Time-of-flight optophoresis analysis of live whole cells in microfluidic channels
-
Upload
independent -
Category
Documents
-
view
2 -
download
0
Transcript of Time-of-flight optophoresis analysis of live whole cells in microfluidic channels
��������� ���������� ���� ������ ����� ���� ����� �������� ���� ��� � ������ ���� �� !�� "� ������ �
����������� � ������ ��#�� ��� $�� ��� %�� ������� &'(��
������������ ����������� ������� �� ���� ���� ��� ������������� �������
�������� ���� ! "���� �� #��$��� %& ���� ��������� �& '����$� ������ (& )������ ����� '����� )��� �& #���� (��� *& +������ ����� �&,���� �������� ����������� ��� )������ (&��������-������. /��& 0012 ����� �������� *��� '�� %��� �� 13434
5'�
"����6 �7���8������.&���
�$������& &) �)���� � � � ���*���� ��� �� ���+ � �����,�� �� � �� �� �� �� �� ���� ��� �� ��� ���� �� �� � �) ���-������ .�� � +)���+ -����� �� �+ � ����*�������� � ��� !����-�� ��� �� �� �� ���� ��� ��)��� �)�� �� �� ��� �� )�+ ���)��)�� �� �� �� �� � ��� � ���� ������ ��� ����/� ���)� � ���� �'�� ��� ���)���-+� !���*��*0�-� 1!&23 �) �)���� � � ����)���� � ��� �� �� �����,�� �� � �����0����� ���������� � 4 ��� ��� �� ���� ��� ����-� � ./�� �� ���� �� � ��� �� ��� ������� ��� ���� � � �� ����� !�� ��-�� ��� �� �� �) ��� ��������� �� � ��� ��� �������� �� ����-� �� ��� � ��� �� ��������+ �� )�� ���� �� �� �������� � �� )������ � �-�� ��� ��� ����� �+ ������� ��- ��� ��� ������ ��� � )�)�� ��� �� �� 1 +)���+ ����5�� �� )�� )�)�� ���3� �������� �� +)� � ���- ��� ��� � �� ����-��� � � ��� �� ���)���� ,��� � � ���+�� ��� �� ���� ��� �/ ���� ��� �� ���(�� � �� �� �-�� �� !&2 + �� �� ���� ��� ��� �� ��� ������ ���'��� !�� + �� +)���+ � � ,���� ��)����� �� � 6������� �� ���� ����� ����� � � � +���-�*)��)*�� �� 0�� + �� �� -����� � ��� ����( 0�� ����� �� �� ���� ��� ��� �����7 ��� 8 ��- �� !&2 �����,��� �� ���� ���� ��� � ��� � �� + �� �� �-��.��� ���������� �� ���� ����� (�� ��� ������� �� ��� � 99%*��5: ��� �5:6� �� )�� ���+� ;� ���� � � ���� ��� � ��� ������ � �� ���������� �� � �� �������� �� ��� ���� 1<=�� �� ����� � %#& ��� ��� 3� !�� � ���+ �� � ������ � �� )� �� ������-��� �� � ��� + �� �� !&2 ��� ������ �����,�� �������� ���+ � ��� ������ ���-�� �� �))��� ��� �
+�� �����& �) �)���� � � �����0����� � ��� �� ���+ �
4& /�����������
��� ����� ����� ������� �� ��������� ������� ����
�������� �� ��� ��� �� ���� ���������� �������
�������� ���� ������ �� !� ��"�# �� �� ���� ���� ��
���� �������� �� ������� ��� ��� ������� �� !�
��"� $����� ���"#! ��� � ������ �� ��� ����� �����
������� ���� ��� ������ ���������� ��! !� ���������
������ ������������ ������� �� �� ��%�# �� ���
������� �� ���! &�� ������� �� ����� �� �
&������������ �������� '��������� ������ �� ��
����� �� ������� ��� ������ �� ��� � �� ������ ��
�� ����� � �������� �� � ����� ������ (��� �! !�
��� ���! )���� ������������ ���������� �������
��� ���� �������� �� ���������� ��� ����
����� �� �������� �� ����*���� ������ �)��
+�� �� !� ,��- .� �� !� ,��/#! ���� ���� ���������
�����0�����*���� ������� ����*��*0� �� ��&1#
&������������ �� ��%� �� ���������!
