Documento QUIM1CACLfNICA 1999: 18(1)33-40

Recomendaciones para la determinacion de la concentracion en suerodel colesterol de las lipoproteinas de alta densidad

Sociedad Espanola de Bioqulmica Clinica y Patologia MolecularComilc CientificoComisi6n de Lfpidos y Lipoprotcfn<ls'

DOClllllcnto G. Fuse 3. Versi6n 2

Preparado por Mercedes Palacios. Margarila Esteban. Jose Angel Aguilar. Juan B. Ortola

indicc

oIntroducci6nI Objeto2 Definicion3 MClodos de scpanlcion )' cu.mlificaci6n del coleslerol de laslipoprolcfn:Js de alIa dcnsidad4 MClOdo de referene!a5 Cri1<::rios de c,llid,ld6 ESpCcimcn y lllucSlra7 Rccomcndacioncs pr:iclicas8 Considcraci6n final9 Bibliogmrfa

oINTRODUCCION

La relitci6n directa y o:slrcrha entre 1:1 conccnlr.lci6n de colcs­teml en suero y d ricsgo de presentar cnfcrmcdad cardio\'as­cular fue cSlablccida haec dccada.~. E.'audios epidemiologicosposteriores demostrJron que existfa ademas una relacion inver­sa enlre la conccntmci6n sericH del colestcroltr.msponado porlas lipoprolcinas de aha densidad (HDL) y el desarrollo de ar·teriosclerosis: los individuos con concelltraciones mas bajas decoleslcrol de las HDL prescnliln un mayor riesgo de sufrir ac­cidenlcs cnrdiovascularcs. induso con l:oncenlraciones acepta­bks de l:01csterol. que los individuos con concentraciones su­periores de estas lipoprOlcfnas (I). Se eSlima que cl aumentode un 1% en las eifras de eolcslerol de las HDt se ;Isocin a unadisrnilllKion de un 2 ,I un 4% del ricsgo cardiovilsl:ular. Losposiblcs Illccanismos segllll los cuales las HDL prolegen con­tra el desarrollo de la eardiop:Jlfa corollaria eSlan li1:!ados a Sllfuneion mas import.mle: ellr,lllsporte reverso del colesteroldesde los lcjidos hacia eI hfgado.

EI Nmimm/ Clwfestf."rof £tJI/('(//;O/1 Progmm (2) rceomend6recienlemellle realizar la mcdida del eolcslerol de I:ls HDL jun­10 con cl colcslcrol. ya que cxiSlcn evidclll:i;IS suficicnlcs pamm:eplar su p,lpd «causal" en el desarrollo de la merogenesis. yconsider:lr las conecntraciol\es por debajo de 0.91 mmol/Lcomo factor indepcndiellle de riesgo eoronario. mielllras laseoncenlmciones supcriores a 1.55 mmoUL ser.an protectofCs.

'<.:."""".,ici(", ,Ie I~ <':0""';(>'" J, i\. Aguila,. M. Arr:,,,,. 1'. CI1.:"'''n.•\1. b'cban.F. t'abiani. A. Gin~,. J. ,\. ( .....,"''- (;';"'1"'" J. II. Ort"l~. M. 1'~13C;"". J. I'u'"I p'-",idcn'cl. C. V~II~_

Por 10 tanlo. t:onsideralllos que la delerminaeion de Ia t:on­centraciOll scrica de coleslerol de las HDL debe realizarJ<,C. jun­to con cI eoleslcrol. como pane del pcrfillipoproleieo utilizndopara evaluar 1.'1 ries1:!o indi\'idual de aecidcntc cardiovascular.La grJn imponancia dinica que ha adquirido esta magnilud.asf como la aplicacion de unos valorcs discriminantes de apli­caci6n universal. han rnOlivado <lUI.' diferentes Socied;ldes eInslitucioncs hayan cSI:lblecido nilerios de t:alidad y n:COlllcn­daciolles para su cllanlificaci6n en los 1aboratorios clinicos.EslO es irnporlante porquc los mClOdos ernplcados habitual­mente no alcanZ'1lI los objelivos an'llflicos deseables. y 'Ique­Hos valorcs diM:riminanles se establecieron con unos mcllXktsque no pucden realizilrse en Iii pr.ictica cOlidi:lna de los labor.l­IOrios dfnil:Os (3).

I OB,IETIVO

EI objelivo del presente documento cs hacer una revision sabrelos melodos mas U1i1iz.ados de sepamci6n de las lipoprOlcfnasde alln densidad y la cu.lIltifieacion de la concentr.lcion del co­1csterol de las lipoproldnas de alia densidad. y propone!" unaseric de reeomcndaeiones sobre los mismos. lcndellles a dismi­nuir 1,1 gran v.lriabilidad analflic;l y f.lvorecer su eSI.mdariza­cion en la pnictica asistencial dc los I..bomlorios dinicos.

2 DEFINICION

Las lipoprolcfnas de allu dcnsidad induyen una familia t:Olll­pleja y hClerogenea de parlieulas que varian en ellamano yt:omposicion quimica y que sc manliellen en un eSlado din:lmi­co de intenlceion con las lipoprotcfnas de baj:l (LOL) y mllYbaja dcnsidad (VLOL). us HDL l:onlicncn en su panfcula unamayor proporci6n (. 50%) de protcfnas frente a lipidos que lasOlms lipoproteinas. LIS 'lpolipoprolcfnns prcscntes en elias sonlas ilpolipopmtcfnas A-I (1/3 de la ll1:tsa lolal). A-II. C·l. C·ll.C·IlI. E. A-IV YD. Los I'osl'olipidos son c1 principal componen­Ie lipidico de las HDL (50% del mismo). con menorcs cam ida­des de coleslcrol no eSlerifie'ldo. colcslerol esterifieado y tri1:!li­ccrido (estos dos uhimos en la zona central dc la lipoproteina).

La definici6n de eslas lipoprolcinas no es f:leil y por el10 sehacc de aeuerdo al mClOdo ulilizado para su separ'lei6n.C1:1sicamenIC. el (~oleslcrol de las I·IDL se reliere n la fmeci6nde coleslcrol vehiculizada por hiS Iipoprolcinas de alta densid'lddefinidas por ultracenlrifugacion. En la praclit:a habitual. sinembargo. lo~ principaks componCnles de esta fraeei6n son las

Quilllka Clinica I')<)9: III (I) 33

HDL lipo 2 Y HDL lipo 3, dcbido <I quc est<ls sulx'iascs son I;t~

que so.: so.:paran con Ins Illclodos dc prccipital:i6n rn,b utilizadus,Las HDL so.: cuanliflo.:all o.:n Icrminus dc su conlcnido en eo­

!o.:sterol. ;lUllqUo.: .s610 eonstituye un ~cxto de la masa tOlal. dehi­<l,) a 101 amplia expcricncia ;Il:umuhu.b con los esludios realil-a­dos h,lst,l hoy subrc su 'lsociaei{JIl cun cI ric~go cardiov'lsl:ul'lr.

3 METOOOS DE SEI'ARACI6N YCUANTIFICACION DEL COLESTEROL DE LASL1POI'ROTEiNAS nEAI;rA DENSIDAn

L:I:o. panieul:I:o. lipopwlcie:I:o. pueden scr fr:J(xionada" )' scpara­das enlrt.' dla:o. por divcn-os mctodos s.:gun sus diferentes pro­pied'ldes. allies dl.' prtx:cder;1 su cuanlifi("aci61l. Dcbido;1 quelos rnclodos esl:in basados en prineipios de rnedida diferenleslos resuhados no MIn inlerc:unbiab!o.:s. l:nlEO en las lipoproteinasab.lada:o. l"OmO en 1<1:0. t"OIK"cntracionl.'s dc colesterol medida:o..

Los diven-os IllclOdos disponiblcs p:lr:I I.. !>I,.'par:ld6n Je lasHDL s.: POl'den dasiriear s.:glln eI prindpio ;ll1alitico emplca­do. Los lIl:h lItilil:Kim. en e11'lbor.llorio dinico par.t la s.:par.l­d6n )' poslcrior cuanlific;lcion del coleslerol dc la familia do.:las HOLMln:- M':todos e1C('trofun:licos- M':looos de pl\.'\:ipilacion quimica- MCltxlos tic uhr.tt·emrifugacion- r.,·l':ltxlos ('ombimldos

3,1 Ml'lodos dl'Clrul'orclil'os

Hist6ricaml'll\e I,IS lilxlpmlcinas fut:Ton s..:parada~ por ,'slOsm':lodos en h;l.sc ,I su l,nll:uio y scgun la l'arg,1 de sus aIX)lilX,­proldll,ls, Sc tknumin:lrnll lil}()proldna.s ,Ma, pre-hel,1 )' bCl'l.al cumpar:lr Sll d..:splaJ:<lllliclllo COil olms proldnas sericas co·ll{K:idas: lipoprolcfnas alfa. pr..:-oct:l)' octa. Las primcms dasi­ficacioncs dc las hipcrlip~mias se hicieron scglin los diagra­m,lS obl..:nidos con hIs dislinl,ls c1a~es de lipoproteinasso.:paradas cort estc mClOdo (.J).

Exislcn fundam..:nlalm..:nte dos lipos de separacioncs el..:e·lroforClka,s: las basadas en soponcs no reslriclivos como aga­ruS<l y ,1t:CI<110 de cdulosa, y hiS que ulilizan soportes rCSlri,'li­vos eomo la poliat'rilamida y la poliacril<l111ida-agarosa.

Una vo.:z .~eparadas las lipoprolo.:fnas so.: ido.:nlifiean pOI":- su ""p"L:id<ld tI..: caplal'i6n do.: un o.:olorante Imis 0 menos es­pecflieo- pr..:cipil'lCi6n con compueslos poli<lnionicos- do.:sarrollo do.: 0.:0101" do.: ro.:at·t·iones cnzim,\lil:as dd colcslo.:rol.sobr..: d mislllo SOIXlrt..: d..: d..:elrofor~sis.

- lHedi,ulle recuper,u:i6n de hand,ls sl.'paradas y postcrior..:uanlillcacion tid ..:onll.'nitlo de co1cslerolen las mislll'ls.

