BIBLIOTECA DE FARMACIA Y BIOQUIMICA
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IOQUIM
ICA
UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO
FACULTAD DE FARMACIA Y BIOQUÍMICA
ESCUELA ACADÉMICO PROFESIONAL DE FARMACIA Y BIOQUÍMICA
TESIS II
Evaluación in vitro de la fotoprotección del extracto de las hojas de Passiflora edulis
“maracuyá”
PARA OPTAR EL GRADO ACADÉMICO DE:
BACHILLER EN FARMACIA Y BIOQUÍMICA
AUTORES:
RUIZ GUTIERREZ, Yusara Lisset
SIFUENTES GONZALES, Kris Caroline
ASESORA:
Dra. AYALA JARA, Carmen Isolina
TRUJILLO – PERÚ
2018
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Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/
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DEDICATORIAS
KRIS
A Dios por otorgarme una
familia maravillosa, por
haber puesto en mi camino a
personas que me apoyan y
por guiarme en todo
momento.
A mis padres Howard y Raquel
por brindarme su confianza,
su amor, apoyándome
incondicionalmente en todo
momento e impulsándome a
seguir adelante a pesar de
todas las dificultades.
Ustedes son mi mayor
motivación y fuerza para
alcanzar este objetivo, el
cual conseguimos juntos.
A mi hermano Howard, quien
siempre ha estado a mi lado en
buenas y malas a pesar de
nuestras diferencias. Y a mi
pareja Juan Carlos, quien a
pesar de la distancia encontró la
forma de mostrarme cuánto me
ama.
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Primeramente a Dios por brindarme la salud
e inteligencia para concluir con éxito mi
tesis y por siempre guiar mi camino por
el sendero correcto. Gracias por nunca
desampararme y por ayudarme a
comprender que la vida está hecha de
altos y bajos; pero siempre tu propósito
será el idóneo en mi vida.
A mis padres y hermano por ser los
pilares fundamentales de mi vida,
brindándome siempre sus sabios
consejos, apoyo incondicional y
motivándome a ser una mejor
persona para así alcanzar cada una de
mis metas trazadas. Gracias por estar
siempre a mi lado, y por depositar su
entera confianza en mi capacidad
para afrontar mis desafíos
académicos. Ustedes son mi mayor
fortaleza para seguir adelante, los
amo.
A Kris por ser una excelente persona y una
amiga excepcional. Gracias por estar en
los buenos y malos momentos de mi
vida, sin tu apoyo la culminación
exitosa de nuestra tesis hoy no sería
realidad. Te quiero hermana de mi
corazón.
YUSARA
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AGRADECIMIENTOS
A la facultad de Farmacia y Bioquímica, especialmente a los
profesores, quienes brindan sus conocimientos y experiencias
contribuyendo a la formación de los estudiantes.
A nuestra asesora Dra. Q.F. Carmen I. Ayala Jara y a nuestro
Co-asesor Q.F. Segundo Miranda Leyva por su paciencia, su
tiempo y su dedicación, así como por brindarnos su
conocimiento para guiarnos en el desarrollo del presente
trabajo.
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PRESENTACION
SEÑORES DEL JURADO DICTAMINADOR
Dando cumplimiento a las disposiciones legales y vigentes del Reglamento de Grados y
Títulos de la Facultad de Farmacia y Bioquímica de la Universidad Nacional de
Trujillo, queda a vuestra consideración y elevado criterio el presente informe de tesis II,
titulado:
Evaluación in vitro de la fotoprotección del extracto de las hojas de Passiflora edulis
“maracuyá”
Es propicia esta oportunidad para manifestar el más sincero reconocimiento a nuestra
alma mater y su plana docente, que con su capacidad y buena voluntad, contribuyen
con nuestra formación profesional.
Dejo a su criterio, señores miembros del jurado la calificación del presente informe.
Trujillo, 31 de diciembre del 2018
__________________________ ______________________________
Yusara Lisset Ruiz Gutierrez Kris Caroline Sifuentes Gonzales
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JURADO DICTAMINADOR
_____________________________
Dra. Ana María Guevara Vásquez
Presidenta
_____________________________
Dra. Carmen Isolina Ayala Jara
Asesora
_____________________________
Dr. Segundo Guillermo Ruiz Reyes
Miembro
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RESUMEN
La presente investigación tuvo como principal objetivo evaluar el efecto
fotoprotector in vitro del extracto de hojas de Passiflora edulis “maracuyá”. Para
analizar la capacidad fotoprotectora, se recolectó las hojas de Passiflora edulis,
procedentes del sector Chumpón, Paiján, La Libertad. El extracto hidroalcohólico de
las hojas se obtuvo por el método de percolación usando como solvente etanol de
70°GL hasta agotamiento. Se determinó la concentración del extracto mediante el
peso del extracto seco, encontrándose un valor de 50 mg/mL. Según la metodología
de Factor de Protección Solar (FPS) in vitro descrita por Sayre y por Mansur,
quienes se basaron en el efecto eritemogénico (ee) y la intensidad de la radiación (I)
para calcular el factor de protección solar, el extracto se analizó en
espectrofotómetro midiéndose las absorbancias en la región de la radiación
ultravioleta B (290-320nm), la cual puede penetrar en la epidermis por radiación
solar y generar daños irreversibles a la piel. Se concluye que el extracto
hidroalcohólico de hojas de Passiflora edulis “maracuya” tuvo un efecto
fotoprotector alto con un FPS 14,598, según COLIPA.
Palabras clave: Passiflora edulis, extracto hidroalcohólico, factor de protección solar.
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ABSTRACT
The main objective of this research was to evaluate the in vitro photoprotective effect
of the extract of leaves of Passiflora edulis "maracuyá". To analyze the photoprotective
capacity, the leaves of Passiflora edulis, from the Chumpón, Paiján, La Libertad sector,
were collected. The hydroalcoholic extract of the leaves was obtained by the
percolation method using as solvent ethanol of 70 ° GL until exhaustion. The
concentration of the extract was determined by the weight of the dry extract, finding a
value of 50 mg / mL. According to the methodology of Solar Protection Factor (SPF) in
vitro described by Sayre and Mansur who based on the erythemogenic effect (ee) and
the intensity of the radiation (I) to calculate the sun protection factor, the extract was
analyzed in a spectrophotometer measuring the absorbances in the region of ultraviolet
radiation B (290-320nm), the which can penetrate the epidermis by solar radiation and
generate irreversible damage to the skin. It is concluded that the hydroalcoholic extract
of leaves of Passiflora edulis "maracuya" had a medium photoprotective effect with an
SPF of 14,598 according to COLIPA.