�&1 �� ��������� �� �����0����� ����� � �����
�� 1� ��� ��#! ����� �'�� ����� �������� 2�� 2,
�� 2/ �� �� �� ���� �������������� �� ������ ���
�������� �� �������� �� ��� ������� 0���� �� ���
����� ���� �� ������� 0�� ����� � ��� ����������
���� ��� �� �� �� � ����� �� 1� ��� �#! �� �����
������ (�� ������� ���� �������� ���*�������
�345# ��� ��� �� ���6����� ������� ��� ������ �2,#
�� ����� �2/# ���������! ���� 345 ��� ��� �� �������
���� ��� ���������� �� ��� �*��� � ����� �� 1� ���
���#! ��� ���� ��� ������ �� �� �� ���� ���� ��� (���
�������� �2�# �� ��� ������ �2,# �� ��(��� � ��� �� ���
���� ���� ��� ������ �������� �2,# �� ��� ����� �2/# ��
��(��� � �,! 4� ��� ������ �� � ����� ������� �, ��
�� �'� �� ��� �� ��� 0�� �� �����! .��� ��� �����
������ �� �������� ��� ������� ����� ������ �� ���
������ �� ����� ���� � ������� �� �,!���������� �� ��� ���� �,��� ��� �������� �� ���
�������� ������������ �� ����� ��� ��� ��������! �
�� ����� ��������� ��� ��� �� �� ������� ���
78����������� �����!
44
��� ������ �� ��� ���������� �� ��� 0�� ����������
�� ��� ��� ��� ������� 0���� �� ��� ������ �� ���
����� �� ���� ��� ��� �� �� ��������! 4� ���
��� �������� �� 1� ��� ��#� ��� �� � �� �������� ����
�� , �� �� � �����! 3��� ��� ��� ��������� ���
���� ��� ������ �� �� ��(��� ����� ������ �� ���
������ �� �� ������� �� ��� 345 ��� ��� ���� �.
��! . �� ��� �����#! 1� ��� ���# ����� ��� ������ �����
��� ����� ����� ������ ���� �� �� ��� �����*
�����# ������� �� �� 0���� ������ ��� �����0�����
����� � �� �������� �� 1� ��� ��#!
)���� ��� ����� ������ (�� �� ������� �� ���
��� ���� ��� ����� � ��� ����� ���� ��� ���
������ �� ��� �*���� �� ��� ��� ������ ������*
���� ������� ��� ������ ������ ��� �9� ���:
��,�
��,� ������ ������ � �� � ���
��
��� � �� ��
� ��
���
����� � �� ��� �� ������ �������� �� ��� 0��
���������� � �� ��� ��� �� ��� �� ����� �� ��� �������
�� ��� �� �,����, �� ��� ��������� �� ��� �� � ��� ��
��� 0�� ������� � ����� � ������ ��� �� ��� �����
����� �� ��� �� �� ��� ��� ��� ��� ��� �� ���
�� ����� ����� �� ��� �'���! ��� ����� ������ ��
������� ��������� ������ �������� �� ;����� ���
��� �� �� ������ ���� ��� ;�����%�� <����%*
=�� ������ �;<=�# �;������ �� !� ���,#! 1� ��� ,
����� ��� ;<=� ������ ����� ������ �� �� ����
�� ����� ����� � ��� ��� ������ �������� �� 1� ���
��# �� ��#! ��� �������� ������ ��� ����� �� ���
��� ��� �� ��� � �� ���������� �� ��� �� �� �� ���
�� �� 0���� �� ��� �*��� ���� �� �� ����������
��� ��! ��� �� �� ���������� �� �� �������� �� ��
�������� ���� ������ ���� ��������� ������ � � ��
�!/" ���������� �� ���� ���� ��������� ������ ���
�� �!//! ��� ����� ����� �� ���� ���������� ����
������ ������ � �� � � �� �� ������ ����� � ��� � ��! ��� ��� ��� � ��� ������ �� ����������
�� � ������ ;����� ��������� ���� � ����� ��
�� "�" ��! �� ��� ��� ������ ��� �����6�� ��� �� ��
��& 4& ������������ � ��� ������������ ��� ��� ����������� ���������� �� �! ��� �" ��� �#���� ��������� �� ���� �� ������� ���������� ������� �� � ������� �� ���� �� ������ ��� ��� $��� ������� ���� �� ��� ������ ��!� �� ��� ��� ��� ���� ��� �! �� �" �� �,! %� � ����� &������� $���&�������� ��� � ������ ����'������� ����� (��� �� ��)����� (��*��� ��� ������ ��!� ��� ����� ��"� ��������� %� ������������ ����� (��� ������ &�������� ( � ��* �*�� ����� (��� �� ������ ��� ��� �������� +�*��& ����& ��� ������ � ��� ������������� �(� �������� ����� �*��� ���� ����� ���� (��,�� ���� ����� ��� ������� ��� ������� �� ���� �!
43 -���& �� ���
��� *��� ���� ���� �� ,- �� �� ���,#! ��� ���������
��� �� �� ��� �*��� ���� ���� �� >!> �� �� ���,#!
$��� �� ���� ��������� ��� � ������ �� ��� ����� ��
����� �� �� ��������� �� ��� ����� �� ���������
���������� ������� ��� ������ �� ��� ����������
����! 4� �� ������� �� ��� ��� ����� �� ��� ������
�������� �� ��� �� ���� ��� ������ �� ��� ;����� ���!
.��� ��� �� �� �������� ��� ��� ���� ���� ���
�� �� ������ ���� �� �������! ��� � ������� �� ���
��� �� �� ������ �� � ����� � ��� ���� ��
��� � � �������� �� 1� ��� ,!
