Download - Biochemical analysis of a caveolae-enriched plasma membrane fraction from rat liver

Transcript

���������� ������ � � �������������������� ������� ������ ��� ��� ����

�� ������� � ��� ���� ��� � ���������� � ����� � ��� � �� ��� ������������������� ���� �� �� ����������� � ���� � ������� � ������� ���� �� �� ����������� �������� ��� ��� �� �� � ���� � �������� ������� � �� ���� ���������� � �� ���������� ���� �� ����� � ��� ������ ������ ���� �� ��� ������� ������������������ ���� �� � ������� ���������� � ��� ������ �� ������� � ���������� ��� �������� ������� �� ��� �� �������� ���� ��� ���� ����������� �������� ������� ��� � ������������ ����� ���� ���� � ����� ������� �� ���� �� ��� ����������� ������� �� ���� �� �� ���� ������ ���� �� � ������ � ����� ����������� � ��� �� ���������� ��� ���� ������� �� ������ ���� ��� ����������� ���� ������ ���� �� � ����� �� � ������ ���� �� � ������ ����� � �������� � �� ���������� ����� �� ��� �������� ������ ���� ��� � ���� � ����������

��������� ���������� � ����� ���� �� � !������ � "�� ���� � #������ � $��� ��

� �����%�� !& '()*

����� ��������� �����

+��� ����� � ,�������#������� � �+�,� -.��������� � $������/��� ����� � ,� ������,� ������ -���

� ����������

0�� ���������� �� � ������ ���� ��� ���� ���� � ���������� �� � ����� � �� �� ���� �� �� ���������� ��������� ������ 0�� �������� ������ ���� ������ �������� �� ����� ����� ��� ��������� ����� � ���-���� �� +����� �� ���� ���� ���� �� ������ � �� � ���� ����� �� �� ���� � �����������1 ��� ���� �������� ���� �� ������� ��� 2������� ������3������ �� ��� ��������� � ��� ��� 2������ ������� ��� ��������� ������ ���� ��� ������ ��������������� � ��� �� ����� � ��� ���� �� ���� 4(� 56�0�� � ��� � �������� �� ���� �������� ���� �������� � ��������� ��� ������ �� � ������ ������ ������� ������ ������� � � ������� ������� � ����� �� ����� �� � �����%��� ����� �3�������� � ��������� 47896�

� ���������� ������ ��� ��� ����� �� ��� ������ �� ����������� �� ������ ���� �� ���� ��� ����� ����� �� ������ � ��� ���������: ����� ������� ���� ��������� 4;� *6� "������ ������� ��������� �� ��������� ������� ���� � �������� ���� ��� ���� ��� ����� ��� � ��� �����������1 ������������ ���� ������ ����"� ������ � ���� �� � ��������� ����� ���� <&+&= ������ � � � ��� �3������ �� ������� � ������� �������� � ����� ������� ���� �� ��� �������� �� ���������� �� 4>8((6� �������� ���� �� ��� ����� ������ ����� � � ������ � ��������� � � ��������� � ������� � ����� ������� ����� ���� ����� �� �� �� �� � �������� ������� ���� � ��� �3������ �� �������� � ����� �� ���������� ���� ���� 4(5� (76 � � ��� ���� 4('6���� ��� ����� ���� ������ � �� � ������ ��� ����� ��� �� ����� ���� �� �������������� � ��� ����������� ��� ��� ��� �� � ���� ��� � �� � ���% �� ��� ������ ����� ��� ���� ���� � ��� ����������� �� ��������� ��� ��������� <�����������= � � ���� �� � �����%���� �������� �������� �� � ������ � �� ���� �?���� 4(@� (96 ������ @) ��� � ����

0�� � ����� �� �������� ��� ��� �� ���� �� ���� ��� ���� ������� � ��������� ��� ����� ��� � ���� �� A� ��� ���� 4(;6 � � ���������� �� ����� ����4('61 ����� ������ � ��� ��� �������� �� �������� ������� ���� �������� ���� ��� ���� 4('� (*� (>6� #�������� � � ����� � ��������� ������ ������ ������������ � ��� ������ ��� � � ���� ��%��� �� �� � ���� � ������� ������ ������ 0�� ���� �� ������� �� �� �����

������������� + � #� ��� ! ���� +��� ����� � ,�������#������� � �������� � $������ /��� ����� � ,� ������ #������� ('7� )*)79 ,� ������ -��������� � ���B���������������� C7'�>7�')5(>);

������������ !"#�$� ������������ ���� ������ 1 � %���������� ������ ���� ��1 ���� ���������� ���� ���������� �� � �����1 �&$'� ����� ���� �� �������� �� ������� � � �����1 "#�� ���������������������������1 ' (� ���� �������� ���� ��1 ')'� ��� ����� ����� ����1 ')'$� &+& ������� 1 '$#� &+& ������ � ����� � ����1 � #�� ������� ���������� � ���� %����1 ���� $� D�!"D %����1 �*�� �������������� �����1 #��� � ���� %���� #1 $$�� ������ � ������������ ����1 !�%� �������� ������ � ����1 !$���� ������� ������ ���� �

77*9 ������������ 5)))� �� 77*9877>@

E ��&!?�F#� F� ��� G���� 9>'@( �������� 5))) )(;7�)*7@�))�(9(9�77*9 H(;�@)C�@)�)

. �+�,� -� ������� I������������ ,���J�K��� ������ � �-���

���� ����������� � ��� ������� ������ �����D����� � �������� � ��������� ������ &����� �� %������� ��� ������� ��� ������ �� �������� � ���� ������-�������� ���� �������� ���� �� ��� ��� ���� ��� ��� �� ��������� �� ���� �� �������� ����� 45)6 ��� ����� D����� ����� 45(6� /��%� ���� �������� ���� �������������� � �� ���� �� ����� �������� 455� 576� 0��� ���������� ���� ���� �� ������� ������ � ��� ����������� ���� �� ������������

0�� ���% �� %������ ��� �� ��� ���������� ������� ������ �� �� ��� ������� � ������ �� ���� ������������ ��� �������� "������� �� ����� ��� � ������� ������� � ��� ������� ����� ���� 45'6 � ���� ���� ����� ���� �� � ����� ���� �� �� ��� ���� ��� ������� � ���� ���� �� ��� ��� � ��� ����� �� ������� ��� �������� �� � ���������� ���� ������ ����� �� � ����� <#!�= � �� �� ���� � ����� ��� ������������ � �� ���������� ������ ���� �� ��������������� ��� ���� ��� ��� � �� � ����� ��� ��� ����� ���� ����� �� �� ����������� �� �� ������ ������������� ���������� � ���������� #�5C���������� ����� � ��������

+ �������� �� �������

+,� ����

$��� -� �����+����� ��� ������� 5))85@) � �� � %����� � ��� ���� ������� ������� ���� � (5 � � %�� ��� ��� ������ ������ ���� �� � � ������������� ����������� ��������� ��� � ���� �� � ���������� �� ��������

+,+ ��������

0�� �������� ��� � ���� ���� �� �: ���������� ���� ����� ������������ ����� ���� D#�� ����� ����$�%5� ����� ����"���(� � �� 0 ������� &��� ��� ���<&�3����� D?� /-�=1 ����� �������"�� <���5= � ��L����� -����� </������ A?� /-�=1 ����� �������� � � ����� ���������� � �� �#A <#���� $���� #��/-�=1 ����� ����������� � �� -���� <$� �� -���=�$���� ������3� �� <��;= ��� ���� �� + � F��%� G� %� </��� ���� �� $M��� � G� ���=1 ��� ���������� ����� ����� ������3� F� ��� � ��� � � �� ���� ��� �1��� ����� ����G�� ��� ���� �� + � D���� !� $������/��� ���� �� #����� ��� -� � ������� #�� /-�1 ��� ������ ����������� ������ ���� � <����-",��= ��� � ����� �� + � � �� "���� </��� ���� �� ����� ��G� ���=� �� �� ���� �� �3���� <�" =���2���������� � �������� �� � � �� ,���"� <�� ������ #��/-�= � ��� � ���� � ��2����� �� () � ��� ���� �� + � N� -��� </� ���� /��� ����� 0�� A���� ���=�

+,- !������� ���������� � ��� ������������ � ���

�� ��� � ��� ����� �� ����� �� ��� ��� �� ����������� �� �� �� ������� � ������ � �� �� ���� 45@85;6� ���� �� �� ��� �� (;��������� ��� ���� � ��������� ��� ��� �� ���� ��� �3� ����� �� ��� &+& ������� � 45*6� ��� �� � ���������� ���� ������ ��� ����� &+& <@ �� �� � ����= ��� �2���� ��� ��� ���� ������ 0���� �� ���� � ���� � �� � ����� � ���������� � )�5@ $ ��� ��� ���� � ������ ������� �� 0� �������� ������� � ������ �� � ������ ���� ��� ��������� �� � � �� ������ � ����� � � ��� ��� � �����: ������������� ����� <$F,= �� *�5'O � (>�7O������ ���� �� �������� �� ������ � � �����<#/"&= �� (>�7O � 5*�*(O� � ������ � ������� ������ ���� <""#= �� 5*�*(O � 79�7;O ��� ��� ������ � ����� ���� � � ��� �� �� �� ��� ��� ���� �� 79�7;O � '9O�2��� � ��� ������ �� ����� ��� ���� ��� ���� ��������� ��� ���� ���� +�� �� ��� ����� ���� � ������ ��������� ���� � ����� ��� ����� #!�� 0�� �������� �������� ���� �� ���� ������ � ������� � �� ��� �� ������ �� �������� ����� �� ���������� �� � �� ��� �� �� ��� ��� �� ����� � !��� 45>6�

+,. +�) /� �������������� �� 0����������/

�� 5�+ ����� ���� ����� ��� ���� ����� ��� �� ����� ��� � ������ ��� � ����� � ��� ������ ����� ������ �� ������ ���� �� � ������� � ������ 45;�7)6 ��� �� ������ �� ���� ��� � ����� �� #!�� , ��������� LI�� ��� �� ��� 47(6 � ���� � ��� ��� ���� ���������������� ���� � $��� ���� �� 5�+ #!&& � �� ,���"� &��� ��� ���� 0�� �� �� ������ ��� �� �� �� ���!� <7 � �� ;@) F= � 'O ��� ������ ������ ���� �������� 5O �� �� ����������� �� 78() <,���&��� 7�()��������� � �� ,���"� &��� ��� ���=� >�5 $ � ��� 5O������ #��97)� $��� �� � ������ <(@ �� � ����= �� ����������� � >�* $ � ��� 5O ������ #��97)� 5O �� �� ����������� �� ;8> <�������� �� ;�)8>�)1 ��� ���� �� ����� ,������� /������� -���= � ()) �$ +00��!� ���� �� � �K����� ��� <@ �� �� ��� ����� ��� �= �( �& �� �K����� ���� ������� <)�)95@ $ 0 ����#�� �� 9�*�5�7O -+-� ()O ����� ��� ()) �$ +00� )�))5O � ��������� ����=� �!� ���� �� � ��� � �� 8*)�# ���� ������ � ��� �� ��� ������������� �� 0�� (�+ �5�+ -+-� �G! ���� <() � (5O= �� � �� �� ��� ����� ��� �� &������ 4756� ���� ����� ���� ����� ������ � ����� �� ��� ����� �� ,��� �� ��� 4776 � � ����� � ����� ���� �������� �� 9) F �� >) �� �� '�# ����������� � ���� ���� ��� <$������ �� ,��� �$�� /-�= � ������ �� � ������� ���� ���� ��

������������ 5)))� �� 77*9877>@ #��������� ���� ���� ��� � �� �� ���� 77*;

#�����������+�)�

�������� ����� � 0,- ������� )�@O ���� ��%���� ���%� ������ ��� ������ � ���� ��� ���������� ��� !#& ������ <��� ����=�

+,1 ������ ���������� �� ���������/

� �� ���������� ���� �� ��� �� ���� ��������� ����������� � ������ � ��������� ������ ���� �� ����� �� ��� �� ����� � ��� ������� ������ � �� �������� ������ �� � ��3� � 5�@O ����� ������� (O �� ���� ������� � )�( $ ��������� ����� � �� ;�'� � � ���� � �� ����� � ��� ������ 47'6� �� � ������������������ � ��� ������ � ������ �� � ������� �� (@ �� � � !���� � ��� ���� ����� � �������� ��� ������ ����� (:( ���� ��� ,- � ������������ ���� ������� �� � ������� � ������� ������������� ������������( <(:())= � ,- ������� (O,-� �� ( � �� ��� ����� ��� �� #�� �� ������� �� �������� ���� ,-�(O ,-� ���� � ������ �� ������ �� �� ����� �� ��� �������� � ,-� -�������� � ��� ������� ���� � ���� � ��2����� �� @ � () � ��� ����� ���� ,-�(O ,-� <(:>@= �� ( � �� ��� ����� ��� �� ���� ���� �� ������� ������� �� ���3� � (O �� ��� �������� 5�@O ����� ������ �)�( $ ��������� ����� � �� ;�'� �� 7) ��� ���� �� �� ���� � )�( $ ����� ��������� ����� � ��� ������� �� �������3� � (O L�L' � )�( $ ����� ���������� �������������� �� � ����� � -�� <-����=� � �����3�� ������ #!� �� � �� ��������� ���� )�(O ������ �� ��� �������� ���� ��������� ������������( ������� � )�)5@O ����� � �� ��� ������ 45'6�

- $����� �� ���������

-,� ������� � ��� ��� ��� ����

�������� �� ������� �������� � ������� �� ���� ����� ��� � �� ���� �� ���� ����� ����� ���� �: <�= ��� ����� ��� ���� <�� �3����� 0 ��� P�())=� ���� � ���������������� �� ������ �� �3� ��� � �� ���� �� � ������� � �� ����� ���� ��� �������� � ����� � ������� ����� ���� �� � ��� ���� � ���� � �������� 47@87*61 <��= ��������� �� ����� �� ����� ��� �������� ����� ��� ���� �� �������� � ����� � ����� 47>61 <���= � � ��������� ���� � ������� ��� ����� �� ��������� ����������� ������ 4')� '(6� !���������� ����������� �� � ������ �� ��� �������� �� �������� � ����������� ����� � ������ ��� ���� �� ����� �� �������� � ������: <�= ���������������� �� ������ ���� ����� � ������ �� ��� � ����� ��� ��� � ��� � ���� ����� <��= ������� ����� �������� <������� ��� �� �������� ��=� ������ � �� �� ����� � ���� �� ������ ������ �� ��� ���� � 0�� ����� ��� �� ��� ��������� �� ������� �� � � ����� ���� �� � ���������� ��%� �������� �� ������ ���������� �� G���� ��������� ��������� ��������� � ��������� 45'6� 0�������� ���� �� � ����� ��� �������� �� ������������������ �� ����� � ���� ���� ���������� ������ � ���� � @I����������� ���� ��%� �������� ����� ������ �� ���� �� �������� � ������� 45'� '56� �� �����K��� ������� �� ��� ���� �� �� ������ � ����� ������� � �� ���� ���� ��� ��� #!��

� ���� �3�� ������ �� ���� � ��� ��� ����� �� ���������� #!� � ����� ��� ���2���� �� ������������� ���� 0 ���� P�()) � ��� ������� � � ��� ��� � ���� �� ��

77** $� #���� � #� ! ��� ������������ 5)))� �� 77*9877>@

��/��� �, -+-������� ��������� ����� ���� ���� �� �� ���� �� ���� ���������� � �������0�� ����� �� � ���� � �������� ��� (@ ��� -�� �������������� ���� ��1 #�A� ���������� ������ ���� ��1 &�0����� �� ������ ���� ��� #/"&��� ����� ��� �������1 $F,����� �������� 0�� ��� �������� ���� #�������� ������ ��� < ����= ������ ��2� ������������ <.= !������������ � ����� �� ����� ��2� � �������

�� ��� �� &� �� ��� 4'76� -������������ ���� )�(O 0 ��� P�()) �� � >)O �� ������� � ��� �������� ������� ��������� ���� ��� ��� ��� ����������� �� ���������������� ���� �� � ������ ��� ��� 47@6� ������ � ���#!� ��� ���2���� �� ������������� ���� (O 0 ��� P�())�� '�# � ��� ������� � ��� ��� � ����� �� ��� ����� �� ���� � ��������� ����� �� ������� ������ � ����� ����� ����� � ����� <79O ��� ���= ��� ������ �������� <>8('O ��� ���=� � �� ����� ���� ��� ��� �����

�� �������� ������� � ����� ������ ���� ��� ����45'� ''6� 0�� ���� � ���� � ��� � �� � ��� ��� <�� ������ ���� ��� ���� � � ����� ���� ������ ����=��� ���� �� �� �� � ��� ����� � �� ���� �� ����� ��� ����� �1 ��� ���� �� � ���� � ��� #!� ��������� ��� ���� <C (;��������� ��� ���� <!!= C &+&:(>�@ Q ;�)1 � � ������: 55�( Q (5�) �� #!��� ���� <� R;==� 0�� ����� �� ������� � ���� ����� ��� ��� ����<�� ����=�

������������ 5)))� �� 77*9877>@ #��������� ���� ���� ��� � �� �� ���� 77*>

(��� �, #���� ��� �� ������� � ������ ���� �� � ����� � �� �� ����

G ��� ���� #/"& $F, ""# #!� -�A #�A &�0 "��� A���� � ���

� "�� ' CC C CC C 45'6"�� @ CC 8 CCC C 8 8 8 45'� @@6"�� (( CCC C C C 0��� �� %"�� (; CC CC C C 0��� �� %��3� � CC CC C 4@56��3� �� C 8 CCC CC C 8 8 45'� @56��3� �F CC 8 CC 4@56��3� F� C C C C C C C 45'� @56 ')#����� ��� CC CCC 8 8 8 8 45'� @;6���� 8 8 C CCC C CC CC 45'� 7)6 *(0����� C 8 CCC C CC CC CC 47)� @56 ���� ���� � CC C CCC C CC 8 CC 4@5� @96 5������� C 8 CCC C 45'6 5;

�� !G�" C C CC C CC 8 8 4@76G�� CC C CCC C 0��� �� % *@#������� C C CCC CCC CC CC CCC 4@5� @*6 ��� D#� C 8 CC CCC 45'6 7*#������ C 8 CC CCC C 8 C 45'� 9'6 (';�('*"�� 8 C CC CC C C C 4@7� @>6 (@5�(@7"���( C C C CCC 4@76 7'$� D 8 8 CC CCC 4@76$!D5 8 8 C CCC 0��� �� % �� � ����

��� ��� ,()) C CCC 8 8 0��� �� %���� C 8 CC 8 45;6

�F 0�" C CC CC 8 45;6�-G �" CCC C CC 8 CCC 8 C 45'� 9)6���" CC 8 CCC 8 CC C 8 45'� 9(6-",�( 8 8 8 CCC 0��� �� %&" CC C CC 8 CCC 8 8 0��� �� %&+&" CC 8 CC 8 C 8 8 45;6�(����� � CC C CC 8 CCC 8 8 45;� 976

F #�CC��0 ��� C 8 CC CCC 45'6A��D��0 ��� 8 8 CC C C 8 C 45'6@I�A0 CC CC CCC CCC CC CC C 0��� �� %� 45;6��� ����� C CC C 8 CC C C 0��� �� %� 4956

����� � � ��������� � ���� � ����: �� ������� �� %� � � �����%������ � �����1��� ����� � ������� ��������1 ���� �����1 �F� ������ �1 F� ������ � ���� ��� ����� ����� ��� ������ �� �3� ���� �� � ��� � � ������� ������: CCC ����1 C� ���1 8� ��������1 ���% ������ �� ��� ����� � ����� �� ������ � ����� ������A���� � � ��� � ������� ��� �� � ����� ������� �� ��� ���� �� ����� �!G�"� ���� ��� � ���� ����� ������

0�� ��2� ����������� �� #!� <#������������� �������= �� � ����� � ���� ��� ������ ���� �� � ������� ������ � �� ��� �� �� ����������� ����� <������������� �� � ��������� = � ��� � ���� �� �� ��� ������������ �� ����� � !��� 45>6 � ���� ���� ����� �� ������� � ������ <���� (=� �� ��� �� � ���������� � �� ����� ���� ��� �������� �������� ����������� ��� ���� �� ����� ����� <����� ������ ����� �� � ������� ����� ����= 47)� '@6� ��� � �� � ��������� ��� ������ ��� ���������� ����� � �� �������� ������ ���� ���� ������ � ���� �� ��2� � ��������� � ����� � ������: ����� &+& ������ � ����� � ����<&" = ��� ��� � ���� � ��� �������� ������ ����� �� � � ��� ������� � ������� ��3� F� ����� � ����� � ��� ������� � ������ � � #!�1������� ������� � ������ ������ �� �� ������ ��&+& ������ <&+&"= � &+& <���,�())= �� �� ������ ���� � ������ � ��� ����%�� ������������

-��� ���� �� ������ ���� �� � ����� �� � ���� � ��������� � �� ��� ������ ���� �������� � � ������ ���������� ������ ��� ��� ������ �� ��� ������� ������� ��� #!� ��� ��� ������� -�� �������� ������ �������� ���� ��� ������� ����� �� ��� ����� �� ��57O �� ��� ������ ���� �� �� ���� � �� � �� ��')O �� ��� �������� �� ���� � �� 4'96� �� ��� �� ��� �������� ��� ����� ���� �� ����� � ���������� �3���� ����� � ��� ��� �� ��� ������� ����� 4';61 ����� ������ ��� ������ ��� �� ������ ���� �� � �������������� � �� ���� ������ � ������� ����������� 4'*�'>6 ���� �� ������� �� ��� ���� ���� ����� � � � ��������� ���������� ���� ���1 ������� ����������� %� � ���� �� ��� 7) %+� ���������� � ���� ������ � F!����� � <� "!#��( �����= �� � ������ ��� �� �� �� � ���� � ��� ������� ������� � ���� �� � ������ 45'� @)6� 0�� ��� �� ����� ��� ������ ��� ����������� �� � ��� ������� � ��� �� #!� ����� �� �������� ���� ��� ���� ���� �������� � � ����������� ���� �� ���������������

0�� ���������� ���������� �� #!� ��� ������ ����� �� ���� �� ��������1 0���� ( ����� ��� � ����������� � ��� ������� ����� �� ���� � ����� ������� ������� � ���� ������ ���� �� � ������� �� �� ���� � #������ ��� � ���� � ��� ""# � �#!�� ������ � ����� �� ��� ����� ����� �� �������� � ���� <� ��= ����� � � ���� � ����� <$F,� ;7 Q7*1 #/"&� (5) Q *)1 ""#� 75' Q 9;1 #!�� >)@ Q 79*1 �R (5 �3�� �����=� � ��� ������� � ������ �� ��������� #!� <9@O= ��� ��� � ����� ������� ��� ������������ �� ������� ������� �� ""# <77O= � #/"&<5O=� A� ������� ��� ������ � ��� $F, � �������������� ������� ��� ��� �� %� �� #!�� ���� ���������� ����������� �� #!�� ��� ����� � ���� ���

����� � ��� ���� ����� �� ��� ���������� ���������� ��� �� �: ��� ���� � ������ �� ����� ���������� #�5C��0 ���� ������� ��������� � ���� %����<$� D=� $� D�!"D %���� <$!D= � "���(1 ��� ���% �������� ���� ��� ��� ����� �� ����� ������ � ������ ���� ����� ������� ���� <������������ ���� ������

77>) $� #���� � #� ! ��� ������������ 5)))� �� 77*9877>@

��/��� +, !���� � ��� ������ �� ������� ���� ��� ������ � �� �� ���� #!� ������ �������������������� ��� <� ������= � ���� ���� �� �� ����� �� ���� ������� �� ���� �� ��� ������ � ��� � �� ����������� ������ ���� ��� <�=� <�= +������ �� �� ���������� �� ���� �� �� #!�� <= #�������� ������ ����� �� � ����� ������ ��� �� �� ����� �������� ���� �� �������� ���������� ���� �� �� #!�� ,� � ()) ��

��/��� -, ���������������� �� ������� � �������#!�� ���������� � ��� �� ���� �� ��� ���� ������� ��#!� ������ <� �������� �����K��= ���� ��� ���������� ������������ � #!�� �� ��������� ���� )�(O ������� ��� �� ������ �� � ����� ��������� ���� ��������<� ������=� ,� � ()) ��

<�-G �"=� &" � � ���"=� � ��� �������� � ����� ��-",�� <0���� (=� "������� -",�� ��� ���� �� �������� � �������� 4@(6�

-,+ &������������ ����������2���� � ������������������ ������

,� ����� � ��� ������ �� �� �� ���� �� ���� #!� �� ����� �� � ����� ���� ������ � �� �� ���� �� ����������������� ���� �� � ������ <� ������=� 0�� ��� ���� ���� �� ��� ���� ���� ��� ������� ��� ��������� ��� (@)85@) � ���� '@8*@ � ������� �� ������ �� ������� <���� 5=� ���� � 5� ����� � ����� �� ������� ����� ���� �� �� ���� � ��� � #!�� ��� ����������������� ���� �� �� ���� �� 0���� �� ���� �� � �������� �� ����� � �� ��������� ����� ������� �� -�����

�� �� ��� 47@6� 0���� ���� �� ���� �� ������� ����������� ���� � ������ ����� � �� ��� � ��%��� �� ��������� ���� ��� � ��� ������������� � ��� �������� � �� ��� ��������1 ��� ������ ���� �� �� � ���� ��� �������� ��� ��� ��� ��� � ����� ��������������������������� <G �=����� � � �����47@6� � ����� �� ������������� �� ���� ������ @I����������� � ����� ���� ��� <�� ����=� 0�� ����� ��� �� ��� ���� �� � ������ �� �� �� ��� ����������������� ������� � �� ��� � ��������� � ������A� �������� ������� ����� ����� <�� � $F, � #/"&=�� � ���� �� � #!�� 0��� � ����� ���� ������ ������ ���� �� ����� �� ���� ����� ���� ������� ��� ������ ��� ����� ���� ��� � ����� � ���� ��� �������� ���������� �� �� ��� ����������� � ����� � ��� ��������� �� ��� �� ��� ��������� ������ ���� �� 4''6 ��

������������ 5)))� �� 77*9877>@ #��������� ���� ���� ��� � �� �� ���� 77>(

��/��� ., 5�+ ��� ����� ���� ���� �� #!�� ���������� �� ��� 5�+ ��� �� � ��������� �� ����� ������ ����� �� �!�� �� 7�@8*�;1 �G!� 55)8(' %+��

���� <���� 5= �� ����� ��� ���� #!�� 0���� ����� ��� ������� �� � ���������� ��������� �� �������������� ���� � ����� ��� ���������� ���� �� � ��#!�� � � � �� ���� � ���� �� ���� �� ������ � #!��� ����� �� ��������� ���������� � ��� ������������� �� ������� � ������ ��� �� �� �� ���� ������������ ������� � ���� 7 ��� ��� ������� ���� ����� �� ������������ �� ����� �� �� �� ���� ������ ��� ����������� ������ ������������ ������ ��� �������� � ����� ���� ��� ���� ���� ��� � �� ������������� ������ � ��� ����������� �����

-,- +�) ������������ �������������� � ���

0�� � ���� ���� ���� �� ���� ��� ���� �� ���������� ����� �� ��� �� �� ��2� ������ ���� �� ������� ��� ���������� � �� ��� ������� � ������ � ��� ��� �� ��� � ����� �� ��������� ������������������ � ����� ���� ��� 45;� 7)� '@� @56� 0��

��� � � ��� � ��� � ��� ����3� �� ���������� � ��������� � � ������� � � ��������� � �����%��� ���� � '����� � �� ��������� ����� ������ 5�+ ��� �� #!�1 (;)����������� �� � ������ � #!� � ��� �� ��� '�)8*�9� �������� ������ ��� �� (' )))85)) )))� �� �������������� �� � ����� � ��� 5�+ ����� ��� ���� �� ������� � � �� �����: �� �� ����� ������ � ��� ���� �� ����� ����� #������ 5�+ � ����� ���� ������K���� (( � ����� �� � ������� � #!� <���� @ �0���� 5=� ���� � @ ����� �� �� � ��� �� #!� ��� � � ������� ����� ������ � ��� ����� � �������� ������� ������� �� ����� ���� < ���� �����=� � ���� @��� ����� ���� �� ��� ��� �� ���� ��� � "���( � � ����D���� #� < D#�= �� � ��������1 "���( ��� �������� ��� �� � ����� �� <*�@8>�)=� �� ��� ������ �� ��� �!� ����� D#� ��� ���� ������ �� 98;� � ���� @�� $�%5 �������� � �� �� S 9�5� � �� ����� ���� ��� �� ��� �� ���� ������� <5�+ �������: /"&� ��������������%�������������=� G�� ��� ������ � ��� ��� �� �� @89�

77>5 $� #���� � #� ! ��� ������������ 5)))� �� 77*9877>@

��/��� 1, ����������� �� � ����� � #!�� &��� ������ ����� ������ 5�+! �� #!�1 ���� ���������� ��� �� ������ ����� ������ <�= D#� � "���(1 <�= $�%5� G�� � ��3� ��� � <�=������� � �� "���

��3� �� ��� ������� � ��� 5�+ ��� �� ��� ����� ��������� ��� �� ���� �� ���� ��3� ��� � � ����� ��<79�9 � 7;�9 %+�1 �� ;�' � ;�)� �����������=� ����������� @� ����� ��� ����� ����������� ���� �� ������� � "��� 0�� ��������� ������������( ������ � ��2� ����� ����� ��� �� ���� �� ��� ���� ����� ����� � <������� �� �� @�* � 5(�@ %+�= �� ������� <���� ���� ('; � ��� ����� ������ 5�+ ���=� 0�� �������"�������� ��� ��� ����� �� �� "��: ���"��� ��"�� � A�"�� <���� � �� ���� � �� '�@ �� ;�)=1 ��� ��� ���� �������� <���� @�= ��� �� ���� �� ����� ����� ��� � ����@�� �������� <���� (9; � ���� '= ��� ���� ��������� ��� ��� ����� <�� � �������� ����=� � ��� ����� ������ ���� �� � ���� � ����� <0���� (= 4@56�

��� ����� � ���� ������� � ������ <#/"&� $F, � ""#=� �� �� �� ���� �� ����� �������� ��� (�+ �������%� �� � ������ � ��� ��� ��� 5�+ ����� �� #!� �� ����� �� � ��� ��2� ����� �� �� #!� � � <�= ���% �� ������� ����� < ������� �� ��� ����� ����� ���� ���� ����� �� � �������� ����= � <��= � ������ � �����%������� � ����� <����� �� ����� ������ � ����%� ����=���K������ � ������ ���� �� � ��� ������ ���� ���������� � � <���= ��� ��� ���� �� � ����� � ��� ���� �� � ������ �� ��� "�� � ������ � �� ����� ���� � ������� � ��� �� ��� G0 ����� � ������ <��= ��� ���% �� ������ �� � <�= ��� � ������ � ����� � ����������������

������������ 5)))� �� 77*9877>@ #��������� ���� ���� ��� � �� �� ���� 77>7

(��� +, ����� ������� � #!�

�����= $��� ���� ��� �3� �� A���� � $F,�= #/"& ""# #!�<%+�= ���

G�� '@�7 @89 *@ * (9 7' '5 D#� *5 98; 7* �� ' 5) ;9#������ 5( @�(�@�* (';�('* �� 9 9) 7'�� "�� 5( @8; (@5�(@7 5 () '* ')"�� ( ;' *�@8> 7' (' (5 7( '7$!D 5 ';�@ 9�5 �� � ���� �� @ (@ *)��3� �� 7; ;8;�' *>�>) ( 9 ;; (9��3� F� 9* 9 ') 5) 7* 5@ (;���� '7 @�)�@�( *( �� �� 9 >'������� *@ @�@ 5; �� 5 95 79���� � ((* 9�' 5 (@ (' 7> 75

�= ������� �� ����� ��������� � ��� �� ������ � ����� �������= +�������� �� K��������� � �� ������

��/��� 3, #������� � �������� � �����%��� 0�� ����������� ��� �������� ���������� �� ���� ���� ��� ��������������� ������ � ���������� <����� ������� ����� ## =������� ������� ���� <A## =� ��������� #������� ������ ����� ��� ���� � ������������� �� �������� <""#�= �� ���� � �������� ����� ���������� ��� ���� ���� ��� �� ����� ��� �������1 ""#�� � ���������� �������� �� �� � ����� ����� ��� �������1 �""# � ������� ����� ���������� � ��� � ���� � �� ������� � ���% �� ��� ���������� ��� � �� ��� �� ��� ��������1 -�#� ��������� �������� ����� ����1 �2� ����� 2�������

-,. ��� �� ��� �������� ����������

#������ �� � ���� �� ������ ���� �� � ���� ������� G���� � � �������� ����� �� ��� �������� �� ���������� �� <��������=� #������ ������ ������ �������� ���� �� ����� ����� � � ������� ��� ����� ��� ������� ����� ����� -��� �� � ����� ������� ��� ��� �� �� ��������� ���� ������� � ����� � ���� �� ������� � �� ��� ���� �� ���� �� ���� ���� �������� ���������� ������ ��� �� ����� ��� �������� <#/"&= 4@76� �� ���� � ����� ���� �� ���� ��������� � ��� ""# ��� � ������ � ��� ����������������� �� ���� ��� <#!�= <���� 9= ���� ���� �� �� ��� T�������U �� ��� �� ������ �� ������� � ������������������� �� ��� ����� � ������� ������ � � ����� ����� ��� ������� ����� ���� 4@'6� 0��� ��������� �� ���� � ����� �� �� ������� �� !G� 49@6� #����� �� ��� �������� ���������� �� #!�� �� ����� ���������� ���� ���� ��� �� ���� ��� �������� �� �������� ����������� �� �3����� � ����� ���� G ������ � � ������ ������ ��� ��������� �� ������������� ���� ��� ��� �������� ������ ���� �� ������� � ������ ������� � ��� ���������� � �����%���������� ������ �%���

. ������/ �����4� �� ������������

0�� ��� �������� �� ���� ���� �� ���� �� ���� �������� ��� ���� ��� � ����� ���� �� � ����� � ���� ��������� ���� � �� ������� ������ ������� �� ��������������� � �� ��������� ������ ���� � ��� ����� ������� ������� �� ������� ������ �� ���� ���������� % �� � � �� ��� �� ��� �� �������� �� �������� � ��#!�� �� �� ��� � ������ �� ������ �� ���� �� ���������� �� ��� ����������� �� ��2� � ����� �� ��� ����K����� � ����� ������� ������ ��� ����������� ��G0 ����� � ����� <"�� � �����= � ��� �������� ����� �������� ��������

���� ��� ��� ������ �� � ����� ��� ��� ���������� �������!� �� "������ #$ %�&''()*� +� ��� �������� ���� ������� � ��� ,-��.��� "�������� � �/�����, �� ���0��.������ � 1������� �� ��� ������� ������� ������&�����

"������ $� �� 7� 5)))

1 $� ������

4(6 !���� �� ��� 1������ 1����� 2��� (>*)� �'3� 5;89'�

456 !���� �� ��� 4������ (>*(� �� '@58'@;�

476 ,� ����� N� "�� ����� � �� &�� ������ 1������ -��� (>**��)� (*(8(*'�

4'6 $���� � D�� $������ ��� "���� 5��� "��� 1��� (>>'� ��@'@8@@'�

4@6 $������ D� !�� #� ��� $� ��� 1������� (>>@� ���(5>8(7*�

496 V��� �� $� $� �� ���%�� �� +�� 1������ 6� (>>*� ))��5@;859>�

4;6 $������ ��� 2���� 7�.� "��� 8�.� 1��� (>>9� � � @;@895@�

4*6 �� ��� "� G� ��� 2���� 7�.� 1������ (>>*� ���(>>855@�

4>6 #�������� � ��� -���� ��� �� &�� &����� �� ��� "��� �%()�) � ��9 �:�

4()6 G����� �� N�� -���� N� ��� -� ���� G� N� �� $�� &����� �� ���-���� ��� �� &�� "��� (>*7� ) � 5;;85*;�

4((6 G����� �� N�� -���� N� ��� -� ���� G� N� �� $�� ���� � N���� ���� �� D�� ������%� ��� -���� ��� �� &�� "��� (>*'� )��(>@85)'�

4(56 $������� "�� "���� N�� "��� �� ��� L ��� &�� ;����� (>*5� %�� 9@(89@7�

4(76 ������ N� "�� D ���� � !� �� ��� L����� ,� N�� $�A���� $���� 6� "��� 1��� (>>*� �3�� *@8>>�

4('6 $������ &�� -����� -�� -���� ��� A� ��� D� "�� ,� �� 0��,�������� "�� D��� �� G� $�� 6� 1��� "���� (>>@� �'�(@9*98(@9>5�

4(@6 ����� G� !�� 6� 2�� $���� (>@7� 3� ('5'�

4(96 ?����� !�� 6� 1����� 1������ "���� (>@@� �� ''@8'@*�

4(;6 G���� N � N� "�� <�1- =���� (>>5� )�3� '@8'*�

4(*6 N������ $�� ���K���� ��� +����K����� ,�� 6� 1��� "����(>>(� ��� (5*@*8(5*9@�

4(>6 N������ $�� #���� N� �� +����K����� ,�� 1������ 6� (>**� :)� ;7@8;'7�

45)6 0����� ?�� L����� $�� ���� 0�� 2���� 4����� 6�� (>*7� 3��')(8'59�

45(6 L����� $�� ���� 0�� 2���� 4����� 6�� (>*9� 3%� *78()7�

4556 ����� "� !�� ,������ N�� $������ "� ��� ,������� +� $�� 6� "���1��� (>*@� �''� ()78((;�

4576 L�� �� $������� +� �� -������ � N� !�� 6� "��� 1��� (>>*��3�� ()(8(('�

45'6 ��� ��� #����� $�� &�� ��� ! ���� #�� 4������ (>>>� %�(*'*8(*@;�

45@6 ,����� � N� +�� �������� "� &�� , ��� -� !�� �� ��%� #� ���NW�%��� -�� -����� � �� N�� ������ "� N�� $��� ;���� 2����-��� 0-2 (>*;� (3� 9;*@89;*>�

4596 NW�%��� -�� "�K����� !� ��� , ��� -�� �������� "� &�������� "� N�� 6� =�� 7��� (>>(� ) � '*@8'>*�

45;6 ��� ��� L ����� +�� ! ���� #�� 1������ 6� (>>;� ) )�'7@8''7�

45*6 #���� ?� -�� ���� � !� !�� #��� G� #�� ������ "� N��6� 1��� "���� (>;>� :3� ((79)8((799�

45>6 ����� � $� ��� !���� �� ��� 1������ 6� (>;@� �3��7;@87**�

47)6 ! ���� #�� 0����� �� !���� �� ��� 1������ 6� (>>)� ��� (;(8(;*�

47(6 LI�� ���� � V�� G����� �� $�� LI�� ���� � ��� "��� (>;;�� � ((778(('5�

4756 &������� /� D�� ;����� (>;)� �� 9*)89*@�

4776 ,���� ��� ,��� � ��� G ���� ��� ������������ (>*;� (�>78>>�

47'6 �� ��%� #� ��� �������� "� &�� -������� !�� !� �� G� ��������� "� N�� 6� "��� 1��� (>*@� �''� (@@*8(@9>�

77>' $� #���� � #� ! ��� ������������ 5)))� �� 77*9877>@

47@6 -������ � N� !�� $������� +� �� +�� �%� �� $�� &��� N�� L�� �� -������ (>>@� �%� ('7@8('7>�

4796 #���� �� N�� ?��� ?� -�� "����� �� D� G�� ����� � A� $��0� � � �� N�� G�������� �� ��� +� G���� �� N�� $����� -�$�� G����� �� #�� �� ��� "� G�� 6� "��� 1��� (>>'� � ��(5;8(7*�

47;6 &������ $� �� -��� � � � !�� F���� ���� N�� 0��� V�� �� ������%��F����%�� ��� 0�� ?� ��� #��%� "� ��� -� ��������$�� 6� "��� 1��� (>>'� � �� (((8(59�

47*6 &������ $� �� 0��� V�� -��� � � � !�� -� �������� $�� ����� ��>���� (>>@� :'� 9@@899*�

47>6 -�� �� !� N�� ?��� ?� -�� $���� #�� �� ��� "� G�� $���;���� 2���� -��� 0-2 (>>@� % � ()()'8()()*�

4')6 -��� "��F�� "��� ��� �� G�� ������ +�� ����� D�� -������ &� G�������� &�� ����� G� !�� �� 1��� "��� (>>;� (�@>@89)@�

4'(6 L�� �� -������ � N� !�� 6� 1��� "���� (>>>� �3�57(''857(@'�

4'56 ��� ��� ! ���� #�� ������������ (>>;� �(� 5@'*85@@;�

4'76 &�� -�� L%������ 0�� #��� $�� -� �������� $�� #�������N� !�� ����� -� ��� A��������� ��� &������ $� �� 6� 1���"���� (>>@� �'� (@9>78(@;)(�

4''6 -� �������� $�� -���� $�� 0��� V�� &������ $� �� 6� "���1��� (>>7� � � ;*>8*);�

4'@6 !���� �� ��� ! ���� #�� 1������ -�� ������ (>*>� ���9(>8955�

4'96 ,����� ��� ,���� � "� �� ������� !� "�� 6� "��� 1��� (>;;�� � ''(8''@�

4';6 �� ,� %��� 0� N� #�� D���� � N� ��� �: ������ !�� D��%� +� &�<!��=� ?����� "���� ��� 5���� -�������� "����� !������ �A������� ����� �� (>;;� ��� 5>>87)9�

4'*6 ����� � $� ��� !���� �� ��� 1������ 6� (>;;� ��3�'(@8'55�

4'>6 ,������ � N� F�� ������ +�� 6� 1��� "���� (>*9� ���;''@8;'@'�

4@)6 -��� � #� N�� #�� ��� �� "�� 6� 1��� "���� (>;>� :3�''@;8''9(�

4@(6 ,������ N�� 0 ������� ,�� "������� ��� -�� �� !� N�� �� �� "�G�� P�� -�� D ���� � $�� 6� 1��� "���� (>;;� � �(75'58(75'>�

4@56 ��� ��� L ����� +�� ! ���� #�� 1������ 6� (>>;� ) ��;'(8;'9�

4@76 ��� ��� #����� $�� ! ���� !�� <�1- =���� (>>*� 33�� 7'87*�

4@'6 ! ���� #�� ��� ��� #����� $�� ��� $�� NW�%��� -�� 4����&�� (>>>� )'� (((@8((5)�

4@@6 L ����� +�� ��� ��� ,�� �� � $�� NW�%��� -�� ! ���� #��6� "��� -��� (>>*� ���� 59(859>�

4@96 ��������� "�� &�������� � -�� ,����� L�� -� ������ N��,������ � ?�� G�������� �� 1������ 1����� 2��� (>>)��')%� ;78*)�

4@;6 #����� $�� ��� ��� &�� ��� L ����� +�� ��� +�� ,����� N��! ���� #�� 6� 1��� "���� 5)))� �:� ;>()8;>(;�

4@*6 ! ���� #�� ,����� L�� !���� �� ��� 1������ 6� (>**� ::�>>>8())@�

4@>6 ! ���� #�� !���� �� ��� -������� 1������ (>>7� �%�(>@8555�

49)6 ! ���� #�� F� �X�� $�� !���� �� ��� 6� "���� $������ (>>5��:'� 7''87@5�

49(6 ! ���� #�� NW�%��� -�� ������ "� N�� 4������ (>>9� 3�5598575�

4956 ! ���� #�� !���� �� ��� G����� �� #� G�� <�1- =����(>**� (� (7@8(7*�

4976 �2���� #�� �� ��� �� !�� ! ���� #�� N������� -�� 6� "���-��� (>>5� �' � *(@8*5)�

49'6 D� �������� 0� F�� +�� ��� �� � ��� "� G�� D���� � "��F� ��� ��� &��� �� $�� -����� D�� 6� "��� 1���� (>>5� ��(�())78()('�

49@6 ��� ��� #����� $�� &�� ��� ! ���� #�� "��� -����� 5)))�� � ����

������������ 5)))� �� 77*9877>@ #��������� ���� ���� ��� � �� �� ���� 77>@