1-Kromatografi Lapisan Tipis

8/18/2019 1-Kromatografi Lapisan Tipis

1/10

KROMATOGRAFI LAPISAN TIPIS (KLT)

THIN LAYER CHROMATOGRAPHY (TLC)

1. TUJUAN

a. Mengetahui pemakaian kromatografi lapisan tipis untuk pemisahan

komponen-komponen dalam senyawa atau campuran.

b. Mencari harga Rf dari beberapa komponen pada system fasa diam dan

fasa gerak.

c. Untuk mengetahui fasa gerak (eluen) yang cocok dan bagus untuk

memisahkan komponen-komponen dalam suatu senyawa atau

campuran.

2. TEORI DASAR

Kromatografi adalah suatu metoda pemisahan campuran senyawa atau

komponen berdasarkan perbedaan distribusi senyawa atau komponen tersebut

antara dua fasa, yaitu fasa gerak (eluen) dan fasa diam (adsorben).

ase diam ( stationary phase) merupakan salah satu komponen yang penting

dalam proses pemisahan dengan kromatografi karena adanya interaksi dengan fase

diamlah ter!adi perbedaan waktu retensi (tR) dan terpisahnya komponen senyawa

analit. ase diam dapat berupa bahan atau porous (berpori) berbentuk molekul

kecil atau cairan yang umumnya dilapisi pada padatan pendukung .

ase gerak (mobile phase) merupakan pembawa analit dapat bersifat inert

maupun berinteraksi dengan analit tersebut. ase gerak ini tidak hanya dalam

bentuk cairan tapi !uga dapat berupa gas inert yang umumnya dapat dipakai

sebagai carrier gas senyawa mudah menguap ("olatile).

Kromatografi lapis tipis merupakan salah satu analisis kualitatif dari suatu

sampel yang ingin dideteksi dengan memisahkan komponen-komponen sampel

berdasarkan perbedaan kepolaran. Kromatografi lapisan tipis dikembangkan oleh

Egon Stahl dengan menempelkan absorben pada lempengan gelas, sehingga

merupakan lapisan. #elain plat kaca !uga digunakan plat alumina.


2/10

Prinsip

$rinsip ker!anya memisahkan sampel berdasarkan perbedaan kepolaran

antara sampel dengan pelarut yang digunakan. %eknik ini biasanya menggunakan

fase diam dari bentuk plat silika dan fase geraknya disesuaikan dengan !enis

sampel yang ingin dipisahkan. &arutan atau campuran larutan yang digunakan

dinamakan eluen. #emakin dekat kepolaran antara sampel dengan eluen maka

sampel akan semakin terbawa oleh fase gerak tersebut.

'istribusi fasa atau perpindahan molekul suatu komponen dari fasa yang

bergerak menu!u fasa diam yang dilaluinya merupakan suatu proses

kesetimbangan. da macam distribusi fasa, yaitu *

+. Distribusi fasa partisi, yaitu distribusi fasa yang ter!adi karena

perbedaan kelarutan komponen-komponen dalam pelarur-pelarut yang

tudak saling melarut.

. Distribusi fasa adsorpsi, yaitu distribusi fasa yang ter!adi karena

adanya perbedaan daya adsorpsi komponen pada fasa padat,

Kromatografi lapisan tipis beker!a berdasarkan pada distribusi fasa adsorpsi

cair-padat. #ebagai fasa padat atau absorbennya berupa lapisan tipis bubur

alumina, silika gel yang menempel pada permukaan selembar lempengan kaca

atau lempengan alumina. #edangkan sebagai fasa gerak atau eluen yang

digunakan untuk membawa at yang diperiksa bergerak melalui fasa padat. luen

K&% ini berupa cairan yang mengelusi campuran komponen atau senyawa dari

u!ung yang satu ke u!ung yang lain, yaitu dari bagian bawah plat ke bagian atas

plat. $ertimbangan untuk pemilihan pelarut pengembang (eluen) umumnya sama

dengan pemilihan eluen untuk kromatografi kolom. 'alam kromatografi adsorpsi,

pengelusi eluen naik se!alan dengan pelarut (misalnya dari heksana ke aseton, ke

alkohol, ke air). luen pengembang dapat berupa pelarut tunggal dan campuran

pelarut dengan susunan tertentu. $elarut-pelarut pengembang harus mempunyai

kemurnian yang tinggi. %erdapatnya se!umlah air atau at pengotor lainnya dapat

menghasilkan kromatogram yang tidak diharapkan.