4� �� ���� ���(��� �� ���� ������ ��� �'����� ��
������ ��# ��� ��� ������ ���� �,� ������ ������ �������� ������� ������� ����! +������� �� ��� �����
����� ������� ���(������ � �� ��� ������ �� ��
������ �� �, �� �� ��(����� � �� ��� ��!����������� ���� ��� ����� ������ ������ �� � ���
��� �, ����� ��������� ��! 1� ��� / ����� ���
������ �� ������� �������� �� ��� ��� ���� ��,������! ��� �����! )���� ��� � ������ �� ��� ����� �����
�� ���������� �� ��� ����� �� ��� ������ �� ��� ���
����� �� ����� �� � �� ��� ���� ��,���� �
��������!
4� ��� ���������� ���������� �� ��������
�������� ��� ��� ���� ��,���� �� ������� ���� ���
� ������ �� ��� ����� ����� �� ��� ��! ���������� ���
������� ��� ���� �,��� �� �� � ��������� �� ���
��?� ��������� ���������� �������� ��������� ������
������������ ������� �� �� ��%�#� ����� ��� ����
���� �� �� ����� �� ��� ���� �� ���������� ��
���� ��������� � ��� ���� �� ��� ����������! ��
����� ����� �� ��� ����������� �������� ������ ��
������ ����� ����� �� ��� �� ��������� �����
������� ���� ���� �88@*��/�# �� �����
��/�>� .=��>� �� .=,AA# ���� +<A� ����
�������� �� ������ ���� @=)&� �� ����������
�2)# �� ����������������� �2==�# ����! ���
������ ���������� ��� ������� ������ �� ��� �&1
���������� ������'�� � ���*���� � ����*��
����� ������!
3& �������� ��� �������
�� ���� ����� ������ ������� ��������� �&1
���������� �� ���� ����������� � ����� �� 1� ���
-�#! ���� ��������� ����������� ��� ��'�����
���������� ��� ��� ����������� ������� ��������
��� �������� ������� �� �'��������� �� ��
��������� �������!
3&4& ����������� ������ ��� � �.� ��� ���� ���� �����0����� �� ������ ������ ��*
������ �� �'���� ����� ���� ������� �2��������
4��!# � 0����� ������ �� �&1! ��� ������ ��
�����0����� ����� ������ �� >� �� ���� �� ,�9
,> �� ����� ���� ��� �'���� ����� ���� �������
��� >�� �>� �� ��� �� ������ ���������� �4@#! �
���� �� ������ ����������� � ������������ ��
� � ,���A �������B�� ���� ��������� ��� �� ���*
������ �� ��� ����������! � ������ ����� � ���� ��
���� �� ��� �� ���� �������� ���� ��� �������� ��� ��
��� ����������� ���� ���������� ��� ��� ���� ���
���������� �� � ������� 0�� ���! ��� ��
��& 0& .�������� ���������� (���� �� �#������ � �� ��� �,��� ���������� ������� ������ � ����� �*��� ��� ����� �*�� �� ������������ ��� ������� ����� �*�� ���� ��� ��� ��� �������!
��& 3& � ����� ����� ������ ������ � �� � � �� ��������� ����� � �� � � �� �� � ���� ���������� ( /01� ��������&��� ���� �� (� � ������ �2�� �������� ����� � ���� *��� ���������� ������ � � � ��"3 ���������� ( ����� *��� � ��������������� ��� � ��""�� ��� � ����� ���� �� ������� ( �� ���� �����/������� ����� (��� *��� 323 �� *������&��! �� ��� � ��� ��� ������� ��� ��������� ��� ������)�� *���� � ��� /�������(��� �� ��� ���, ���� ����& ��� � ��� ����� 4��� ���� ������������ �� ��&��� �!
����'�'���&�� � �� ������� %������ � 0��� 5���� 6���� 40
��������� ����� ��� �&1 ���������� �� ����
������� ,�� �� A�� ��B� ������������ �� ��� 0��
��������� �� �!,> �� /!� �B�! ��� ��� ������� ��
���������� �� ��� �� ���� �� ���������� �����*
�����! C��� ��������� �� ����������� ��� ����
�� �6����� �� ���� ��������! ��� ������ �� ����
0����� �� ��*������ �� ������ ��� �����'����
�����������!
3&3& ����� ������1�� ��� �&1 ��������� ������ �� 1� ��� -�##� ��� �����
������ �� ������� ���� ��� ��� ���� ��� � ������
������������� ��� ����� ��!A .� "�" �� ����� ���
���� 8�������� 4��!#� ������ ��� ��� ������ ��%�! ���
��� ����� �� �� ������� �� ���� �� � �� ����
��� �<�� �� !� ���>� ���A <�� �� !� ���A#!
)���� �������� ������ 0�� ����� �� ������
��& 9& ��� %� ����&����� ����(�� ��(������ ����� � ��� ����������� �(� � ����� ����� ��������� � ��� ����(�� ��(������ ����� � �������������� ����� ��� �*� �����&���� ����� ���� ���� ��� �����&� ��� �#���� �� ������ 4��� ���� ������� 667 ������� �� ������ �������������� ������� ���������� ���&������ ��� ����������� ���� ������ ��� �� ����� �� ���&�� ���� � ���, ���� �� �� ���� � 7������� �!
