumnya normoseluler. (A) Lumen pembuluh kapilerpaten, dinding pembuluh kapiler tidak menebal. (B)Ruang bowman tidak menyempit. (C) KapsulaBowman tidak menebal. (D) Tubulus tidak atrofik,interstitium tidak fibrotik, tidak terdapat infiltrasi selradang. Pembuluh darah tidak menunjukkan kelainan.(AG4) (Perbesaran 400x).

Gambar 2. Gambaran histopatologi kelas III & IVKeterangan: (A) Tampak jaringan ginjal hiperselulerdengan proliferasi endokapiler ringan denganpenambahan sel-sel mesangial. Tidak didapatkan

infiltrasi sel-sel neutrofil pada glomerulus. (B) Lumenkapiler paten, dinding kapiler menebal (AG 27)(Perbesaran 400x).

Gambar 3. Gambaran histopatologi kelas V Keterangan: (A) Tampak jaringan biopsi ginjalhiperseluler dengan proliferasi endokapiler ringandisertai dengan penambahan matriks dan selmesangial. (B) Didapatkan beberapa sel neutrofil pada1-2 glomerulus. (C) Lumen kapiler paten, sebagianmenyempit serta didapatkan penebalan dindingkapiler tanpa terlihat gambaran wire loop. Tidakdidapatkan nekrosis fibrinoid maupun karyorrheksis.(D) Simpai bowman tidak menebal, ruang bowmansebagian menyempit, didapatkan kresent fibroselulerpada 2 buah glomeruli. (AG 1) (Perbesaran 400x).

3. Uji perbandingan kadar uMCP-1 antarakelompok kontrol dan kasus

Untuk melihat perbedaan kadar uMCP-1antara kelompok kontrol dan kelompok kasus,maka digunakan uji Mann-Whitney yang secararingkas ditampilkan pada tabel di bawah ini. Tabel 2. Perbandingan kadar uMCP-1 antara

kelompok kontrol dan kelompok kasus

VariabelKontrol (n=6) Kasus (n=25)Rerata Rank Rerata Rank

uMCP-1 12,00 16,96Keterangan: ∝<0,05

Hasil perbandingan rerata rank kadar urineMCP-1 kelompok kontrol sebesar 12 dankelompok kasus sebesar 19,96 menunjukkantidak ada perbedaan yang bermakna (p=0,247>∝ ). Hal ini dapat diartikan bahwa tingginya

kadar urine MCP-1 belum tentu menunjukkankejadian nefritis lupus.

3

D

A

Jurkessia, Vol. IV, No. 1, November 2013 Yuliana Salman.

4. Uji perbandingan kadar uMCP-1 antaraketiga kelompok sampel

Analisis data hasil uji Kruskal-Wallis secararingkas ditampilkan pada tabel di bawah ini:Tabel 3. Perbandingan keempat kelompok

sampel

Kelompok nRerata rank urine

MCP-1 (ng/ml)kontrol 6 12,00

Klas III & IV 16 15,13Klas V 9 20,22

p-value 0,197Keterangan: p-value < 0,05 ada perbedaan yangbermakna

Pada Tabel 3 hasil uji perbandingan ketigamean rank kadar urine MCP-1 menunjukkan tidakada perbedaan yang bermakna (p=0,197> ∝ ),dengan nilai rerata rank masing-masingkelompok sebesar 12, 15,13 dan 20,22. Hal iniberarti bahwa kadar anti-dsDNA dan urine MCP-1antar klasifikasi histopatologi pasien nefritis lupustidak menunjukkan perbedaan yang bermakna.

PembahasanLES merupakan prototype dari kelainan

autoimun yang mempunyai karakteristikketerlibatan berbagai multisistem dan adanyaautoantibodi (antara lain anti- dsDNA) yangsecara langsung menyerang komponen sel. Padapenelitian ini, menggunakan 31 sampel pasienSLE yang terdiri atas 25 pasien dengan nefritislupus dan 6 pasien SLE non nefritis lupus.Karakteristik pasien pada penelitian ini dapatdilihat pada Tabel 1. Tabel tersebut menunjukkanjenis kelamin pasien 93,55% perempuan, hal inisesuai dengan penelitian yang dilaporkan olehRus (3) yang menyatakan bahwa rasio prevalensiLES antara wanita dan pria sebesar 9:1. PadaTabel 1 juga menunjukkan rentang usia yangpaling banyak berkisar antara 21-30 tahunsebesar 48,38%, hal ini sesuai dengan penelitianyang menyatakan bahwa Sebagian besar pasienberkembang menjadi lupus nefritis pada awalpenyakitnya (11,13).

