Lipad Analisis Menggunakan Layar Tipis Kromatografi

8/18/2019 Lipad Analisis Menggunakan Layar Tipis Kromatografi

1/33

1

JURNAL REVIEW BIOLOGI MOLEKULER

Lipad Analisis Menggunakan Layar Tipis

Kromatografi

Oleh:

Kelompok 7 dan 9

Cindy Sandra (1406552881)

Citra Noviasari (1406569882)

Ghina Marsya .N (1406608025)

Meidina Sekar .N (1406553045)

Merisa Aulia (1406531731)

Rana Najeges (1406553026)

Program Studi Teknik Kimia

Departemen Teknik Kimia

Fakultas Teknik, Universitas Indonesia

Depok, April 2016


2/33

2

Kata Pengantar

Puji syukur ke hadirat Tuhan Yang Maha Esa atas segala rahmat dan karunia-Nya,

sehingga kami dapat menyelesaikan Makalah Biologi Molekuler yang berjudul “Lipid Analysis

by Thin-Layer Chromatography“. Penulisan makalah ini dimaksudkan untuk menyelesaikan

tugas UTS di semester empat ini, yaitu mata kuliah Biologi Molekuler.

Selesainya penyusunan makalah “Lipid Analysis by Thin-Layer Chromatography” ini

tidak terlepas berkat bantuan dari berbagai pihak, terutama kepada Bu Rita selaku dosen mata

kuliah Biologi Molekuler. Oleh karena itu melalui kesempatan yang sangat berharga ini, kami

mengucapkan terima kasih kepada semua pihak yang telah membantu pembuatan makalah ini.

Semoga Tuhan Yang Maha Esa membalasnya dengan yang lebih baik.

Akhir kata “tiada gading yang tak retak, tiada manusia yang sempurna”, begitupun

dengan karya tulis ini. Kami menyadari bahwa karya tulis ini masih jauh dari sempurna, oleh

karena itu kami mengharapkan saran dan kritik yang bersifat membangun untuk lebih

menyempurnakan makalah ini. Akhir kata kami mengucapkan semoga makalah ini dapat

bermanfaat.

Depok, 7 April 2016

Penulis


3/33

3

DAFTAR ISI

Kata Pengantar ............................................................................................................................. 2 Daftar Isi ........................................................................................................................................ 3

Isi .................................................................................................................................................... 3

I. Pendahuluan .....................................................................................................................3

Struktur Lipid ....................................................................................................................5

Metode Analisis Lipid………………………………………………........………11

Ekstraksi Lipid dari Sampel Biologis……………………………………..……..20

II. Kromatografi Layar Tipis..................................................................................................... 23

Fase Diam ....................................................................................................................... 24

Sistem Deteksi .......................................................................................................26

Daftar Pustaka…………………………………………………………………………………. 33


4/33

4

I. Pendahuluan

Ketersediaan pringan pre-coated TLC secara komersial yang terus meningkat telah secara

signifikan meningkatkan ketercapaian kemampuan memproduksi dari pemisahan yang dahulu

sangat terbatas pada saat piringan TLC konvensional masih digunakan. Selain itu,

ketersediaan banyak materi absorben yang berbeda termasuk high performance silica, fase

tergabung dan lapisan fleksibilitas dari HPLTC untuk banyak pemisahan pada lipid.

1. TLC mudah dan sederhana. Jika pelat TLC tersedia secara komersial, bahkan

pengguna yang kurang berpengalaman mampu melakukan pemisahan berkualitas

tinggi.

2. Peralatan yang dibutuhkan untuk TLC cukup murah, sehingga mudah ditemukan di

laboratorium.

3. TLC sudah terjamin di banyak industri, terutama farmasi. Keuntungan dalam bidang

itu adalah TLC dapat dengan mudah digunakan untuk menentukan analit yang berbeda

secara kuantitatif (setidaknya bila ada standar yang terpercaya).

4. TLC tidak menyediakan efek “memori” sehingga dalam setiap kasus selalu digunakan

fase diam yang baru. Ini adalah keuntungan yang signifikan dibandingkan dengan LC,

dimana kontribusi yang tersisa dari analisis sebelumnya tidak dapat pernah benar-

benar dihapus.

5.

TLC membutuhkan jumlah pelarut yang jauh lebih kecil dari pada HPLC. Sehingga

TLC lebih murah dan ramah lingkungan.

6. Banyak sampel yang berbeda dapat secara bersamaan ditempatkan ke piring TLC

tunggal, sehingga dalam prakteknya TLC seringkali lebih cepat daripada LC

(meskipun baru-baru ini tersedia “multiplexing” LC yang memungkinkan analisis

beberapa sampel secara paralel).

7. Setelah pemisahan TLC, lipid dapat dengan mudah divisualisasikan dengan

pewarnaan, misalnya dengan pewarna untuk karakteristik gugus fungsi khusus, sepertiamino atau karbohidrat residu. Ini adalah keuntungan yang signifikan dibandingkan

dengan HPLC mana “derivatisasi kolom” biasanya lebih sulit .

8. TLC juga dapat digunakan untuk analisis sampel “mencurigakan” (belum pasti ada

lipidnya) yang mudah merusak sistem HPLC. Hal ini terutama penting dalam kimia

makanan dimana campuran yang tidak diketahui harus dianalisis.


5/33

5

Di bidang lipid, TLC digunakan untuk pemisahan rutin, identifikasi lipid individu dan

penentuan kuantitatif. Dengan munculnya teknik "automated multiple development" (AMD),

semua langkah mulai dari aplikasi sampai pencampuran pelarut, pengembangan dan

pengeringan bisa otomatis. Terutama, gradien elusi yang dapat direproduksi menjadi tersedia.

Penggunaan gradien (yaitu campuran dari pelarut yang berbeda dan / atau konsentrasi garam

yang berbeda yang berubah tergantung waktu) adalah sangat umum di HPLC tapi tidak terlalu

umum di TLC. Meskipun yang otomatis jelas mahal, itu adalah prasyarat untuk penggunaan

HPTLC yang lebih luas dalam farmasi, kosmetik dan yang paling penting, industri minyak

dan lemak.