Key words: Passiflora edulis, hydroalcoholic extract, sun protection factor.
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ÍNDICE
Pág.
Dedicatoria
Agradecimiento
PRESENTACIÓN
JURADO DICTAMINADOR
RESUMEN ....................................................................................................... i
ABSTRACT...................................................................................................... ii
I. INTRODUCCIÓN ............................................................................... 1
II. MATERIAL Y MÉTODO ................................................................... 9
2.1.Material de Estudio.......................................................................... 9
2.2.Método ............................................................................................ 11
2.2.1. Recolección de la materia prima................................... 11
2.2.2. Preparación de la muestra ............................................. 11
2.2.3. Obtención del extracto .................................................. 12
2.2.4. Control de calidad ........................................................ 13
2.2.5. Caracterización química ................................................ 14
2.2.6. Método del análisis de factor de protección ................. 20
2.2.7. Análisis estadístico ........................................................ 22
III. RESULTADOS..................................................................................... 21
IV. DISCUSIÓN ........................................................................................ 24
V. CONCLUSIÓN.................................................................................... 31
VI. RECOMENDACIONES ...................................................................... 32
VII. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS.................................................. 33
ANEXOS.......................................................................................................... 40
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I. INTRODUCCIÓN
El espectro solar en la superficie de la tierra está formado por radiaciones que
presentan longitudes de onda de energía electromagnética comprendida entre 290 y
3000 nm. Y debido a esto, desde el enfoque de la práctica clínica se considera que el
espectro solar está compuesto por: radiaciones ultravioleta (290-400 nm), luz visible
(400-760 nm) y radiaciones infrarrojas (>1800 nm)1.
La luz UV es una parte de la energía radiante que proviene del sol y constituye
la porción más energética del espectro electromagnético que incide en la superficie de
la tierra, siendo uno de los agentes físicos causantes de mutaciones en los diversos
organismos de nuestro planeta y están indisolublemente ligadas a los procesos de
fotocarcinogénesis2.
La intensidad de esta radiación es muy variable y es afectada por la posición del
sol, la latitud en la que se encuentra la persona, la nubosidad presente, la altitud, la
concentración del ozono y por la presencia de elementos reflectantes o absorbentes. Por
lo que puede afectar a las personas de manera directa, pero además puede ser radiación
dispersa o reflejada. La radiación dispersa se encuentra asociada a nubes, polvo,
contaminación, etc.; mientras que la reflejada se asociada al suelo o piso, muros, cerros,
cuerpos de agua, etc. Por ejemplo la nieve puede reflejar un 80% de la radiación que
recibe, mientras que un césped o prado refleja solo el 10%, la arena seca de la playa un
15% y el mar un 25%3.
Existen tres tipos de radiaciones ultravioleta (UV): UVA, UVB y UVC. La
radiación UVA (400 a los 320 nm) provoca pigmentación directa a través de la
fotooxidación de la melanina existente lográndose un bronceado rápido pero poco
duradero. Es responsable del fotoenvejecimiento, fotosensibilidad y daño en la retina,
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así como de la aparición de cataratas. En cuanto a la radiación UVB (320 y 290 nm)
se absorbe en un 90 % por la epidermis y es la responsable del eritema solar,
inmunosupresión y fotocarcinogénesis. Además, Interviene en la melanogénesis,
apareciendo el bronceado tardíamente pero de forma más duradera que el originado
por la radiación UVA. Finalmente, la radiación UVC (200-290 nm) la cual posee
propiedades germicidas y es responsable del eritema sin bronceado, es potencialmente
la más peligrosa, pero no está presente en la superficie terrestre debido que el ozono
impide su penetración en la atmósfera4.
La radiación UV en pequeñas dosis es beneficioso para el ser humano y
esencial para la producción de vitamina D. Además, se puede utilizar para tratar
diversas enfermedades, como el raquitismo, la psoriasis y el eczema. Pero cuando se
expone de forma prolongada a la radiación UV puede producir efectos agudos y
crónicos en la salud de la piel, los ojos y el sistema inmunitario. Las quemaduras
solares y el bronceado son los efectos agudos más conocidos de la exposición a la
radiación UV; a largo plazo, se produce un envejecimiento prematuro de la piel
debido a la degeneración de las células, del tejido fibroso y de los vasos sanguíneos
inducida por la radiación UV. También puede producir reacciones oculares de tipo
inflamatorio, como la queratitis actínica. Los efectos crónicos comprenden: los
cánceres de piel y las cataratas. Los cánceres de piel no melánicos pueden ser
extirpados quirúrgicamente y rara vez son mortales, pero los melanomas malignos
contribuyen con un alto índice de mortalidad a las poblaciones de piel clara5.
La fotoprotección consiste en evitar, a través de medidas preventivas, los
efectos adversos no deseados producidos por la incidencia de la radiación UV sobre
la piel. Para protegerse de la agresión por parte de las radiaciones externas, la piel
posee unos mecanismos de adaptación y de defensa, de los cuales los más
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importantes son el engrosamiento de la capa córnea, la producción de melanina, la
activación de moléculas antioxidantes, los sistemas de reparación del ADN y la
síntesis de citocinas. Estos mecanismos de fotoprotección natural tienen una eficacia
variable según los individuos, siendo insuficientes para prevenir el
fotoenvejecimiento y la fotocarcinogénesis, especialmente en las personas de
fototipo claro6.
La fotoprotección exógena la constituyen todas aquellas estrategias
encaminadas a disminuir los efectos adversos de las radiaciones UV sobre la piel.
