CD81-induced behavioural changes during chronic cocaine administration: in vivo gene delivery with...

13
CD81-induced behavioural changes during chronic cocaine administration: in vivo gene delivery with regulatable lentivirus Amine Bahi, 1 Frederic Boyer, 1 Tal Kafri 2 and Jean-Luc Dreyer 1 1 Institute of Biochemistry, University of Fribourg, Rue du Muse  e 5, CH-1700 Fribourg, Switzerland 2 Gene Therapy Center and the Department of Microbiology and Immunology, University of North Carolina at Chapel Hill, USA Keywords: behaviour, CD81, cocaine, drugs of abuse, lentivirus, in vivo gene transfer Abstract CD81, a tetraspanin transmembrane protein involved in cell adhesion, is up-regulated in the mesolimbic dopaminergic pathway 24 h following acute administration of high doses of cocaine [Brenz-Verca et al., (2001) Mol. Cell. Neurosci., 17, 303±316]. Further evidence consecutive with this observation and based on microarray analysis are presented here. In addition, a regulatable lentivirus was developed bearing the rat CD81 gene under the control of a tetracycline inducible system. This lentivirus vector was stereotaxically injected into the ventral tegmental area (VTA) of two groups of animals, one fed water (expressing CD81) and the other Doxycycline solution (which down-regulates CD81 expression) and locomotor activity after chronic cocaine administration (10 mg/kg daily) was monitored. After 2 weeks, the groups were inverted, animals receiving water were placed on Doxycycline and the second group was placed on water. In all cases highly a signi®cant increase (3.2-fold) in locomotor activity was observed in animals expressing CD81 in the VTAvs. animals placed on Doxycycline. Similar studies where CD81 was delivered into the nucleus accumbens (NAcc) resulted in signi®cantly higher effects (30%), in accordance with microarray data and our previous reports, yielding a 4.2-fold increase in locomotor activity. No change was observed under similar conditions in control animals, which were injected a regulatable lentivirus expressing GFP. These ®ndings suggest that CD81 expression in the mesolimbic dopaminergic pathway contributes to behavioural changes associated with cocaine sensitization. This study provides a powerful approach for evaluating a gene function in vivo in a single animal under various paradigms, even on gene candidates, which display small changes of expression. Introduction Drug addiction is a behavioural and neuropsychiatric disorder related to aberrant brain function and resulting into a loss of control over drug- taking or into compulsive drug-seeking, despite noxious consequences (Nestler, 2000). Understanding the molecular basis of drug addiction is a central challenge in the ®eld and encompasses two major areas of enquiry. One of these is the identi®cation of molecular candidates that partly determines susceptibility to addiction. The other is the use of animal models to investigate the role of speci®c genes in mediating the development of addiction. Because addiction, like most other psychiatric disorders is a com- plex trait, identifying genes that contribute to risk for addiction and assessing their biological function are dif®cult tasks. In a molecular screening, aimed at identifying such molecular cues, we described CD81, a cell surface protein from the tetraspanin family (Hemler, 2001), as a potential candidate, as it is up-regulated in the nucleus accumbens (NAcc) upon cocaine treatment (Brenz-Verca et al., 1998; Brenz-Verca et al., 2001; Michna et al., 2001; Michna et al., 2002). CD81 is expressed in almost all cell types (Levy et al., 1998; Meacker, 2003; Takeda et al., 2003), but in the brain, it is expressed by neurons in the mesolimbic dopaminergic pathway and the galanin pathway within hypothalamic nuclei (Brenz-Verca et al., 2001). It is also found in glial cells (Sullivan & Geisert, 1998), and is involved in reactive gliosis (Irwin & Geisert, 1993), anti-CD81 causing changes in astro- cyte morphology (Geisert et al., 1996). CD81 is up-regulated during early postnatal development, at the time of glial birth and neuronal maturation, providing evidence for a role of tetraspanins in brain plasticity. More recent studies found CD81 associated with the mel- anocortin receptor MC4R in the hypothalamus, elevated expression in obese yellow mice leading to altered neuronal function of MC4R (Lamar et al., 2003). In this study we con®rm further our ®nding that CD81 is up- regulated in the brain-reward pathway after cocaine treatment. To characterize the behavioural changes associated with the expression of CD81 upon drug administration in vivo, we have developed a strong system based on a novel lentiviral vector in which the CD81 cDNAwas expressed under the control of a tetracycline inducible promoter. Injecting the newly developed vector into speci®c brain regions (the NAcc and the VTA) conferred the ability to switch gene expres- sion on/off and evaluate in the very same animal how such in vivo modulation affects its drug-related behaviour. We show that local overexpression of CD81 in the VTA or in the NAcc leads to a 3.2±4.2- fold increase in functional activity, which can be reversed by switching off local gene expression. This approach may be very useful in resolving a major challenge in the ®eld, namely to understand how the many genes implicated in this disorder interact to yield as complex a phenotype as addiction. European Journal of Neuroscience, Vol. 19, pp. 1621±1633, 2004 ß Federation of European Neuroscience Societies doi:10.1111/j.1460-9568.2004.03260.x Correspondence: Dr Jean-Luc Dreyer, as above. E-mail: [email protected] Received 5 November 2003, revised 7 January 2004, accepted 12 January 2004

Transcript of CD81-induced behavioural changes during chronic cocaine administration: in vivo gene delivery with...

���������� �� ������� ����� ����� ���� �������������������� �� ���� ���� �������� ��� �������������������

����� �� ��� ������� ������� ��� �� ��! ��� "����# �������

�������� �� ����������� ��������� �� �������� � � ��� �� ���� !! �������� "#��$�%���&'� (���)� ���� ��� �� *)������ �� ��������%��� ��� �����%���� ��������� �� +���� ����%��� �� ���)% ��%%� �",

��������- �������� �*.�� ������� ���� �� ���� %�������� ��� �� �������

�������

����� � ������$���� ������������� $������ �������� �� ��� �� ������ �� $��������� �� � � ��������� ��$�������� $�� ��� !% �������� ��� �������������� � �� ����� � ����� &����'�(��� �� ��)� *!++�,�� ���� �� ������ �-� .+./.�01) ��� �� ��������������� ��� � �� ����������� ��� ����� �� ��������� �������� ��� $�������� ���) 2� ��������� � ���������� ��������� ���������$�� ������� � � ��� ���� ���� ���� � � ������ � � ���������� ������� ������) � �� ��������� ����� ��� ��������3�������4���� ���� � � ������� ��������� ���� *(��, � ��� ���$� � �������� ��� �� ����� *�3$������� ����, ��� � � �� �� ��3������������� *� � ������������� ���� �3$�������, ��� �������� ������� � ��� ���� ����� �������������� *�+ ��56� �����, ������������) � ��� ! ���6�� � � ���$� ���� ��������� ������� �������� ����� ���� $���� �� ��3������ ��� � � ����� ���$ ���$���� �� �����) 2� ��� ���� �� �� � �����7��� ������� *.)!� ���, �� �������� ������� ��� �������� �� ������� �3$������� ���� �� � �(�� ��) ������� $���� �� ��3������) 8������ ������ � ��� ���� ��� ��������� ���� � � ���� ������ *9�, ������� �������7����� �� �� � ��� *.+:,� �� ������� ��� ��������� ���� ��� �� $������ ��$����� �������� � %)!� ��� ������� �� ���������������) 9� ���� ��� �������� ���� ������� ��������� �� ������ �������� � � ���� ��4���� � ���������� ��������� �3$�������;�<) � ��� 7������ ������ � �� ���� �3$������� �� � � ��������� ��$�������� $�� ��� ��������� �� �� ������� �������������� ��� ����� �������'�����) � �� ���� $������� � $���� � �$$��� �� ��������� � ���� ����� �� ���� �� � ������ ���������� ������ $��������� ���� �� ���� ���������� � � ���$��� ����� ����� � �3$�������)

2���������

���� ������� �� � ��������� ��� �������������� ������� ������

� ����� ���� ������ ��� �������� �� � ��� � ���� ��� �����

����� � �� ��������� ������������� ������ ����� �����������

�������� ����� !����������� �� �������� ���� � ���� ������� ��

� ������ ��������� �� �� "��� ��� ���������� # ��$� ����� �

������� %�� � ���� �� �� �����"���� � �������� ��������� ��

����� ��������� ������� ���� ������� &�� ��� �� �� ��� �

������ ����� ��������� �� ��� � �����"� ����� �� �������� ��

��������� � �������

'������ �������� ���� �� ��� ���������� �������� �� � ���

���� ���� ���������� ����� �� ���� �� ���� �� ������� ���

��������� ���� ������� ������ ��� ���"��� ���� (� � ��������

���������� ����� � ���������� ���� �������� ����� #� ������ ��

)�*+� � ���� ������� ����� ��� �� ��������� ������ �,������

���+�� �� � ������ ��������� �� � �� ����������� �� �� �������

����� ��� ��-��� ��� ������ ������ �'���.�/���� �� �� � +00*1

'���.�/���� �� �� � ���+1 2����� �� �� � ���+1 2����� �� �� � �����

)�*+ �� ��������� �� ���� ��� ���� ���� �3��� �� �� � +00*1 2�������

���41 &����� �� �� � ���4�� � �� �� ����� � �� ��������� � ������

�� �� ������ �� ����������� ���#�� ��� �� ������� ���#��

#���� ���������� ������ �'���.�/���� �� �� � ���+� ( �� ��� ����

�� ����� ����� �5������� 6 7������ +00*�� ��� �� ������� �� �������

������ �(�#�� 6 7������ +004�� ����)�*+ ������� ������� �� ����

��� ������� �7����� �� �� � +008� )�*+ �� ����������� ������

����� ������ ���������� � �� ��� � ����� ��� ��� �������

�������� �������� �������� �� � ��� � ���������� �� ����

�������� 2�� ����� ������ ���� )�*+ �������� #�� �� ����

������ ������ 2)9: �� �� ����������� ������� ��������� ��

��� ����# ���� ������� ������ ������� ������ � 2)9:

�3���� �� �� � ���4�

(� ��� ���� #� ��"�� ������ �� "����� �� )�*+ �� ���

�������� �� �� �������#��� ���#�� ���� ������ ������ &

���������.� �� ��������� ������� �������� #�� �� ��������� �

)�*+ ��� ���� ����������� �� ���� #� ���� �������� � ����

����� ���� � � ���� ��������� ���� �� #���� �� )�*+ ���-#��

��������� ����� �� ���� � � ���������� ������ �� �����

(�$����� �� ��#�� �������� ���� �� �����"� ���� ������

��� �-�� ��� �� /&-� �������� �� � ���� �#��� ���� �������

��� �;�� ��� ������� �� �� ���� ���� ������ �# ���� �� ����

������� ������ �� ����������� ������� <� ��# �� ����

������������ � )�*+ �� �� /&- � �� �� �-�� ����� � 4 �=9 ��

��� �������� �� �������� ������� #���� ��� � �������� � �#������

�� ���� ���� ��������� &��� ������� ��� � ���� ������ ��

�������� � ��$� ��������� �� �� "���� ������ ��������� �#

�� ���� ����� ��������� �� ��� ������� ������ ����� �� ������

� ������� �� �������

��� ��� ������� �� ������������ ���� �� � ��������� ���� � ���������� �� ��� ��� ������������ ���������

��>+� ++++;$ +98��0?8* ���9 �4�8� �

����� �������> �� @����3�� ������� �� � ��

A�����> $������� ������B����� ��

!������� " ����#$�� ���� ������� % ������& ���� ���� ��� �� ������& ����

=�������� ��� ��� ���

��������� ����������� ��� ��������

'��( �����#���

-�� ������ ���������� #��� ������� � �� ��������� #�� ��

���������� ��� ��������� �� -����� A������������ '-7� '����

5#�.������ -������ ���� �� ��������� ������ #��� ����� ��

���#�> ��?=�?� �� ���� <���� ��� �':3� C����������� 5#�.�������

#��� ��$���� � � #�� 4� ��;�� �������,)� �5���� )������� ) �

����� � � �� ��� ��$����� )��� ������� �������� � 0D ������

��$����� ����� �� ���� �������� &�� ��� #��� ������ � ��������

�� �9 � ���� �� ��� ��$���� ��� �� ���� ����� #��� �������� �

��� ���� �� �� :�- ������

)��������& ��$��������

2�������� �� ������ #�� �������� �������� �� ������ �����

�5���� �� �� � +008� '���E�� F): ������ #��� ������� � ��������

�������� ������ �)A3 -�������� ,���� &G� � ����� � ����

�������� �������� � �7���2�������� 5�� )����� )-� ��������

#�� ��� ������� ��� �&���)��� (���������� 5�� @��� )-� -���

�������� �������� ������ #��� ���#�� ���� ��� �� ��� ��- #��

������ #�� � �D 5�5 ��� �� ����������� ,�%1 �������� ���

��- #�� �������� �� � ��� �� ����� #��� C��� ��������� #���

������� � ������ ������ �� ? ��� �� 8* �2 ����� ��������

��������� �� F'5 �������� �?D ������ 5������ #������ ����

#��� �������� #�� � �D 5�5 ��� �� ����������� ,�%1 ��� ������

#��� ����� � ����������� � ?��� � �� ? ��� ��� ���� � ��

��������� �� ������ �� ����.����

!�* �+��������

&�� :�- #�� ������ ��� �������� ���� ������ � ��HI�� ���

������������ ������� ��� 4� ����� &:(.� ������ �(�������

J+??08=��8� '���E�� + �3 � &:(.� #�� ����� K? �� � ������

������.�� #�� � ����� ������.��� ������ �� 4� � ��� �����

��� � �� ��������� �� ? ��� :������� ����� #�� ������ �

�� ������ � � � �3 � �������� ������ �� 4� �� ���� ��� �

�� ��������� �� 4 ���� ��� ����������� �� +? ��� �

+� ���� � ��� 9 �) &�� ������ ����� #�� ���������� #��

� ? �3 � �������� � ������ �� +? �� ���� ��� �� +� ��� �

�� ���������� ��� ����������� �� +� ��� � +� ���� � ���

9 �) &�� �������� :�- ����� #�� #����� #�� + �3 � K?D �����

��� ���������� �� ? ��� � K?��� � ��� 9 �) &�� :�- ����� #��

���������� ����������� �� � + �3 � �AF)������ #���� ���� ��� �

8� �) �� +� ��� ��� ���� � �*� �)

!�* �# ����������

&��� #�� �������� �������� L��������� �� �� �+000� C��� �����

�������� #�� �������� �� � � �3 :�-������� F): � �� �� ���#�>

��� � �� :�-#�� ����� 0�3 � � 8 2 ������� �� �AF) #���

��� +�� A ��#��� �����&;&K ������ �?��---)7-)77))-7&�

7--&&7&--&-)7-)&)-)&-&-77)7)&+?�4�� &���� ����

���� #��� ����� #��� � ������� ��� ����� � 8? �) �� +� ���� ���

��� � ��� C�� ��������� � ?� "�� ����� ����� �(�������� #��

����� �� ������� ���#�� � ��3 � + 2 ���������� +� !

:�-��� �(������� J+??+*=�+��� +�3 +� �2 ��&F ��� �F�����

J!+�9��� +�3 ������ ���������� �� + ��;�3�� +�3 ��� !;�3 5�����

����� (( :����,�������� ����������� �(������� J+*�89=�+9� &��

������ #�� ���� ��� �� � ���������� � 4K �)� ? ���1 9? �)� ? ���1

��� �? ������ ��������� �#��� 8� �)� � ��� ��� ?? �)� � ���

&� �� #��� ��� � ���� #���� ������ �� ����� ����� �������

5���� ����� �������� #�� ���#�� � ������ +�8�3 �AF) #����

+?�3 ����� ����� ����� M��� �2 &��� �, 8 0� 0�� �2 L)�� 98 �2

2�)��� + ? �2 ������ ������� ���������� �)�� ����� J9*+0+?��

+�� �2 ��,9��5%9�N� 4�3 +� �2 ��&F ��� �F����� J!+�9���

+� ! � ���� ��- ������ ��A' J��? 3�� 4� ! � ���� ��- �������

��� (�����.��� ��A' J��0 3�� � ! :����, �(������� J+*��+=

�K+� &�� ������ #�� ���� ��� � +8 �) �� 9 � &�� ������ #��

����� � �� ������ � K ?�3 + 2 ��%, > � �2 A�&- ���

���� ��� � 8? �) �� +� ��� &�� ����- #�� ������� ��� #��

����� > ������� > ������������ ��? > �9 > +� %�� ������� ���

"�� ��������� � ������� #��� ����� ������� F): � ��� �����

��� ���������� �� ? ��� � +? ���� � � �� ��������� &��

������ ����� #�� ���������� :���� ���� + ? �3 A������� � ��

��� ��- #�� ���������� #�� K��3 � K ? 2 ������� ����� ���

�AF)�#���� � � ����� "������ ��� + �3 � ���� ����� ���� �)�

&� �� #��� ������ ��� ���������� ���������� �� �� ��� �

+? ���� � � �� ��������� &�� ����� #�� #����� ��� #��

+���3 � ���� ����� ��� ����������� �� +��3 � �AF)� #���

,� ����� ���������� #�� ��� �������� #�� �� -� �� &K 2����

����� L� �J+449�� �������� �� �����������O� ����

-��$� �� ������� ��� .&$����/�����

A��� �:�- ������ ��� ��� ������ ���� ������ ��� �� ���

������������ ������� #�� ��������������� �� �� �� �������� �

)�4��)&F ������������� �������� � )�?��)&F �������������

�������� �-������� F�������� '����� 5#�.������ JF-?4��+

��� JF-??��+� A��� ������ #�� �������� �� � 4���3 �����

�������� ��� � �:�-� ��� � �����&� �+����� ?���2 ���� �

�-&F� �7&F� ��� �&&F� ����2 �)&F� +���2 )�4��)&F �

)�?��)&F� 4� ���� � :���� ���� ��� +� �2 ���������� ���

9�� ���� � 5����5����(( ������� ����������� �(������� J+??�*=

�+4� �� 5����5���� ����� -��� ���� ��� � 9� �) �� 4 �� ��

������ � �� �������� )�4 ��� )�? �� ������ #��� ���� ���

����� #�� � 8?�3 � �? �2 A�&- ��� 4 4�3 � + 2 ��%, ��

+� ��� � 8? �) ������� �� :�- -��� �� ������ � 4 4�3 �

+ 2 ,)� ��� ?�3 � + 2 &����,)�� �, 8 *� �� ����� ����- #��

���������� #�� � + ����� � 4 2 ����� ����� ��� # ������

� ������ ��� �� ����� #�� #����� #�� *�D ������ ������ ���

����������� �� +��3 � �� ����.��� ����� �������� 4� 55)�

� �D 5�5� ��� � ��D ���� :�- �(������� J+?9�+=�++� F� ��

#��� ����"�� � 2������� �/����#��� 5#�.������� !��������2)