49 -���& �� ���
���(� �� ������������ ��� ����� �� 0���� ��
����� ���� ��� ��������� �������� �� ��� �� �� ���
����������� ���� ������ ����� � ��� ������ ��
���� �� ����� ��� ��� �! ��� ����� ������ (��
�� �� ��� ������� ����� ��� �����! ���������� �� ��
�������� �� ������ ��� ����� ��� ��� ��� ������*
���� ��� ��� ��������� ��������� �!�!� ��� ��� ������
�� ��� �����0����� �����! �� ������ ����� �� ���
���� ��� ��� �&1 ������ ��������� ������ ���� ��
����� ������ ��� �A/> ��# ���� ������ ��� ������
����� ��������� ��� ���� ��� ������ �� ���
���������� �� ����� �� 1� ��� �#! 8�� ������
������� ��� ��������� �� �� ��� �� ��������! ����
��������� ��� �� ���� ��� �� ��'�������� ��� ���
������������� �� �������� ��� �� �*��*����� ����
�)35# ��� ������ ���������!
� �������� �� ��� ����� ������ �� ���� �&1
���������� �� ����� �� 1� ��� -�! ����� �� ���
����� �� ��� ���� ��� ��� ����� � ��� �'���
�����! &�� ��� ������� ��� �!A .� "�" �� ��� �
����� ������������� ��� �� A/> �� ����� ��� ��� ���
���������! ��� ����� ��� ������� ������ ��� ��
������ ��?� ��������� �������� �� ��� �*���! $���
���� ������ 88@ ����� ��� ���� ��������� ��
����� ���������� � �����! D�� ���� ������ ��
-�� ��� /�� �� (��*��*����! ��� ���������� ��
������ ��� ����� �� �� �� ���� �>�� ��(�����
���� ��� ��� �� �� ����� �� @������� �! ��� ��� ��
��� ���� ������ ��� ���� ����� �'�� ����� �A�9
�> �� ������9������ ����� # ����������� �������!
��� �� � �� ��� ����� ���� ��� ��� �� ��0�����
��� �� ���� � �� ����� �� 1� ��� >! @������� � ��
�� � �� �������������� ���� � ������ ��������
����� �2@�>>� ������� 4��!#! .��� �� �����
��� (��� �������� �2�#� �� �������� ��� ����� ��
��������� � �� ������ @������� � �� ����� ���
������ �� � �� �������! ��� ��� ����� ����������� ��
��� ������ ���� ��� ������ �� ���� ������ �� �
������ ���� ��� ����������� ������?� ������ �� ���
���! ��� ��� ���� �� �� � �� ����� ���� ���� ��
����� ��� ������ �2,# �� ��� ����� �������� �2/#!
���������� ���� ������ �� �� ����� ����� � ���
���������� ��� @������� � �� ������ �������
��� ������� ��� �� �� �, ���������� � ����� �� 1� ���
>�! 3��� ��� @������� � �� �� �� �������� �����
������ �������� ����� ��� �� ��� ����� �������
�������� � �� ���� ��� �� ��� ����� �����������
������� �� ��� ������ ���!
3&0& %��� ��:�������� ��� ���������� ������ �&1 ������ �������� �� ��� ���� �1� ���
-# �� �������� ��� ������� ��� ����� ����������
����� ����� � ����� ���� ���!#� �'����� ��� ��������
�� ��� �� ��%�� ��� ���������� ��! � ��
�'�������� ��� �3���� 4���������� 4��!� @�E*A�,-D#
�� ���� �� ���� ��� �������� �� �� � ���� ,�� F
�����B� ���� �, ��� ���������! ���� �� ���(����� ��� ���
�&1 ������������ ���� ��� �� 0�� ��������� ��
,��� A�� ��B�! ����� �� �� ������ ����������
�������� ��� ������� ��� �������� ������� ��� ���
����� �� ���������� ������! 4� �������� ������
���������� ������� ����������� �� ��� �������� �� ��
������ ��� �� �'�������� ���!
� ������� ��� �� �� ���� ��������� ����
<�G4D.� ��� �� �'�������� �� �����! &���
������ �� �� ����� ����� � ��� ���������� ��� ���
��� �� �� ��� ���� �� ������ ��� ������ ������� ����
��� ��������! � ���B��� ��������� ������ �� ���� ��
���� ��� ����� ��� ��������� � ����� �� 1� ��� >� ���
@������� �� ���� ��� �� �� �, �� �� ������
�������� �� ��� �������! � ����� �&1 ����������
������� ,��9/�� ��� ��� ��� ���� ��������! ���
��� �� ��������� ������� ������ �� ��������
�������� ����� ��� ��� ����������!