Esto incluye desde evitar la exposición solar, ponerse a la sombra y utilizar gorros y
ropas, hasta la aplicación o ingestión de sustancias destinadas a este fin, conocidas
como fotoprotectores. Estas sustancias son agentes que se aplican tópicamente y son
capaces de modificar la penetración de la radiación UVB y UVA, y de la radiación
infrarroja ofreciendo protección frente a la quemadura solar y frente a otros efectos
crónicos responsables de patología inducida por la radiación UV. Para una mayor
eficacia, este amplio espectro de protección debe mantenerse durante todo el tiempo
que el individuo se encuentre expuesto al sol. La potencia de los fotoprotectores se
suele medir en términos de «factor de protección solar»7.
El factor de protección solar (FPS) se define como la relación entre el tiempo
necesario para que la radiación produzca el mínimo eritema perceptible sobre piel
protegida con fotoprotector en comparación con la dosis eritematosa mínima (DEM)
sin protección, es decir, es el número que indica el múltiplo del tiempo que le toma a
una piel protegida en desarrollar un eritema, con respecto al tiempo que tarda esa
misma piel en conseguir el mismo efecto si no se hubiera aplicado ninguna
protección. Es decir, un factor de protección 15 nos muestra que si una piel normal
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tarda “x” tiempo en manifestar un eritema solar tras la exposición al sol, esta misma
piel protegida con ese factor tardaría quince veces más (15x)8.
Existen diversos tipos de filtros: orgánicos, inorgánicos y biológicos. Los
filtros orgánicos o químicos protegen solamente frente a parte del espectro, son
sustancias que absorben la radiación UV, la cual estimula sus electrones
haciéndolos entrar en una fase inestable que, posteriormente, se estabiliza
devolviéndolos a su estado original. Durante este proceso se libera energía en
forma de calor. Se clasifican según el bloqueo de los tipos de radiación UV, entre
ellos tenemos las aminobenzonas, cinamatos, octocrileno y salicilatos que
bloquean las radiaciones UVB y las benzofenonas, ecamsule y avobenzona que
bloquean las radiaciones UVA. Los fotoprotectores químicos son incoloros y
cosméticamente muy aceptados, por lo que suelen añadirse a cosméticos. A pesar
de ello, presentan un mayor riesgo de causar reacciones de contacto y fotocontacto
que las pantallas minerales9.
Los filtros inorgánicos, como dióxido de titanio y óxido de zinc, poseen un
amplio espectro; dispersan, reflejan y absorben la luz UV; protegen contra la
radiación infrarroja; y abarcan hasta el rango de 380 nm. Son fotoestables por su
grado predictivo de fotoprotección aun después de la exposición solar, y poseen
poco potencial alergénico y de sensibilización. No obstante, debido a su baja
aceptación cosmética y su capacidad de bloquear los poros de la piel son poco
aceptables10.
Por último, los filtros biológicos son aquellos que evitan la formación de
radicales libres y estimulan el sistema inmunológico a nivel cutáneo. En muchas
ocasiones nos encontramos los filtros solares asociados a antioxidantes como las
vitaminas A, C y E y los carotenoides y otras sustancias como enzimas reparadoras
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del ADN, Selenio, etc. Los antioxidantes contrarrestan el daño oxidativo que se
produce en nuestra piel en la vida diaria. Debido al daño que generan las ROS y los
radicales libres, su incorporación a los fotoprotectores aumenta la eficacia y
seguridad de éstos11.
Debido a la necesidad de nuevos productos para la protección contra la
radiación UV y siguiendo la tendencia mundial de producir cosméticos a partir de
componentes naturales, uno de los filtros biológicos recientemente estudiados son
las plantas ya que la mayoría de procesos biológicos de protección frente a la
radiación UV en las células vegetales, se pueden extrapolar a las células animales,
muchos compuestos que protegen las plantas podrían proteger a los humanos.
Desde este punto de vista, se puede contextualizar el uso de algunos metabolitos
secundarios de las plantas, como protectores solares en productos de consumo
humano, con sus diversos mecanismos de acción. Un ejemplo de ello, además de
otros compuestos, son los flavonoides, las isoflavonas derivadas de distintas
plantas poseen efectos antioxidantes, estrogénicos e inhibidores de la actividad
tirosincinasa12,13.
Un género de plantas con grandes propiedades funcionales y nutricionales
es el género Passiflora L. (pasiflora) el cual se distribuye en regiones tropicales y
sub tropicales desde el nivel del mar hasta altitudes superiores a los 3000 m.s.n.m.,
pero la mayor riqueza en especies se encuentra en las regiones moderadamente
cálidas y templadas, entre 400 y 2000 m.s.n.m. Actualmente, la familia
Passifloraceae Juss. ex Rousel posee entre 17 a 25 géneros, dentro de los cuales
Passiflora L. es el más numeroso e importante para la economía del país. El género
Passiflora refiere aproximadamente 575 especies, sin embargo, la cifra sigue
creciendo en las últimas décadas14, 15.
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Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/
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De la familia Passifloraceae, el género de Passiflora L. es la más
abundante, de ellas Passiflora edulis es una de las cuales sus propiedades
fotoprotectoras no han sido muy estudiadas desde el enfoque cosmético.
Passiflora edulis, más conocida como maracuyá, es una planta trepadora que
alcanza los 9 m. de longitud. Su tallo es rígido y semileñoso; presenta hojas de
gran tamaño, perennes, alternas, con márgenes finamente dentados, lisas y de
color verde oscuro miden de 7 a 20 cm de largo. Las raíces son superficiales. Es
una planta perenne, que se adhiere a los soportes por medio de zarcillos los cuales
son filamentos de 40 cm que salen de la base de las hojas. Sus tallos jóvenes son
ligeramente angulados y cilíndricos. Sus flores son de color blanco con tintes
morados, de 5 cm de ancho. Esta planta tiene un uso alimenticio al consumirse
sus frutos maduros y procesados en bebidas, postres y helados, y medicinal al ser
empleada la infusión de sus hojas como sedante nervioso y otros usos al
combinarla con otras plantas16.