EslOS mClOdos d..: s.:paral:ion s..: han illo abandonado progre­sivilmentc tkbidu a su impr..:cisitin ..: incxal'titud. La tillci6ninCSIK:dllc<l. fa im:omplcla recupcmcion de la" lipoprtllcinas yla b,tia so.:nsibilid"d (5) hac..: qllo.: .s610 puell:m ,s..:r t'onsiderJdoscomo IlIclodos semicuamitativos, algo alcjado dc la" nl'1:esida­des ,IClU"lcs, Puedell tlUl.'dar rl.'sl.'n'ados para cicrtos estudio"Cll los quc s..: descc tkl<.:rmirlilr car:il"lerlstiCil" cualil<lti\';lS de1:ls lipoproldn..s tid p:tci..:ntc, como 1,1 disbo.:l'llipoprOl..:inclllia,y p;lm la d"",...ip,:i6n d,jsica tI..: las dislipcmi..s.

•l21'1lclodos dl' pn.·cipil:lciulltIUfmicll

EI prindllio anal iIit'o de estos 1II,ltodos c" aislar la" HDL me­dianle pro:cipilil.... ion ..decti, ,I de las otr.ts Iipoproh:'fnils en un,,:sp<.'..:imo.:n tk suero 0 pl,"'1I:I, p;lrJ ptblcrionn.... nlc medir d co-

:w QUIllIic;tClinic:lI'N'); I~tl)

leslerol de las BDL pre.senle en d sobren"d,mte oblellido Ir,lS1<1 separ<ll:i{m pm co.:ntrifugacion.

La pret·ipilao.:i6n s..: o.:ollsiguo.: poria intel"a....ci6n de un polia­ni6n y un t'alilin dival..:nte. u Olra.s sustancia.s quimicas. con laslipoproleinas quc conlien..:n ;lpoli)XlprOlein" B -(VLDL. IDL.LDL Y lipuprolein,l (<l)- p;tr;l form,lr UIlO" compkjos insolu­bles con lcndo.:nl:i" a sedimcnlar)' lIu,,: luego se s..:paran porcenlrifugacion a b:ti:1 vdocidad. D..: ..:sta man..:ra. si la precipi­t>ldon de las lipoprotdnas con apolipoprotcfna B es completay no precipil:l I'IOL. se puede ....on~idemr qu.... solo Ia:. HDL pcr­mano.:ccn en cI ~obr..:n<lthul1c. Hay qu..: consider:lr (luc. ":11 pre­~encia tic cOllc..:l1ir:lciones c1ev<ld:ls d..: lipoprotcfnas ricm. entriglicC:rido. los eompkjos formados pUl'd..:n pcrlllanet'er..:nsu~pcnsi{in () notation. Por OIm pane, en fund6n del mc.'todo yde l;t~ condil'ion.:.s de pret'ipilaci6n, Olr.ts protein;ls plleden co­prt.'\:ipi...r con las lipoproldn:ls ..:on :lpolipopmtdna B (6).

Est" grupo d..: m':lodos :Ietualm..:nt..: es cI lIl:b milizado pm:1la detcnnin:lcitin haitll:J1 del cotestcrol d..: hiS HOL por hi rclati­\':1 simJllidd:ld, tkmptl de rcali/ad6n. ~'oslO. no rcqucrir ins­lnlll1o.:nlOs sofhlic..d()~ y I" posibilid<ld de su :llItolll<llil-aci6nparci:ll en labor:llorios l"t11l gr.tll c<trga ,,~islencia1.

Los agent..:s pl\.'Cipil:mt..:s m:'is U1ilizado~ son:Heparin:H::loruro de mangancso () I).Sulf,lltJ de dextr:lIlo-domro dc magnesio (ll)

Acido fosfollingslit'o-.... Iomro de lllilgn..:sio (II)Concan.l\ .. lin.. A

3,2,1 Precipil'll'i(lIIl'On hcparin,l-doruro d(' mang<lnesn (II)

Esl": m':lodo, tk""'rilo por Burnslein y S,IIlMilk en 1960 (7).

fuo.: acon....:jatlo por d Ul'itl N/'.w·ardl Clillin' '~m~mlll (8) o.:n1974)' utili"l como agcl11cs precipitan..:s I.. heparina s6dil~a yel doruro tI..: mangancstl (II). A una alfeuota del eSI~cimen s..:Ie :Iliade l':llliidad sufkiellie de solud6n de heparina (5(XI()

kU/L) Y dorllro de mang,ule.s\l (II), p:lr<l oblencr un,1 l'OIlcell­Iraei6n final tk 46 mmol/L. Se manliene 1:1 melda do.: rea,'ciondurant..: J() minu10s .... n hido)' se c..:nlrifuga a 1500xg. 30 mi­nutos)' a 4'C, En una alieu01a dcl sobrenadant .... sc midc la con­ccntr<lei(ln de l'olesterol corrcspondiente a las HOt. Estudiosposteriures demostr,lron que aUlllenlando 1<1 l:oncenlraci6n li­nal d..: c1oruro II..: mangancstl (II) a 92 ml110l/L s..: mcjora la ca­p"cidat! de precipilao.:i6n (Y).

Los Ill,lyllrcs inconvenientes descrilOs del m':lodo son:- Su ill"ompalibilillall con los sislo.:m'ls el1Zimalicos ulilizalloso.:n la m..:dici(in do.: la cont·o.:nlrao:i6n de colesl..:rol que ulilizanl<lmp6n fo.sfalo (/O) debidll a que clmangancso (II) puede for·Ill<lr complejos t:l)n aquel ESla inl~'rr.::rcncia. debida a la IUrbi­del- origillada, no Dellrre cll,lfldo se utiliz,l t;lInp6n tris(hidroxi­mdil)amiml!llo.:lann-HCI.- En mueslras con una concenlrat'i6n alta de triglit'c.'rido pu..:­dCll l.',\:istir faUns en 1;1 precipilad6n pm formacion de un com­pleju inst)luhle de bilj" densid,ld que no sedim..:nlil compkla­m..:nlc (II, 12).

- Otm inl·Ol1\'cni..:nt..: d..:st·rito..:s la gran ,'ariabilidatl de lasprl.'p'lrildollc.s cotllerci,llcs de hepilrin;l. qu,' haec neco.:~ario

cOlllprobars..: I" d":O:li\'idad cumo pr":"ipil:lnl": o.:n cada 101..:UJ).

3.2.2 Prccipil,lci{ltll'nn sulf;[IO de deXlr,lllo-donlro demagllcsio III)EI ..gentc pre..:ipil:lnl": ..:~ uml lll":l.d" :1 p"rt..:s igu"k~ d..: unasulucion de::W gIL de ...u Ifato de dcxlranu de rnaS:1 molar50001M) ) un;1 disultll'ilin 2,0 [1101/1. de doruro dc m,lgn.... sio.CUll una ennccntr:l<.:itin final tie 0.9 giL Y91 mmol/L rcspt:cli­\illl1..:nl..: (/.J). Un:1 ptlsibk m..:jor:l de ..:st..: m':todo l'ons' ..I..:..:nmeldar ,0Iulll,'nes igua1c... d..: una ..oludOn de 20 giL de ,"ulra­10 de dextr:uln llIa":l molar 5tMMX»)' ...-,hll·i6n I,D mol/L do.: do­rum do.: magn..:sin.....on Url:1 eono:enlr:leion rina) d..: 0.9 giL y 45

1Illll01/L respccli\'amcl1\e (15 J. Con C!>le ultimo !>in embargo lo~

\':L1orcs oblcnidos !>On !>ignificali\'amcllIc mas b,ljo~ que con dprirncro. E~la modil'ic;lcion con cI dcxtrano de ma~,t molarooסס5 fue un mCiooo selcccionado en 1983 por la t\/IIl'ri("(1/I

;\.uodm;ul1 ojCfillit"lll ClIl'III;.f,ry. La capacidad de prccipila­cion de este rcaclivo l.'!> d"'bil (/6) Y M: ob"er\',Ln gmn propor­cion de "obren,ld,ulle" lUrbio" de TllUe!>lr:l~con conCl.'nlr:lcione,de",lda" de VLDL 0 lipoprolcin,l~ ,morm"lc".

3.2.3 Precipilao.:i6n con acido fo"l"olllngslico-l·lorul"l)de magllesio (11)Fue descrilo por Bur"lein cI ,II. en 1970 (/7) Y ulilil." comoagenle prccipil,lllle una lllezcl:1 cn proporci6n ~: I de un:1 di!>O­lucion dc .ill giL de (o~fotung"lalOde MXIio y una wluci6n 1J)1Il01/L de c1omro de rnagnc"io. "Oil una ,-ol1Cenlr..ci6n final de~,O giL Y 50 mmollL rl.'"pecli":nllcnle. Una adaplacion (/8)de~ril,1 de e"lc re:lcli\"o loon \·ariacione~ en cI pH Y en las con­centracione~ fin:lIe~ f 1.6 gIL de :\cillo fo!>(olting"lico y 15ml1lol/L (It: dorum de lIlagnc"io eon pH de 2.5 J l1Iejor:t .'u ren­di lllicl1lo y pre"l'nla divcl"Sas verlwja., (/9).

La c;lp,l("id;ld do.: pnxipil,K"i6n do.: I<IS lilXlprotdna" (;Un apoJi­pllprotdnil 13 o.:s bllo.:na. po.:ro d adaralllie11l0 dc los "obrcna­d,mlcs dcpendc dc la concclllr:tci{m de lriglie"'rido. Pam dismi­nuir la \'ariabilid:llJ y en particular ,'olhq;uir un,l mejorreprnducibilid,ld e" n..:ce"ario ..:onlrolar e~lrccharnenle 1000"lo~ P,ISO~ dd procedimienlo. p:lrticul"rmenlc lo~ tiempo" deincubaci6n y I:u. condicione" de t'c11Iri(ug:lcion.

.l2A Precipit,lcion con polieliknglimlEn 1976 Viikari (20) de~cribi6 Il11mclodo qUl' ulilil.:1 lIna di"o­IUl·i6n do.: policl ilo.:nglicol dc lI1a,,:1 molar 60(X) a 1111:1 ('orll'Cl11ra­ci6n final dd 12'J l·01110 <lgCllll' prcl·ipilal11C de 1<1" lipuprold­nas no HDL. Esla l·Onl·...11Iraci6n es e.H'csiv'lInenle ('kvad" yda lugar a un,l prccipiwci6n p<lrcilll de HOL. I>or 10 (lue eslll­din" po~leriorc~ :1l·on:-cj'lll ~e1eecion<lr una corK"enlraci6n finalmenor (II). con 1:1 (I"e ya no"c delCCla :lpolipoprOlcfna B enlos "obrcn<ldanle" y con I.. qUl' pcnnanece en lo~ rni"mo" lo(bla apolipoproldna A 1ll"l'M:llle inicialmcnle en 1,1" Il1Ue"Ir:I".