��� ����� ������ �� ������ �������
���������� ���� ��� ���������� ��! 1�� ������
��� ����� �� ��� ���*����� ������� ������� ��
��� ��%� �� ��� �� � �� � ��� ����� �� ��� ��������
������ �����! C��� ��� 0�� ����� ���������� �����
��# �� ��� ����� �������� ������ ������ ������ ��%�
���������� �� �� �������! $� �������� �� ��
������� ���������� ��� ��� �� �� �� ��������
����������� ������ �� ����� ���� ��� ��� �� ���
����� � ��� ���������� �� ���� �����(����� ������
������� ����! ����� ����������� ������ �� ��6�����
����� ��� ����������! ���������� ��� �&1 ������
��� ��� ���� �� ��6��� ������� ������ ���� ��
��%�� ��������� ������� ������� �6���� ������� ���
���# �� ������ ��� ������� ��������� �������
���������!
0& *�����
0&4& /��������� ���$��������� �&1 ���������� �� ���� ��� �� '����������
��������%� ��� �� �������! .� ��� ���� ���
��������� ����� �� ����� 2) �� 2==�� ���� $� �
<�������� 4��! �� ������ ��� ����������! $��� ����� ��
���� ��� � ��� � ������� �� > �� ���� ������
��������� �� ��%� �� �!�� �� ���� 2) ����# �� �!� ��
���� 2==� ����#! ��� 2) ���� ��� ��������� �����
�� �!>�� ���� ��� 2==� ���� ��� ��������� �����
�� �!-"! ��� ���� ��� ��������� ����� ���� ��
������%�� ���� ���������� ����� �� �!//#! ��� �����
����� �� ��� 2) ���� �� � �� ��� �� ��� �����
���������� �� ��������� ����� ������� 2) �� ����! ���
������������ �� ��� ���� �� �,��� ����������� ��
����'�'���&�� � �� ������� %������ � 0��� 5���� 6���� 4;
����� �� 1� ��� A �� �� �����������! ��� ����������
������� ��� ��� ����� �� ���� �������� ���� ��� �����
����� � ������ ���������� � 2) ���� ���� � ��
�,��� ��� ��� �1� ��� A�#! �� ������� ������� ���
�,��� ���� �� ������� �� ����� ����� ��� ��� ��
��� ��������� �&1 ����������� ���� > �� 2) ����
����� ��������� ��� ������� ��� ������! 1� ��� �
����� ��� �������� ��� ����� ����� � ������� ��
�,���� ����� �� ���������� ���� ��� �������� ��������
�1� ��� /#!
0&3& ��������� ��� ������������� �� ����4� ����� �� ��������� ������� �&1 ����������� ��
������ ���� �� ����������� �� ���� ���� ���� �� ���
������� ����� �������� �� ���*�������� ���
����� ���� � ����� �� ����� �������! 1� ��� "
����� ��� �&1 ���������� ������ ���� ����
����� �� ���� �;��� �� !� ���/ 8������ �� !�
���"# ������� �/�>� .=��>� .=,AA �� ����
���� �� ���� 88@*��/�� ������� ���� ���� ������
������! ��� �/�> �� ��� �� ������� ���� ������� ����
��& ;& ��� ���&� � ��� �� ����� ���� ��� ���,� ��� ������� ��� ������ ��&�� � ��� 89 �� �#���� �� ����� ��� (� ���� �� ���������� ��� ���,���� �� �� ���� � 7������� � �� ���� ��� � ������ ���� *��� ����� �#���� � ���� ������������ *����*�� % ���� ���� )��� ����� ����� *����*���� (� ���� �� ��� ��*�� ��� � ��� ������� ����� �(� � ���� *������� ��� ���(���� 7������� � ��� �� *��� � ���� ����� ��� ����� �������� �� �! ��� �" ������������� ��� ������� � � ���� ���� ����� �������� ���������� ��� ������ � ������������ ��&�� �������& 7������� � ��������� ��� ��� �� ��&��� �� ��������� ��� ����� ���� ������ ���� �� ��� ������ *��� ��� ������ � ���� ������� ���&� ������ � *��� ��������������� *����*� �� ��� ���,� 4 ��������& ��� *������ ��� ��������& ��� ����� �������� ��� �� ��� �, ���������� ��� (� �(������!
4< -���& �� ���
�� ��� �����! .=��> �� .=,AA �� �������
���� ��� � ������ �� ��������� ������ ��
�������� ����� ���! ����� �� ���� ����
������� ���� ��� ������� ���� 8����� 8�������
�=���� G�# �� �������� �� D � �������
������� ������ �=���� G�# ����������� ����
��H ��� ������ �����! ��� ��%�� �� ����� �� ����
�� � ���� �> �� ,, ��! .� �� ��� ������� �����
����� �� ���� ������� +�>��!= � +�A��!= � =@�*
=$*,/�� =@�*=$*-/>) �� =81*�! 8� ���
+�>��!= �� +�A��!= �� ������� ���� �6����
���� ������ �� ����� ����� �������! ����� �� ����
�� �������� �� ��� �� ������ ��� �� ���� ������ ��
��� ������ �� ������*����������� ���� �� �� ����
������� �� ���� �! =@�*=$*,/�� =@�*=$*-/>)
�� =81*� �� �� ���� ������� ���� ������� ����
������������ �� ��� ����� �)��� �� !� ���A#!