1.1 Struktur Lipid

Secara tradisional, "lipid" dapat didefinisikan sebagai senyawa apolar atau merupakan

senyawa yang tidak larut dalam air dan dapat diperkaya dengan pengobatan /ekstraksi dengan

pelarut organik seperti kloroform atau heksana [2]. Definisi lain telah diperkenalkan oleh

Christie [17]: Menurut definisi ini, lipid adalah asam lemak dan mereka derivatif, dan zat

terkait biosynthetically atau fungsional untuk senyawa ini. Sebuah survei metode ekstraksi

lipid yang umum digunakan dalam praktek sehari-hari akan diberikan di bawah, tapi pertama,

survei singkat lipid yang relevan dengan topik ulasan ini akan disediakan. Kita akan berfokus

terutama pada senyawa yang terjadi dalam


6/33

6

Gambar 1. Bagan Klasifikasi Lipid

sistem biologis dan memiliki relevansi fisiologis. Menurut pengalaman kami, kita akan

fokus pada lipid hewani, sedangkan lipid tanaman tidak akan terlalu focus dibahas.

Struktur dari glikolipid yang relevan biasanya terjadi pada tanaman akan diperkenalkan di

tempat yang tepat . Sebuah gambaran kasar dari lipid yang relevan dengan tulisan ini

diberikan pada Gambar. 1. Harap dicatat bahwa selain senyawa diilustrasikan pada

Gambar. 1 ada banyak deterjen yang dapat juga dianggap sebagai lipid. Namun, senyawa

ini tidak memainkan peran utama dalam kami ulasan. Lipid tidak hanya dari relevansi

mengenai penyimpanan energi, tetapi juga besar-besaran yang terlibat dalam proses

transduksi sinyal [20]. Dengan demikian, penentuan spesies lipid yang dipilih seperti

lysophospholipids (hasil residu kurang satu lemak dibandingkan untuk fosfolipid) [21],

diacylglycerols, asam fosfatidat atau phosphoinositide adalah cukup menarik karena ini

memungkinkan kesimpulan dari proses metabolisme dan memiliki, dengan demikian,

signifikan diagnostic relevansi. Beberapa glikolipid yang saat ini juga dianggap sebagai

penanda penyakit dan penanda diferensiasi mis batang sel menjadi sel kanker. Ada saat

ini juga banyak protein membran diketahui bahwa terletak di membran sel. Karena

banyak dari protein ini mewakili enzim, aktivitas mereka diasumsikan diatur oleh

Komposisi lipid dari membran dan sedikit perubahan dari lipid Komposisi dapat sangat


7/33

7

mempengaruhi aktivitas enzimatik. Ini, misalnya, untuk terkenal enzim fosfolipase A2

(PLA2) [22]. Dengan demikian, pengetahuan tentang komposisi lipid adalah kepentingan

dari sudut pandang yang berbeda

Lipid dibagi dalam beberapa golongan berdasarkan kemiripan struktur kimianya,

yaitu: asam lemak, lemak, lilin, fosfolipid, sfingolipid, terpen, steroid, lipid kompleks.

1. Asam Lemak

Asam lemak adalah asam organik yang terdapat sebagai ester trigliserida

atau lemak, baik yang berasal dari hewan atau tumbuhan. Asam ini adalah asam

karboksilat yang mempunyai rantai karbon panjang dengan rumus umum:

O = R - C - OH

Dimana R adalah rantai karbon yang jenuh atau yang tidak jenuh dan

terdiri atas 4 sampai 24 buah atom karbon.Rantai karbon yang jenuh ialah rantai

karbon yang tidak mengandung ikatan rangkap, sedangkan yang mengandung

ikatan rangkap disebut rantai karbon tidak jenuh.

Asam lemak tidak jenuh dapat mengandung satu ikatan rangkap atau

lebih.Asam oleat mengandung satu ikatan rangkap. Ikatan rangkap ini

memungkinkan terjadinya isomer sis – trans.

Asam lemak tidak jenuh yang terdapat dalam alam adalah isomer.Asam

linoleat mempunyai dua ikatan rangkat, sedangkan asam linolenat mempunyai

tiga ikatan rangkap.

2. Lemak

Yang dimaksud dengan lemak disini ialah suatu ester asam lemak dengan

gliserol.Gliserol ialah suatu trihidroksi alkohol yang terdiri atas tiga atom karbon.Jadi setiap atom karbon mempunyai gugus – OH.Satu molekul glilserol dapat

mengikat satu, dua atau tiga molekul asam lemak dalam bentuk ester.


8/33

8

3. Lilin

Yang dimaksud dengan lilin (wax) disini ialah ester asam lemak dengan

monohidroksi alkohol yang mempunyai rantai karbon panjang, antara 14 sampai

34 atom karbon. Sebagai contoh alkohol panjang adalah setialkohol dan

mirisalkohol.

Lilin dapat diperoleh antara lain dari lebah madu dan dari ikan paus atau

lumba – lumba. Lilin lebah dikeluarkan oleh lebah madu untuk membentuk

sarang tempat menyimpan madu. Lilin lebah adalah campuran beberapa senyawa,

terutama mirispalmitat.

Lilin yang terdapat pada bagian kepala, ikan paus atau lumba – lumba

disebut spermaseti. Spermaseti ini digunakan sebagai lilin untuk keperluan

penerangan.

Lilin tidak larut dalam air, tetapi larut dalam pelarut lemak. Lilin yang

terdapat pada tumbuhan berfungsi sebagai lapisan pelindung terhadap air,

misalnya yang terdapat pada daun dan buah.

4. Fosfolipid

Fosfolipid atau fosfatidat ialah suatu gliserida yang mengandung fosfor

dalam bentuk ester asam fosfat. Karenanya fosfolipid ialah suatu fosfogliserida.

Senyawa – senyawa dalam golongan fosfogliserida ini dapat dipandang sebagai

derivat asam α fosfatidat, yang diikat oleh asam fosfatidat ini antara lain kolin,

etanolamina, serin dan inositol. Senyawa yang termasuk fosfolipid ini ialah

fosfatidikolin, fosfatidetanolamina, fosfatidilserin dan fosfatidilinositol.

5. Spingolipid

Senyawa yang termasuk golongan ini dapat dipandang derivat sfingosin

atau mempunyai struktur yang mirip, misalnya dihidrosfingosin.

Seramida adalah derivat sfingosin yang mengandung asam lemak. Gugus ini

terikat pada gugus amino. Sfingomielin adalah kelompok senyawa yang

merupakan satu – satunya sfingolipid yang mengandung sfingomielin terutama

terdapat dalam jaringan syaraf.


9/33

9

Kelompok seramida dan sfingomielin adalah senyawa golongan sfingolipid yang

mengandung karbohidrat. Ini disebut glikolipid dan salah satu contoh senyawa

ialah serebrosida. Serebrosida terdapat terutama dalam jaringan syaraf.

6. Terpen

Dalam alam banyak terdapat senyawa yang molekulnya dianggap terdiri

atas beberapa molekul isoprena (2- metilbutadiena) atau mempunyai hubungan

struktural dengan isoprena. Senyawa – senyawa tersebut dikelompokkan dalam

golongan terpen.