Un estudio realizado por Carvajal L et al. (2014) titulado "Propiedades
funcionales y nutricionales de seis especies de Passiflora (passifloraceae) del
departamento de Huila, Colombia" entre ellas la Passiflora edulis, refiere que al
realizar la marcha fitoquímica, este género de plantas contiene una gran cantidad
de compuestos como saponinas, triterpenos, compuestos fenólicos, alcaloides,
leucoanticianidinas, taninos, triterpenos, compuestos lactónicos, cumarinas y de
flavonoides en las hojas, flores, cáscaras y pulpa de los frutos, en diferentes
concentraciones. Debido a la gran cantidad de sustancias que contiene esta
familia de plantas, sus propiedades medicinales son amplias siendo una de ellas la
de fotoprotección17.
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Todos estamos expuestos a los rayos solares y con ellos, a la radiación
ultravioleta causando daños en la piel como eritema, hiperpigmentación,
fotoenvejecimiento, inmunosupresión y carcinogénesis cutánea.
Las características del protector solar ideal deben ser: brindar protección
UVA y UVB; evitar la producción de EROS (especies reactivas de oxígeno) por
daño solar; y contener enzimas activas que ayuden a la reparación del ADN. De
igual forma, debe ser estable; seguro y fácil de aplicar de manera uniforme;
resistente al agua, el sudor y la abrasión; no comedogénico, hipoalergénico y no
absorbible; y también, de precio accesible.
En el Perú existen pocos estudios acerca de productos naturales como
fotoprotectores en formulaciones cosméticas. Siendo que nuestro país tiene una
extraordinaria variedad de productos naturales, se debe aprovechar la
oportunidad para desarrollar productos con valor agregado, que puedan brindar
efectos benéficos o preventivos frente a enfermedades que estén relacionadas
con el exceso de exposición a la radiación UV.
Actualmente se está combinando protectores solares comunes con
extractos de plantas que han demostrado contener metabolitos secundarios que
tienen propiedades fotoprotectoras. Es por ello que consideramos importante
desarrollar esta investigación en hojas de Passiflora edulis “maracuyá” de
nuestra región, que será evaluado in vitro, para conocer si posee efecto
fotoprotector.
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Por todo lo antes mencionado, se planteó el siguiente problema:
¿Tuvo fotoprotección in vitro el extracto de hojas de Passiflora edulis
“maracuyá”?
El Objetivo General fue:
Evaluar la fotoprotección in vitro del extracto de hojas de Passiflora edulis
“maracuyá”
Los Objetivos Específicos:
1. Obtener el extracto hidroalcohólico de hojas de Passiflora edulis
“maracuyá”.
2. Determinar los fitoconstituyentes del extracto hidroalcohólico de hojas
de Passiflora edulis “maracuyá”.
3. Realizar los controles de calidad del extracto hidroalcohólico de hojas de
Passiflora edulis “maracuyá”.
4. Determinar el factor de protección solar del extracto hidroalcohólico de
hojas de Passiflora edulis “maracuyá”.
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II. MATERIALES Y EQUIPOS
A. MATERIAL BOTÁNICO
2000 g de hojas Passiflora edulis “maracuyá” procedentes de Paiján, sector de
Chumpón en el mes de Octubre del 2018.
B. MATERIAL DE LABORATORIO, EQUIPOS E INSTRUMENTO
Material de vidrio y otros
De uso común en el laboratorio.
Equipos
Balanza analítica OHAUS GA-200
Balanza común OHAUS U.S.PAT. Serie NO.2729439
Baño María PRECISTERM S-140
Estufa MEMMERT TYP U-40
Refrigerador marca COLDEX.
Espectrofotómetro marca HP serie: 8450 con arreglo de diodos.
Potenciómetro marca METRHON
Rotavapor marca DLAB
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C. MATERIAL QUÍMICO
Agua destilada
Alcohol de 96°GL
HCl concentrado
NH4OH
Cloroformo
FeCl3 al 1%
NaCl 1%
KOH 0,5%,
Ácido acético
3 virutas de Magnesio
Éter de petróleo
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7.2. MÉTODO:
A. Recolección de la materia prima18
Recolección
Se recolectaron las hojas de Passiflora edulis “maracuyá”
procedentes de Paiján, del sector de Chumpón en el mes de
Octubre del 2018 (Anexo 01).
Identificación de la especie
Las hojas de Passiflora edulis “maracuyá” procedentes de Paiján,
se llevaron al Herbario Truxillense, donde se realizó su
identificación y depósito, su código asignado fue 59620 (Anexo
02)
Selección de la muestra
En esta etapa se descartó toda parte de la muestra que no reunía
las condiciones necesarias para su utilización, como son las
materias extrañas.
B. Preparación de la muestra18
Lavado de la droga
Después de la separación de las sustancias extrañas, se procedió a
lavar el material vegetal con agua potable a chorro y después con
agua destilada.
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Secado de la droga
Las hojas de Passiflora edulis “maracuyá” se secaron sobre papel
Kraft separadas unas de otras por 48 horas a temperatura ambiente y
durante 24 horas a estufa a 40°C, utilizando bolsas de papel Kraft.
Molienda
Las hojas de Passiflora edulis “maracuyá” se molieron en un molino
hasta reducir a polvo.
Tamizado
El polvo de las hojas de Passiflora edulis “maracuyá” se pasaron
por un tamiz de número de malla Nº 0,75.
El producto obtenido se guardó herméticamente en frascos de vidrio
de boca ancha y aislada de la luz hasta el momento de la extracción.
C. Obtención del extracto
Se pesaron 200 g de polvo de las hojas de Passiflora edulis
“maracuyá”, se humectó la droga agregándole 200 mL de etanol de
70°G.L. Se extrajeron los metabolitos secundarios por el método de
Percolación, empleando 2000 ml de etanol de 70°G.L y se concentró
en el rotavapor a presión reducida y a temperatura controlada,
obteniéndose finalmente 858 mL de extracto hidroalcohólico.
(Anexo N° 3)
Se tomaron 10 mL del extracto obtenido y se llevó a sequedad en
una estufa a 40°C para determinación del extracto seco, el cual fue
de 0,5 g. Para el cálculo del rendimiento del extracto, se consideró el
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peso inicial de muestra que fue 200g y el peso del extracto seco del
total del extracto obtenido que fue 42,9 g, por lo que tenemos que el
rendimiento de la extracción fue de un 21,45%.