KO"lner el :11. (2/) en 1985 dc,cribicron una mooifil-at·iontllIe Ulili1.a 1>oIielilcllglicoi 2()()()():l1 9.5':'- en ,,0luei6n amort i­guadora de (o"falO de "odio a 1'1-1=6.5. Lo" m"'lodo" ba"ado" enpolieliknglio.:ol "on los quc po.,eo.:n una mayor o.:ap:lcid:ld depro.:cipitaci{lIl sobl'c la" LDL y VLDL c inciliso VLOL anOl"llIa­10.:". Sin o.:lI1bargo. MlIl 10.' ma" at"eclado" por la pm(:edellcia de10" rc<lt'livo" y 10" (lue rcalil.an una mayor dilud6n de 1'1 mue,,­1m (22).

3.2.5 Prt.'Cipil:K:i6n con cOllcaml\:llin:1 f\EI agente 1lR-'Cipilante e" una "oluci6n de 3..1 giL de n)llc:lIla­\'alina A en "uluci6n de 9 gIL de doruro de ,odin (23).Necc,ila para :-u :IClu:lci6n inler\,alo" de pl-l mil)' aju"t:ldo!>.pOI' 10 '11110 1:1 prcpar:lei6n dd,x: hat'er:-c diariarnem.... La l·apad­dad do.: precipil;lCi{1I1 cs buclla 1:11110 par,l LDL COIllO pitr,lVLDL. oblo.:nicndo"o.: sllhrcn,lduntcs tr:1I1...;par.':111c" en d IOO'Jdo.: 10." caso". inl"lliso l·un COIIl·Cl11nll·iones de lriglictlrido de ll.IJmmol/L. pcro c" un ml.'lodo e,lnl l·on rC"IX'Clu <II rC'IO de In.,e"'lIdi'ldo".

3.2.6 CorhiderJcione,,!>Obrc 1:1 delcnnin:lcion dl' lacOlIl-cnlr.K:ion en ~uero dc1 cole"leml de HOL. ml,.'tIiante IQ!>mclodo>, de :-Cp:lr.ld6n de 1:1:- HOI. por preeipil:ll.:i6nDunlllic 1;1" iihima' deC,tllit~ I.. o.:u:mlifieaei6n del CtJlc'lerol dcla' HDI. en lo~ lithomlorill~dinil·u~ .,e ha rc,i1il.adu ('a,i exdu~"iV:lllleIl1C por o.:"to., l11ellldo". aunqlll· hay lIna l..:ndenl"ia prcvi­"ihlc a ahandllllarlll.... Por dill, c ... inlcrcs:1l110.: h<lccr ,dguna.,l·uu"ider<lciono.:" lo.:ndenlo.:s it Ml 0.:'lalldariJ:lo.:i6n y a di'lllinllir lavariabilidad inlra y cnlre laoor,llorio,,:

3.2.6.1 EI O(oc..."o inicjal dl,.' pn:o.:ipil:lCi6n e!> muy scn~ible ainlerli::renci:I' CXlerna,> y requierc un:b condicione~mu) con­lrolada~ de pipelcado_ hornogenci;..ilci6n de la n'K'l.c1a r~acli\a.

1l.'lllpcr.tlUr.t } Ilcmpo de incubaciOn. a~i como d re~pclO c-.<:ru­pulo:-o de lit" (-(JIldicionc, de cenlrifug:lCion indic:lda, por df:lbrie,1II1e (:lcekmei6n cxprc,,:ldit en g) c\e11lIlallempcrJIUr:ldc incubaci6n) )' c\·il:lr rCIr:l"O, IOn 1:1 ~cpar:ldon del "obrena­dante. E"IO" pa~" "on difidlmcnte aUIOl1lalil.abk~en la pr,ic­liea habilual aunque "e h,l inlCl11ado f,lcilil,ll" C(\11 pipcteadoro.:.,alll0111alico., 0 0.:011 cl o.:mplco do.: llibus como.:l·ci:I!o.:S prcparadu"con d reacli\'o precipit'I11IC.

3.2.6.2 L:I efeClividad de la "kp;lr:Jci6n del mt'looo e!o.:gido:-c debe e":lluar en e~pccimcne"de p;.it·ienlc~ ;l concenlrJcionc~

variable" de lrigliccrido. La pre"cncia dc quilomicronc!>} con­cenlr:lCione, de\ada" de la:o. VLOL puede 'oCr la cau~ dl.' una"obrcc"limaci6n err6nca del t'oh.:"lerol c011lenido en 13" HOt.Se rt.'Comiendan la~ "iguienle~ pmeb..., par:l e\ aluar la e"pccifi­ddad dd rn"'lOdo elegido:- rcalizar Ullit declrofore"i., dd prccipilado re"ollibiliLaJo yIiIvado eon c1orllro dc sodin (0.6 1I101/L) Ydel ~obrcnadal1\eob­lcnidos Ira" la t"asc de "eparill·i6n de las liporrotdnas con ,qXJ­lipoproteina B. En d "Obrell<llhinle "" debcria ob""rv,lr s610 1:1banda '111''1 de I"" HOL.- \",llor:lr la pre.loCnci'l de :lpolipoproldn:I:o. A-I} B cn cI ~bre­nadame y precipilado rc!>Olubiliz:ldo. La pn:.-..:nda de apolipo­protdna B en eI M>brcnadamc >,ugiere"l1 ("(Inlaminacion ("(In li­pt>prOleina B cn eI :'>Obrcn,ld,lIlle "ugierc ,>u cOnl:unin:lCion I.:onlipoproldn,,~ no HDL. y aha~ concentr.tcionc., de apolipoprotd­na Al en cI pl"t."(·ipitado indican pn.·I.:ipilaci6n (Xlrdat de la~ HDL.

:-.2.6.3 La l'uantificaej{;11 IXl"lcrior del ('{.k;:,lero! en d ,,0­brclwdante Ilblo.:nido so.: pllede re:t1 il.:lr en 'lIlali/.:ld(m:s alltoma­lkos. E" cOllI'enielllo.: "dectlar I<IS pruporo.:iono.:., do.: Illueslra yrl'<lClivu eOIl el fin de con.\oCl;uir UrI,l;:' 'lb"orb:ull·ia, 6plima:o.. dc­bidu :1 I,,~ b:tia~ concenlr:lcione, habilUak" de colc"ll~rolde la~

HDL y a 1:1 diluci6n que"e iruroduce al aii:ldir 10" rcaCli\l);:,prcdpitanlc;:,.

3.2.6A ElllrMo de Illalkriak" de COnlrol cn tooa" 1:1:0. ,cric,anaI11ic:I:o.. -.omelido~ al pn:)I:c-.o de '>Cpamcion al igual que la"rnue"tr.t" de pacieme". E~ de:-cabh.' que ~e,1ll e'lx'cifico~ p"r.lde~cartar la innucn,'ia de 1;1 l1l,llriz de 10" I1llllerialc" habilu,,­Ic~. y con \'itlol" :I!>ignado por un m6000 y proccdimiemo t·onlra1.<lbilid'lll cnnocida. EI nllmo.:ro de mal..:ri:lle" de control dc­seable son 2 y ,·on Ulla COrlCl'ntr,ll'i6n rr6xim,l a los v'llllro.:.,di"criminante" de I;t conco.:nlraei611 ell "uo.:ro de co!o.:slerol do.:HDL (0,91 Y 1.55 mmollL).

3.2.6.5 En lo~ crilcrio" kll la "c1l."("cit1n del fCil('ti\"o prccipi­lante .'>C plledo.:n con::.idl.·mr lo~ ,igllknte" a"pc"IO>,:- EI cfl'CIO de,(avOrJblc c<lth:ldo por la dilu,·ion de 1:1" lIlue,­Ir:t" de ~lIero con d re:lcli\o prccipilantc en d que '>C delenni­nar:, po"lcriorn'K'llle la concel1lr:lci6n dt' t'Ole'lerol.- La (R-'l..'ul'nda de prt.'Cipil:lCi6n incornpkla de 10" ~uero' ,'onl·oncenlr.lcionc, clevada" de lrigli('crido. m:iximo.: "i 1,1 alto.:rna­liv,l d,lda por algul1o" m':tnJn" c" diluir :llin m:b la mllo.:"lra ini,o.:ial. Por clio c., d....","·on:o.....jabk r~'ali;.ar la "cpllral'itln en <lqlle­lias mue"lra., que no haY'l1l ~ido IOIl1"da" cn :lY"I1<1".- En E.,paii". 1:1 mayor parlc dc 10' laboralorio, dinico" ern­plc:ll1 re:leli\ 0" comerci:lle, de ,ulf:IIO dl' de\lranO 0 fo"ro­lUn"gtalO d.... m:lgne,io. Segtin 10" dato" del ,·orllrol de e:llidadde la SEOC del alio 1996. un 75t} U1ilil.a acido lo"folung,licoy dororo de Illagne"io (II), un 15'1 ~ulf:Jlo de dexlrano y un~'l policliknglil·o! (2-1).

J_J i\1{>todus de ullracclllrifllJ,:llf:hill

L:I Ullrlll·cntrifugacioll l'" cI print'ipio analflil'o !,."I,bieo panl lit,eparaci6n y cuanlifk:lci6n de Ia~ lipopwlcina'. En ell,l ,e

QuimkaCiinkal·)tN: ISII} :<5

aproveeha el hechn tk que las lipopmldna., ticncn lIna dCI1'i­d"d inferior (II re~1O de la!o prOlcina~ pla!ol1l:itica!o y ~ flierLa ~lI

notao.:i6n ;1 densid:ldo.:~ conneta~ por medio dc campo~ gm\ ita­IOrio!o inlensos. Dc hecho 1'1 nOlllo.:ncl:ltum d,bica utiliLada cnla liter.lIl1m pam de.-.cribir la' diferenle:. lipoprQ(cina~ :.0.: ba~:1

en ~u~ dcnsidade:.: a~" la~ VLDL indu~cn paniculas cuya den­~idad e~"$ de 1.006 kglL el illlcl"\'alo de den!oidad dc la!o LDL:lb;HC;1 de 1.006 a 1.1)63 kg/L Yel de la!o HOL entre 1.063 ~

1.110 kgIL. concrclamcnle 1.063-1.115 kglL par:.I la fr:.lcci6n 1dc la~ I-IOL y de 1.125-1.110 kg/L pam la fr:.lcci6n 3.