"����

0&$����/����� �������� ��� #��������& ����&���

'���� �� ����.���� �� �� � ����� #�� ���� �� + ��� ��� ���

������� ������� �� ��������� ����� � ���� ���� 5����� #��� ������

�� �� ����.��� ���� ���� ��� ���3 � 4� 55) #�� ������ ������

���� ���� �� ���� ������� 5����� #��� ���� ��� �� +9=+8 � �� �

#��� �� � 89 �) ��� #����� ����������� �� �� ���#��� ������>

�� 55)� � +D 5�5 #��� �� ? ���� � �� 55) #��� �� + ���� ���

� +� 55) #��� �� + ��� 5����� #��� ����� � ����������� �

0��� � �� � ��� ���� ��������

2��������� #��� ������� #�� � �������� ����� �������� �5����

-����9���1 F������ '��������� 5������ ������ #��� �������� ��

���� E������� � � ������� � +��� ��� ����� & ������.� ��

# �������� #�� ������ ������ �������� ����������� ��� �����

�#�� ������ #��� ��$���� ���� �� �� ������ ��� � �� ����

����� #�� �� ���� + � �� ���� �� &�� ������� E���������

������� �� ���� E������� ��� �� ���� ���� #�� ���������

� ����� �� P���-���� ������ /����� 4 � �F������ '���������

'�������� E��������� #�� ��������� �� �� ������ E���������

������ � ������� ������ ����� ���� ���� �� (������ �

��������� � � ���� #�� ��"��� �� � ������� #���� ������ ��

�� �������� �����

+8�� - '��� �� ���

� ���9 C������� � A������ ����������� 5������� ��� ��� ������� �� ������������� ��� +8�+=+844

����������� ���������� �� #��������& ����

5� ��������� �#�� ���� ������� �������� ����������� ��

���� � ������ �� ���� ���������� �� ����.��� ���������� ���

���� ���������� ����� �������� ��� �������� �� �� ��������

�#��� ������������ �)�? �� ����� �������� ��� ������������

�)�4 �� ����� �������� ����� �� ���� >������ ���� �� ���� >

7-F�,� ���� &�� -������� #��� ��������� ��� �������� �

�������� ������.�� ��� ���� ���� � �������� ������ ���

7-F�, � � � #���� ��� ��������� ��� ������ ������������

��� �����"����� #�� ������� ����� � ����

���� ��� ������� ��� �������� � ������ �����

&�� '1� ���� �7��'��� �������� � �2Q�+4�*K� #�� �����"��

� ������� ���������� '���E�� ��� � �� :�- ��������� ��� ��

������� ����� ��� � ������������ �������� #��� ����� +��

������&�+��+*� ��3 � ��&F ��� � +� �2 ���� ��� ���� ��

+��3 #�� :���� �����#��� &���� ������� #��� ����� ���

����� � 8? �) �� ? ��� ��� ��� � ��� C�� ��������� � ?� "��

����� ����� #��� ����� �� ������� ���#�� � ��3 � + 2

���������� +� ! :�-��� �(������� J+??+*=�+��� +�3 ��� !;

�3 5��������� (( :����,�������� ����������� �(������� J+*�89=

�+9� &�� ������ #�� ���� ��� � 9� �) �� 4 � & ����� :�-=

��- �� ����� � ! :����, �(������� J+*��+=�K+� #��� ����� ���

���� ��� � 4K �) �� 4� ��� &�� ���- #�� ��� F): �����"�� ���

8,�������� #�� �� ���#��� # �������> )7)������7)�

7-&7777&77-777)&7) �� ��#��� ������ ��� ))7�����

��)77&&--&7-&7-&7-&7-&7-&77&-)-)77-7)&7&&)�

)77 �� ������� ������ &�� ��#��� ������ ������ � 2�#,(

�������� ��� ���#�� � �� ?� �� )�*+ ���- �����"� ���������

�� ������� ������ ������ �� 4� �� )�*+ ���- �����"� ��������� �

8,���&��� � �� ��� ��� �� 3.�( �������� ���

&�� F): ����� #�� ������� #�� 2�#,( ��� 3.�( ��� �����

�� ������� ���� �� �&L94+ �C�� �� &�� �&L94+ �� � �������������

��� �5(�� ,(/�+ ����� #���� ������ �� ����� ���� ������ ��

������ �� �FF& ��� �� #������ ������� ����� ������������

���� �������� ������ �<F:A� ( #�� �������� � ������� �

2(�((;2�#,( ��- ������� �������� �� �������������������

���������� &- �?�� ��� �� ���������� ������ �� ����� �4���� � 2�#,( ��� �#������ � )2/ ����� �� � 5(� ,(/�+