7. Steroid

Sejumlah besar senyawa lipid yang mempunyai struktur yang sama dan

dapat dianggap sebagai derivat perhidrosiklopentanofenantrena, yang terdiri dari

atas 3 cincin sikloheksana terpadu seperti bentuk fenantrena (cincin A, B, dan C)

dan sebuah cincin siklopentana yang tergabung pada ujung cincin sikloheksana

tersebut (cincin D). Senyawa – senyawa tersebut termasuk dalam suatu kelompok

steroid.

Beberapa senyawa penting yang termasuk golongan steroid akan dibahas

berikut ini :

a. Kolestrol

Kolestrol adalah salah satu sterol yang penting dan terdapat banyak

dialam.Kolestrol terdapat pada hampir semua sel hewan dan semua

manusia.Tubuh manusia kolestrol terdapat dalam darah. Empedu, kelenjar

adrenal bagian luar (adrenal cortex) dan jaringan syaraf.

b. 7 – Dehidrokolestrol

Senyawa ini terdapat dibawah kulit dan hanya berbeda sedikit dari

kolestrol, yaitu terdapat ikatan rangkap C = C. Dengan sinar ultra violet 7

– Dehidrokolestrol dapat diubah menjadi vitamin D yang sangat berguna

bagi tubuh.Kekurangan vitamin D dapat mengakibatkan kerapuhan pada

tulang.


10/33

10

c. Ergosterol

Sterol ini mempunyai struktur inti sama dengan 7-

dehidrokolestrol, tetapi berbeda pada rantai sampingnya. Ergosterol dapat

juga membentuk vitamin D apabila dikenai sinar ultraviolet.Ergosterol

maupun 7 – dehidrokolestrol disebut provitamin D.

d. Asam – asam Empedu

Cairan empedu dibuat oleh hati dan disimpan dalam kantung

empedu yang kemudian dikeluarkan kedalam usus dua belas jari (

duodenum ) untuk membantu proses pencernaan makanan. Cairan empedu

ini mengandung bilirubin yaitu zat warna yang terjadi dari penguraian

hemoglobin, asam – asam empedu dalam bentuk garam empedu dan

kolestrol. Asam – asam empedu yang terdapat dalam cairan empedu

antara lain ialah asam kolat, asam deoksikolat.

e. Hormon Kelamin

Ada dua jenis hormon kelamin yaitu hormone kelamin laki – laki

dan hormon kelamin perempuan. Testosteron dan androsteron adalah

hormon kelamin laki – laki. Tertosteron diperoleh dari ekstrak testes dalam

bentuk kristal, sedangkan androsteron didapati pada urine dan mungkin

merupakan hasil perubahan kimia atau metabolisme testosteron. Hormon

kelamin perempuan ada dua jenis yaitu estrogen dan progesteron. Estrol,

estradiol dan estriol adalah hormon yang termasuk estrogen. Pregnandiol

adalah hasil metabolisme progesteron.

8. Lipid Kompleks

Yang termasuk dengan lipid kompleks ialah lipid yang terdapat

dalam alam bergabung dengan senyawa lain, misalnya dengan protein atau

dengan karbohidrat. Gabungan antara lipid dengan protein disebut

lipoprotein. Lipoprotein pada umumnya ialah trigliserida, fosfolipid atau

kolestrol. Lipoprotein ini biasanya juga digolongkan dalam protein


11/33

11

gabungan. Lipopolisakarida ialah gabungan antara lipid dengan

polisakarida, Lipopolisakarida terbentuk dalam dinding sel beberapa jenis

bakteri.

1.2 Metode Analisis Lipid

1. Thin-Layer Chromatography

Memiliki prinsip kerja pemisahan yang tercapai pada fase diam (biasanya yang

digunakan adalah gel silica) berdasarkan perbedaan kepoaran dari analitnya.

Keunggulan : Metode TLC dapat dilakukan dengan harga yang sangat murah dan dalam

waktu yang singkat. Variasi dari fase gerak memungkinkan terjadinya pemisahan bahkan

untuk senyawa kompleks. Perbedaan warna akan dengan mudah terlihat.

Kelemahan : Oksidasi (dari lipid tidak jenuh) hanya akan terjadi jika piringan TLC

disimpan terlebih dahulu karena sebagian besar permukaan lipid terpapar oleh oksigen

dari atmosfer.

Keterangan : Biasa digunakan sebagai metode awal ketika menganalisis campuran lipid

yang kompleks.

Cara Kerja KLT :

a. Fase Diam

Fase diam yang digunakan dalam KLT merupakan penjerap berukuran kecil

dengan diameter partikel antara 10-30 μm. Semakin kecil ukuran rata-rata partikel fase

diam dan semakin sempit kisaran ukuran fase diam, maka semakin baik kinerja KLTdalam hal efisiensi dan resolusinya.

Penjerap yang paling sering digunakan adalah silika dan serbuk selulosa, sementara

mekanisme sorpsi yang utama pada KLT adalah adsorpsi dan partisi (Gandjar & Rohman,

2007).


12/33


13/33

13

Bejana kromatografi harus tertutup rapat dan sedapat mungkin volume fase gerak

sedikit mungkin, akan tetapi harus mampu mengelusi lempeng sampai ketinggian

lempeng yang telah ditentukan. Untuk melakukan penjenuhan fase gerak, biasanya bejana

dilapisi dengan kertas saring. Jika fase gerak telah mencapai ujung dari kertas saring,

maka dapat dikatakan bahwa fase gerak telah jenuh (Gandjar & Rohman, 2007).

e. Deteksi Bercak

Deteksi bercak pada KLT dapat dilakukan secara kimia dan fisika. Cara kimia

yang biasa digunakan adalah dengan mereaksikan bercak dengan suatu pereaksi melalui

cara penyemprotan sehingga bercak menjadi jelas. Cara fisika yang dapat digunakan

untuk menampakkan bercak adalah dengan cara pencacahan radioaktif dan fluorosensi

sinar ultraviolet. Fluorosensi sinar ultraviolet terutama untuk senyawa yang dapat

berfluorosensi, membuat bercak akan terlihat jelas (Gandjar & Rohman, 2007).

Deteksi senyawa dilakukan dengan menggunakan detektor UV di bawah sinar UV 254

nm, indikator pada plat KLT akan memancarkan warna hijau dan pada UV 366 nm akan

memancarkan warna ungu. Komponen yang menyerap cahaya pada 254 atau 366 nm

akan tampak sebagai bercak gelap pada plat yang bercahaya (Gibbons, 2006). Metode

deteksi lain adalah dengan menggunakan pereaksi semprot.