Dado que la ultr.K·l'l1Irifllgaci6n permite la ~.:paraci6n dc la~

lipoprOlc1nas u1iliL'llldo critcrios de dcn~idad, aclllalmel1\e l'~

considcrada COlllO d proccdimicnlo <[,.: comparadlin para I:t sc­paral'i"n y ellanlifieaci6n d.: las lipopro1dn;I~. Sin cmb'lI·go. IiiultraccIllrifugaci6n no cUlIIple los estrielo:. crilerios nec.:sario.'pura ~er considcr;ldn mctodo de refert.'nda: la rccupt.'raci6ncumpkta y rt.'produdbk c~ difkil y 1:1~ fr.K·cionc~ obtenidu!o:.on heh:rogcn.:as y puedcn comen.:r otra~ p;lnkula~ funciona­Ie,. No obstant.:. ~ de~cribc a cOl1linuaci6n d;ldo qu.: ;Ktual­melllc cs l'on~iderJdo ..1r.l11sitoriaml'ntc.. como lal y habitu:ll­men Ie e~ utilizado para la validaci6n d... 10:. otros mctodo~

habituales en cl>tudio.. cpidcmioI6gico:.. puc:. lo~ \alore.. di:.­criminamcs e~tablccidm. p"r... una ;lplil'"ci6n uni\"ehallo fue­ron con eSlc lipo de metodos. Exislcn m::. lipo.. principil1c~ dcullr..lcentrifugad6n: ......-cueIKia!. cn gr..ldiente de densidad y ul­lraeentrifugacion I.onal.

.1.11 Ullraeel11rifugaei(lIl secw.:ncialFue dcscrita iniciallllcnlc pOl' Havel el al. (25) (~n 1955.51,'bas:1 en rc,lliz,lr repclid,I" ultraeenlrifug,lcione" aju"lando ~ue ... ­sivamenlc los infrilnOldmllc:, oblenido,~ a la~ dcn.. idade" limilede cada una de 1:1" familial> de lipoproteina:. que qucn':ll1os ai:.­lar. Las lipoproteina.. I-IOL sc pucdcn :li..1:lr a un,l densidad de1,210 kglL de!opu6 dl.' ,eparar las VLDL)' LOL. Esc m.'tOOol'I::quiere lantas ultmcenlrifugacione.. sUl·l.'si\,as como c1a........ deIipoproteinas quer.unm. ai:.lar.

Es laborioso. prolongado y puede d:lr Iligar a :llIerJcioncs 1,':.­IrUl'lUrales dc las HDL pro\'()Cada.. pOl' anefactos dur.ll1le cIproccso. Adclll:is cxi~len OIrJs "ubpobl;ll.:iones. habilualmenleminorilarias. de olm.. lipoproleinas (HOL lipu I con inlervalode dens;dad de 1,055 a 1.115 kg/L Y lilXlllrOlcina (a) con inler­vaIn de dcnsidad de 1,055 a 1.085 kg/L), que pllcdcn ai~lar"l.'

con 1;1 pobhlCi61l de las I-IDL. Se 111ilizil con lines prcp<lr:llivos,pero su lllilidad ellnica c., Iillli1ada.

3.3.1 Ultracc111rifugaei6n ('n gradiente dl' den.. idadE~le I1lctOOo pcrmile la :-cparad6n de ];b prindpal<:.. c1a~!o d.:lipoprolclnas)' sus l>ubf.....cciones cn una :.olil u1tracemrifug:l­cion (26). EI procedimiemo consistc en coloe:lr cI especimen(prc\'iamel11e aju.. tado:1 una dcnsidad :.upcrior a 1.210 kglL)en ... 1fondo de un IUbo de uhmce111rifuga y supcrponer sobre dlllisl1lo solucionel> dc di\"en.al> concenlrJCioncs de brolllllro depota.. io con dcn.. idades d.: 1.210. 1.100 Y 1,000 kglL. Durante];1 ultracentrifug,Il'i6n la.. lipoprolcfnas ~e di~lribuyen en elgradienle de aCllerdo con ~u propia densid,ld: en la pane infe­rior dcllllbo se obliene .. llero dcliciente ell lilXlprolcfnas YIXlr':Ilcima ell eSle ordl'll las HOL. la.. LOL. las IOL y par iiltimolas VLOL.

Es lin mCludo rel;llivillllenc rapido y, por rcalizarse en lllla,,0101 eelllrifugaci6n. CVil:IIXlsibles contamin:lciones. La neo.:e­..aria idcIllilieaci6n vbual de las lipoprotcina!o pam su posll'rior~par:.lci6n !oe con"iguc medianlc la adici6n prC\ ia del coloran­te :ILul de Cuorn:I.."ie, Lo" principa1c.. in('onwnienlc.. de-.crilll":.on d niimero reducido dc rnuestras que pucdcn SCI' proce~a­da" y Ia dificultad de :.epamci6n de familia.. de lipoprotelna..con densidade:. ll1uy pr6xil1la~, como la' HOL lipo 1 Y la"HDL tipo 3 (22).

.'6 QUilllic,1 Clilll";;1 I'''''': IX(I J

3.3.3 Uhracenlrifug<lcilin :Inalltica 0 Lon:t1La ultmeentrifug:lci611 Lonil!. lambien lIamada :ll1alflica. e:. unn1£-IOOo :.ofi'lic:ldo pam d an:i1isb l'uantilali\ 0 de la., lipopro­lcfn:b de:-arrollado en 1950 ~ que comimi:! ho~ utilil.;)ndm.;: enalguno:.l:lbor;llorio, de ime~lig:lci6n(17). Las di\er".." lipo­prOI""na, ,on ...eparada' <;cgun 'u \clocidad do: notaci6n ~

cualllificada., pol' rcfr.l(:ci6n. pol" tanto ..... pn.-ci"a de un ,i ...ll:.'l11aoptico incorJ)omdo .. la l'emrifuga. E.. l.: m~tOOo pennite I1ll'<lirla ma"" lot;11 de HOL. pero no da informaci6n,.,oore la mmpo­.'iciOn en 1ipido~ 0 IHOICin;)~. Requiere equipo" e"pcci"lc" yllna considemblc expcrienci:1 en c1 ..ntili"i., de datos. Por C,I:I~

razones C~le lipo de ultracentrifllgacion no -.c Uliliza en los la­boratorios dinico".

3.3A Ultr,\Ccnlrifugacion a den,id,ld 1.063 kglLLil scpamci6n de las I-IOL st' lIe\'a a cabo en una soli! ultmcen­trifugaci6n (I den!oidad de 1.063 kglL (lX). En 1:1 fmcdon ~u(X.'­

rior notan las lipoproteina" de dcn~id;ld mcnor que b!o HOL(10:, quitomicrones, la:. VLDL y la" LOll ~ qued:m la" J-10L ~

las prOtelna' ...erica... en la pane inferior. Si a cominuaci6n ...eaju~ta eI infrJnadam"':1 una den.,idad de 1.210 kgIL ~ ~ :.ome­Ie a una nue\a ultracentrifugaci6n,:.e puede ..cparar la.. HDLdel resto de I;I~ proleina:.. Sin embargo, para anilisi~ cU:lIllitati­\,0.. sc con~idcra :1 I:I~ HDL como 1'1 frJcci6n de dcn~id"d 111:1­yor:1 IJl63 kglL.

.3.:1.5 Con~idcr:l(·ione .. sobre los l11clOdo:. dellllr,lCel1lrifugilci6n parOl 1;1 sepilr<Jcion dc 1,1" HOL en slleroy la determinacil'ln de la COIKcnlnlci6n dd colcsterolde las HOLLa ...eparaci6n y cu,lIllilicaci6n dt' 1:ls !-IOL por ultmc<.'r1trifuga­cion prO:5<:nl;1 ;llguno.. probkmal>.3.3.5.1 TOOo:, los procedimiemos dc uhr.K:cnlrifug:tci6n par... 1:1:.o.:paraci6n de lipoprotcinas son rclati\'anlCl1le earos pol" c1 cos­Ie dcl cquipo y c1liempo de opemdor n.'querido y por talllo:.onulilizado~ :.olo ... n alguno.. laborJlorio:. especiales 0 con fine:.de in\"estigaci6n.3.35.2 La fmcci6n de las HDL sc puede comaminar con tipo­protelna.. no HDL.

La lipoproleina (a)...e di<;tribuye en un intervalo de den"ida­des. enlre 1.050 y 1.110 kg/L. en1re la HOL y LDL. y por tanlOpuede ser ..eparada en parte junto con bs lipoprOlefnas HDL.prodllciendnse \In error por eXCCHl propor('ional a I.. ('oneen­lr:lcion de lil>oprolcina(a) en suero (2CJ). Est" inlerferelleia esimpon:mte puc:. apro,~ill1;)damenlc cI 2S'if- de I;) poblaei6n ge­neral presenta concentraeiones pla~l1l:ltic:l~ de lipoprolclna(:I)..upcriore:. a 0.3 giL.3.3.5.3 La:. c1evada:. concentra('iones salinas utiliLada~ paralos ajusles de dcn:.id:ld pueden a1terar la:. caraclerislicas fisico­quimicas de la., HOL (30).3.3.5A La re1:upcmci6n dc la.. HDL e:. a menudo inferior al90'>.

L:I fiabilid:ld del melodo depcndc de la habilidad tecnic"del opcrador para realizar una rccupcraci6n y tran..fcrcneiaexacta de I:I~ diferentc.. fracci(Jrle~ de"de ellubo de 1:1 Uhr.l­ccnlrifuga.

Inlluyendo ad<:11l'b, la dilllCi6n, 01 vel'es.::n una prol>orei6ndc..eonoeida. de las fraccioncs fCcll(X.'radas.3.3.5.5 E.. dificil cI ,Ieeeso a nWlcri,llc" de control ad<.'cliados.pues cslO" dcbcn :.cr "fresco:.» )'a que 10.. procesos de liofilil.a­cion. habilualc~ pam la conscr\"..ci6n de los Imllerialc~ de con­lrol. producen mOOilicaciones (i:.koqufmk:ls en la~ lipoprotei­nas que influyen en la rccup<.'raeion y e .. tabilidad de la"lipoprolein:1l> y su:. componenle".3.3.5.6 Son aplicablcs las n.."COl1lcndacione~ n:spccto ala deter­minaci6n de la concentraci6n dc l"Olc'lerol antcrionnent.: de:.­('rila.. pam IOl> nlftOOos de pn.--cipil:lci6n.