���� - ���� ���� ������� �&L944� �� #���� 7CF �������

��� �� �������� � � ���������� ������ �� ������ #�� ��������

� ������ � 2�#,(;2(� (( ��- ������� �������� �� 4�- ����

�� � 2�#,( ��� �� �&L94+ �C�� �� -�� �������� #��� )�)��

����"��

&�� ���� ������� ������ �&L94+�)�*+=8,�� � �&L944��

����� #�� �� ��������� ������ ������� ���:C ��� ��

������� ������� �2�7�/5/�7 #��� ���������� �� ,AL�04&

����� ������ �� ����� �������� �������� �� �� � +008� '���E�� 4 �

���� ���������� �� ���� ������ #�� ������� #�� ����� �2A2

����������� #�� +�D C)5� ?� !;�3 ����������� ?���;�3 �����

������ � �?��;�3 �����.�� ��� + �2 3��������� - �� �

4��� ������� ��- #�� ���� �� �� ��������� �� ,AL�04&

����� � � ?�D ��E������ � � +������������ ���� ������� #��

� ��+D ��� ������ �5���� JF9K�K� &�� ��- #�� �������� �� ��

���#��� �������> +?�� � �&L94+�)�*+=8,�� �� �&L944�

7CF�� +��� � �� ���:C ��������� ������� ��� ?�� � ��

�2�7�/5/�7 ������� ������� ��- #�� ����� #�� 8��3 �

� 2 )�)�� ��� �� ����� #�� ���� �� ?���3 #�� ������ ����

���� #��� &�� ����������- ��� #�� ����� #�� �������

?���3 � �� ,'5 ��*� �2 ��)�� +� �� L)�� + ? �2 ���,F%9�

+� �2 ������ R���� ������ �����O ��� ?� �2 ,AFA5 �, K �?�

��$���� #�� � ? 2 ��%,� ���� � ��� �) �� +� �3 ������� &��

��� #�� ���� ��� �� 4� ��� � �� ���������� ������ ���

����� ����� �� ����� F���� #��� ���� ��� � 4K �) #�� ?D

)%� C������� ���� ����� �� ��������� #�� �������� ������

����� +? ��� � 8���� � - ����� ��������� #�� �������� ����

����� 9* � ,������� ���� #��� ����� � ���������������

� 9? ���� � �� � � � 9 �) &�� ����� #�� ����������� �� F'5

����� �������� +D ���� ����� �� ����� ��� ���� ��.�� �

�*� �) &�� ����� ���� #��� ��������� � ��9 ������ ��������

���� �LF3� !5-� C� �� �� ���� ����������� �� �������� �����

���� ������ �� ����� ������� ���� #��� ���� � � 9 ��;�3 �

��9

������ �������� ��� ������� ��� ��������

5� $��� ���� �� ��� ��������� #��� ���� <���� ��� #������� ��?=

�?� � �':3� C����������� 5#�.������� -�� ������ ���������� #���

������� � �� ��������� #�� �� ���������� ��� ��������� ��

-����� A������������ '-7� '���� 5#�.������ &�� ������� #���

����� �� ��� �� ����� ������ ����� #�� #��� ���� ���� -����� ��

��� #��� #�� ���������� &���� ���� ���� �������� �� "�� ���� #��

��������� #�� � ��D ����������� �5���� J��0*0+� ��� ?D

������ ����������� �� #���� �� ����� ���� �� ������ #��

��������� ��� #�� ?D ������ &�� ������� #��� ��� �� �� ������

������� ��������� � � +��� ���� > +��� ���� ����� ������ �� �

+0 > �� ��

��������+�� ���(��& ��� ��5������ �� �.� ���������� ������

-�� ������ ���������� #��� ������� � �� ��������� #�� ��

���������� ��� ��������� �� -����� A������������ '-7� '����

5#�.������ '���� �� ������� ��� #��� ��$���� #�� ����

�� 9 ��;�� ����������� � � �� ��� �� +? ��� ��� ��$���� #��

�� ������ �C������ 9?���;��� � � � -��� +? ���� �� �������� "���

#�� ������� ������� ����� �� ���� ����� �� ?D ������������

������� �� K�D ������ ��� ������� � #�� ������� ����

-������ #��� ������ �� � �������� ����� �5������ (3�

5������� ��$����� #��� �������� ����� � ?��3 ,�����

������� #�� � 44������ �� ������ &�� ��$����� #��� ��������

�� �� /&- ������� �81 ������ �� ?1 ������ �* �� ��� �� �-��

������� �+ 91 ������ �+ 81 ������ �8 *� �� ��������� ���

����� ��� �� ���� ���� &�� ���� #�� ����� #�� � �������

������� ���� �� ������� ��� � � �3 � 2������ �� �?D ������

����� ������������ #�� ������� �� #��� �� ���� ���������

%�������� ����� #�� ��� �������� #�� ������ P���� �������.�

����� ��� �� ����� #�� ��������� ��� � ������������ ��

������� ,����� � �� ����� �� ������� � ��������� � ������

� �0D ������ ����� ����� �� �������� ��� 2��� <���� ��� #���

��������� ��$���� �� �� /&- � �� �� �-�� #�� 9�3 �

��������� ��������� ��� �����$���� � ��3 � �����)�*+�

,��8 ����� #�� ��3 � �����7CF� ��#�� ������� � �� ����� �

�� ��3;��� &�� ������� #�� ��� ��������� �� ����� �� � ������

? ��� ���� ��$���� ��� ��� #�����#� ���� ��#�� ������

���E# � ����� &�� #��� ��� #�� ����� #�� ������ ����

����� :�� #��� ��� ������ ��� �� ������ ��$���� #�� �

������ � -������� �������.�� + ��;��� � � � ��� �� ��� �����

������ � ��;��� � � � �� ��������� � ? �3 � � �0D ������ �����

��� :������ ��������� � ��;��� � � � �� �������� ��� ����

������ 3������ � #�� ���������� ���� &�� ������ #�� �������

��� �� ���� � � �� ������� ��� ��� #��� ��� �� ��#���

��� ��� ��� � ������� � ��� � ����� �������� &�� ���� ���

�� 4 ���� ������� � ����� �� ������ ����� �� #��� #��

� ��D ����������� �� �� "�� ���� ��� #��� ���������� ��

�� ����� �� :� ������� #�� ���#�� ��

� ���9 C������� � A������ ����������� 5������� ��� ��� ������� �� ������������� ��� +8�+=+844

)�*+ ������� ��������� ������� �� ������ ������ ����������� +8�4

���� + 2�������� �������� � )�*+ ��������� ������� �� �� ����������� ������� ����� ���� ������ ��� ������ ������� ���� � ������������;������� �� ����� 2��������� #��� �������� �� �������� �������� ������� �� ������ �� �� �� 2������� ��� ����� ������ ��� ������ � ���- ����� )�������� #��������"�� ��� ���� �� � ���� �������� ��� � � ����� ���������� ����� #�� ����� )���� �������� �� ��������� ��� ���� ��� ���� ������ ���������� ������� ���� �������� �������� � �� ������ ��� 7-F�, ��� ������ ������ )-:& ������������������ �������� ��������� #�� ���� �� ������� ���� &�� :�- ��� ��� �������� ���� ������ ��������� �� �������� �� �-��� �� ���������� ��� �� ����� ������ � ������������ ��������������� ������� #��� ��������� �� ����� #�� )�?��)&F ������������� �� $���� ��� )�4��)&F ������������� �� $���� ��� �� ����.�� � �� ���������� �:�- ��������� ��� �� ����.��� #�� �������� ����� ��� ���� ���������� ������ � ������ � ������������ ������� -����� #��� ������� ��� �������� �������� �� :����� #��� ������.�� ��� �����"��> ���� ������ �#�� ���� ������� �������� ��� �� ��������� ����������� �� ���� ���� ��� �������������� �� ����.��� ���������� ��� ���� ����� �������� ��� ���� �� ������������ �7��� >������ � 7��� > 7-F�, ��� )�? �� ����� �������� �� ������������ �� �� �7��� >������ � 7��� > 7-F�, ��� )�4 �� ����� �������� �-� 7��� >������ ���� �� ������ ��� �� ������ �� �� �'� 7��� > 7-F�,���� �� ������ ��� �� ������ �� �� C� �����"���� ���� 2������� ��� ����� ������� �� ��������� ����������� �� ���� � ������ ��� ���������#�� ���� ������� �������� �� �� �������� �#��� ������������ �)�?��� ����� �������� ��� ������������ ������� �)�4��� ����� �������� ����� ��7��� >������ �-� � 7��� > 7-F�, ���� �'� &�� -������� #��� ��������� ��� �������� � �������� ������.�� ��� ���� ���� � �������� ������ ���7-F�, �#���� � ��� ���������� ��� �����"����� #�� ������� ����� � ���� -� � �?1 -� � ��+ ,���� ����������1 ����� ������� ����� ���1 )��������� ������1 /&-� ������ ������� ����

���� � 7��� ������� ��� �� ���� ��������� �-� &������� �������� �&L94+�)�*+=8,�� ��� �&L944�7CF ���� �� ��� ���� �� �� ������� � ����)�*+=8,����� ����7CF &�� �������� ����� � &��%�� ������ ����� �� ���� � � ������� )2/ ����� ��� � �FF& ������ �'� 7��� ��������� ���� �� ���� ������� �����)�*+=8,�� ��� ����7CF &# ��������� � ����7CF ��� ����)�*+=8,�� ��� +�? �� ��9;�3� #��� ����� ��� ����$���� �� �� /&- � �� �� �-������������ ��� 2������ ��� ������ -������ #��� ����� ����� ?D ������ �=�%GS� � ?D ������ > � ��D ���������� ���%GS� -��� � #����� �������#��� ������� ����� ������ ��� �������� �� ���������������� 7CF ��������� �� ������ ������� ��� )�*+=8,�� �� ������ �� &���� :�� ���� 2��������� ����� ������ 2����"���� 9��1 ���� ������� ����� ����� � �� ��$���� ���� ������"���� � ?�� �)� ,� ���� �������� � ���� ��������� ����������� 3���)�*+=8,�� ��� ����7CF ���3 ����� #��� ������������ ����$���� ��������� �� �� �-�� ��������� ��� 2������� ��� ������ � �������� � ������� ��� �� ������� #��� ������� ������������ ���� ������ ���������� �� �%GS�� � �9 � ��%GS �9 �� � K� � ��%GS K� �� ���� ���������������� �?D ������ > � ��D ����������� �� ��$���# �� �� �������� #���� -��� K� � #�� ����������� ���������� #�� ������ ��� �� ��� ���� �������� #���� #��� ������ 08 � ���� �� �%GS 08 �� -��� �������� ����� #��� ������� �������� �� ��������������� ��� ���� ��������� �� �� ��$�������� #�� ����������� ��������

� ���9 C������� � A������ ����������� 5������� ��� ��� ������� �� ������������� ��� +8�+=+844

+8�9 - '��� �� ���

� ���9 C������� � A������ ����������� 5������� ��� ��� ������� �� ������������� ��� +8�+=+844

)�*+ ������� ��������� ������� �� ������ ������ ����������� +8�?