����� ����� �� ���� �� �� ������� ���� ���
������� ���� 8����� 8������� �� ������ ��
@������?� ����(�� D �?� ����������� ���� ��H
��� ������ ����� �� �!�� � B� �� ������! ��� ��%��
�� ����� ����� �� ���� �� � ���� ,� �� /� ��! ���
������ �� ��� �&1 ���������� �� ����� ����� �� ����
�� ������%�� �� 1� ��� "�! $��� ����������� ���
��& <& ��� ����������� ������ �� �*� � �� � (���� �: ��� �11% (��� 9�� ��������� ��� �,��� ������(������ � (��� � �� � (����� �(�1��� ������ � �,���! ��� ����� (��� ��� ��� ������ � ��� ����� ��� ���(��� �(��� ��� ����� (��� ��� ��� ���� ������ � �,���! %(��� "22 (����� ���� ,��� *��� ��������� ��� �: (���� ���� � ��������� ����� � ��9; *���� �11% (���� ���� � ��������� ����� � ��<3� ��� ����� ������������� ����� (���� �� ��'������� *���� ���������� ����� � ��""�!
����'�'���&�� � �� ������� %������ � 0��� 5���� 6���� 4=
���� ������� �� ���� ���������� ������: ��� ��������
�� ���� ��� ��� �� ��� �,��� ���� ��� ��� ���*
�������� �� ����!
0&0& ���<> ��������������� ?��� %�' ���������+<*A� �� �� ��� ��� �� ������� ���� �������
���� 8����� 8������� �=���� G�#! 4� ��
������������ �� ��� ������� ���� /A*���*��
8����� ���� ���� ���� ������������ ������!
+<*A� ��� �� �� �������� �� ������������ �� ���
��������� ����� ���� �������� �� � �� �!>H
��������������� �@=)&#! &��� -� ���� ��������
������ ���� �H @=)&� ����� ��� ����������
������� �� ��%� ���� ���� �/ �� �� �� ��� ��
������� �� ��� ���� �� ����� �� �� ��� �������!
����� � ������� �������������� ���� ��� ����� ����
���� (�� �� ����� ��� ����*��������� �8���� �� !�
���"#� �&1 ���������� �� ����������� ���� �� ��
������ ���� ���� �� ����������� � ��� -� ����� ����*
��������� ������� �� ����� �� 1� ��� "�#! 4� ��������
��� ���������� ���� 0�� ��������� �� -� ����
@=)& ������ +<*A� ��� ����� � ������� �� ���
��������� �� ������� ������ 8@��� ��������
��� �������� ������ ��������������! ����� ������
������� ��� ���� ��������� ����� ��� �&1 ������*
���� �� �� ��������!
9& %���������
1��� ��� ���������� ������ ��������� ����� �� ���
���� �� ��� ��� �� �� �&1 ����������� ��
��������� �� ��� �� �� ��������� �� ���� ����
���! ��� �������� ���������� ���� 2) �� 2==�
���� �� ������ ��� ��������! ��� ������ ����
����� �� ����� ������� ��� ��� �&1 ����������
������'�� �� ��������� �� ��� ���� ��� �� ��������
���� ����� ���� �� �� �� ����� ���� ��������� ��
���������! 4� ����� ������������ ��� �� ��� ���
������� �� ��� �� ���� �� ��'����� �� ������ ���
���� �� ����������� ��� ��� �� ��������!
��� ���������� ������� �,��� ����������� �� ���
����� ����� �� �������� �� �� ������� ��!�!� � �
���� � ����� ����� �� ������� ��� ��� ������ ��
���� �,��� ������� ��(����#! ���� ������� ����������
�� �� �� ���� �� ��� �������� �1� ��� /#! ����� �� ��
�������� �� ������ ��� 0�� ����� ������ ����� ���
����������! ��� ��������� �&1 ���������� �1� ��� -#
�� ������� �� ���������� ����� ����! 4� ��
������� ������ �� ��� ��� ����� �� ��� �������
��������� �� ��� ����� ������! 4� ��� �������
����������� ������� ��B�� ��� ���� 0�� � ��
����� �� ��������� ��� �� ����� ����� ����
�������� ������� �,���! ��� �� � �� ��'�����
������ ��������� �� �� �������� �� �� ��� �����
��� ��!�!� /� > .# �� ����!