3/10

&arutan pekat senyawa yang diperiksa ditotolkan pada permukaan lapisan

tipis bubur silika gel atau alumina pada suatu garis yang se!a!ar. &apisan tipis

yang telah ditotolkan larutan pekat dari at yang diperiksa dimasukkan ke dalam

botol kromatografi yang telah berisi eluen. Komponen yang lebih kuat diserap

oleh adsorben akan lebih lambat naiknya dan komponen yang kurang diserap oleh

adsorben akan lebih cepat naiknya pada plat. #ehingga pada plat akan terdapat

komponen-komponen yang tersusun sepan!ang plat.

Kromatografi lapis tipis merupakan cara pemisahan campuran senyawa

men!adi senyawa murni dan mengetahui kuantitasnya yang menggunakan

kromatografi !uga merupakan analisis cepat yang memerlukan bahan sangatsedikit, baik menyerap maupun merupakan cuplikan K&% dapat digunakan untuk

memisahkan senyawa-senyawa yang sifatnya hidrofilik seperti lipid-lipid dan

hidrokarbon yang sukar diker!akan dengan kromatografi kertas. K&% !uga dapat

digunakan untuk mencari kromatografi kolom, identifikasi senyawa secara

kromatografi dengan sifat kelarutan senyawa yang dianalisis. ahan lapis tipis

seperti silika gel adalah senyawa yang tidak bereaksi dengan pereaksi-pereaksi

yang lebih reaktif seperti asam sulfat.

Untuk mengidentifikasi komponen yang satu dengan yang lainnya dapat

digunakan faktor retensi Rf (Reterdation factor / factor perintang lambatan).

0ilai Rf

Rf /

Jarak yangditempuh komponen(a)Jarak yangditempuheluen(b)

(b)

(a)


4/10

1arak antara !alannya pelarut bersifat relatif . 2leh karena itu, diperlukan

suatu perhitungan tertentu untuk memastikan spot yang terbentuk memiliki !arak

yang sama walaupun ukuran !arak platnya berbeda. 0ilai perhitungan tersebut

adalah nilai Rf , nilai ini digunakan sebagai nilai perbandingan relatif antar

sampel. 0ilai Rf !uga menyatakan dera!at retensi suatu komponen dalam fase

diam sehingga nilai Rf sering !uga disebut aktor Retensi. 0ilai Rf dapat dihitung

dengan rumus berikut *

Rf Jarak yangditempuh komponen(a)

Jarak yangditempuheluen(b)

#emakin besar nilai Rf dari sampel maka semakin besar pula !arak

bergeraknya senyawa tersebut pada plat kromatografi lapis tipis. #aat

membandingkan dua sampel yang berbeda di bawah kondisi kromatografi yang

sama, nilai Rf akan besar bila senyawa tersebut kurang polar dan berinteraksi

dengan adsorbent polar dari plat kromatografi lapis tipis.

0ilai Rf dapat di!adikan bukti dalam mengidentifikasikan senyawa. ila

identifikasi nilai Rf memiliki nilai yang sama maka senyawa tersebut dapat

dikatakan memiliki karakteristik yang sama atau mirip. #edangkan, bila nilai Rf-

nya berbeda, senyawa tersebut dapat dikatakan merupakan senyawa yang berbeda.

da 3 cara penampakan noda, yaitu *

+) $enampakan langsung, dimana noda diamati langsung !ika noda tersebut

berwarna.

) #ecara fisik, yaitu dengan menggunakan sinar U4.

http://id.wikipedia.org/w/index.php?title=Relatif&action=edit&redlink=1http://id.wikipedia.org/w/index.php?title=Perbandingan&action=edit&redlink=1http://id.wikipedia.org/w/index.php?title=Retensi&action=edit&redlink=1http://id.wikipedia.org/w/index.php?title=Plat&action=edit&redlink=1http://id.wikipedia.org/w/index.php?title=Polar&action=edit&redlink=1http://id.wikipedia.org/w/index.php?title=Bukti&action=edit&redlink=1http://id.wikipedia.org/wiki/Senyawahttp://id.wikipedia.org/w/index.php?title=Karakteristik&action=edit&redlink=1http://id.wikipedia.org/w/index.php?title=Karakteristik&action=edit&redlink=1http://id.wikipedia.org/w/index.php?title=Perbandingan&action=edit&redlink=1http://id.wikipedia.org/w/index.php?title=Retensi&action=edit&redlink=1http://id.wikipedia.org/w/index.php?title=Plat&action=edit&redlink=1http://id.wikipedia.org/w/index.php?title=Polar&action=edit&redlink=1http://id.wikipedia.org/w/index.php?title=Bukti&action=edit&redlink=1http://id.wikipedia.org/wiki/Senyawahttp://id.wikipedia.org/w/index.php?title=Karakteristik&action=edit&redlink=1http://id.wikipedia.org/w/index.php?title=Relatif&action=edit&redlink=1


5/10

5) #ecara kimia, yaitu dengan menyemprotkan atau menggunakan reagen

pewarna. 6ontoh menggunakan uap 7odium (7).