'��( �����#��� ��� ����#���� �������& #������#���

3��� ������ #�� ������ ������ �� ���� ����� %�� #���

���� �������� ���� �� $�� #�� #������1 �� ������ #�� ���� �#�

��� �� ������ ������� ��� ������ ���������� �� �� �������

������� ���� �� � 4� ��� ������� #��� ���� -��� � 4�����

������ �� ������ ���������� ������ ��� ������ ��� �������� ����

�� $�� �������� �������,)� �+� ��;��� � � � ��� #�� ��� ������

��� �� �� ���� �������������� ���� �� 8� ���

3��� ������ #�� ������ �� 2A��%C-�:5 ����� �2A�

-������� (�� !5-� -������ #��� ������ �� � ������ �94 � ���94 � ��� 4� ? ��� F/) ������� -����� �� �� ���� #�� �������

� �� ��� ���������� - ���� � +8 ������� ������ � ?9 �� ���

���� ���� �������� �� RG=SO ����� � �� ������ ��� ���� ���

����� &�� ������ ���� ������ �� ����� � �� ������ ��

���� � �� G ��� S ��������� �� �� ������ ��� �#��� ��

������ ��� ���������� �� ��� �������� &# ��� � ����� #���

���� �� �� RG=SO �� ����� ��� ���� #���� � ������ �� #�� ����

�� �� RTO ������� ���

5���� #�� ������� � ������� �� ������� ������� � ��

�������� � �� ��� ���� ���� ���� #���� � ������� ��� #���#

� 9 � #���� �������� ����� ���� ��� ��� �� ��� '� ��.� #��

��"��� #�� # �� ���� � G � S � ���� ���� �

������ #�� ��������� �� ����� 5����� � ��� �� �� �

#�� ������ � �� �� $�� <��� �� ������ ���� �� ����� �

�� �� � #�� ��������� �� ����� ��� �� � ��������� � ��

�� $�� &�� �� $�� �������� �� ����� ���� � ��� � ����� �� ���

��������� � �� ���� ��� �� ������ ����� &�� ���������������� #��

��� ��������� 5������� ���� #��� ��"��� �� �� �� ��� �� �

��� ����� ������ �� �

����������� ���������� �� $�.�������� ����&���

&�� ��� � ������� ������� �� ���� � �� �������� � �� �����

���� � �� ��� &��� �� ������ �������� �� ������ �������� ��

�������� ������� ��� ���� �� � ����� ��� ��� �� ������� �

��������� �� �������� �� # ��� ���� �� � �� ����������

�#��� �� �������� � ���� �� ��� ���+�

<���� �� ���� ����� �� ����� ��� ������� �������� #���

������� � � ����������� �������� ���� ��� ������ �� ������

������ ��� ������ - � ��� ������ '� � �����"��� ������� #���

������ �� ��� ��� ��������� ��� �� ���� ������ &�� �����

��� �� ������� �������� ��� ��� ����������� #���� �� ������

#��� ��� ��������� ������ ������ ����� ��� �� $��� � �� ����

���� � �� ���� ������� ��� ����

&�� ���� #�� �������� � �������� � �� ��� �� $��� �����

��� ���� ����� �� �� ���� ��� ��� ��� �� -������ #�� ���������

����� �� �� �����"����� � �� ���������� �#��� �� ����� #��

��� #��� �����������

��� ����������������

- �� ��� � �� ������� ������� #��� ������ � ��������� :�

����� #��� ������� �������� � ��� ��.�� �� �������� ���

������� �� �4� �) �� 4 ���� ��� ��� � ��? �) )���� ������

#��� �� � +9�� �� � ����� �3��.� ��� ������ � �������.�� �����

������� ��������� � �� ��������� �� �� ��� ��� ��� � ��? �)���� ������ ���������

-������ ������ #��� ����� ������� ������ �� ������� �����

7CF�E���������� � �� ����� #�� ���� �������� �� ��� ��

�2)-+408� 5����� �� ������� )�*+=8,�� ��������� (� ��

���� ����� ������ #��� "��� �� 9D FC- �� +? ��� ��� ��� #�����

���� ���� �� F'5 5����� #��� ����� ������ ��������"� ������

�� 4� ��� � �� ��������� �� +� F'5 �������� +D ����

����� �� ����� +D &��� G�+�� ��� 4D ����� �� ����� 5�����

#��� ��� ������ ��� ���� ��� �� 0� ��� #�� ������� ��� ��

����� ����������� �� ��� ��� 2)-+408� 5���� + > 8���� -���

�� #�� ������ �� +� F'5 �������� � �+D &��� G�+�� ��� +D

����� �� ����� 5����� #��� ��� #����� ���� ���� �� +� F'5

��� ���� ��� #�� �� �������� ��� �� �&���� ������$����� ��

������� ������� ���� 7� 2������� F� ��� + > ���� �� �� ����

�� 9? ��� � �� ��������� 5����� #��� ������ ���� ���� ��

? ��� �� +� F'5 � �� ��������� ��� ����������� #�� � ������

�������� ������� �� +� F'5 �-C+ ������ ������ )��E���3��

(� ��� ����� ������� ����� �������� ������ � �� ����� � ��

������� ��� ��

������������ #������� &

5����� ������ #��� ������ ����� � ����E��������� ��������

�-������ � �������1 T����� #�� � �9� � � �84 $����� ���

��������� ����� � ����������� ������ �-������ T����� ���

���� ��������� ��#��� �-������� ����� 4 +� &�� E���

����� �7CF� &���� :��� #��� ������ #�� �� ��������� �������

������ �,-3 +��� 7CF #�� ������ � � 90? �� ��� ��� #��

������ ����� � ���� ��� ������� ��� ?+� ??� �� &���� ���

#�� ����� � � ?0? �� ��� ��� #�� ������ ����� � ���� ���

������� ��� 8�� 88� ��

6�������������

5����� #��� ��������� #�� � �9� $����� ����� � ������

������ �-������ T����� ������ � ����E��������� ��������

�-������� �������� T����� 5������ ���� #�� ���� ����� �� �����

�� �� ���� ����� � ���� ����� �������� �� ���� ������ <����

���� ������ ����� ��.� #�� ��� ����� ��� ����� ����� &��

������ � 7CF � )�*+������� ����� #�� ��������� �� ���� ����

����� � ������ � ���� ���� � ��� ���� ����� �� 5��� ��#���

A��� ����� #�� ��������� �� &(CC ����� ������.�� � �� �

������ �� �������� &��� � ����������� �������� ������

���������� #�� ��������� � ���������� �� ����� ������ � �

"��� �������� ����� 5������ �������� #��� ���� �� ���� �����

������ �� ������ ����������� #��� �������� �� &�� ���� ����

����� � ����� ������� �������� ���� ����� � ��������� �

����� 7CF � )�*+ �� �� �����"� ���� & ���� �� � 7CF � )�*+

������������� ������������ -�%/- ���#�� � � 5������ �����

#�� ���� -�� ������ ��� ��������� �� � ����� 5A2

>�����

���� ����� ������ �� ���� ��� ���

)�*+ ����������� �� �-�� #�� �������� ������ �� � �����������

������� ��������� �� ����� �������� � ������ ������ �2�����

�� �� � ���+� &�� ������� #�� ������ ������ �� �-�� � �������

����� ������� �� �� ������ ������ � ��� ������ - �����

��������� �� �� ���������� � ������������ ������� #�� ���

������ :������� F): ��"���� )�*+ ����������� ���� ����

������ ������� ��#��� � 9 8���� �������� �� �� �-�� �2�����

�� �� � +0001 '���.�/���� �� �� � ���+1 2����� �� �� � ���+� (� ��

������ ����� ���������� #��� �������� ������ ��"�� ��� ���

�������� �� �������� ��������� � ���� ����������� - ���������

��� ���� #�� �������� ������ )�*+� ������� ��� )�0 ����� #��

� ������ � ���� ����� M���� ��� ���� ����� �� ������� ������

)-:& ������� ��� ���������� �������� ��������� �� �������

������ �������� ���� ����� ����� #�� ������ ��� 7-F�, ��

������� ���� �����N 7������ #�� ���� ������ �� �������

������ ���� ��#� �� �� ���������� ������� )�*+ �� ������

� ���9 C������� � A������ ����������� 5������� ��� ��� ������� �� ������������� ��� +8�+=+844

+8�8 - '��� �� ���

���� 4 ���� ����������� ���� !�� ������� ������� #��� ������� �� # ����� �7��� + ��� 7��� �� 7��� + #�� ����� ���������� > ������ �� ���������� #��� � ��� 91 7��� � #�� ����� ��� ������ - ��� K� ������� #��� �� $���� ������� ��$���� � 9�3 � ����)�*+;3���7CF ��� ���#�� �������� ����� K ���� &��� 5����� - #�� ������� #�� � ����� A��� ���� #�� ����������� ������ ����� �+� ��;��� � � � ��� +� ��������� ���� ������� ������ #�� �������� - �� ��� � 5����� -� ���� ����������� #�� ��������� ��� �� ����� #��� �#����� 7��� + #�� ����� ��� �������#������ 7��� � �������� ���������� > ������ 5���� ���� ���� ��� ������� #���� ���������� ��� �������� ������ ����������� ����� ����� #�� ������������ ��� +� ��������� ���� �5����� '� ��� ���� ������ ������ &��� ���� ���� ��� �������� �� ���� ���� ������� � ����� ����� ������� ����������� ����������� - �� ��� � �� ����� ������ ������� #��� ������� ����� ������ ��� �������� �� ���������������� '��� ���#� ��� ���#���� ���������� #�� ����������� � ������1 ��� ���#�� ��� ���� #���� ������ #�� �����������1 ���� ���#�� ��� ���� #���� ����������� #�������

� ���9 C������� � A������ ����������� 5������� ��� ��� ������� �� ������������� ��� +8�+=+844

)�*+ ������� ��������� ������� �� ������ ������ ����������� +8�K

��������� �� ���#��� �������� #�� ������� �'���.�/���� �� �� �

���+� )�0 �� ������ �� �� ���� �������� �� ��������� )�*+

��� ������ �� �� ����������� ������ ��� ���������� :�- ���

��� ������ �-��� /&-� )F� ��� ���������� � ��HI�� � �������

����� ��� ��� 8 ��� ����� #��� ����� �����"�� ��� �� ����� #��

)�4 � )�? ��� �� ����� #�� �� ����.�� � �� ���������� -�

��#� �� C�� +� )�*+ �� ����������� ����� #�� ������� ��� )�0�

� �� �� /&- ��� �� �� �-�� )����� ������� � � ?���� ��������

�� )�*+ �:�- ��������� �� �� /&- ��� � ������� �������� �� ��

�-��� �� �������� #�� �� ������� ���� ���� � �������� F):

����������� ������� ��� ���������������� �'���.�/���� �� �� �

���+1 2����� �� �� � ���+� &�� ����������� #�� � ������ ��

��� ���� ������ ����� � � �� ���������� ��� �� )F�� #����

����� � + *���� �#���������� #�� ������ ������ ��� 7-F�,�

���� �� ������ ��# � ������ �� ��������� �� ��� ������ ����

(�������� �� �������� #�� ������� ������ �)����� �� �� � +00*1

C�������� 6 ,���� +000� #� ������ � �����"��� �������� �� )-:&

��������� �� �� ��� ���� ������ &���� ��� ������ ��"��

������� ����� ��� ������� ������� �� )�*+ ����������� ��

�����"� �� ������ ���� ������ ��� �� )�*+ ��� ���� � ��$�

��� �� �� ������� ������

�� ������� �������� �

(� ���� �� �� ������ � )�*+ �� ����� #� ���� ��������

������ �� ��������� ������ #���� ���#�� �������� ��������

��������� �� ���� -� ��#� �� C�� �-� �� ����� ����� �

�������� ��������� ������ ��� #���� �� ���������� �����

������ �&-� �� ��������� ����� �� ���� � � )2/ �����

��� � ������������������� ��������� ������� #���� ����� ��

��������� � ����� �� ,�������� )�*+ ���- � �� 7CF ������

���� ��&L94+�)�*+�,��8 ��� �&L944�7CF� ������������ /���

�������� #��� ������� � �� ������� ����� ������� ���������

�������� ��� ��������� � ��������������� &�� � ���� � ��

����� ������� ��� ������� �������� ��������� �� ����� #��

��"���� ���#��� ��������� � ,AL�04& ����� ���� �

��#�� & ������� �� � ���� � �� ��#�� �������� �����

������� �������� ��������� �� ���� ��3 � ��������� �����

)�*+=8,�� ��� �����7CF��&L944 �������� �� 9 �� ��9���;�3�

#��� ������������ ��$���� �� /&- � �-�� -������ #��� �����

����� � ��D ���������� > ?D ������ ��� 4� � #��� �� + #���

���� ������� - � #���� �� ��$���� �� ������� #��� ������

��� �� ������ � ��������� #�� ��������� � ������������

���� -� ��#� �� C�� �'� )�*+ � 7CF ��� ��������� �� ���� �� ��

� ����� � ���������� &�� ��������� �� ���� ������� ���� ����

�� �� ����� �� ��"���� �� ��������� ��� � �� �� �� ��� ���

������� ���� ��������� ��� �� ��� �� �� ��$���� ���

�������� �� �� � +0081 &��� �����

<��� ������� ������� ����������� �� ��������� � � )�*+

��� 7CF �� ������� �#���������� ��� �� ����� � )�*+ ���������

� �� ��$���� ��� �� ��������� #���� �9 � ����������� +�=

+?D ����� ������� ��������� ������� ���� �� �� ������ ����

�C�� �' ��� )� :������ ���������� ������ �� ����� � )�*+

��������� +��=+��D � �� ������ ����� �C�� �)� 3��������

������� ������� ����� ��� ������� ������ ������ ������ ��

�������������� �C�� �'� &������� ��� ���� ���#� �� ��

����� �#��� � ���� ���� ���������� ��� ������� �� ����� �

�� ��������� ���������� &�� ������ ��������� � �� ������

��� �� ���� ��������� � ����� �������� ���� �� ��� ���� ���

� ������� #�� ���� ����� ��$���� ,#���� �� �� ���� ���

��������� �� ������� ��� ������ ���� �� ������� ���� )�*+ ������

�� �� ����� #���� �� ������ ������� ��� ������ ������

�'���.�/���� �� �� � ���+�

!������ ��� ������� ���������� "��� �������� ��������������������� ��� ������� ���� �#��������

- ������ � �� ���� ������ #�� ������� �������� ������ �� ��

������ � )�*+ � ���� ������������ �� �������.�� �� C�� 4 !��

������ �� ������� #��� ������� �� # ����� ��� 8� C�� ����

���� �������� �� ���� �7��� +� �������� � ��D ���������� ��� ?D

������ �� �� �������� #���� �� ��� ���� �7��� �� �������� ���

?D ������ %�� #��� ���� �������� �� ������� �����#�� ��������

������� ��� #��� ��������� ��$���� #�� ��������� ��������� &��

��$���� ������� � � ������ � ��3 ����7CF ����� #�� ��3

����)�*+=8,��� � ������� ��9��� ���������� %�� #��� ����

������� � "�� ������ � ������ ����������� #�� �������

���������� ������ -� )����� #�� ����������� ����������

�+� ��;��� ����� �� � � ��$����� ��� +� ���� ��� ���� ������

#�� ������ ���������� ���� �� ��$���� - �� ��� � ������ -�

���� ����������� #�� ���������� ��� �� ����� #��� �#�����>

������� ��� ���� �� #���� ��� � �������� ���������� � ���� #���

����� � ��D ���������� ��� ?D ������� ��� ������� ��� ���� +�

#���� ��� ��� ����� ����������� �# �������� ��� ?D ������

-��� + #��� � �� ���� �������� ���� ����������� ����� ����

��� ���� ��������� #�� ����� ����� ��� +� ��������� ����� #����

�� ������� #�� ���������

&��� ������ ����������� ������ #�� �������� #��� �� #

�������� ��� � ������� (� �� �� � �������� �� ����)�*+=8,��

��� ��� ��$���� �� �� /&- ���� ��� �������� C�� 9�� ��� �� ��

����� ��� ��$���� #�� �������� �� �� �-�� ���� ��� ��������

C�� ?�

(� ��� ����� �� ���� ��������� � )�*+ ������ �������� �������

������� ����� ��� ������� &���� ��������� ������� ��� �

��� �������� ��� )�*+ ������������� ������ ������ ���������

���� ������ � #�� � #��� ����������� � ����

������� ��� ����������� ��������� � )�*+ ��������� -� ��#�

�� ���� "������ #��� ������ ��� ����� ����������� � � #��� )�*+ ��

� ��������� �� �� ���� ���� �/&-� C�� 9 � �-��� C�� ?�� ������

����������� ������� � ����� �� ���� ������ � ������� ��

������ ������� ����� 9? ��� ���� ���� ��$���� ,#����� �� ��

� ����� � ���������� ��� �������� �� ���� ��� �����"��� ��� ��

��������� ������ � 4 ����� ����� � �� ���� ������ ���

������� #��� �� ���� �� ��������� �� �� /&- ��� � 9 �����

�������� #��� �� ���� �� ��������� �� �� �-�� <��� ���������� ��

���� 9 )�*+ ��������� �� �� /&-> 3��� ������ ��� 5������� ������� 5�� 2������ ��� ����� �� ������ �������� 5���� ���� ���� �������������� #���� ������������ ������ 3���)�*+=8,�� ��� ����7CF #��� ����$���� ��������� �� �� /&- ���������> ������ �81 ������ �� ?1 �������* �� ��������� ��� ����� ��� �� ���� ����� 5���� ���� ���� ������� ������ - #�� ������� ���� C�� 4� F��� ����� ������ ��$����� ���� ������ #�������� �� �� ������� ���� �� 4� ��� ���� �� �� ���� ������ #�� �������� )����� �+� ��;��� � � � #�� ��� ��$���� ����#� ��� �� ������ ������� ��������� ���� �� 8� ��� ���� ����������� #�� �������� ����� ��� +� ���� ������� -� � +� ���� �������� 3��� ������ ������� ��� ������������������� #��� ������� � ���� ������� ��� A��� ��� ��� ��������� �� ������� ��� ���� ������� � �� "�� ����������� ������� -� � �������������� ������� '� �������� �� ���� ������ 3�� ��� ������ ������ ��� ��� ��� ���� ���� �� �� �������� ������� :��� ������ ��� ���������� � ����� ��� ������ ������ ��� �������� �������� � �� �����"����� � �� ������ ����������� �#��� ���� + ��� ���� � �� ���� ������ '��� �� �� �������������� ������5A2 -� � �?1 -� � ��+

� ���9 C������� � A������ ����������� 5������� ��� ��� ������� �� ������������� ��� +8�+=+844

+8�* - '��� �� ���

� ���9 C������� � A������ ����������� 5������� ��� ��� ������� �� ������������� ��� +8�+=+844

)�*+ ������� ��������� ������� �� ������ ������ ����������� +8�0

CD81 in NAcc – LOCOMOTOR ACTIVITY

CD81 in NAcc – STEREOTYPES

Group 1

0

4000

8000

12000

16000

20000

24000

28000

0 15 30 45 60 75 90Time (min)

Dis

tan

ce T

rave

lled

(m

m/m

in)

Group 1Group 2

0

28000

0 15 30 45 60 75 90

Time (min)

Group 2

0

40008000

1200016000

20000

2400028000

0 15 30 45 60 75 90

Time (min)

Dis

tan

ce T

rave

lled

(m

m/m

in)

Group 1, with DOXYGroup 2, NO DOXY

**

****

+ DOXY - DOXY

SE

SS

IO

N A

0

4000

8000

12000

16000

20000

24000

28000

0 15 30 45 60 75 90

Time (min)

Dis

tanc

e T

rave

lled

(mm

/min

)

Group 1

0

28000

0 15 30 45 60 75 90

Time (min)

Group 2

0

4000

8000

12000

16000

20000

24000

28000

0 15 30 45 60 75 90

Time (min)

Dis

tanc

e T

rave

lled

(mm

/min

)

Group 1, NO DOXYGroup 2, with DOXY

**

****

- DOXY + DOXY

SE

SS

IO

N B

** p<0.05

** p<0.05

0

800

1600

2400

3200

4000

0 15 30 45 60 75 90

Time (min)

Ste

reot

ypic

cou

nts

Group 1

0

800

1600

2400

3200

4000

0 15 30 45 60 75 90

Time (min)

Ster

eoty

pic

coun

ts

Group 1, NO DOXYGroup 2, with DOXY

**

**

**

0

4000

0 15 30 45 60 75 90

Time (min)

Group 2

0

800

1600

2400

3200

4000

0 15 30 45 60 75 90

Time (min)

Str

eoty

pic

cou

nts

Group 1

0

4000

0 15 30 45 60 75 90

Time (min)

Group 2

0

800

1600

2400

3200

4000

0 15 30 45 60 75 90

Time (min)

Str

eoty

pic

co

un

ts

Group 1, with DOXYGroup 2, NO DOXY

**

****

+ DOXY - DOXY

- DOXY + DOXY

SE

SS

IO

N B

SE

SS

IO

N A

** p<0.05

** p<0.05

���� ? )�*+ ��������� �� �� �-��> ���� ������ ��� �������� ������� 5��� ������� �� �� C�� 9� � ������� ���� ��� ������ �� �� �-��� ������� �������� ��$����� � ��������� ������ �+ 9� ������ �+ 8� ������ �8 *� ��������� ��� ����� ��� �� ���� ����� -��#�� ��� ��� ��� 4� ����#��� ������ #�� ��$���� �� ������

� ���9 C������� � A������ ����������� 5������� ��� ��� ������� �� ������������� ��� +8�+=+844

+84� - '��� �� ���

����� ����� �� ������� �� ��������� ����� ������� ��� �������

��������� �� )�*+ ��� ���� �� ��������� ������� ����

����� #�� ������� ������ �������

<��� �� )�*+ #�� ��������� �� �� �-��� �� ���������

������� #��� ������ ���������� ������� ����� ��$���� �� ��

/&-� ��� #��� �����"����� ������ ��?=4�D1 C�� 8-� &�� ����

������ ������� #��� ��� ��������� ����� ������� �� ��#� ���

�� �������� ����� ������ �� �� ��������� ��� �C�� +� ���

������� ������ �'���.�/���� �� �� � ���+�� ������ ���� � ����

�������� �������� �+�� ��;�� ��� �9 �� ������� +� ��;��� ��

��������� �������� ��������� ��������� ������ ��������

��������� � )�*+ �� �� �-�� ���� ������ ,#����� �� #

��������� ��� �������� ���# ������ �������� ��� ��� ��

����� � ��������� ������ ������� � �� ��������� �� ���� ������

��� ������������ ����������� � )�*+ ����� ��� ��������

F����� ��������� �� �� ��������� ������ �� C��� 9 ��� ? ���������

�� ������ � ���� + ��� � ��� � ����� ������ &�� �������

�� ���� ��� ���� ����� ��� ���� ���� �� � ����� ������ #���

�������� ��� �� ������ ������ �� ���� ���� #��� ����������

������� -� ��#� �� ������� ������ �#��� # ����� �� �

������ ������ ��� ���������� ���� �����"��� ��� ���� �������� ��

<���� � ������ ������ ��� �� ��� ������ ����� �#����� #� ������

� �������� ���������� ��� ��� #��� ��� ��� ����� ���� �������

������ #�� ������� �� #��� ������ ����� �� ���� �������

���� 8 �-� )������� � ���� ������ � ������� ���������� )�*+ �� �� �-�� � �� �� /&- !���� � ����� �� ���������� �#��� �� ������� �������� �������� ��$���� �� �� /&- ��� ������� ��$���� �� �� �-�� #�� ��������� &�� -������� �-� � �?� � �� 4? ��� ��� �� 9� ��� ��� ������ �����"��� ��� ��"���� "����� �� ��������� ������� #��� ������ ��������� ��?D ������� #��� �� )�*+ ���� #�� ��������� �� �� �-�� ������� ����� ��$���� �� �� /&- �'� ��������� � ������.��� �) ��� �� 3��� ������ � ������� ���������� )�*+ �)� � 7CF ��� �� �� �-�� 5��� ������� �� �� C��� 9 ��� ?� �������� ���� ��� ������ �� �� �-�� ����� �������� �� �� C�� ?� ��� ��$���� ��� #�� ����)�*+=8,�� �)� � ��� #�� ����7CF ���� ����������� -��������������� ��������� �)� ������� ������� ������ ������� ��������� �� ����� ���� ���� 7CF #�� � #��� ���������� ���� � ������� ������ ��������������� �� �� � ����� � ���������� �)� -��#�� ��� ��� ��� 4� ���� #��� ������ #�� ��$���� �� �� ������

� ���9 C������� � A������ ����������� 5������� ��� ��� ������� �� ������������� ��� +8�+=+844

)�*+ ������� ��������� ������� �� ������ ������ ����������� +84+

�C�� 8'� &���� ��� )�*+ �� ��������� �� �#���������� �� ����

����� �������� �� ���� ������ ������ ��� ������ ��$���

�� ������� �� ���� �������� ������ ���� � �� +�=+� ���� � �

����� ������ ��� ������� ��� � ������� �� �������� � ������.���

������ � ������ ������ ��� ��� -� ��#� �� C�� 8) ��� �� ��������

��������� ������� ��� ��������� ���� ������ �� �������� �

�� ������������ � )�*+� ��� ��������� � 7CF ������� � ������

������� ���������� ��� �������

��������

���� ������� �� � �������� �������� �������� �� ������� ��

��������� � � �� �� � ����� �� ������� �� �� �� ��� � ��

�������� ���� #��� ���� ������� ��� ���� ���� ��� ���� �� ����

��� # ��� ��� ���� �� ������� -��� ���� ������ �� �������

������ �����"�� )�*+ �� �� ���� ���� �������� ������ ������� ��

�� /&- ��� �-�� ���� ���� ����������� ����� �������� �����

����� )�*+ �������� ��� � 4�9���� �������� ��� ��������� ���

��� ������� ��������� � ��� �� ���"���� �� ���������

������� �2����� �� �� � ����� )������ � �� ��� ���� �������

�� ��� �������� �������� � ����������� ��� ���� �� ���� ����

��"����� & ���������.� ������ �� ������ � )�*+� #� ����

�������� ���� � ���� ����� ���� � �� ��� � �� ������ ��

��������� ������ ��� ���� �� ��� � ���� ������� �� ��������� �

�������� %�� ��� ��# �� ��� ������� �� ��������� ����� �� � �

� ����� �� ��������� ��������� �������� ������ �� ���� ��� �

���������� ���� ������� �������� �������� ������� � ���� �������

��� �� �� ���� ����� #���� ��� ��� � ������� #�� ����������

&��� ������� � �#����� ����� � #���� ������ ��� ��� �����

������ ��������� �� ���� ( �� ��#��� �� ���� � ��������� �#

���� �������� �� ���� ���������� �� �� ���� � 4=9���� �������� �� ��

/&- � �� �� �-��� �� ������ � ����������� ��� ��� � ����"��

#�� ��� ������� �� ��������� ����� �� �� ������ �� ���� ������

����� � ��������� ��������� ������� �� �������� �������� &���

����� �������� � ��� �� � �������� ��������� �� ������

���� ��������� ����� �&��� �����> � �� �� ���� ���� ���������

������� ���� ��� ��� � ������� ������ �#�� ���� ������1 �

�� ��� ���� ����� ������� ���� ������� ���#� ����� �

��������� �������� � ��� #��� ��� #���� ��������� �� �������

-����� �� ��� ���� #� ���� �������� � ��������� ��� ��� �����

� K ���� �#��� � ��� �� �������� ��� ��� ����� ��� �

�������� �� ������� ��9 � ���� C�� �)� &�� ��$� �������� �

��� ����� ���� �� �� ��� �� �� ���� ���� ������ ��� � ���� �� ��

#� ���� '��������� �������� �������� #�� ���� ������.����

��� � ���������� � � ������ ������ ����� �������� ������� �� �

����� �������� ��� �������� ��������� ��� � ���� � �� ����

������ &��� ������.�� ��� ��� ������������ �� ��������� � ��

���� ���� �������� ���� ��� �������� �����"����� � �� ��� ����

����� ���� &����� ��� ��� ������� �� ��� �� � ������� ������

�� ���������� �����"��� ��� �������� &��� ������� ��� ���#� ��

����$���� #�� 7CF �� ���������� ��������� ��"�������� ���

��������� ���������� ��� ������������� ����� �� ���� !����������

� �� ����� �� ��� ������ �9 ��� ���������� ��� ����� ��������

�������� ���� ��������� ��� ���� �������� #�� �������

������� � ��� ��� ��������

2�������� ��� ��� ��� ���� ��"�� �� ������� ����� ��

)�*+ �� ������� ���� ���� ���� � ������� )�*+ �� �������� #��

)�0 �2������ �� �� � +00K1 5��� �� �� � ���+1 &����� �� �� � ���4��

#���� �� ��� ����������� �� �� ��������� �������� ��� ��� ���

�������� �������� #�� ��� ������� ���� ���������� ���

�������� '���� � ���� "������� �������� �� #��� ��������

����� �� ������� �� ��������� ����� ��� ��������� ������ #���

������� ����� ������ ������ C�� �� ������� ���������

������.��� ��� � ������ ������ ��� )�*+� � �� ����

��������� ��� ���� �� ��������� ������� �������� #��

���� ������� ��� ������ �������� �� ��������� � � ��

������� � ��������� ������.��� 5�����.��� ��� � �������

�� # ������ ������ ����� ������� ��� ���������� #���� ���

� �������� ��� ���������� ������ �L������ 6 5�#��� +00+1

F����� 6 L������� +00K� %��� �������� ���� ��� ������ �� �� ��

��������� � � F(4�������� #���� �� �������� ��� �� �� ���������� �

� �� �������� � ��������� ������.��� �(.. �� �� � ����� %��

�������� ���� � ������������ � )�*+� ��� ��� �� ���"����

����� ��� �� ��������� ������ �� ������.���� #���� #���

������� �� �#���������� ��# ���� ������ C��������� ��

��������� ������� ������ ���� ���� ������ � )�*+� ���� ������ ���

��� ����� ��� �� ���� ��������� ����� �� ������� ������� �9 �

���� ������ � ����������� ��� �������� ��� ��������� �������

C����� ������� ��������� ���������������� ���������� #��� �

��������� ������ �������� �� ��� � )�*+ �� �� ��������� �

������.��� ��� �������� #����� ������ ��������� �� )�*+ ���

���������� � ��������� �� �������������� ����� ��� ������

�����

:���� ��� � )�*+ ��� �� �������� #�� ������� #����

�����"� ���� ���#��� ��� ���� �� ������� �� ������ )�*+

��� )�0 ������� #�� CF:F� �� ����������� ��� ������ �������

�� ����� �5��� �� �� � ���+�� #���� ��� � � �������� �� ����

� �� ����������� ������� ���� ���� ������ 3��� �����������

�� ������ ���#��� ������ ������������ ��� ��� �����������

�� ������� ��� � ��������� )�*+ ��� �������� ������

������� �� �� ������ ����� �&������ �� �� � +00K1 2�������

���4� ��� ������� ������ �� �� ���� ���� ��� ������� ���������

������� �� ������ ������� ��� ������� � )�*+ �� �� /&- ��� ��

�-�� )�*+ �� ������ �� ���������� ������� ���#�� �'���.�

/���� �� �� � ���+� #���� �� ������� �� �� ���� ��� � �������

������� ��� �� ������ �������� �2������� �� �� � +0*81 �����I�

�� �� � +0*K� ��� ���� ��� � ����������� ������� �� �� ������

���������� �C���� �� �� � +0*K� )�*+ �� ��� �������� #��

��������� ������� ��� �� � ���� � �� ��������� ������

2)9: �� ������ ������� �3���� �� �� � ���4� &�� �������� � ������

��������� ������� ��� ����� �������� � ������� ������� �

����������� ��� ��������� ������ ������� ������ �3���� �� �� �

���4� )�*+ ������� � ��� � � ���������� ������� ��������

��������� ��� ������������ ������ �� ��� ��������� �� �����

��������� ������ ���������� )�*+ �� ������� �� ��� ���� #��

������ ������ � �������������� ���������� ��� �����

��������� � ���� ���������� ����� &��� ������������ �� ���

���� �� ��� ������ #�� ��������� ����������9������� �2)9:�

������ ��� ���������� �� ���������� ���#��� )����� ����

��������� � 2)9: ��� )�*+ ������� ��� �� �������� ���� ��

���� ���� �������� #������ ���������� � �� ���� ������

������� ���� �� ����� ��� ������ A������ ��������� � )�*+

�� ���������� ������ � ��� ����# ���� ��� ������� ��

��������� ���� �#��� �������� �� �� ��� ������� � ���

��#��� ��"������ �������� :����� ������� �� �� ������ ��

����������� ���#�� ������ � ��� ������ ��� ��� ���� ��

�� ������������ � �� �������� ���������� ������� �� ����

������� ��� ������ �������� C����� �� ���� ���������� �����

�������� ��������� ��� ��������� �� ���� ��������

(� ��� ����� ��������� ������� �������� �� �������� #�� ��

��������� � � �����"� ���� ����� )�*+� ��� ��� �� �� �����

� # ������> "�� �� ������������� �������� ������������ �

)�*+ �� �� ����� ����� ���������� �/&- � �-��� ��� ����� ��

��������� � )�*+ ��� �� ��������� ����� & ������ �� �����

� ���9 C������� � A������ ����������� 5������� ��� ��� ������� �� ������������� ��� +8�+=+844

+84� - '��� �� ���

������ ��� �� ��� �������� ��� ���� � ������ ������#� � ��

����� ������.� �� ����������� ��� ���# �� ����������

�#��� �� # ������

(� ��������� �� ���� ������ �� ������ ���� �� ���������

�� ������ � � ���� � ����� � �������� ������� � � ����

������� ������� �� ���������� ���#��� �� ���� �#��� �� ���� ����

��������� ��� �� �������� ������� � �� �������� ���������

������� &���� "������ ������� ��"�� �� ������� ������ � � ���

�� )�*+ �� ������������� �������� ,��� #� ��# �� ���������

������� �������� #�� ������� ������ ������� ��� ������� ���

��������� � )�*+ �� �� ������ �� ����������� ���#��

�6�������������

5������ � � 5#��� ������ C������ ���� 4+����?04?� ��� 4+��-%�+��8*8 �@ 3 � � ��� ,(, ���� �(��L :%+ �L?*K����4 �& L � &�� �������� ��� ���� ������� �� 7���� <����� �� ������� ������� � �� ������������ ���������� ��� 2�� ) �������F��� �� ��� ������� �����������������

�������������

)F�� ������ ������1 ,AL�04&� ����� �� ����� ������ �04& �����1 �-���������� ����� ���1 5��� �� ����� �����1 /&-� ������ ������� ����

>� ������

'���.�/����� 2 5 � '���.�/����� 5 � :������ 5 6 ������� @ 3 �+00*� 2���"���� � ������ ������ ��������� �� ��� � ����������� �������� 2�����.7��8���� �� ��������

'���.�/����� 2 5 � <������ � - @ � <������ 7 ) 6 ������� @ 3 ����+�)������������� ��������� � �� ��������� )�*+ ��� �� ������ ���������� ������� )��� ���� ���������� �� �������

)������ F : � F����� 2 � L���� A � L����� 2 @ 6 5���� S �+00*� )��������� ������������������� �������� �)-:&� ������ ������������� ���������� ������ ������ � �� �� ����� ��� �������.��� #�� ���������������������� �&�� ��� ��� ����

C��������� F 6 ,���� S 3 �+000� 2����� �� ������ ����������� �� ������)-:& �:�- ���������> ������ � ������� ������� ���� ��� ����� �

C����� 7 � <�� ) C � )���� 5 � ������� % � '������ � � '������ & �2�������� & 6 ,����� & �+0*K� 7������ ���� �� ����������� ������� ���� ������ ���������� � �� ��> ������������ �������������� �� �������� �� ����� ������� -���� ���� *���� ���� 9�*� � ���������

7������ A A @�� S���� 3 6 (�#��� 2 , �+008� -����� ��#�� ��������� ����� ���� � �� �������������� ��� ��� &-F-� �� ���������� �����������

,������ 2 A ����+� 5����"� ��������� �������� �� ��� 2����� ��������������

(�#��� 2 , 6 7������ A A @� �+004� &�� ���������� � � ����� ���� ������������� � �� ������� ���� �� �� ��� ��������� :����� ��� �����

(..� A � 2�����C����� : � L � 7 C � <����� C 6 5����� F F ������ �������������� ��� �������> F(4������� ��� ������ �������� ������.���������� ���������� �� � ��� �

L���������� @ A � )���� F ' � A ��#���� @ �+000� F�������� � ���- ��������� ����� ��� �� �������� ������ )��.��� �/&#���� ���� �����

L������� F < 6 5�#��� @ �+00+� ������� ���������� �� �� ������� ������������ � ����� ��� ������������� ������.��� � �� ������� 2����!��� 2���� !��� !���� ��� �� �

3����� ) : � 7������� < � '��.��� - 6 L������� : - ����4� F����� ������ )�5 ��������� ������ ������� *��� ��;� *���� ����� ��� ��� ���

3���� 5 � &��� 5 ) 6 2������� , & �+00*� )�*+ �&-F-�+�> � �������������� �� ������ ��������� ��� ���� ������� �� �� ������ ������*���� !��� ,##������ ��� �������

2������� , & ����4� ,���� )�*+ ������� �������� &�+ ��� &�� ������������ � ������������� ������� ���������� � &�� ����� ��� ������� ��������� )2 ,##������ � ����

2������� , & � &��� 5 ) 6 3���� 5 �+00K� &�� ��������� �����������>�������� ��������� M:����#N �*�2 ��� ��� �� �

2�������� & � ,����� & � :������ - � )����� - ) � %����� < , � /��������- 6 7������� 2 �+0*8� )�������� � ������������ �������������#�� ������������� ?���������������� 7-'- ��� ����������� �� ���� )�5� �� ���������� �� ������

2������ 3 � '���.�/����� 2 5 � )���� 5 � 3��� @ � :����� @ � T��� : �&������� A � 2�������� 7 ) � ������� @ 3 6 <������ 7 ) �+000�)������������� ����� ���������� ��� ������ �� )�*+���"���� ��������� ��������� *$����� ��� �����

2������ 3 � '���.�/����� 2 5 � ������� @ 3 6 <������ 7 ) ������ 2���� ������� �������� ������� ��� �������� ������ � ���� ������������2���� !��� -��������� �� �������

2������ 3 � '���.�/����� 2 5 � <������ � - @ � )���� 5 3 � :����� @ � T���: � &������� A � 2�������� 7 ) @ �3 � ������� @ 3 6 <������ 7 ) ����+�-����� ��������� � )�*+���"���� ���� ���� �������� ������ �������� )��� 2���� !���� ��� ����

�������� 3 � '����� ! � 7������ F � %��� � � 2�������� : � 7���� C , � /�����( 2 6 &��� � �+008� ,� ���� ���� �������� ��� �� �� ��������� ����������� ����� � � ��������� ����� ������� ��� �� ��

������� A ������ 7���� ��� �������� ������ 4������ ��� ��� ��������I� % � 2�������� & � ,����� & � '������ & 6 7������� 2 �+0*K�

A������� �� �� ���� ��� ����� � �� ������ ������� � ������� ���������� �� �� ������ ��������� ��������� :����� � ���� �� �

F������ : ) 6 L������� F < �+00K� - �������� ���� � �� ��������� � �������� ������.��� ��������������� �������������� 2���� !���2���� !��� !���� ��� �� � ��

5����� � � 5���� 5 @ 6 '�#�� F % �+008� - ��- ��������� ����� �������.��� ������ ��- ������� ����� #���� E������� �� � �� �����.��� 4���#� !���� �� �����

5���� ) 5 � L��������� & / 6 ,������ 2 A ����+� A<(�� �� � ��$� )�0��� )�*+ ������ ��� ��� �� � � ���� �� ����� �� ������ �� 2���� .�#����� ��������

5�������� ) � 6 7������ A A @� �+00*� A�������� � �� ���� � ���������������� ��� �� �&-F-� �� �� ��������� ����� �� �# � ������������ ������

&������ S � &���� ���� ( � 2����� L � L ������� 2 � 2���.���� & � C��������& � L������ , � S������ , � 5��� S � 7� , � S����� & � S������ 2 �L������� & � %����� & � ,������� 5 � L�#���� ( 6 2������ A ����4�&���������� )�0 ��� )�*+ ������ ������ �� ����� � ������������������ �� ��� 2����� ���� ������

&��� � ������ 3�������� �����> ������ � ������ �� �� � �������������� 4��� <.���� � �� ��

&������� A � � 7������.�:���� @ ) 6 7���� : 5 �+00K� (������� )�+0��������� ��� ����������� �������� ��� �� ������� ��� (( & ����������� ������ ��� ������� � '�+ ����� �� )�*+���"���� ����� -��������� *���� ���� 9�*� �� ���������

� ���9 C������� � A������ ����������� 5������� ��� ��� ������� �� ������������� ��� +8�+=+844

)�*+ ������� ��������� ������� �� ������ ������ ����������� +844