2. High Performance Liquid Chromatography (HPLC)

Pemisahan pada fase diam pada keadaan tekanan tinggi oleh elusi dengan pelarut

yang berbeda.

Kelebihan : Pemisahan yang dapat terjadi berkualitas tinggi. Dapat diaplikasikan pada

skala preparat. Jika disertakan dengan MS akan lebih stabil dengan baik.

Kekurangan : Lebih mahal dan memerlukan waktu yang lebih lama dibandingkan TLC.

Sulit dalam mendeteksi asam lemak jenuh (sedikitnya penyerapan UV). Penurunan post

kolom masih diragukan.

Keterangan : Metode rutin yang dilakukan pada banyak laboratorium untuk mengisolasi

lipid. Namun mencari kesesuaian komposisi fase gerak agak sulit.


14/33

14

Cara Kerja :

Pada prinsipnya kerja HPLC adalah sama yaitu pemisahan analit-analit

berdasarkan kepolarannya, alatnya terdiri dari kolom (sebagai fasa diam) dan larutan

tertentu sebagai fasa geraknya. Yang paling membedakan HPLC dengan kromatografi

lainnya adalah pada HPLC digunakan tekanan tinggi untuk mendorong fasa gerak.

Campuran analit akan terpisah berdasarkan kepolarannya dan kecepatannya untuk sampai

kedektetor (waktu retensinya) akan berbeda, hal ini akan teramati pada spectrum yang

puncak-puncaknya terpisah. Ukuran skala polaritas : golongan fluorocarbon < golongan

hidrokarbon < senyawa terhalogenasi < golongan eter < golongan ester < golongan keton

< golongan alcohol < golongan asam.

a. Pompa

Pompa pendeteksian tetap dapat dibedakan menjadi pompa torak dan pompa

semprit. Pompa torak menghasilakan aliran yang berdenyut jadi memerlukan peredam

denyut atau peredam elektronik untuk menghasilkan garis alas detector yang stabil jika

detector peka terhadap aliran. Pompa semprit menghasilkan aliran yang tak terbatas.

b. Injector

Cuplikan harus dimasukan kedalam pangkal kolom (kepala kolom), diusahakan

agar sedikit mungkin terjadi gangguan pada kemasan kolom. Ada dua ragam utama aliran

henti dan pelarut mengalir. Ada 3 macam system injector, yaitu:

Stop flow : aliran dihentikan, injeksi dilakukan pada kinerja atmosfir, system

tertutup dan aliran dilanjutkan lagi. Teknik ini bisa digunakan karena difusi di dalam

cairan kecil dan resolusi tidak dipengaruhi.

Septum : septum yang digunakan pada KCKT sama dengan yang digunakan pada

kromatografi gas. Injector ini dapat digunakan pada kinerja sampa 60 – 70 atmosfir. Tapi

septum ini tidak tahan dengan semua pelarut-pelarut kromatografi cair. Partikel kecil dari

septum yang terkoyak (akibat jarum injector) dapat menyebabkan penyumbatan.

Loop vaive : tipe injector ini umumnya digunakan untuk menginjeksi volume

lebih besar dari 10µ dan dilakukan dengan cara automatis (dengan menggunakan adaptor

yang sesuai, volume yang lebih kecil dapat diinjeksikan secara manual). Pada posisi load,


15/33

15

sampel diisikan ke dalam loop pada kinerja atmosfir, bila valve difungsikan, maka sampel

akan masuk dalam kolom.

c. Kolom

Kolom merupakan jantung kromatograf. Keberhasilan atau kegagalan analisis

bergantung pada pilihan kolom dan kondisi kerja yang tepat. Kolom dapat dibagi menjadi

kolom analitik dan kolom preparative.

d. Detector

Detector diperlukan untuk mengindera adanya komponen cuplikan di dalam eluen

kolom dan mengatur jumlahnya. Detector yang baik sangat peka, tidak banyak berderau,

rentang tanggapan liniernya lebar dan menggapai semua jenis senyawa.

Jenis-jenis detector :

· UV/Vis

· Retraktif indeks (RI) detector

· Konduktifitas decetor

· Elektroimia detector

· PDA

· ELSD

· MS dectetor

e. Fase gerak

Fase gerak memiliki syarat-syarat :

· Murni, tanpa cemaran

· Tidak bereaksi dengan kemasan

· Sesuai dengan detector

· Dapat melarutkan cuplikan

· Mempunyai viskositas rendah

· Memungkinkan memperoleh dengan mudah cuplikan jika diperlukan

· Harganya wajar


16/33

16

3. Gas Chromatography

Pemisahan senyawa-senyawa mudah menguap dalam gas pembawa. Proses

deteksi biasanya ditunjukan oleh spektrometri masa.

Kelebihan : Sangat stabil dalam analisis asam lemak. Perlatan otomatis sudah tersedia

secara komersial.

Kekurangan : Hanya senyawa udah menguap yang dapat di analisis. Sehingga turunan

dari analit dibutuhkan.

Keterangan : Teknik yang paling banyak digunakan untuk pengujian dan pengukuran

komposisi asil dari lemak. Namun banyak tergantikan oleh ionisasi teknik MS.

Cara Kerja GC :

GC : pemisahan campuran berdasarkan sifat volatilitas masing2 komponen penyusun

campuran. Interaksi antara komponen sampel dengan fase gerak dan fase diam pada alat

GC.

Asam lemak dibuat volatile dengan metode metilasi asam lemak, terbentuk

senyawa metil ester yang volatile. Senyawa metil ester asam lemak diinjeksikan dalam kolom GC, terpisah

berdasarkan volatilitas nya.

Komponen yang keluar dari kolom akan dideteksi dengan alat detektor ionisasi

nyala api (Flame Ionization Detector/FID).


17/33

17

Gambar.2 Skema Gas Kromatografi

Hasil deteksi dibandingkan dengan standar asam lemak yang telah diketahui jenis

dan konsentrasinya

Waktu retensi (relatife retention time / RRT) masing2 asam lemak tergantung

pada panjang rantau dan jumlah ikatan rangkap.

Gambar 3. Kromatogram Asam Lemak

4. Ionisasi Halus Lembut Spektometri Massa

MALDI dan ESI MS dapat mengkarakterisasi lipid tanpa fermentasi analit utama.


18/33

18

Keunggulan :

Kedua teknik sangat sensitive dan dapat menganalisis analit secara langsung. Perlakuan

biasanya sangat sederhana.

Kekurangan : Penurunan tekanan ion dapat terjadi, contohnya ketika terdeteksinya

kelas lipid dengan perbedaan sensitivitas yang drastic. Pemurnian mempengaruhi kualitas

spectral secara signifikan.