D. Control de calidad del extracto hidroalcohólico de Passiflora edulis 19
a. Organoléptico
Para evaluar el comportamiento de estas características, se tomó
una muestra del extracto, la cual se observó durante 7 días las
diferencias en el color, olor, sensación al tacto y homogeneidad
que indiquen cualquier tipo de alteración valorable en el extracto.
b. Fisicoquímico
pH
Para determinar el valor de pH se empleó el método
potenciométrico directo a 25 °C, utilizando un potenciómetro
digital calibrado previamente las lecturas con soluciones patrón
del pH conocido (pH 4.0 y pH 7.0).
Densidad
Se determinó usando un picnómetro. Se pesó el picnómetro
vacío (A1), luego el picnómetro con agua destilada (A2) y se
midió la temperatura de esta para calcular la densidad del agua
(δA), posteriormente se pesó el picnómetro con el extracto
(A3).
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(𝑨𝟑 − 𝑨𝟏)
(𝑨𝟐 − 𝑨𝟏) 𝒙 𝜹𝑨𝒈𝒖𝒂= 𝜹𝑬𝒙𝒕𝒓𝒂𝒄𝒕𝒐
E. Determinación de metabolitos secundarios (MS)20,21
Se prepararon 4 tipos de extractos (diclorometánico, metanólico,
acuoso y acuoso-ácido) se tomaron 10 mL del extracto fluido los
cuales se vertieron en 4 cápsulas de porcelana y se llevó a sequedad.
Después de haber obtenido el extracto seco se procedió a realizar la
extracción con 10 mL de cada uno de los solventes mencionados.
(Anexo N°4)
Extracto diclorometanólico: Se identificaron compuestos de muy
baja polaridad: Esteroles, Quinonas
Ensayo de Liebermann-Burchard: Se midieron X gotas del
extracto en una cápsula, se llevó a sequedad y se agregaron X
gotas de anhidrido acético, XX gotas de Ácido acético y I gota
de Ácido sulfúrico concentrado.
Reacción positiva: la reacción es positiva si aparece
coloración azul, verde o naranja.
Ensayo de Borntranger: Se midieron X gotas del extracto en
una cápsula, se llevó a sequedad y luego se redisolvió en XX
gotas de tolueno, se transvasó a un tubo de ensayo y se agregó
XX gotas de NaOH 10%. Se agitó mezclando las fases y se
dejó en reposo hasta su separación.
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Reacción positiva: el ensayo se considera positivo cuando la
fase acuosa alcalina (superior) se colorea de rosado o rojo.
Extracto metanólico: Se identificaron compuestos de polaridad
muy variada como: flavonoides, polifenoles.
Ensayo de Resinas: Se midieron XX gotas del extracto en un
tubo de ensayo y se adicionaron 5 mL de agua destilada.
Reacción positiva: El ensayo se considera positivo al
observar un precipitado o la presencia de turbidez.
Ensayo de Catequinas: Se tomó una alícuota del extracto
metanólico y se aplicó sobre papel filtro, se dejó a evaporar
el solvente a temperatura ambiente y a la mancha residual
se le esparció solución de Carbonato de sodio al 5%.
Reacción positiva: El ensayo se considera positivo por la
aparición de una mancha verde carmelita a luz ultravioleta
(UV)
Ensayo de Shinoda: Se midieron X gotas del extracto en un
tubo de ensayo y se agregaron limadura de Magnesio
metálico más II gotas de HClcc.
Reacción positiva: La reacción se considera positiva si dan
coloraciones rojas (flavonas), roja a crimson (flavonoles),
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crimson a magenta (flavononas) y algunas veces azules o
verdosas.
Ensayo de Ninhidrina: Se midieron X gotas del extracto en
un tubo de ensayo y se adicionaron 2 mL de solución de
Ninhidrina al 2% en agua y se llevó a calentar por 5-10
minutos.
Reacción positiva: La reacción se considera positiva con la
aparición de un color azul violáceo.
Ensayo de Tricloruro férrico: Se midieron X gotas del
extracto y se añadieron II gotas de tricloruro férrico al 5%
en etanol.
Reacción positiva: La reacción se considera positiva con la
aparición de una coloración azul-negruzca, la cual nos
indica la presencia de polifenoles.
Extracto acuoso: Se identificó compuestos de alta polaridad
como saponinas, taninos.
Ensayo de espuma: Se midieron XX gotas del extracto, se
agitó vigorosamente por 30 segundos, se esperó durante 15
minutos en reposo.
Reacción positiva: La persistencia de la espuma nos indica la
presencia de saponinas.
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Ensayo de Gelatina: Se midieron XX gotas del extracto en
un tubo de ensayo y luego se añadió I gota de solución
reactiva de gelatina al 1%
Reacción positiva: El ensayo se considera positivo al
observar un precipitado blanco, el cual indica presencia de
taninos.
Ensayo de Fehling: Se trasvasó una alícuota del extracto a un
tubo de ensayo en el cual se mezclaron y llevaron a
ebullición permanentemente volúmenes equivalentes de los
reactivos Fehling A y y Fehling B.
Reacción positiva: La reacción es considerada positiva con
la aparición de un precipitado color rojo ladrillo.
Extracto acuoso-ácido: Se identificó compuestos básicos, como
Alcaloides.
Ensayo de Dragendorff: Medir XX gotas del extracto en un
tubo de ensayo y luego agregar II – III gotas de reactivo.
Reacción Positiva: La reacción es considerada positiva con
la formación de precipitados de color rojo o anaranjado.