� �� ��� ����� ��� ���� �� ���� �� �&1 � �� ����
��� ���� �� ����� ��� ��� �������! ����� ��� ����
������ ������� �������� �� ������ ��� ������ �� �� �
����� ���� �� ���� ���! &�� ������ ����� �� ����
���� ����� �� ���� ����0� ��������� �� �������� ����
�.� �� !� ,��/#! .� �������� ��� ����� ���
�������� �� ������ ���� ��� ��! ��� ��� �� �����
���������� ����������� ��� ��� �� ��� ��� ����� ���
�&1! �� ���� �� ��� ��� �������� �� ������� �� ���
������� � �� ��� ��� ��� ��� ����� �������
���� ���� ������ ��� �������� �� ��� ���! )������
���� ����� ���������� �<�� �� !� ���A <�� �� !�
���>� ���A �� ���� ��� ��� ������ �� �� � ����� ���
���� �� ��� ���� � �� ��� ������� �� ��� ����� ���
����� ������� �� ��� ���� � ��������! ��� �����
�� ����� ��(������ �� 8������ ������ ���� �8+&#
��� �� <�� �� ! ����A# ����� ��� ���H �����
��(������ �� �������� ���� �*������ �������� ��
����� ������� �� ,!A� ��� .B��, ��� ��� �
����� �� �� ",� ��! 4� �&1� ��� ��� ����� ������� ��
���� /!�� ��> .B��, �� ��� �������� ���� �� ���
������� �� ������! ����� ��� ��� �������� �� �� ����
��� �� ��� ����� �� � �� ��� ��� �� ���� ��������!
���������� ��� �&1 ���������� ������'�� ����� ��
��� ��� ��� �� ����� ���� ���� �� �� �� ��� �����
��� �� ���� �� ��� ������!
� �� ��� ����� ��� �� ��� ��� ���� ���������� ��
��� ��������� ����������� ���� ��� �� ��� �� ���
�������� ����! ������� ��� ������ ����� ���
����� ���� �� ��� ��� ��� ��� ��� ��� 0�� ����� �
��� ������ �� ��� �����0����� �����! )��� �� ������
��& =& ��� ����������� ������� �� 9 �� �: (���� ����� �������.�= ����� �*���� ��� ����� (��� ��� ��� ������ � ��� ����� >������� ���� ������� �(��� !22 (����!
42 -���& �� ���
��& 2& ��� ��� ����������� ������ �� ����� �������� ���� ����� �%"89 51��9 ��� 51!??� ��� � ������ �,�� ���� ���� �667'�2"8�� ��������� ���� �� �� ����$���� ��������� ���� �(��� *���� �� �� ���������� � ����(�� �,�� �������� ������� �(� ��� ����������� ������ �� (����������� ���� ����� @�98;�1& @�?�8�1& 17%'14'!"� 17%'14'<"9: ��� 16�'8� ��� ������ ���� �� �� ����$���� ��������� ���� �(��� *���� ���� ���������� � ����(�� (����� ������� ��� ��� ����������� ������ �� � �������� � ��������� @0?2 ��� @0?2 ������� *��� 71:� �� <2������ �� ��� ����� ������������ ��� ����� (��� ��� ��� ������ � ��� ����� ��� ���(��� �(��� ��� ����� (��� ��� ��� ���� ������ � �,���! >������� ���� ������� �(��� !22� "22 �����!
����'�'���&�� � �� ������� %������ � 0��� 5���� 6���� 41
�� ��� �� �������� ������ �� ��� �������� �� ���
��������� ��� �� ����� �� 1� ��� ��##! .� ��
�������� ������ ����� ����������� �� ����� �����
�� ���� ������� ������� �� ������ ��������
�������� 0�� ����� ��� ��� ���� ������� �� ���!
���� �� ���� ����� ��� �������� ������� ��� �� ����
��� ����������� ������ ����� ����� ��� ����������
�� ����� ���������� ������ �� ��6�����! 8�������� ��
��� ������%�� ���� ������ �� ���� ���(������ ��
�� ������������! 1����������� �� ����� �� ������
��������� �� ��� ��� �� � ����� ��������� ���������� ��
�� ��6����� ������ ����� �� �� �������� �� ��� (���
�������� �2� �� 1� ��� �# ���� �������� �� �� ���
������ ��� ����� �������� �2/ �� 1� ��� �#! ����� ���
������ ��� ������ ��� �� ��� �� ������� �� ���� �
������� ���� ��� ������ �� �������� ���! � �� ����
�������� ������ �� ���� ���� ���� ����� ����
��� ���������� �������! ��� �� ���� ����� ��
����� ���� �� �� ������%�� �� ������ �������� ���
�� �������� �� �� ��������� �� ������ !
4���������� �� �� ���� ���� ���� ���� ���������
�� @������� � ������ ������ �� 1� ��� -��## �� ���
���������� �����! 4� ���� ���� ���� ��(�����
������ ��� �� ��������� ������� ��� ����� ��������
��������� �� �� ������ �� ��� ��� ��'����� ��������
������� ��� �� �� ���������!