Keterangan : Metode ini sangat berkembang dengan pesat. Sejauh ini, metode ESI yang

paling sering digunakan untuk menganalisis lipid, namun aplikasi dari metode MALDI

justru bertambah. Dapat mendeteksi jaringan biologis.

Cara Kerja :

Electrospray ionization (ESI) merupakan teknik yang digunakan dalam mass spectrometri

untuk menghasilkan ion. Khususnya untuk menghasilkan ion dari makromolekul karena

ada kecenderungan molekul tersebut menjadi fragment saat diionisasi. Pengembangan

electrospray ionization untuk analisa makromolekul biologi merupakan sebuah kerja

keras jadi John Bennet Fenn pada tahun 2002 dan memperoleh sebuah Nobel dibidang

Kimia. Satu dari instrumen asli yang digunakan oleh Dr. Fenn saat ini di pajang di

Chemical Heritage Foundation in Philadelphia, Pennsylvania.

Mass spectrometry yang menggunakan teknologi ESI disebut dengan electrospray

ionization mass spectrometry (ESI-MS) atau juga dengan sebutan electrospray mass

spectrometry (ES-MS).

MALDI (Matrix-assisted laser desorption/ionization) adalah teknik soft ionization yang

digunakan pada spektometri masa yang melibatkan analisis biomolekul (seperti DNA,

Protein, peptide, dan gula) dan molekul organic yang besar (seperti polimer, dendrimer,

dll).


19/33

19

5. 1H/

13C NMR

Perbedaan masa jenis electron menyebabkan perbedaan perubahan kiawi dari nucleus

dari senyawa yang diberikan.

Keunggulan :

Secara umum, semua jenis lipid dapat terdeksi. Percobaan-percobaan lain yang

memiliki hubungan dengan metode ini dapat dicantumkan untuk menemukan informasi

yang lebih lengkap, contohya untuk mengklasifikasikan isomer.

Kekurangan :

Diperlukan spectra yang kompleks ketika menganalisis campuran. Sensitivitas

sangan terbatas (13 C) dan membutuhkan larutan yang terdeturasi. Peralatan yang mahal

dibutuhkan.

Keterangan :

NMR dapat dengan mudah digunakan pada keadaan dalam makhluk hidup (NMR

Managing).

Cara Kerja

1

H/

13

C NMR :

Metode spektroskopi jenis ini didasarkan pada penyerapan energi oleh partikel

yang sedang berputar di dalam medan magnet yang kuat. Pada umumnya metode ini

berguna sekali untuk mengidentifikasi struktur senyawa / rumus bangun molekul

senyawa organik. Jumlah dan tempat proton dalam molekul senyawa organik

menentukan bentuk spektrum yang dihasilkan.Energi yang dipakai dalam pengukuran

dengan metode ini berada pada daerah gelombang radio 75-0,5 m atau pada frekuensi 4-

600 MHz, yang bergantung pada jenis inti yang diukurnya, NMR bermacam-macamragamnya, misalnya NMR

1H,

13C,

19F


20/33

20

Inti yang dapat diukur dengan NMR yaitu :

a. Bentuk bulat

b. Berputar

c. Bilangan kuantum spin = ½

d. Jumlah proton dan netron ganjil, contoh :1H,

19F,

31P,

11B,

13C.

Dalam keadaan normal (inti tidak dikenai/diletakkan pada medan magnet

eksternal), semua orientasi dari suatu inti berenergi sama (degenerasi). Bila inti dikenai

medan magnet, maka orientasi/tingkat spin tidak lagi berenergi sama. Hal ini disebabkan

karena inti mempunyai momen magnetik (µ) yang ditimbulkan oleh berpusingnya

muatan. Jumlah orientasi yang mungkin bagi suatu inti bila padanya dikenakan medan

magnet homogen eksternal ditentukan oleh bilangan kuantum spin (I) dari inti tersebut,

sesuai dengan persamaan :

Jadi untuk inti1H dan

13C, dengan I = ½, masing-masing akan mempunyai dua

macam orientasi (2 x ½ + 1 = 2), yaitu + ½ (searah dengan medan magnet) dan – ½

(berlawanan arah/melawan medan magnet). Tingkatan spin + ½ berenergi lebih rendah

karena searah dengan medan magnet karena searah dengan medan magnet eksternal,

sedang tingkatan spin – ½ berenergi lebih tinggi karena melawan medan magnet

eksternal.

1.3. Ekstraksi Lipid dari Sampel Biologis

Langkah awal dari analisis lipid biasanya adalah ekstraksi lipid. Ekstraksi lipid

sangat penting karena banyak lipid yang tidak bisa langsung dianalisis karena masih

berada atau terikat di bahan biologis dengan senyawa lain. Misalnya, gugus alifatik

hidrofobik lipid berinteraksi dengan sisi nonpolar dari protein, terutama dengan asamamino valin, leusin, atau isoleusin. Selain itu, kelompok asam fosfat lipid berinteraksi

kuat dengan ion logam yang biasanya berikatan dengan protein. Contoh-contoh ini

menunjukkan bahwa lipid sering berikatan dengan senyawa lain. Oleh karena itu, lipid

harus diekstraksi dahulu sebelum di analisis.


21/33

21

Pelarut Terutama cocok untuk Keterangan

CHCl3/CH3OH (2:1,v/v)

“Metode Folch”

Lipid dari hewan,

tumbuhan, dan jaringan

bakteri

Jumlah air sangat

penting untuk

menghindari hilangnya

lipid

CHCl3/CH3OH (1:1,

v/v) “Metode Bligh and

Dyer ”

Berguna untuk sistem

yang kaya air, terutama

cairan tubuh

Terjadi kehilangan

sebagian lipid nonpolar,

seperti TAG

Butanol jenuh dengan air Lipid tanaman (contoh:

lipid dalam pati), lipid

polar

Memberikan pemulihan

lisolipid yang sangat

baikHeksana/2-propanol (3:2,

v/v)

Kandungan rendah non-

lipid (protein, pigmen,

molekul kecil) di

ekstrak karena

campuran pelarut sangat

non polar

Dibandingkan dengan

CHCl3, heksana dan

isopropanol adalah

pelarut untuk yang

tingkat toksisitasnya

rendah saja

Kloroform/isopropanol

(7:11, v/v)

Sangat cocok untuk

eritrosit dengan kadar

lemak yang tinggi

Diindikasikan untuk

memberikan hasil lipid

(yield) yang besar

Kloroform/metanol/12N

HCl (2:4:0.1, v/v/v)

Fosfolipid asam seperti

PS dan fosfoinositide

Penambahan HCl

meningkatkan hasil

ekstraksi lipid asam.