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D. Método del análisis de factor de protección solar (FPS) 22,23
El extracto obtenido se sometió a análisis en el espectrofotómetro en
la región de la radiación UVB (290-320 nm), principal responsable
por los fotodaños cutáneos. Los análisis en el espectrofotómetro son
parte de la metodología de comprobación de FPS in vitro descrita
por Sayre. Se preparó una solución hidroalcohólica, pesando 0,5 g
de extracto seco de la especie en estudio y se transfirieron a una
fiola de 100 mL, que contenga 30 mL de etanol de 70°G.L para
disolver el extracto y posteriormente se aforó el volumen con el
mismo solvente. De esta solución se midió una alícuota de 1 mL,
transfiriéndose a un matraz de 25 mL y se aforó el volumen con
etanol de 70°G.L, lo cual da una concentración final de 0,2 mg/mL,
de esta solución se midió un mililitro a una fiola de 100 mL y se
aforó con etanol de 70°G.L. (Anexo N°5)
De esta dilución, se obtuvo 5 muestras y se leyeron en un
espectrofotómetro UV-VIS, en el rango de 290 a 320 nm; con las
lecturas obtenidas, se calculó el factor de protección solar mediante
la siguiente fórmula:
𝐹𝑃𝑆 𝑒𝑠𝑝𝑒𝑐𝑡𝑟𝑜𝑓𝑜𝑡𝑜𝑚é𝑡𝑟𝑖𝑐𝑜 = 𝐹𝐶 𝑥 ∑( 𝐸𝐸 (𝜆)
320
290
𝑥 𝐼 (𝜆) 𝑥 𝐴 (𝜆))
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Dónde:
FC = factor de la correlación (está determinado por el estándar de
las formulaciones de fotoprotección que contienen el 8%
determinado por espectrofotometría UV. MANSUR, J. y otros.
1986)
EE (λ) = efecto eritemogénico de la radiación de longitud de onda
λ.(cuadro1)
I (λ) = intensidad del sol en la longitud de onda.
A (λ)= absorbancia de la solución en la longitud de onda.
(Anexo N° 6)
Los valores del efecto eritemogénico (EE) versus la intensidad de la
radiación (I) para cada longitud de onda se presentan a continuación.
Cuadro 1: Relación entre el efecto eritemogénico (EE) versus
Intensidad de radiación (I) para cada longitud de onda ()
Fuente: Sayre, 1979. Photoc Photob
(nm) (EE) x (I)
290 0,0150
295 0,0817
300 0,2874
305 0,3278
310 0,1864
315 0,0839
320 0,0180
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El valor numérico del factor de protección solar se refiere básicamente al efecto
protector frente a la radiación UVB, que es la que genera eritema. Sin embargo,
la protección solar tiene que ser efectiva frente a ambas radiaciones UVA y
UVB: un mayor FPS debe ser proporcional a la protección que ofrece frente a
UVA. A continuación se muestra una tabla con los valores de FPS y su
categoría, el valor calculado se corroboró con esta tabla.24,25
Cuadro 2. Categorías de clasificación de fotoprotectores utilizando el método
COLIPA
TIPO DE FOTOPROTECTOR FPS
Bajo 2-4-6
Medio 8-10-12
Alto 15-20-25
Muy alto 30-40-50
Ultra 50+
Fuente: Sun protection factor test method. COLIPA Publication Ref 94/289,
1994
8. ANÁLISIS ESTADÍSTICO
A los resultados obtenidos se les aplicó las pruebas estadísticas: Media,
desviación estándar, coeficiente de variación con un 95% de confianza (p<0,05).
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III. RESULTADOS
Tabla 1. Características organolépticas del extracto hidroalcohólico de hojas de
Passiflora edulis “maracuyá” procedentes del sector de Chumpón, Paiján evaluados
durante 7 días.
Tabla 2. Características fisicoquímicas del extracto hidroalcohólico de hojas de
Passiflora edulis “maracuyá” procedentes del sector de Chumpón, Paiján
Extracto
hidroalco-
hólico
Día
Color Olor Sensación al tacto Homogeneidad
1 Verde oscuro Suigéneris Ligeramente fluido Presente
2 Verde oscuro Suigéneris Ligeramente fluido Presente
3 Verde oscuro Suigéneris Ligeramente fluido Presente
4 Verde oscuro Suigéneris Ligeramente fluido Presente
5 Verde oscuro Suigéneris Ligeramente fluido Presente
6 Verde oscuro Suigéneris Ligeramente fluido Presente
7 Verde oscuro Suigéneris Ligeramente fluido Presente
Características
Muestra
pH Densidad
Extracto hidroalcohólico 5,76 0,962 g/mL
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Tabla 3. Caracterización química del extracto hidroalcohólico de hojas de
Passiflora edulis “maracuyá” procedentes del sector de Chumpón, Paiján
Extracto hidroalcohólico Ensayo Evidencia Resultado Metabolito
identificado
Extracto
diclorometanólico
Liebermann-Burchard
Naranja oscuro
Positivo Triterpenos y
Esteroides
Borntranger Marrón rojizo
Positivo Quinonas
Extracto metanólico
Catequinas Amarillo Negativo Catequina
Shinoda Rojo Positivo Flavonoides
Ninhidrina Azul
violáceo Positivo
Proteínas y aminoácidos
Tricloruro
férrico Azul oscuro Positivo Polifenoles
Resinas Homogéneo Negativo Resinas
Extracto acuoso
Espuma Espuma
persistente Positivo Saponinas
Gelatina Marrón Negativo Taninos
Fehling Celeste Negativo Azúcares reductores
Extracto acuoso – ácido Dragendorff Anaranjado Positivo Alcaloides
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Tabla 4. Absorbancias del extracto hidroalcohólico de hojas de Passiflora edulis
“maracuyá” procedentes del sector de Chumpón, Paiján, en función a la longitud de
onda de 290-320 nm
nm) M1 M2 M3 M4 M5
290 1,5739 1,5941 1,5825 1,578 1,5868
295 1,4924 1,5104 1,4947 1,4976 1,5045
300 1,4405 1,4599 1,4435 1,4468 1,4543
305 1,4274 1,4426 1,4311 1,4325 1,4391
310 1,4511 1,4665 1,4538 1,4546 1,4621
315 1,5028 1,5211 1,5073 1,5101 1,5164
320 1,5633 1,583 1,5638 1,568 1,5748
Tabla 5. Factor de Protección solar del extracto hidroalcohólico de hojas de Passiflora
edulis “maracuyá” procedentes del sector de Chumpón, Paiján
MUESTRAS FPS
M1 14,52
M2 14,69
M3 14,55
M4 14,58
M5 14,65
14,598 ± 0,0705
CV 0,4829
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IV. DISCUSIÓN
La radiación solar es la principal fuente de energía del planeta. Diferentes
bandas espectrales de radiación solar son responsables de desencadenar varios procesos
físicos y biológicos. La banda B está relacionada con la mayoría de los procesos
fotoquímicos que ocurren en la atmósfera de la tierra. En Perú no hay como escapar de
la situación global de cambios en las condiciones ambientales que favorecen un mayor
impacto negativo de la radiación solar, por tanto es importante abordar el conocimiento
adecuado de la fotoprotección solar 26, 27.