Berdasarkan hasil biopsi diperolehgambaran Kelas I dan II (Gambar 1), yaitujaringan ginjal yang pada umumnyanormoseluler, Lumen pembuluh kapiler paten,dinding pembuluh kapiler tidak menebal, ruangBowman tidak menyempit dan tubulus tidakatrofik. Pada kelas II terdapat penambahan

ringan matriks dan atau sel mesangial. Hal inisesuai dengan gambaran klasifikasi WHO tahun1982 (14). Selain itu juga diperoleh gambaranhistopatologi kelas III dan IV (Gambar 2). Darigambaran tersebut, diperoleh karakteristikjaringan ginjal yang hiperseluler denganproliferasi endokapiler ringan denganpenambahan sel-sel mesangial, Kelas IIIdigambarkan memiliki kerusakan atau glomeruluslesions <50% dari total glomerulus, sedangkankelas IV digambarkan memiliki kerusakan atauglomerulus lesions >50% dari total glomerulus.Hal ini sesuai dengan gambaran klasifikasi WHOtahun 1982 yang menyatakan bahwa sebagianbesar kasus dari kelas III dan kelas IV nefritislupus endocapillary mengalami hiperseluleritas.Kelas III nefritis didefinisikan sebagai focalsegmental atau global endocapillary danextracapillary glomerulonephritis kurang dari 50%dari total glomerulus. Sedangkan kelas IVdidefinisikan sebagai diffuse segmental atauglobal endocapillary dan extracapillaryglomerulonephritis lebih dari 50% dari totalglomerulus. Pada penelitian ini juga diperolehgambaran klasifikasi kelas V (Gambar 3) yangsesuai dengan klasifikasi WHO tahun 1982 yaitupada kelas V terdapat penebalan dinding kapilerkarena adanya deposit kompleks imundisepanjang kapiler glomerular (10).

Pada penelitian ini diukur kadar urine MCP-1. Berdasarkan hasil analisis kadar urine MCP-1,menunjukkan bahwa tidak ada perbedaan yangsignifikan antara kelompok kontrol dan kelompoknefrits lupus (Tabel 2). Begitu pula perbandinganantar kelas pada nefritis lupus, tidak adaperbedaan yang signifikan (Tabel 3). Adapunalasan yang dapat menjelaskan hasil di atas,yang pertama adanya penelitian yangmenyatakan bahwa polimorfisme gen uMCP-1dapat mempengaruhi kadar MCP-1 dan dapatmenjadi faktor pemicu terjadinya nefritis lupus(4,14). Alasan yang kedua, yaitu pada penelitianyang dilakukan oleh Tian et.al (15) menyatakanbahwa uMCP-1 tidak berhubungan denganhistopatologis indeks aktivitas penyakit danpeningkatan uMCP-1 bukan merupakan prediktorindependen dari kerusakan ginjal. Padapenelitian tersebut, yang menjadi prediktorindependen adalah urine RANTES dan M-CSF.

4

Jurkessia, Vol. IV, No. 1, November 2013 Yuliana Salman.

Kedua kemokin tersebut juga merupakansuatu kemoatraktan yang berperan dalaminflamasi. RANTES merupakan kemoatraktanyang kuat bagi sel T dan sel monosit, sedangkanM-CSF merupakan kemoatraktan dan proliferatoryang baik bagi magrofag intrarenal. SedangkanMCP-1 merupakan kemokin yang diproduksipada ginjal yang dapat merekrut sel-sel inflamasi.Penelitian Dai (16) menunjukkan bahwa ekspresiMCP-1 berhubungan dengan jumlah infiltrasimakrofag pada interstitium. Sehingga untukmenentukan klasifikasi kelas nefritis lupusdiperlukan penambahan parameter ataubiomarker lain seperti RANTES dan M-CSF (15).