Tetapi metode ini

menyebabkan hidrolisis

sempurna dari

plasmalogen

Tabel 1. Tabel metode untuk mengekstrak lipid dari sampel biologis


22/33

22

Metode Folch

Jaringan dihomogenisasi dengan kloroform / metanol (2/1) untuk volume akhir 20

kali volume sampel jaringan (1 g dalam 20 ml campuran pelarut). Setelah dispersi,

seluruh campuran diaduk selama 15-20 menit dalam orbital shaker pada suhu kamar.

Kemudian homogenat tersebut disaring (dengan kertas saring) atau disentrifugasi untuk

memulihkan fase cair. Lalu pelarut dicuci dengan 0,2 volume (4 ml untuk 20 ml) air atau

lebih baik dengan 0,9% larutan NaCl. Setelah divortex selama beberapa detik, campuran

disentrifugasi pada kecepatan rendah (2000 rpm) untuk memisahkan dua fase. Pisahkan

fase atas dengan menyedot dan menyimpannya untuk menganalisis gangliosida atau

molekul polar organik. Setelah sentrifugasi dan menyedot fase atas, fase bawah

kloroform yang mengandung lipid diuapkan di bawah vakum dalam evaporator putar atau

di bawah aliran nitrogen jika volume di bawah 2-3 ml.

Metode Bligh dan Dyer

Merupakan metode yang ekonomis untuk mengekstrak lipid dari sejumlah besar

jaringan basah, khususnya jaringan ikan beku, dengan mengggunakan volume pelarut

yang minimum. Air dalam jaringan merupakan komponen penting dalam sistem ekstraksi

dan hanya kloroform dan metanol secukupnya saja yang ditambahkan ke dalam sistem

fase tunggal untuk homogenasi. Setelah disaring, residu dire-homogenasikan dengankloroform untuk memastikan bahwa lipid telah terekstrak secara sempurna dan lapisan

organik ditambahkan ke dalam larutan garam yang membentuk campuran. Lapisan

kloroform akan mengandung lipid.

Butanol jenuh dengan air

Untuk mengekstraksi lipid polar yang dianjurkan ialah butanol yang jenuh dengan

air. Kompleks lipid-protein atau lipid-karbohidrat mungkin tidak larut dalam pelarut

nonpolar. Dengan adanya alkohol senyawa kompleks ini terurai, sehingga lipid dapat

terekstraksi.


23/33

23

Heksana / 2-propanol

Mencampur lipid dengan heksana dan 2 – propanol dengan perbandingan volume

3:2

Kloroform / isopropanol

Mencampur lipid dengan kloroform dan isopropanol dengan perbandingan volume 7:11

Kloroform / metanol / 12N HCl

Mencampur lipid dengan kloroform, methanol, dan 12N HCl dengan perbandingan

volume 2:4:0.1

II. Kromatografi Layar Tipis

Semua kromatografi memiliki fase diam (dapat berupa padatan, atau kombinasi

cairan-padatan) dan fase gerak (berupa cairan atau gas). Fase gerak mengalir melalui fase

diam dan membawa komponen-komponen yang terdapat dalam campuran. Komponen-

komponen yang berbeda bergerak pada laju yang berbeda.

Sedangkan fase diam untuk kromatografi lapis tipis seringkali juga mengandung

substansi yang mana dapat berpendar flour dalam sinar ultra violet. Pendaran ini ditutupi

pada posisi dimana bercak pada kromatogram berada, meskipun bercak-bercak itu tidak

tampak berwarna jika dilihat dengan mata. Namun, apabila di sinarkan dengan sinar UV

pada lempengan, akan timbul pendaran dari posisi yang berbeda dengan posisi bercak-

bercak. Bercak tampak sebagai bidang kecil yang gelap.

Sementara UV tetap di sinarkan pada lempengan, harus dilakukan penandaan posisi-

posisi dari bercak-bercak dengan menggunakan pensil dan melingkari daerah bercak-

bercak itu. Ketika sinar UV dimatikan, bercak-bercak tersebut tidak tampak kembali.

Prinsip Kerja KLT

Pada proses pemisahan dengan kromatografi lapis tipis, terjadi hubungan

kesetimbangan antara fase diam dan fase gerak, dimana ada interaksi antara permukaan

fase diam dengan gugus fungsi senyawa organik yang akan diidentifikasi yang telah

berinteraksi dengan fasa geraknya. Kesetimbangan ini dipengaruhi oleh 3 faktor, yaitu :

kepolaran fase diam, kepolaran fase gerak, serta kepolaran dan ukuran molekul.


24/33

24

Pada kromatografi lapis tipis, eluent adalah fase gerak yang berperan penting pada proses

elusi bagi larutan umpan ( feed ) untuk melewati fase diam (adsorbent ). Interaksi antara

adsorbent dengan eluent sangat menentukan terjadinya pemisahan komponen. Oleh sebab

itu pemisahan komponen secara kromatografi dipengaruhi oleh laju alir eluent dan

jumlah umpan. Eluent dapat digolongkan menurut ukuran kekuatan teradsorpsinya

pelarut atau campuran pelarut tersebut pada adsorben dan dalam hal ini yang banyak

digunakan adalah jenis adsorben alumina atau sebuah lapis tipis silika. Suatu pelarut

yang bersifat larutan relatif polar, dapat mengusir pelarut yang tak polar dari ikatannya

dengan alumina (gel silika). Semakin dekat kepolaran antara senyawa dengan eluen maka

senyawa akan semakin terbawa oleh fase gerak tersebut. Hal ini berdasarkan prinsip “like

dissolved like”.

2.1 Fase Diam

Fase Diam dan Fase Gerak KLT

Pada kromatografi, komponen-komponennya akan dipisahkan antara dua buah

fase yaitu fase diam dan fase gerak. Fase diam akan menahan komponen campuran

sedangkan fase gerak akan melarutkan zat komponen campuran. Komponen yang mudah

tertahan pada fase diam akan tertinggal. Sedangkan komponen yang mudah larut dalam

fase gerak akan bergerak lebih cepat. Semua kromatografi memiliki fase diam (dapat

berupa padatan, atau kombinasi cairan-padatan) dan fase gerak (berupa cairan atau gas).

Fase gerak mengalir melalui fase diam dan membawa komponen-komponen yang

terdapat dalam campuran. Komponen-komponen yang berbeda bergerak pada laju yang

berbeda.