R!a"!n p!#arna $n%$& KLT'TL

R!a"!n P!#arna P!#arnaan Un%$& J!nis

Uap 7odium (7) $ewarna umum untuk kebanyakan senyawa

organik

0inhydrin $ewarna yang baik untuk asam-asam amino

KMn23 $ewarna yang baik untuk &efin dan gas

yang mudah dioksidasi

6erium sulfat 8at pewarna umum, terutama untuk

senyawa alkaloidrom 6resol 9reen $ewarna untuk golongan asam dengan pKa

: ;

,3 'initro $henol $ewarna untuk ldehid dan Keton

3) #ecara biologis, yaitu dengan menggunakan at warna yang dapat

terdegradasi oleh mikroba.

*. ALAT DAN +A,AN

*.1 ALAT

9elas piala ;< m&

Kaca arlo!i

$lat alumunium (fasa diam)

$ipa kapiler

• $ipet takar +< m&

*.2 +A,AN

• utanol p.a

• til p.a

• Methanol p.a

• 8at warna Rodamin

• 8at warna Metilen lue


6/10

-. PROSEDUR KERJA

-.1 ARA KERJA

+) &apisan plat alumina diukur + cm dari bagian bawah (garis start ) dan +

cm bagian atas plat (garis finish).

) 'isiapkan luen 7 dan luen 77 yaitu dengan membuat campuran

dengan perbandingan dari *

luen 7 utanol til Methanol

+ m& m& 3 m&

luen 77 utanol til Methanol

3 m& m& + m&

5) 'itotolkan at warna pada plat pada garis start dengan 5 totolan yaitu *

%otolan / at warna Rodamin

%otolan / at warna Rodamin = Metilen lue

%otolan 6 / at warna Metilen lue

3) Kemudian plat dicelupkan ke dalam gelas piala yang telah berisi eluen

(hindari noda !angan sampai terendam). 'an tutup dengan kaca arlo!i.

;) #etelah itu diamati kenaikan eluen hingga mencapai garis atas (garis

finish).

>) #etelah eluen telah mencapai garis finish, maka plat dikeluarkan dari

gelas piala dan dikeringkan.

?) Kemudian dicari harga Rf nya dengan menggunakan rumus *

Rf /Jarak yangditempuh komponen(a)


-.2 GAM+AR ALAT

. PENGAMATAN

• Rodamin berwarna merah muda pekat

• Metilen lue berwarna biru tua pekat


7/10

El$!n 1

@arna noda yang didapat *

%otolan A + / warna pink pekat

/ warna pink muda (seulas)


/ warna pink muda (seulas)

%otolan 6 A 6+ / warna biru muda (seulas)

El$!n II

@arna noda yang didapat *


/ warna pink muda

5 / warna pink seulas


/ warna pink muda

5 / warna pink seulas

%otolan 6 A 6+ / warna biru muda (seulas)

/. DATA DAN PER,ITUNGAN

/.1 DATA

6+

++

6

5 5 6+

++

6


8/10

'ata yang didapatkan *

asa

9erak %otolan

Kode

#ampel

1arak yang

ditempuh

komponen, (a)

1arak yang

ditempuh

eluen, (b)

luen 7 + 3,5 cm

>,> cm

+ 3, cm

>,> cm

6 6+ >,> cm

luen 77 + +,+ cm

5,< cm

5 >,> cm

+ +, cm

5,+ cm5 >,B cm

6 6+ ?, cm

/.2 PER,ITUNGAN

'ari data yang diperoleh, maka dapat dihitung nilai Rf nya dengan

menggunakan rumus *

Rf

Jarak yangditempuh komponen(a)


El$!n I A utanol * til * Metanol (+**3)

%otolan

(Rodamin ) Rf + /4 ,3cm

8cm /


9/10

Rf /3,0cm

8 cm /


10/10

luen 77

1-Kromatografi Lapisan Tipis

Documents

Transcript of 1-Kromatografi Lapisan Tipis