3.4 MCiodos comhinados de ultracentrifugaciony precipilaci6n

En e~lC' ap'lnado ~ il!,'rupan los mcuxlo~ que combin;m las ca­nlclC'rislica~ de m:is de uno de los dC1\crilos anlcriormenlc. EIIllclOOO rccom.:ndado aClIl<llmcnl.: pilnl la scparaci6n habiluald.: las HDL por la Lipid U(·.I'('ol"ch Clinin (X) aprovccha lasvel1laj'ls dc los mclOdos dc ullracenlrifugacion y precipilacion.Inidalmctllc. ~c rcalil.a una scparacitSn por UllraCl,~nlrifugaci6n

Y 1)I\.--cipil;lci6n. Inicialmcnte. sc realiza una scp;.lr.tcil'in por ul­Iracentrifugaci6n a dcn~idad 1.006 kglL. par.. ;Iislar VLDL yquilomicrollt:!o de la1\ LDL y HOL. A cominuaci6n. ~ precipi­Ian ~Iecli\'amenle las LDL del infnlllad;lIlle. y por uhimo 1\Ccuanlific;1 cI cok.~lcrol de las HDL que pcrmancccn en e1 so­hrenada111c.

Dcbido a que en cl primer paso se separ,ul las liplJprOldna.~

l·on ililo tOl1lenil!o en lrigliccrido (VLDL y qllilimitron.:s) s.:c1imin;1 1;1 po~ib1e inlcrkr.:n<:ia dc las mismas con los agcllIc!o(IUlmicos pre<:ipil;lIllcs. Dc est.: mooo. puedc ulilizan.e eual­quia;1 dc lo!o metodos de prccipiladon dcscrilO!o anteriomlell­te.

3.5 !\'Ictodl).~ dirc(·los

En e!>los lillilllOS aiios. ~c Iw hcdlO un c~rllcrt.o il1ip0rlal1le par;ldC~ilrmll'lr nucvos mclodo1\ mcnos laboriosos y C01\IOSOS. qUl'M::'1Il f;icilmcnle aUlomalil.abks lcniendo en (·uenta cI gmll au­menlo de 1'1 dcmanda de C1\I;1 rnagnitud y la gr..n variabilidadanalilica alribUlblc a la impt}!>ibilidad de SII alllOl1\;llll.aci6n.Los invcl\ligadorc!> h.m discfl'ldo proccdimiclllo1\ can el fin deellillllific;tr el cnlcslerol por mClodos enl.irmili(·o1\ en 1111 sislC­111:1 dond.: se inhibc la reaceion del ('olcslerol (·onh:nido en lasIipuprol.:i1H1~ no HDL. ESla inhi bk ion s~ puedc real izar condifercilles principios .1I1:Jlflit·uS:al clll.irnas !lltl(linc;ld;l~ WI! (lnlielilcru;licnl y 1\ul(alo dc c:H'i­c!\l(kxlrin;I''' (31). La a-cidndcxlrin;11'oulfalad;1 en pre~nciadeiones lllagllC1\io y a pH neutro aClll;l como agente l>C(·UCSlraJ1ledd co[eslcrol de 1'1 lipoprolcinas con baja proportion prolef­na/lipido ((Iuilnmicrnnc~. VLOL y LOL). Las erlli11l;1~ co1c~le·

rol eslemsa y colcslerol osidasa 1ll0dificadas con IXlliclilcngli­('01 6000 l1Iu~slran una a(~lividad calalflka sclctliva hacia eleolcslcml de HDL. r~i1CCiOI1,lI1doCOil d eolcslerol de [;IS lipo­pWlclllas cn eI ordcn: HDL> quilomicrones> VLDL> LDL. EIlllecanisl1lo de dicna ~dcclividad no 1\e n;1 demoslmdo c1am­menle. ;lUnque pu...'dc C1\lar rel;ldonado con la eap:lcidad de re­con(x:er difen.:nda1\ cn 1'1 hidrJ.laciOn. (·arga 0 tam;tflo de la1\ di­f":rl'nll's lipoprolcfna:-.b) (loljclilcncljpli de 1Il'1..a mohr 4(X)(! Y ;lIllicuerpo.. COIllrJ. la~

ilf!plillOpr(l\dnas B y C-II! (32). EllXllidiknglicol forma com­pkjos cOlllos qllilimicroncs. las VLDL y las LDL y los anli­('lll,'rpos prodllccn ilgreg,lllos COil dichus lipoprolcll1as: iI (·ol1li­llllacitJn !>e produce la reacci611 enzim;ilica del colcsleroJ de la:­HDL lIue pcrmall\."'t.'e en di1\0Iuci6n.c) (lolirnero.. )' (loljanione::, que forman complejo~ 110 r..:activo~

con Itr.> quilorllicrolle~. I;t~ VLDL Y1:11\ LDL. La!> ~IOL ~ solu­bilil.an por un delergellle libcrando d coleslerol y 1\U1\ c1\lere1\que pueden 1\cr cuanl ifkadm por mCl/xlo1\ enl.im:il ico:- (.U).d) anticllenXl~C!lll!r;t I;l~ ljP(Jpro!cflla~ con ilP..l.l1.il'0!1mlcill;1 B(.1-1) que inhiben dirccl;lIlh..:ntc I" re:leeion dd C!llcslcrnl conle­nido en las HDL (.i·n

3.5.1 COl1sidemcione~ !>obre 101\ lIlclodo~ dire(·I01\ p;lm ladel..:nnin;lci611 de 1;1 t"Ol1cenlr.lciiin del t"Olc~lerol d..: I;t~ HDLLI m;lyor \,el1l:lja de e~lt)\, lllclnd01\ C.. I" elimin;lcion de los pa­:-01\ manuak~ dc 101\ procedirnicnto:- de precipilacion. 5e han;Idapladn a difcrcllIe1\ ;lIIali/ador(·~. dondc 1\C lIe\':I a (·abo la

cuanlifiC'lcion. junto con cl colc:-lerol y lriglic~rido. en un (ini­co e~pCcirnen con I:ls consiguicnle1\ \'elllaja!> que clio suponeen 1m labor"lOrio1\ clinieos con gmn demand'l a!>blenciaJ.

P.:ro C1\IOS nue\'o:- mClodos y n:acli\'o!> lod:1\ ian debcn ~er

e\'aluado!o en profundidad. p;lniclilarmcnlc par;l cOn(x:er 1\i '11­gll110 dc e1los puedc 0 110 Sub.~lil11ir:1 los 1llclodo~ dc precipila.ciol1 h;lbituall1lcnlC uliliz;ldos. Todos ellos dchen ~.:r validal!llsy <:ollllwrildos robllslal1lentc rr.:nle ;11 mClOdo de rdcrcn(·ia.con cl que se cSlablccieron 101\ \'alorcs dist:rimin:llllc1\. y dchenscr c:lp:lce~ de cumpJir los crilCrios nnnlilico" de ('alidad deri­nido~. La1\ rabrieamc!> y distribuidore1\ de reaclh'o1\ debcn e1\la­bkccr el ~islcma adL'Cuado de IrJ/';lbilidad. exigible a la~ deler­minacioncs de Hpido:- y lipoprotdna:-.

Anle la posibilid'ld de un c;1I11bio .1 eslO~ rnclodos. cad;l la­Ixlr.tl0rio d..:bcria comprnbar:- La inexist.:ncia. \1 evenlual eorreccion. de dif.:rcnciil~ signi­licali vas con los rt.'.~lIllados medidos IXlr el I11clodo aClllillmCI1­Ie Iltilil.;ldo. m..:dianh: un anal isis de regrcsi6n y dc comp;lr'l­cion de mcHKlos ;Ide("llado. Prc\,i;lIn..:nle. se debe cOl11prob;trque elmelOdo aclual. gcncnllmenle de pl\.'Cipilacion. liene un;tinexactilud ;lceplable. medi;lIlle cI cmpleo d.: maleriale1\ decontrol con un valor a1\ignado mediante un melodo )' proeedi­rnicntos atleeuados. 0 mediante 1\i:-tcmas de control de [;1 c;1li­dad espcdficos de las dClcrminaciol1cs lipldiea~.

- Comproh.u· que la iI1lprecisi6n il1lerdi<lria de lo.~ Illclodus di­reclus cs inkrior ala :i1canz:ld:1 por los 11lclodos d.: precipil:l­(·i6n.- UliliZ;lr mal..:rialcs de calibr.lcion con lr.u.abilidad dclinid'l.asi cOl1\o11lalerialc1\ de conlrol preferibicmellie con v;lloresasignado1\ por un tlltlado y procedimienlo dc IrJl';lbilidad defi­nitla.- Comprobar d cornponarniclllo frente ;1 1\Ucros con c1e\'ada.:onccntradlil1 lie lrigliccrido y de lilxlproldl1as VLDL y qulln­mil-rlllles. aSI (·orno OIHIS e\'el1tualcs il1lcrrcretlles.

L;ls primcr;ls c\'nluaciol1es publicadas (35·37) indican (Iueposccn 1l1l:l i11lpl\.'Ci1\iol1 armlilic:l1\imilar 0 rncjor a las concen­tr.lcione1\ con signilicado clinico. La illexacliHld 1\e debe e\'a­luar en e1\ludios m;h alllplio~ y por (·ompamci6n con d mCIOOode rcfercnci;1 l\.--col1lend;ldo.

4 MI~TOI)O DE REFERENCIA

EI desarrollo de Uti ~i~te11la dc rekrencia par:1 la.~ l1Iedicioliesdc Ia (·oncenlr.lt"ion de (·olcslcrol de 1:11\ ~IDL. como cxi:-le p;tr:1la determinacion dt' eolcsl":rol. ncce1\ila. en primer lugar. unadefiniei6n dam de C!>t:l~ Jipoprotcfl1a~ indepcndiclllt' dd mclO­do ulili/ado p;lr.t ~u ai~I'lInicnIO y en ~gllndo lugar. cl dC1\alTO­110 de un mClodo definili\"o. Aun(IUe esla:- condicione1\ nil 1\Cellmplcl1 a(·Hralmcl1lc. exi1\lc un con~cnso mundiaJ :-obre la(~orl\'enieneia de seguir lIliliZiindo (·OIllO punto de «rdl'rellcia»c1ll1clodo (38) dcsarroll'ldo pm cI CI'/lIl'r!"r Oi.l"("(I,\·('.I' Cml/ml(lilt} P/"I'l"t'lIfiOI/ (CDC).

