REAKSI POLIMERISASI DIMANIPULASI DENGAN 3 TAHAPAN SUHU : 1. DENATURASI (PERENGGANGAN RANTAI)

2. ANNEALING (PENEMPELAN PRIMER)3. ELONGASI/EKSTENSI (PEMANJANGAN RANTAI)

• PENGGANDAAN SEGMEN DNA DLM PCR MERUPAKAN PRINSIP DARI PROSES REPLIKASI PADA DNA INTI SEL

• PEMAHAMAN THD APLIKASI TEKNIK DNA REKOMBINAN TIDAK LAIN ADLH MEMAHAMI & MENGETAHUI PROSES REPLIKASI DNA SHG MENHGASILKAN PRODUK PROTEIN BARU MELALUI TRANSLASI SUATU GEN

REPLIKASI DNA

• RNA POLIMERASE MENGKATALISIS SINTESIS PITA PENDEK RNA (100 NUKLEOTIDA). PITA TSB. MENGAND. BASA YG KOMPLEMEN DG. BASA YG TDPT. PD. DNA CETAKAN. BERBEDA DG. DNA POLIMERASE, RNA POLIMERASE TIDAK MEMERLUKAN PRIMER UK, PERMULAAN SINTESIS

• GUGUS 3’ –OH DARI RIBONUKLEOTIDA TERAKHIR YG. MENYUSUN PITA RNA MERUP. TEMPAT AWAL SINTESIS DNA. ENZIM YG BERPERAN DLM PROSES INI ADLH DNA POLIMERASE III

• DNA PRIMER KEMUDIAN DIHIDROLISIS SHG. TINGGAL PITA DNA BARU, HIDROLISIS DILAKUKAN ENZIM DNA POLIMERASE I

• PADA ‘LAGGINGSTRAND’ AKAN TERBENT. FRAGMEN KECIL DNA DG. ADANYA ENZIM LIGASE, FRAGMEN TSB. DAPAT DISAMBUNGKAN

3’ 5’ DNA CETAKAN

3’ 5’

5’ 3’ RNA PRIMER

3’ 5’

5’ 3’ RNA PRIMER DNA BARU

5’ 3’

5’ 3’ DNA BARU

Localization of the DNA in Eukaryotic Cells

DNA Structure Double helix

Basic unit = nucleotide– Sugar– Phosphate– Base (A, C, G, T)

Repeating backbone (sugar, phosphate)

Complementary base pairing:

– Adenine - Thymine– Guanine - Cytosine

Anti-parallel strands

Function of DNA

Storage of genetic information

Preparation of genetic

information for protein-

biosynthesis

Heridity of genetic

information

KLONING GEN