Faktor lain yang dapat mempengaruhi hasilpenelitian ini, antara lain kondisi lingkungan, latarbelakang pasien (adanya faktor genetik) danriwayat penyakit sebelumnya serta lamanyawaktu penggunaan obat-obatan yang bersifatimunosupresan yang berbeda-beda pada subyekpenelitian. Hal ini sesuai dengan teori yangmenyatakan bahwa LES merupakan penyakityang melibatkan banyak gen. Pada individu yangmemiliki predisposisi genetik, alel normal daribeberapa gen normal masing-masingberkontribusi terhadap respon imun abnormalyang kecil, jika beberapa variasi jumlahberakumulasi maka penyakit akan terjadi.Rangsangan lingkungan juga dapatmempengaruhi kemunculan LES denganpeningkatan apoptosis pada sel kulit atau denganmengubah DNA dan protein intraseluler danmembuatnya menjadi antigenik. Semua faktortersebut tidak dapat dikendalikan oleh penelitimengingat keterbatasan sampel dan waktupenelitian. Hal ini merupakan keterbatasan dalampenelitian.

KesimpulanDapat disimpulkan bahwa kadar biomarker

antibodi anti-dsDNA dan uMCP-1 tidakberhubungan dengan kejadian dan klasifikasihistopatologi dari nefritis lupus

Daftar Pustaka1. Sudoyo A. W et al. 2007. Nefritis lupus. In :

Buku Ajar Ilmu Penyakit Dalam. Jilid 3. Edisi

IV. Pusat Penerbitan Ilmu Penyakit Dalam UI,Jakarta.

2. Dooley M. A. 2007. Clinical and laboratoryfeatures of lupus nephritis. In: Wallace DJ,Hahn BH, eds. Dubois' LupusErythematosus. 7th ed. Philadelphia, PA:Lippincott Williams & Wilkins: 1112-30.

3. Rus V, Maury EE, Hochberg MC. 2007.Epidemiology of Systemic LupusErythematosus. In: Wallace DJ, Hahn BH,eds. Dubois' Lupus Erythematosus. 7th ed.Philadelphia, PA: Lippincott Williams &Wilkins:34-44.

4. Tucci M., Barnes E. V., Sobel E. S., et al.2004. Strong association of a functionalpolymorphism in the monocytechemoattractant protein 1 promoter genewith lupus nephritis. Arthritis andRheumatism, vol. 50(6); 1842–1849.

5. Li Yi, et.al. 2009. Increased expression ofFcγRI/CD64 on circulating monocytesparallels ongoing inflammation and nephritisin lupus. Arthritis Research & Therapy; Vol11 (1).

6. Marks, S.D., Williams, S.J., Tullus, K andSebire, N.J. 2008. Glomerular expression ofmonocyte chemoattractant protein-1 ispredictive of poor renal prognosis inpaediatric lupus nephritis. NephrologyDialysis Transplantation: 23: 3521–3526.

7. Rovin B. 2009. Urinary MCP-1 is a sensitiveand specific biomarker of renal systemiclupus erythematosus.

8. Marks S. D, Shah V, Hasson N, Pilkington C,Tullus K. 2010. Urinary monocytechemoattractant protein-1 correlates withdisease activity in lupus nephritis. P265Abstract Book; Nov 25(11): 2283-2288.

9. Mok, C. C. 2010. Biomarker for LupusNephritis : A Critical Apparaisal, Jounal ofBiomedicibne and Biotechnology.

10. Lahita, R. G. 2003. Systemic lupuserythematosus, fourth edition. University ofToronto.

11. Wallace D. J, Hahn B H, eds. 2007.Dubois'Lupus Erythematosus, fourth ed.Philadelphia William & Wilkins: 93-104.

12. Sastroasmoro S & Ismael S. 2002. Dasar-dasar Metodelogi Penelitian Klinis. Edisi

5

Jurkessia, Vol. IV, No. 1, November 2013 Yuliana Salman.

kedua. CV. Sagung Seto, Jakarta. Hal 137-141.

13. Seligman VA, Lum RF, Olson JL, Li H,Criswell LA. 2002. Demographic diff erencesin the outcome of SLE nephritis: aretrospective analysis. American Journal ofMedicine. 112:726-729.

14. Kim HL, Lee DS, Yang SH et al. 2002. Thepolymorphism of monocyte chemoattractantprotein-1 is associated with the renal diseaseof SLE. American Journal of Kidney Disease.40: 1146-1152.

15. Tian S, et.al. 2007. Urinary levels ofRANTES and M-CSF are predictor of lupusnephritis flare. Inflammation research. 56:304-310.

16. Dai C, Liu Z, Zhou H, Li L. 2001. Monocytechemoattractant protein-1 expression in renaltissue is associated with monocyterecruitment and tubule-interstitial lesions inpatien with lupus nephiris. Chin med J (Engl).114;864-8.

6