ESle mClodo no ha sido aprobado y \'alidado C011l0 melodode rcfcrencia en cl M'llIido e~lriclO. pt'ro ha !>ido la ba~ de lo~

alllplio~ ..:sludiOl\ epid":l1lioI6gico~ y c1inicm en lo~ quc M: fun­darnClllan los \'alore1\ di1\crimimllll'::- ulilil.ado:- j:);Ira la a:.igna­cion del rie1\go t"oronario. Por lalllO. esle mclndn St: pUl'dl' cnl1­~ider:lr el punto de referenda que 11lal1lendr;\ 1a lIni{m Cl11re lasIlledid.ls dc (·olcslerol de las HDL por clwlqlliel"il de los I1lcIO­dll~ habiluaks y 1.1S ha~cs dc d<lIO,~ cpidemioJ{)gicas di~pol1i­

bk1\.EI II1clmlo d(' referencia propue1\10 es un prncedimicnlO

combin'ldo que ("011:-1;1 dc Ire1\ pa~)1\:

a) ultrac..:nlrifugacion a 100000xg y a~"C del e~pCcill1en;1

densidad 1.006 kglL. 10 qu.: pt.-nuile 1;1 !oCp;lmci6n de quilomi­(·ronc!> y VLDL en cI 1\obrenadallle.

QlIill1it"aCilniuII<)<)I); IXII) :l7

b) pret'ipilad6n de lipoproldllas qu.:: contienen apolipoprOlci­n,l B, en d infranadante oblenido, con heparina y c1oruro dem,mg,lIleM) (II) ,I cOlleenlr:lcion limll de 46 Illmol/t.c) lIledicion de la eoncentraei6n del eolc~lcrol de las t-IDL end loobrenadante por cI mt.'todo dc rcferencia de Abell-Kendallmodificado (39).

Elo un m":lodo It.:CnicamClllC IaborioM.l. CO~IOM.l. ne<.'e~ita grJn"olun~n de mueslr.t )' disponcr dc ultr.lCenlrifuga y malerialcsapropiado~. pero es d metodo rlocomend:ldo parJ e~labJccery('Olumlar la exat:tilUd de los melodos habitualelo. asi como para lacvenlual \'alidacion, con finelo de inw~ligacionepidemiolOgica.de la ulili/.at'i6n de los OIros Jllelod~ habilualmente utili7.ad~.

EI CDC. en su esfuerzo parJ eonscguir una elolandarizacionadccuada en I;llo medidas de coleloleml de l:lS HDL. mamienepmgr.ull;b dirigido~ a la industria pam la e\'aluaci6n de la~ ca·rJelerislic,t~de lolo reaclivos respcclO a esle melodo de referen­cia (2X/.

5 CRITERIOS DE CALIDAD

Lo~ problemas de la cuantiticaci6n dd eolcslerol conlenido enlas HDL son imporlantes y IOda\'la no han sido r,::sue!los porcomplclO, a l'ausa de ]a falla de eSlandarizaci6n de los mClodo~

empJeados parOl la eSlimacion dellllislllo (.JO,.J I). Dc hceho.hasla haec pocos :Iiios. los mClodolo se h:lll des:lrrolhldo )' co­mercializ:tdo sin lener en cuenta loU eoncordanei:l con un meto­do de referenda y sin exi~tir unalo Ifne:llo el:"'ls en cuanto a Iaimprccision. Numcroso~ cSludios indican 101 ne("eloidad de me­jomr de fonna sllslaneialla5 n~didasde colcsterol de las HDL.que sc rc:llizan cn los laboralorios clfnico~ dc~c hace mas de10 aiios" 1>:lrJ gamlllizar que los rcloulladolo oblenidos eumplanlos rc4ui~itos de ealidadlouficientes y sc:m utilcs en la pr.ktieaclinica (-12).

Se dcben controlar los componentes de 1:1 \'ariaci6n allaHli­ea: incxaetitud c impreeisi6n:I. La inexaclitud ell la medici6n de I:. eoncentr.lci6n de coles·lerol de la" t-IDL es de gnm impon'lllcia debido a \'arias rJlO­

nes: eI inler\':llo de eoncenlr:.eione~con las que se aSOl'ia undCI.::r11linado ricsgo de dcsarrollar cnfcrllled:ld es cSlrecho: eIvalor JiS(Timinante aeeplado para la asignaci6n del riesgo decnfermedad cardiuvi.lscubr se SitU:l en eOllcenlraciones baj:ls(0,91 I11llloI/L): por (Illimo. muchos labol':llorios uliliz:lll 1,1conccnlrad6n dc coleslerol dc las HDL para calcular la eon­cenlral'i{ln del colcslerol de las LDL por la f6rmula dcFriedew.i1d, Por 10 que un error en su delerminaci{m supone undlculo errolleo del eolcslerol de las LDt.

La inexaelilud (difereneia entre cI \'alor \'crdadcro y cI me·dido) puedc ser debida: a la utilizaci6n de malcriales de cali­braci6n in:lpropiados. ya que c1l1:Ullildo erecto matriz puedeafeelar de mancr..l no previsiblc a esto~ materialc~: y a la scpa­rJCi6n inadl'Cuada de la fmc('i6n de las HDL.2. La imprt'Ci"i6n retleja la \'ariaci6n en d proceM.l de mediday a ella pueden conlribuir el opcr.ldor. las diferencias entre 10­tClo de reacti\"os)' \'ariacionelo en I~ inslrumcntOl>.

Debe M'r minimiZ;lda con la Clolandarizaci6n del proceM.l tt.>C­nieo y I.. :lpli('aci6n de un sislem.. de conlrol dc la ('alidad_

En 1995 el NmiOl1ll1 CIIf)It'~'l('ml E(llIrllli()// Pmgmm (3) re­eom.::nd6 definir los objeti\'o~ de ealidild. que deben cumplir hllodel<:rminaciollcs de coleslerol de HOL. cn l~rlllinos dc «error101ill" (:tlle.xo I). El error 101:11 comprende la imprecisidn y lainex:lclilull )' :l~i s<: prdende C01llllClh:lr Ul1<l po~iblc mayor inc­.xactilud con una baja imprecision 0 al eOl11rario. Ellaboraloriodfnico pucJc sclecdonar cualqu it'ra dc los melodos dcseri\t)~

prcl'ial11enle p'lr" 1;1 CU:lllli1icilciun Jell'olcslernl t-IDL en espc­cfmellcs dc pacicnles. pcro d proccdintieillo deber.i sicmprel'llmplir los lTilerios de calid<ld :llwlilica minimos siguienles:

.ill Quhniea Clini<:<l 19')<): 111 (I)

Error 100ai :S:. r3"," '1l1e implie:!:Ine.xactilud :S:. +1- 5'* (compamdo con cI melodo rcfercncia

del CDC)Imprt"'Ciloi6n a conccnlr.lCi6n 2: 1.09 nunollL: CV9'k

a cOlll"Cntmei6n < 1.09 nunollL: s:S:. O.()..W mmoVL

6 F 'PECIMEN Y J\IUESTRA

La muclolm de ckocei6n es c1louero: obtenido al centrifugar 101loangre. en condieiollc~ rdriger..ldalo. antelo de transcurrida~3homs de loU toma. Ellouero elo la IlIUClolra de elc<:ci6n porque elocon el qUI: M' han establccido lo~ valorelo di...criminante~ aecp­wdo~ par.I la c1a~ific:lci6n de lo~ pacicnle~. Sin embargo. en cIcaloO de U1ilizar plasma M' ha propuelolO que los \'alorc~ pla~Il1:L­

licos debcn multiplican.c por 1.03 pam oblener los corrc~l)()n·

diel116 en suel"O.Conser"..cion: I.. medici6n de la concenlraci6n del cokslerol

dc la~ HDL Se debe realizar 10 anle~ I)()sibk. prcferibkmcnle cll1lisl1lo dfa de la eXlmcei6n. No obstanle cI suero sc pucdc alma­cCllar <l 4 "C y en oscuridad durantc 1-2 dfas. Para perfodos masprolongOldos sc debe l1l,lnlencr congcl.tdo a -20 'C (I Illes) 0 ..

-~U·C (h:l~I" 1 alios) en conleneclorcs ..dl.'Cuados P;U,1 pre\"cnir lac\'apor:ll'i6n (3).

7 RECOMENDACIONES PR;\CnCAS

7.1 i\lCtodos rccomendados en la pr.ictic-.t habitual

La nloceloidad de personal elopt.ociali/.ado )' cI relalivo alto l'o:!>tel"l'on6mieo de la ultr.tcenlrifugaci6n han fa\·of\..~ido la utiJil.a­ci6n de l&nicas altemali\":l-\ como melodos habilUalcs. Dcbidoa clio lo~ mbodos habilualcs pam la dctenninaci6n del cole~­

lerol dc las HDL en suero loon lo:!> mClodo~ de precipil:lci6nquimiea. ('on cu:mtifieaei6n po~teriordel coleslerol en cI ~o­

brcnadante por ll1elodo~ enzindticos. Pcro las variaciones en·conlmdas enlre laborJlorios son muy 'llnplias.

EI de.,arrollo de m":loUos mas simples. los 1I:11nados m":lodolodin:clOs. puede facililar la eSlandarizaci6n de eSlas mcdidas enc11"bor;tlorio clfnico. Los Illctodos direclOs puedcn cumplireslus e.xpecwlivas. pew ,lnlcs de :\dOplar un nuevo m':lOdo scdebe scguir las recomendaciones dada.' ailieriormentc.

7.2 R('<1ucir las causas pn?analfti(:",> de mriaci(ln:Control de la \'ariabilid:ld biolOgica

Lo:> c~pccimenes para la lIledici6n de la conecmraci6n de co­Icsh:rol dc las HDL lot' dcben oblcncr o:n las condiciones rceo­mendadal> parJ la delcnninaci6n dc colclolerol (39). LOl> eoeli­ciclllelo de \'ariaei6n biol6gieo~ intr..lindi\'iduales dcscrit~ pamcI colc:!>lerol de las t-IDL:>on alto:!>. comprcndirJo" enlre 4-12CJ­con un:III1\.'<1ia dd 8",". Dcbido:1 clio la dClemlinaei6n en unaMJla ocasi6n es insufieicnte parJ elotableeer la eonecnlr.tci6n",habitual .. del pacienle. En b:L'>C a las ('oneemmciones habitua­Iclo de COIc~lel"Ol de las HDL. ..I ('oclicicnle de \'ariaci6n biolo­gico inlr.. indi\'iduat medio y a los ObjCli\'o,," de calidad pro­puelolos. sc reeomiellda la extracci6n de dolo espccfl1lene~ deloangre como minima con un imervalo de una semana (3).