��� ��%� �� ��� � ��� �� ��� ������ ��������� ���
��� �&1 ���������� �� ��������� ��� �� � ����� ��
��� ������� �,���! 4� ����� ��� ����� ����� ��
������� ��� � �� �������� ����� �������� ����
�'�! 1�� ���� ���� ���� ���� ��� ��� ���������
����� ������ �������� ���� ��������� ����� ��
������� �# �� �� �� �� ��������� �� ���� ��%�
����������! +������� � �� ������ �� �� ������*
���� � �� �� �����! ����� � ���� ��%� ����������
�� �,��� �� ���� ���(��� �� ������ ��� ���� ��
��������! $� ������� ��� �,��� ��� ��! ��%� ���
���� �� ����� �� ��� ��� ����� �� ��������� �,������������� ���� ��� ��%� �� � �� �� ��������!
����� �� ����� ��� ����������� �������� �������
��������� �� ����� �� ��������� �� �������
��������� �� ����������� ����� ��� ��%�!
;& ���������
4� ���� ����� �� ��� ����������� ���� ������'�� ���
��� ���� �� ����� �� �����0����� �����! ���
����� ������ ���� �� ��� �&1 ���������� �����*
�� ��� ��� ������ ���������� �� �� �� ������ ��
0��� �! !� ��� ��������� ������ ������������ ������� �
�� ��%�� �� ������� ��� � �� ��� ��� ������ ����
����� � �����0����� �����! @���������� �� ��� ������
����� �� �� �� ������ ��������� ���������� ��
������ ����������� � ��� ���� �� ����������! 1���
��� ���������� �������� �� �� ��� ������������
�� ��� �������� ��� ����� ����������� �� ��������
���� ���� �� ���������� ���� ��� ������ ����
������� �� ���� ��! 1������� ��� ���������� ��
��������� ���� � �� ������ ���� ������� ����� �����
�� ���������� ���� � �������� ��! ���*��������
�� ��� ������ ��! ��������!
8������ �� ����� ���� ����� �������� �&1
���� ��� ��'���� ���� �� ���� ���� ��� ���! ����
���*����������� ���������� �� ��������� ��������
��������� ����� � ������ ���� ���� (�� �����
������� ��������# ��� ������� �����! ��� �����*
0����� ������ �� ����� ������ �� �� ����
���������� ���� � � ����������� �� ��� ������ �&1
����������! ��� �����*0����� ������ ���� �� ��
���������� �� ��� ������ ��� �� ��� ����� ����
�� ��� ������! 4� �������� �� �� ������� ��� ���������
����� ������� �� ������� ��� ���� ����������
����� ���� ����� � ��� ��� �� ��������� ���� �� ������!
.��� ������� ���������� ������� �� ������� �� ����
���� �� ����� �� ����� ���� ������ ������������ ��
��� ���������� ����� � ���� ����� �� ��� ����� ���
������� ���#� ��� ���������� �� ��� �&1 ����������
���� �� ������� �������� �� ����� ��� ��� �� �������
�������� ���������!
��@��?�������
.� ���� �� ������� � ��� �������� �� ����� 5�����
�� @�� � )� �� ������� ���������� ��!
*���������
�! �! ������� 2����� 5����� <������ ��� �>A �����#!
,! �! ������� I!=! @%���%��� I!D! $6������� �� )! 8��� &�����
<������ ��� ,"" ���"A#!
/! �! ������� I!=! @%���%��� �� �! J���� 3���� 55�� �A� ���"�#!
-! =!.! $����� )������(� ������� �:>� A, ����"#!
>! )!I! 8����� 1!.! 5�������� 5!D! ; ���� �� 5!8! ;��
2�������� � �� 3���� ������ �� )������� �� C)� :6� ,->"
����"#!
A! I!3! 8������� J!=! +�6%�� �! ����� 2! 1������ =! $���������� )!=!
)������� � )!�! 5������� � �� 1!=! =������ 4���������
I���� �� 8���� :6� >�� ����"#!
�! @!I! ;���� )!�! �������� ;!I! ������ 2! ��������� I!+! F������ +!
@����� �� .!2! 2���� I���� �� 3���� 8���� 4���! 6�� �-��
����/#!
"! 1! ;������� ;! ;��K��� �� ;! ;�������� ������ &����� 5��
,�-, ����,#!
�! +! <�� � F!�! G�� 2! F�������� �!8! ��� � @! )���� )! F���� ��
=!.! $����� $�������� I���� :�� �>,�9�>// ����A#!
��! .! )�� +��� =!=! .� � I!5! F������� �� I! +� 8��������
,��-� �� �����!
3> -���& �� ���
��! J! <��� @!F! 8��� � ;!I! )����� =!.! $����� 8!1! 8����� ��
$!I! ������� � $�������� I���� �>� ,�/� ����>#!
�,! J! <��� ;!I! )����� =!.! $����� �� $!I! ������� � $��������
I���� :�� ,�>" ����A#!
�/! )! )��� � I! 8���� D!�! )������ <! @��� =!I!8! +������� �� 5!
) ��� 2�������� � �� 3���� ������ �� )������� �� C)��
��AA� ����A#!
�-! =!=! .� �� !� ������ &����� ��� ,"� ,�A>9>��/ �&��! ��
,��/#!
����'�'���&�� � �� ������� %������ � 0��� 5���� 6���� 34