Las plantas poseen distintos mecanismos de adaptación a radiación UV-B, los
cambios morfológicos que involucran la reducción del crecimiento son, sin lugar a
duda, la respuesta más observada para la disminución de la absorción de luz UV. El
Perú posee una gran variedad de plantas y con el propósito de contribuir con la
sociedad, la presente investigación aporta una posible alternativa que refuerza a las
formulaciones fotoprotectoras actuales, para ello se realiza el análisis del efecto
fotoprotector del extracto hidroalcohólico de hojas Passiflora edulis “maracuyá”
procedentes de la ciudad de Paiján28.
Para la obtención del extracto hidroalcohólico de hojas de Passiflora edulis
“maracuyá”, se empleó el método de percolación. Para realizar el control de calidad del
extracto se analizó las características organolépticas del extracto durante 7 días que
pueden ser observadas en la tabla 1, en la que las muestras analizadas mantienen sus
características durante el periodo de evaluación como el color verde oscuro, olor
suigeneris, sensación ligeramente fluida y homogénea al tacto; según Cazorla (2013)
definió que Passiflora edulis posee un olor herbal característico de la planta, color
verde oscuro y sensación medianamente fluida, por tanto hay una similitud con los
resultados en obtenidos en esta investigación; en cuanto a las características físico-
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químicas del extracto (tabla 2); el pH fue de 5,76 que representa un pH ácido lo que
estaría indicando una condición favorable para su uso, debido a que el pH de la piel se
encuentra entre 5,5-5,9 y la densidad fue de 0,962 g/mL, según Cazorla (2013) quien
evaluó la actividad fotoprotectora de la maracuyá (Passiflora edulis), ishpingo (Ocotea
quixos) en fototipos III (Homo sapiens) para la elaboración de un protector solar,
obtuvo un valor de pH 5,13 y una densidad de 0,964 resultados similares a los
obtenidos en esta investigación utilizando el mismo procedimiento29.
En la Tabla 3 se muestran los resultados de la marcha fitoquímica del extracto
de hojas de Passiflora edulis de Paiján, en la cual, cualitativamente, se observa la
presencia de triterpenos, quinonas, polifenoles, flavonoides, proteínas y aminoácidos,
saponinas y alcaloides. Entre los fitoconstituyentes encontrados en el extracto de hojas
de Passiflora edulis, el efecto protector se sustenta que se debe a los polifenoles y los
flavonoides en mayor proporción, ya que se obtuvo resultados similares según
Santamaría (2016) que realizó su trabajo con Passiflora manicata (Juss.) Pers encontró
en su Screening Fitoquímico la presencia de flavonoides y fenoles en altas
concentraciones al realizar su cuantificación obteniendo resultados de 14,21 ± 0,19
mgEAG/g de extracto para fenoles y 11,96 ± 0,07 mgEQ/g de extracto para
flavonoides, además el extracto contenía terpenos, saponinas, compuestos nitrogenados,
taninos y azucares reductores30.
Los triterpenos, como los encontrados en el extracto del presente trabajo, poseen
propiedades fotoprotectoras, evidenciándose en el trabajo realizado por Diaz MC y col.
(2016) quienes separaron e identificaron compuestos como los ácidos oleanólico y
ursólico, en Corema album (L.) D.Don y determinaron que los frutos de esta planta
mostraron una elevada reflectancia UV. Por lo que concluyeron en que los ácidos
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ursólico y oleanólico pueden desempeñar un papel fotoprotector en las bayas de
Corema album31.
En el extracto hidroalcohólico también se observó la presencia de polifenoles,
de la misma forma la síntesis realizada por Nichols y Katiyar (2010) reporta
propiedades fotoprotectoras, al mencionar que la mayoría de ellos al ser pigmentos
naturales, típicamente amarillos, rojos o morados, pueden absorber radiación UV. Por
lo tanto, cuando se aplican tópicamente, pueden prevenir la penetración de la radiación
en la piel, lo cual incluye todo el espectro UVB y parte de los espectros UVC y UVA.
Así los polifenoles pueden actuar como un filtro solar. Esta capacidad de los
polifenoles naturales para actuar como filtros solares puede reducir la inflamación, el
estrés oxidativo y los efectos dañinos del ADN de la radiación UV en la piel32.
En un estudio realizado por Elmets C y col. (2007) se comprobó que los
componentes polifenólicos del té verde protegen contra muchos de los efectos dañinos
de la radiación UV. En ratones, se encontró que tanto la administración sistémica como
la tópica de polifenoles del té verde protegen contra la respuesta de quemadura solar
inducida por UV, la inmunosupresión inducida por UV y el fotoenvejecimiento de la
piel. Se observaron resultados similares con respecto a las quemaduras solares en la piel
humana que se había tratado previamente con un extracto crudo de té verde. Estos
estudios evidencian el papel en la fotoprotección de los polifenoles, sustancias
presentes en el extracto hidroalcohólico de Passiflora edulis33.
En la marcha fitoquímica además se evidenció la presencia de flavonoides, los
cuales según un estudio de Costa S y col. (2015) en el cual el extracto etanólico de M.
taxifolia muestra tener una buena capacidad antioxidante y actividad fotoprotectora
frente a la radiación UV-B y UV-A. Estos efectos los atribuyeron a los derivados de
flavonoides presentes en la planta incluyendo quercetina. Al desarrollar protectores
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solares con este extracto y evaluar el FPS, encontraron que las formulaciones que
contienen el extracto etanólico de M. taxifolia mostró valores de FPS cerca de un filtro
químico usado frecuentemente en la industria farmacéutica, la benzofenona-3,
encontrándose en un rango de entre 30 y 5034.