7.3 Control de la inexactitud

Ll inex:lclitud en I.. lIledid:1 de las concentracioncs del colcsle­wi de I"s HDL debcriOl eSI"blcccrsc medi:mle eOlllp:traeion con

cspecimencs fr.:seos eongdados respcclo all1l~lodoconsider.t­do de rcfer.:neiil, En nuestro p:lis no exilote ning:un loi'lem:\ de

refereneia al que acudir para realizar eSla \'erifieaci6n. EIChO!l'Slerol Reference Melhotl La/111ftI/o'." Nel.,·orf.. y eICell/erj(Jr l)i.\·('lI.~e!iCO/llml fadlitan un prugmnm de~linado averifiear los maleriale~ de ealibraci{in y "onlrol (-13). Adem;\lodisponen de lin program;l dirigido a la industria para la evalua­don dc hi l:alidad de los reaelivos en h~rll1inos de ine.~aelillid yimprecision. Dc eSla forma cs posible el de!>:llTollo de m':;lodo~

habiluales con los que oblcncr resuhad01> comp;:amblelo ill me­lodo aceplado como de referencia y con1>eguir la C:'I:lIldariza­cion de las dclenninacionc:. de co1cslerol HDL en lo~ labor.tlo­

rio~ dinieos. Se debe cxigir:1 las cmprelo:l~que eornerdalilAlnCSIOS reaeli\"olo y los malcriales de cOlllrol y de calibmd6n laaervditacidn de los mi~molo fTi..'l1le al11leIOdo de rcti:rcncia.

7.4 Rc:llil.ar prOj;Tlun:lS de l'onlnll de 1:1 clilidad inlerno ycXlcrno

EI COlllrol de la calidad intemo~ debe rc;llil.:lr con m:lh:riak:.

(Iue emulen la:,> c:mlcterislicalo de lo~ elopt:dmcoc:. de l>:lCielllcloy dcbe abarC;lr lodos 10lo pa~m, del proccdirnienlo. Se TlX-O·

micnda lXH 10 ml'nos a dos '~lmcc11lr..lcionelode dcci~i(in dini'·:10,9 mmol/L y 1.55 llI111ol/L. Adem;\s. lodus los labor.ttorio., de­

berian panieipar en un progr;lma de calidad eXlerno. que seacap:lz de aportar rnaleriale~adet·uadolo y eon lolo menore, dcc­lOS matriz I>osibielo.

7.5 Las oTgllni7.:lcioncs cicnli"ficlls debcri:lll •.•

- lncluir ell sus programa~ de: cOnlrol de 1:1 ealida<! la lllcdi­d6n dc 1<1 t·olll.:elllraci6n de las HDL l.:OI1 tll<llcriales atkcu:ldo._.- Proporciotwr lo~ v:dores ohlenido~ por cI metodo dc refe­rcncia en lalo l11czclas ulilil:adalo como m:lle:rialc:. de t'ontrol d('

1:1 calid:ld.- Promo\'<,'T la ('olbidemcion de Ia lrotl:abilidad eOl1lo criteriode ~leC(·i(inde :.i~leTlla~ 'lll;alilicm.

8 CONSII)ERACION FINAL

E~ necesario cI desarrollo y e\'alu.u.:ioll de nue\'o, I11clOdo~

p:lTa la rnedici6n dc la:. l'oneelllracionelo dclt'olcloh:rol de HDL(Ille por Sll~ Car.l(·ll'rhtkalo locan e:lp:"'C' de cllmplir IO!- objeli­\'01> de calidad d('M'able~ p:lr.t e~la magnilUd y e~pedfi(·:ldo:.

alllcrionnenle. A,imi:.lllo e~ lll",;enle d de,arrollo de 1Il:lleriak~

de rcfcTCllcia aJ"'''Cllado,.En Espaila c., una nel~c~idad urge Ill!.' c'tablcccr Lin ~hl('ma

rwdol1al dc rcfcrcnda par., b~ Illcdil.:iol1e~ de la.' corK"enlracio­lles de l'oIcSle["ll) y co1c~lerlll de las HDL que aporte la lee nolo­

gia ~uficienle para compamr nuestro lIlctodo habilual con clmclodo de Ti..ofercncia. A nh'el imernadonal e."islen progr.tlll:\l<oe~p,:cifi('Olo (Iue f;acilit:lIl e'le proce~ode elol;md:lril::lCi6n I:UllO

p:mllos l:tbor.tloriO!- c1inieru. como P:lr.t 1:1' emprc,a~ f:tbrie:tn·lelo. En nue:.lm p:li, no cxi'lcn. aunque c, dc louponer que deforma indire"la n01> hahrclllo~ bcrwfici ..dCl de ICllo l11i'llIo~ pord carJc[('r Illultilladonal de Ia mayor p:lne de lalo elllpre.,a~ 1':1­hricanles de reactiwls.

9 B1BLlOGRAFIA

,. Gin_ocr},' GS. Safr..n C. I'a_ll,'rna!. RC. 1'rn:ut'IK.") of ,"" '-I:rurn Il1ghlkn,il) lip0l'.....ern chok,ler\.llnd, in ho....pnal.,..." pallen_ "ilh ~d<-­

,irabk* h.. ,,1 ,'hllk'lcrnl k'ck Am J Canlilll 19')1: (,1\: 1i17_ln.

1. The E\pcrl P"nel. Sumlnar) "ftht' ,ecnnd rqxlr! ofth,~ Nali"nalChnle'teml Ed...:al"m I'r.'gr.. rn (NCEI', e'pcn panel Ofl de',-.;:IHm.C\aIUalilln. aoo trealrnenl of hili'h blood ,'ook"'len,1 III 3duh~ IAduhTrcallllel1' l'al1e1 II,. J,\l>lA 1993: !b':I: JOI5-!3.

J_ Warni.;l GR. W""d 1'1), Naliol1al Chok'lernlEducallOll Pro~rnl1l

Rc,'nmrnendalionlo f"r Mca~ure"K'llIof High-Dcn,il) LipopmWIllChok'll...,I: E~''I.·Ulh " Surn'nar}. elin Chern 19'J.'i: ~ I: 1417-33.

4. Fredri,·k,,,,. DS. Lc') RI. LEES RS. F;u Ir:m'pon In lipopnllei,,,. f\nintq!r:,led appw;"'h II' mech'''li'I1I' ,,,ul di",rder,. N Enl,d J I>lcd]%7: !71>: .l1·~~.

5. G"llle! Ceri'lue JA. 1>1(,1<"11,, de l"ho'r;'lu,i" p:.r:' el e'ludiu de la, di,·lip•.-rni:". En: Lip"prul"ina, pialolll~'iea,. Barcelona: BoehnngerM:mnheim: 1')Sl'i. p. <)3-10<).

6. Fruehan JC, Scpar,mu." d<..'l<o lipop.\..6 ........ en rUnellnl1 lie kur compo­_ili"'l cn apolipoprol':ll'lC"'o-. ,\plicaIK>n~ cliniquc'.•\nn Bioi Clin l'll\O;+4: 1I6-! I.

7. BUN"in M. Sarnaille J. Sur un ..s.....a~e r"pldt.· du cbnic'lerol he au\"Ipha el aU;\, ocla lipuprot,'in,·, du ",rulll. Clin Chlln ;\Cla 1')6(): 5:<JJ9.

It Lipid Re-e:,rch Clinic ""'gra'l1. M:lllU:,1 llf la!'l'r<lll.r) '--'Ix·rali"n,.Lipid "nd lip"l'r"leiu :ul:rI)',i,.DllI\W I'uhl;,;al;"n 1')74: I 75-6!K.

I). AIIl<.<r, JJ. W"mik GR. Wiebe D. Chung ,\'Ie. "'lulli·1:thor.,I"r) c"mp"­,i,ull of lhree I""pa,in-Mil I"e,·ipir"l;lln pn>t·l-dllrc, f"r t·,tim"tiug dlll­I"'leml in high lkn,il) lip0l'ftMein. Clin Chem 1<)78: !4: 853-6.

lU. Sleel BW. Kochkr D. I\!ar MM. BI:""lm,li TI'. Kulla K. [A·Ill ....·)"IE, En!)malic dclenninali.lIllo of chok....lcrnl .n hl~h lien,lI) hpoprn­I,'in fr....·I'om prcpan.-d b) a pn.'I.·ipilatiun 1<'Cbni'lOM'. Oin Chcm 1'J76:!1:'Jll-IOI.

11. C,'me! JA. Rouri~m'! L1ach JM. [);:Ierminaci(;n de colc,tcrtlltlt·HDL 1ll,...Jiame n1<"I1....... Oc P""'-"l·ipiraeK'.n: 1'--'lUtli" oc I,,., !"J'ibic, fac·lure, '1ue pudier.,n m'l<lifiear eI TC,ulladu final en ,'''ua uno de ellll'.QUi'l1Clin II)K~: .1: 249-(,1.

12. A"II1:<l1I1 G. Sl'hriew",. 1-1, I'",sihilili,·, andli",il:'lion llflhe :lIl:,h,i,of HDl_,'hlllc.'leml. J Oill Chem Bi"dlem 1'J81: 19: 1-(1. .

1.'. lla.:huri.... I'S. W,,,,,j 1'1). Alocl' JJ. Steiner P. I:>"'m'-l:) ,\IE. Kub:, K.el al. 1'1:"rna higl,.,Je'h'ly lip"p""le,", eho.,Ic.'leml '·'~lCemr..til}" oclcr·milll.-d :.n,·r !"I.·nlOl·al of "Iocr plUll'in b) ocparin manli'a'''''..... P""'-",ip"a·li'lIl or b) uhr.lt...·mrifu);alioo. Clin Cb<'m 1976: 21: IlI.l1l-J-I.

14. Fink) I'R. Schifma" Ril. William' RJ. Lichli I>A. Ch......'lerol m hl);hlkll,il) lipopn:Mein: U.... of,\lg '/&.'''ran ,ulfalt' in ," en!imallc nlea·,urcnll.·nl. Clill CIII.·m 1978: !4: 'JJ I_.l.

1~_ W"mi..l GR. Bendc..... ,n J. Albel' JJ. [x'lran·,ulfa'e·/tl]; . prt'l'"Ipir:.·lion fur 'lu:lIllifi,·ali.HI "f high de'hil> lipt'prmein d"'!<·'leml. ClinCI""111 19K!: 1S: I.l7'J-KK.

1(, Warn;"'~ GR. N];\I)"eu T. ,\Iber, 1\1\. C"mpari,,'n or imp"''''d Im'l­h",l- ror 'lu,mlifi"ali"n "r high-den,it) lip"pr"lein ..·h"te·,t".... !. ClinChetll 1')K5: 31: !n-!!.

17. !:Iu....l.,;n M. SCbnlni.... IIR. ,\I"rfin R. Rapid Illl.·th."j f"r 1l1l.· i....lallon"f lip"pnll",n, from human .....-rum b) pn."l·ipilatK>tI ""h pol)aI1K"". JLipid R"...J ..no: II: 5KJ-'J5.