Fase Diam

Pelaksanaan kromatografi lapis tipis menggunakan sebuah lapis tipis silika gel

atau alumina yang seragam pada sebuah lempeng gelas atau logam atau plastik yang

keras. Gel silika (atau alumina) merupakan fase diam. Fase diam untuk kromatografi

lapis tipis seringkali juga mengandung substansi yang mana dapat berpendar flour dalam

sinar ultra violet. Fase diam lainnya yang biasa digunakan adalah alumina-aluminium

oksida. Atom aluminium pada permukaan juga memiliki gugus -OH.


25/33

25

Fase Gerak

Dalam kromatografi, eluent adalah fase gerak yang berperan penting pada proses

elusi bagi larutan umpan ( feed ) untuk melewati fase diam (adsorbent ). Interaksi antara

adsorbent dengan eluent sangat menentukan terjadinya pemisahan komponen.

Eluent dapat digolongkan menurut ukuran kekuatan teradsorpsinya pelarut atau campuran

pelarut tersebut pada adsorben dan dalam hal ini yang banyak digunakan adalah jenis

adsorben alumina atau sebuah lapis tipis silika. Penggolongan ini dikenal sebagai deret

eluotropik pelarut. Suatu pelarut yang bersifat larutan relatif polar, dapat mengusir pelarut

yang relatif tak polar dari ikatannya dengan alumina (gel silika).

Kecepatan gerak senyawa-senyawa ke atas pada lempengan tergantung pada:

Bagaimana kelarutan senyawa dalam pelarut , Hal ini bergantung pada bagaimana

besar atraksi antara molekul-molekul senyawa dengan pelarut.

Kelebihan Metode Kromatografi Lapis Tipis

Beberapa keuntungan dari kromatografi lapis tipis ini adalah sebagai berikut :

Kromatografi lapis tipis banyak digunakan untuk tujuan analisis.

Identifikasi pemisahan komponen dapat dilakukan dengan pereaksi warna,

fluorosensi atau dengan radiasi menggunakan sinar ultraviolet. Dapat dilakukan elusi secara menaik (ascending ), menurun (descending ), atau

dengan cara elusi 2 dimensi.

Dapat untuk memisahkan senyawa hidrofobik (lipid dan hidrokarbon) yang

dengan metode kertas tidak bisa

Ketepatan penentuan kadar akan lebih baik karena komponen yang akan

ditentukan merupakan bercak yang tidak bergerak.

Hanya membutuhkan sedikit pelarut.

Waktu analisis yang singkat (15-60 menit)

Investasi yang kecil untuk perlengkapan (Biaya yang dibutuhkan ringan).

Preparasi sample yang mudah

Kemungkinan hasil palsu yang disebabkan oleh komponen sekunder tidak

mungkin


26/33

26

Kebutuhan ruangan minimum

Analisis KLT banyak digunakan karena :

Waktu yang diperlukan untuk analisis senyawa relatif pendek

Dalam analisis kualitatif dapat memberikan informasi semi kuantitatif tentang

konstituen utama dalam sampel

Cocok untuk memonitor identitas dan kemurnian sampel

Dengan bantuan prosedur pemisahan yang sesuai, dapat digunakan untuk analisis

kombinasi sampel terutama dari sediaan herbal.

2.2 Sistem Deteksi

2.2.1 Tidak Destruktif dan Tidak spesifik

Metode identifikasi yang sering digunakan adalah mereaksikan plat TLC

dengan uap iodine yang akan membentuk ikatan non-kovalen, coklat kompleks dengan

lipid. Namun, lipid yang jenuh sepenuhnya sulit didapat, dimana iodin tidak bisa

dihilangkan seluruhnya dari lipid tidak jenuh (mengandung contoh. residu

arachidonoyl) karena iodin sudah berikatan dengan ikatan rangkap. Adsorbsi dengan

iodin atau penyemprotan dengan asam sulfat dan pemanasan adalah metode pemisahan

yang kurang spesifik dan bisa digunakan untuk mengidentifikasi karakter umum darisampel yang sama sekali belum diketahui kandungannya. Absorbsi uap iodin dari

Kristal pada ruang tertutup akan menghasilkan titik coklat pada latar kuning yang

mengandung hampir seluruh senyawa organic, kecuali beberapa senyawa alkali jenuh.

Pewarnaan dengan iodin adalah metode tidak merusak dan reversible setelah evaporasi

dilakukan.


27/33

27

Gambar 4. Hasil Deteksi lipid dengan Iodin

Sumber :https://www.researchgate.net/figure/235757923_fig7_A-Autoradiogram-of-

TLC-plate-showing-hydrolysis-of-the-lipid-DGDG-by-F-solani-pisi

Pewarnaan dengan 2,7 – dichlorofluorescein atau rhodamin 6G akan

menghasilkan titik berwarna merah muda atau kuning, jika plat TLC disinari sinar

UV. Rhodamine sangat berguna saat sistem larutan alkalin sudah digunakan dan 2,7

– dichlorofluorescein dipilih daripada larutan asam karena kestabilan pewarnanya.

Kedua pewarna bisa dihilangkan dengan mudah jika kepolaran larutan berubah, atau

lipid ( dengan pewarna yang terikat) dilewatkan kolom pendek. Hal ini juga berlaku

untuk pewarna primulin yang bisa digunakan dengan cara serupa dan memiliki

sensivitas lebih dari rhodamine. Hal ini juga menunjukan polyunsaturated lipids

menunjukkan warna gelap yang lebih pekat saat pemisahan dilakukan dengan

AgNO3, ini disebabkan oleh reduksi Ag+ menjadi colloidal silver. Pemekatan ini

bergantung pada komposisi sisten larutan dan membutuhkan senyawa hidrokarbon

aromatic, seperti toluene.

https://www.researchgate.net/figure/235757923_fig7_A-Autoradiogram-of-TLC-plate-showing-hydrolysis-of-the-lipid-DGDG-by-F-solani-pisihttps://www.researchgate.net/figure/235757923_fig7_A-Autoradiogram-of-TLC-plate-showing-hydrolysis-of-the-lipid-DGDG-by-F-solani-pisihttps://www.researchgate.net/figure/235757923_fig7_A-Autoradiogram-of-TLC-plate-showing-hydrolysis-of-the-lipid-DGDG-by-F-solani-pisihttps://www.researchgate.net/figure/235757923_fig7_A-Autoradiogram-of-TLC-plate-showing-hydrolysis-of-the-lipid-DGDG-by-F-solani-pisihttps://www.researchgate.net/figure/235757923_fig7_A-Autoradiogram-of-TLC-plate-showing-hydrolysis-of-the-lipid-DGDG-by-F-solani-pisi


28/33


29/33

29

Gambar 5. Hasil Deteksi Lipid dengan Stain Asam SulfatSumber: https://www.scienceopen.com/document/vid/5499036e-e6af-4582-90e3-

26a67934e66a

20% ammonium bisulfat dalam air, juga biasa dipakai sebagai reagent pembakar

lemak, uap hasil pembakaran dengan ammonium bisulfat juga lebih tidak korosif jika

dibandingkan dengan asam sulfat. Walaupun proses pembakaran memiliki kekurangan

yang besar, karena dapat merusak lipid seluruhnya, metode ini sangat sensitive.