IS. L'Ip.:,·Virella MF. Slime I'. Em_ S. C..I"dl JA. o..,k'.lt·r..1del ...,.ml·nali"n in high-lkn,il) lipopnMein, ....·par:ueu h) lhret' differcnl "x·t·hll,h. Oin Chern 1'J77: !,1: 8S!--t.

1\1. 1\"mlll1tl G. Shrk'''''r H. St:hmil! G. ll:l];ak E. Qualillfi,'''li"n hr);hde",il) lil'''p'''le;n eh"te,lccnl h) l'fl'cipiil:uinn \l i,h f",f"lIIn~'ll'·

""idIMg C,~. Cli'l CII"1l l'JlD: 1'J: 1H!f,·.111.!O. Vii~:lri J. l'reeipil:llio'l IIr pl;o,m:l lip"I,.... leili II) 1'10(;·6000 and it­

e' ;.lu"li, '" "ith elc"lro 'phI 're,i, :Inll 1I1Ir:,,·..:nlri fll];:ll i"n. S,·and J CIIIItab lI1\e'l 1976: .1(,: 1(,5-8.

11. K'hln"r GM. M"lin:lri E. I'khkr P. EI alllalinn of a 111.·" IlDLJIlDL.quanlificali"n n>clh,,,j 1la",...J on P""'-"CipilatKm ""h po.'l)e,h~Ie",,' ];I~·,""I. Clin Chim }\,'Ia 1'JlI~: 148: I.N..H,

1!. C6rnc!. GcriqUC" JA. Analitk:a de I", IIp,doo.) hpuprt>ldn,,--, lkl pla,­'lla. Ell: E,w"'n ,I;: la, ul_lipc'11la,. llarednl1a: ItICR SA: I'JSS.

2.1. ItIcC"n"llh) \\'. Abupt>l k I' Slu,lre, "" Ihe imer:....',"" "f co"cana',,·lina A "ith rn"jnr den'!l) {'[a''C'' "f h"m:lII pl:"m:, lipt"pr"ld'h.EI'i,k",',' fu, Ihe ._p',,·ili,· hindin~ "f 1il'''l'n'lein lJ in ii' l""-..-iar,,l :mdfree f,"'tII,. FEllS Iln.l: 41: 17-1_(,.

!4. 1'''');1'''111:1 ,Ic EI alll"ei,-,,, E~Il'rna ,k l:t C;,lid"d de Bi'~lui,,,i,'" (",er"ld,' I:, S",'iedad E'p:1R"I:1 de Bi"'lulmit"a Clinr"a) 1'''lol''~I:'

M"I""·lIlar. Qllim Clil1 19'J7: 16: 6!·.1.15.•la,d RJ. E.....:r U/\. Br..];dt:m HI. l1IC u"lribul'on alkl cb<'mlcal ",..11­

.......ili"n ..f ullrdCenlrifu);all) ~·pMal,...J lopopror,·m, m hUllwn ....rum JClilllnle,. 195.'i: 3-4: I:tI5·53.

11l. Dcllll.d,·r "N. S"nl1lm,:rcnd·Z"nda~ 01'. Stanknhtlef AI'. StU)I I'M,Van·l l.x,r A. UhrdC,·nlnfu);alioo III '''In\llllg-bud''r and ji",-d an~k

r"lo.... ,'I "Iu:lled f"r l'l,ll'li"n "11.1 d"lcrmiu;lli"n "f lugh ,k''''I) hpn.pmle'tl -Uhfr.'''li"n, 110!., :md 11Dl.,. Clin Ch,·m 1'Jll.l: 1<): (,.'i(,.(,,1.

17, Wik,,~ IIG. D''''i, DC, Ikirnb,·r,.. ,\l. 1'11<' i,,,lall"ll ,,( li)mp'''l''in(n1l1l hUl1Ian pIa_ilia b)' 1,1rr;1Cenlrifll~;u"",in ~",,:,I nil,,,. J Lipid Re'1')7l: 12: 160·72.

21\. Wid"" OA. W:lrnid GR. '\\e:l,urelllenl ol11lgh d"INI) hpo.JI,rulellldlule_lend l"t'ncenlr"ll"n. Ell: l..ahtlralur) ea,urcmen "I hp"". lrl"~

pro'le,n' and a....,lip""n~eln,. Wa,hll1gl'lIl. AACC l'rc". I~. p. "1­106.

19. AII'an'! JJ. L'NII1I:i';11 MA. OIn1<'" J\1. llerrcr.. I· Imerl-"'T<:lICl:l & \alipo.>pn..dna Cal cn la cuanufK,-.lt·i(>t1 del l"t,k'len,1oc la, IIDL IIlt"lhan­IC ultm,·emrifu];a,·i(,n. Clm In';:" Artcrill....·kw,l, 1<)1)0: !: 1~6·52.

Quimie:l C1ini..:, 1'.l'J'J: 18 (1) :;9

30. Wieb.: OA. Smith 5J. Six nk:lhod~ for ,,,,l:llinl; high Ucn"il~ lipo",o­le,n e"'npared. ",Iii u...: of II><: rd,·r.......·" nll:IIlIKI of cualllif~ ing ellll­le'I,'wl in ""rum. Cl,n Chc", 1985: 31: 7~6-50.

31. SUl1iul·hi H. Uji Y. Qbbe H. lrie T. Udama K. Ka~ahar.l N. Dim:1Inea,urem;:1II of high den~il) lipoprot"'n r.-1lI,Ie,u:ml in .'>Crom "ilhpol>("\h~lcncgl~,...,1 modified enl~me-. and ,ulfaloo ('i<:kxkmln_ ClinChem l'J9j: ~ I: 717·:23.

3:2. Naucl M. Marl W. Ilaa' 8. Wieland H. Homoge.....·'O.h a.,,....~ for di­=" delermination of high-Ocn~il)' lipoprulein dlOk,tcrol e'·alu:ucd.Clin Otcm 1996: ~2: ~2~-o,l.

.U. !-lams N. Galpchian V. "fh,:'ma, J.1:mnoui E, 1..:1." T. Rifai N. 11m.....gener.lt'on, of high-ocn'il)' li,,"protein chok"'I"wl a'",,~, compared"ilh ullr:'l·emrifug"li"n/dC~lr,.lI1.,ulfate·Mg([1 ) method. Clin Chl·m1'1')6: ~.'l: 1I1(,-2.l.

.'l~, Sigma Diagn"'lic,.I'roeedur... n. 35-t, 51 Loui,: Siglll": 1'1")7.

.'.~, I·larri, N. Galp<:hi:lIl V. Rif"i N. Thr...e mUline lllelh,~I, fur rnc",uringbigh den,ily lip"l'wteill ch"Ic·Slaol c"lIlp"r...d "ilh Ih... Rcl,:ri:nn'Mdlll~L Clin Chelll I<)IX,: -t2: 73X-H.

.'1(,. i"lu:lIlg Y. K"o J. , .."i K. E""lllatio" or IW" h"Ill"gencuu, rnclho<h I,,,I1l1:a""i".. high·"kn,il) lipoprotein ch"Ie'terol. Clin Cl><:m 1\l'-J7: -t3:10.18-55.

.n. Naud; M. Marl W. J:lr:IU""h J. Cnbbat'n C. Sal!l'r A.lkmard 0 .•'1 "I.Mulllc,'m('"r ",,,IU,,tlUf1 "f ahOlIK)gene"'h a~"..} f,or IIOL-cholc'l"ml"illKIUI sampk preln.-ank·lll. Ctin Chem 19',l7: ~J: Ib22-'}.

38. Duocan IW :Iolall><:r 1\, C.K>pcr GR. Tlk: Jll"'X......ure fOf' lhe propo..........cllok'l<:rol rd('"IToce method. Allallla: Cellle,," for di",a", comml:1982.

oW. S.....·i..dad E~paiiula lk: 8i"l.luimica Clinica ~ Palolo£ia Molecular.Corni,i6n tk Lipido.,,) LipUpn:llcina.,. M<'llxl<'" !\.'\:Ollk'"nd:ldo-. par.. ",dctcnninacioo do.:ll·"k'h:ml ('"n ,ucm ... pla,ma ~ en ""n" e,p.xink'"·n<" biol{'l;icu~. QUIIIl elin 19').1: D: ~%-50.'l.

.to. B:I,il M. Riflind :loll). Slalu~ of high den,it> tipoprot ... in. En:Canli'~l..;cular Ri,~ l':k'I",,". :Iokdieal I'mgre'> 1<)')0: I: 01-7.

~ I. N:,i'" 11K. Rcli:lbi1ity or lipid.lipupml"in. and :lpolip"p.-t11ein nll:a'lI­rcmcnt,. Clin Chel11 I'JXll: .'l~: Hll~-WM.

~2. Sl."Ile..:tm:ul G. Sas,c E. V:,riahilily or lipid lllea"In::menl': r... Ie,,:Ul.,Cf"r the l."Iinician. Clin Chem IYO)): -'9: 1495·5H.1.

~.'l. My"r, GL. eo"per GR. Winn CL. Smith SH. '1111: Celllcr f"r Di,ea.....Comrul, National lIe:on. I.ung al1d Bluml In'titut ... LipidSland:ordi/aliun l'rugr:lIll: ,\n appmaeh "' a<:":lIr.. l... and pr'·d ....·lipid",,'a,un::nU:III. Clin!..all ,\k'\l I<JXI): 9: 105-.15.

C'>rn".,."I<l,:n;:,a·So..-...-.bollc.......>ia ok H...",uin,.....,. Cion .....,.) I'al~ia ~""""u"'"

Com,."", ok l..pod... ) L,po>JKllt<"ina.d l':.Jilla. .l~.\..I!3. ''''IIo.-J.0Il025 Ibm:1on:o

.10 QuirnicaCiiniea 1'1")1): IlllI)

Anexo I

Calculo del error 10lalerror 100ai = error :.i:.tcmalico + error :llcalorloerror tOlal (lk) = error :.i1>lemalico(.1 1+ 1.96 CVI (l1)

Calculo dd error ~i1>telllalieo0 bia:.Es la difercncia Cnlrc el valor medido por d metodo c\·aluadoy el valor medido pord melodo de rcfen:ncia exprcsado en C;.

Puedc scr medido:- a traves de programas de eSlandarL~a('i6n que :Iporlen 1>uero1>fresl:os congelados "alorados mediantt: el IIlclOdo dt: rderen­cia.- usa de nWterialcs de rdi:rt:ncia con \':i1orc~ asigtwdos conlir­mados !"renle :11 melodo de r.:feR'tlda.

CV, es d coclicientc de variaci6n an:llilico IOlal.