Metode ini dapat mendeteksi lipid hingga 1µg. Sterols memberikan warna merah

keunguan sebelum menjadi hitam, dan ini merupakan petunjuk yang berguna.


30/33

30

Tabel 4. Reagent Destructive, non – specific for Lipid Detection

2.2.3. Destruktif, spesifi

Reagen berbeda akan bereaksi secara selektif dengan bagian lipid tertentu dan

menghasilkan produk berwarna. Sebuah survey sangat sering menggunakan reagen pada tabel.

Reagent Manipulation Spots

50% H2SO4 in MeOH 110oC

Brown

–

black

3%Cupric Acetate in

8% H3PO4180

oC Black

8%Cupric Acetate in

8% H3PO4160

oC Black

5%Molybdophosphoric

acid in EtOH120

oC Blue

0.04%Bromothymol blue

in 0.1 NaOH-

Blue-

green

0.03%Coomasie brilliant

blue R in 20% NaOH- Blue


31/33

31

Banyak zat pewarna berbda dibandingkan berdasarkan kemampuan sensitivitas. Warna

paling sensitif didapatkan dengan 0.2% amido black 10B dalam 1 M NaCl: Setelah direndam

dalam air, piring TCL dimasukkkan ke larutan pewarna beberapa menit. Sensitivitasnya

sekitar 15 ng untuk DAG, TAG, dan PS, sedangkan 100 ng untuk asam lemak bebas dan 500

ng phorbol ester dapat dideteksi. Ada juga debat apakah metode dicelupkan dan disemprot

memberikan hasil yang dapat dibandingkan

Penyemprotan dilakukan di dalam laboratorium.Piring yang sudah dikeringkan

diletakkan di atas kertas atau kotak semprot. Penyemprotan dialkukan dengan jarak 15 cm

dengan gerak seragam atas-bawah dan kanan-kiri sampai lapisan tertutup. Pencelupan

biasanya metode terbaik untuk mengaplikasikan reagen seragam dan menghasilkan hasil

paling bisa dikembangkan dalam analisis kuantitatif densitometric.Pengunaan reagen spesifik

menjadikan penggunaan TLC dengan resolusi lebih rendah karena zona interferensi tidak akan

terdeteksi. Reagen special tertentu digunakan untuk memvisualisasikan senyawa berdasarkan

aktivitas biologis.

Contoh:

1. Reaksi Orcinol

Melarutkan 20 mg orcinol dalam 10 mL asam sulfat 70%. Larutan ini dapat

disimpan beberapa hari pada suhu 4oC.

Piring disemprotkan dengan larutan orcinol dan dipanaskan pada 100oC dalam

oven selama 10-15 menit.


32/33

32

Titik yang mengandung gula terlihat pink-violet pada latar belakang putih. Batas

deteksinya sekitar 0.5 nmol dari total gula per titik, sehingga, sesedikit 0.5-1 mg

glikolipd dapat dideteksi

2. Reaksi Naphthyl ethylenediamine

Menyiapkan larutan 13 mM N-(1-naphthyl) ethylenediamine (34 mg dalam 10

mL) dalam methanol/conc. Asam sulfat (97/3, v/v) .

Menyemprotkan piring dengan reagen dan dipanaskan 125oC selama 10 menit.

Glikolipid terlihat pink pada latar belakang putih tetapi warnanya memudar

dengan cepat. Batas deteksi sekitar 100 pmol gula pada titik (0.1 mg lipid)

3.

Reaksi Hydroxytetralone

Melarutkan 10 mg reagen dalam asam sulfat 80%. Menjaga larutan pada 4oC.

Piring disemprotkan dengan larutan reagen dan dipanaskan pada 120oC selama

10 menit. Intensitas fulorescent glikolipid pada piring ditentukan pada eksitasi

panjang gelombang 470 nm dengan optical cut-off filter (500 nm). Glikolipid

berwarna kuning dan phospholipid berwarna biru. Responnya linear dengan

batas konsentrasi 10 – 100 pmol dan batas deteksi sekitar 3 pmol glikolipid.


33/33

Daftar Pustaka

Campbell, P.N., A.D. Smith. 1982. Biochemistry Illustrated. Wilture Enterprises. Hong Kong.

De Man, J.M. 1997. Kimia Makanan. Terjemahan. ITB. Bandung.

Detection (Visualization) of TLC Zones - [www.rhodium.ws]. 2016. Detection (Visualization) of

TLC Zones - [www.rhodium.ws]. [ONLINE] Available at:

https://www.erowid.org/archive/rhodium/chemistry/equipment/tlc.visualization.html. [Accessed

07 April 2016].

Girindra, A. 1986. Biokimia 1. Gramedia. Jakarta.

Glycoglycerolipids-TLC. 2016. Glycoglycerolipids-TLC. [ONLINE] Available at:

http://www.cyberlipid.org/glyt/glyt0003.htm. [Accessed 07 April 2016].

Houston, M.E. 1995. Biochemistry Primer For Exercise Science. Human

Kinetics.Champaign.USA.

Kay, E.R.M. 1966. Biochemistry : An Introduction to Dynamic Biology. Collier-

Macmillan.Canada.

Kuchel, P., G. B. Ralston. 2006. Biokimia. Schaum. Terjemahan. Erlangga. Jakarta.

Lehninger, A..L., et al. 1997. Principles of Biochemistry. 2nd .Worth Publisher. New York.

Ngili Yohanis.2009. Biokimia : Struktur dan Fungsi Biomolekul. Graha Ilmu. Yogyakarta.
https://www.erowid.org/archive/rhodium/chemistry/equipment/tlc.visualization.htmlhttps://www.erowid.org/archive/rhodium/chemistry/equipment/tlc.visualization.htmlhttp://www.cyberlipid.org/glyt/glyt0003.htmhttp://www.cyberlipid.org/glyt/glyt0003.htmhttp://www.cyberlipid.org/glyt/glyt0003.htmhttps://www.erowid.org/archive/rhodium/chemistry/equipment/tlc.visualization.html

Lipad Analisis Menggunakan Layar Tipis Kromatografi

Documents

Transcript of Lipad Analisis Menggunakan Layar Tipis Kromatografi