En otro estudio realizado por Zhou R y col (2016) en el cual evaluó la
producción de un glucósido de flavona, escutellarina, ingrediente activo principal
extraído de Erigeron breviscapus, se realizó dos ensayos; uno bajo sombra y otro
expuesto a la luz solar. Después de los 50 días, en las hojas desarrolladas por el sol se
encontró un contenido de escutellarina de aproximadamente 138.5 ± 5.2 mg g- 1 (masa
seca, DM) que fue significativamente más alta que la de las hojas desarrolladas a la
sombra [107.8 ± 9.8 mg g - 1(DM)]. Estos estudios demuestran el efecto fotoprotector
de los flavonoides, encontrados también en la presente investigación35.
Acerca de la acción fotoprotectora de las proteínas y aminoácidos, quinonas,
saponinas y alcaloides no se encontró evidencia científica en plantas.
La Tabla 4 muestra las absorbancias de las 5 muestras del extracto de hojas de
Passiflora edulis, de Paiján; con estos datos, se calculó el factor de protección solar de
cada muestra (tabla 5) por el método de Sayre y Mansur; Estos valores se aceptan con
un nivel de confianza del 95% que se calculó en base a la desviación estándar y
coeficiente de variación. Y según Murillo (2017) quien determino la actividad
fotoprotectora in vitro de Passiflora mixta, a través del factor de protección solar (FPS)
del extracto de P. mixta calculado a una concentración 20 ppm, luego de aplicar la
ecuación de Mansur y el método espectrofotométrico para el registro de absorbancias
obtuvo un valor de 7.00 ± 0.08 a una baja concentración. Los resultados indicaron que
los extractos a 2000 ppm y 200 ppm de P. mixta tienen mayor actividad fotoprotectora
en comparación con los controles positivos octil dimetil PABA y 2-etilhexil 4-
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metoxicinamato (OMC) a la misma concentración. Este resultado es menor al obtenido
en el presente trabajo a pesar de que pertenecen a la misma familia, debido a que su
metodología fue diferente al liofilizar el extracto36.
En esta tabla 5 se muestra el valor del Factor de Protección Solar promedio
obtenido, que fue de 14.598 con una desviación estándar de 0,0705; y un coeficiente de
variación de 0,4829 del extracto de hoja de Passiflora edulis de Paiján, lo que permite
su clasificación en el nivel alto según COLIPA, el cuadro 2 de referencia.
El factor de protección solar encontrado en el extracto hidroalcohólico de hojas
de Passiflora edulis “maracuyá” fue superior al encontrado por Alayo y Fiestas (2016)
quienes determinaron el factor de protección solar del extracto hidroalcohólico de hojas
de Piper aduncun “matico” que fue de 9,32 quienes también utilizaron el método de la
determinación del FPS in vitro mediante la ecuación formulada por Mansur37.
Los valores de FPS encontrados por Buenaño (2014) quien realizó un estudio de
la actividad fotoprotectora in vitro de extractos de Alnus acuminata “aliso” fueron
inferiores al de Passiflora edulis “maracuyá” ya que su FPS fue 13.27. De la misma
forma ocurrió con Barrera (2017) que determinó la actividad fotoprotectora in vitro de
Zea mays, en donde el extracto de las hojas de Zea mays de concentración 20 ppm
presentó un FPS de 6.8. Estos trabajos obtuvieron resultados menores al presente
trabajo y utilizaron el método para la determinación de FPS in vitro mediante la
ecuación de Mansur, pero además sus resultados fueron corroborados con el método
por muerte celular inducida en Escherichia coli tomando en cuenta las colonias
sobrevivientes después de que se las sometieron a radiación UV 38, 39.
En cuanto a estudios en la familia Passiflora, según Malca y Matara (2017)
quienes trabajaron con Passiflora quadrangularis L. “tumbo” utilizando también el
método de determinación de FPS in vitro con la ecuación propuesta por Mansur, tuvo
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un efecto fotoprotector muy alto con un FPS 30,45 y en el estudio realizado por
Santamaría (2016) quien trabajó con Passiflora manicata (Juss.) Pers en subextractos
hexánico, cloroformico, con acetato de etilo y etanólico, obteniendo un valor de FPS de
23,76 que fue el mayor en el extracto etanólico, este resultado fue replicado con el
método de muerte celular inducida en Escherichia coli. Por lo que si bien Passiflora
edulis muestra un FPS más bajo que las demás especies mencionadas, aún puede ser de
utilidad para la formulación de productos cosméticos fotoprotectores 30, 40.
Además, según Cazorla (2013) en su trabajo con Passiflora edulis encontró que
la crema protectora que contenía extracto de hojas de esta planta obtuvo un FPS de 4, lo
cual es bajo según la tabla COLIPA. Al comparar este resultado con el FPS obtenido en
el presente trabajo, que fue de 14,598, se observa que el resultado es mayor
posiblemente por la diferencia en el método, ya que en su estudio se evalúo la
fotoprotección del producto cosmético final mediante la técnica del método COLIPA el
cual consiste en evaluar el tiempo de aparición del eritema con el test colorimétrico en
las zonas donde se coloca la crema en evaluación después de exponerse a la radiación
UV, según sus resultados en la superficie experimental “blanco” y “placebo” que
consistían en una zona sin usar crema y una zona usando crema sin extractos,
respectivamente, se produjo el eritema a los 15 minutos de iniciado el experimento; en
cambio en la superficie experimental en la que se utilizó la crema con extracto de
Passiflora edulis la aparición del eritema fue en 60 minutos, por lo que se calcula un
FPS de 4 que resulta bajo según COLIPA29.
En base a los fototipos predominantes en el Perú y a los resultados obtenidos
en este estudio que confirmaron que el extracto de hojas de Passiflora edulis de Paiján
tiene acción fotorresistente, nos lleva a pensar que estamos ante una futura solución a
uno de los problemas que aflige a la sociedad, que es causada por radiación UVB, por
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eso, si Passiflora edulis se incluye en una formulación cosmética para potenciar el
efecto fotoprotector proporcionaría una mayor protección para la piel, y siendo un
producto natural, reduciría el costo en el mercado, lo que sería de gran apoyo para la
sociedad.
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V. CONCLUSIÓN
1. Se obtuvo el extracto hidroalcohólico de hojas de Passiflora edulis
“maracuyá” de calidad.
2. Se realizó la determinación de sus fitoconstituyentes encontrándose
triterpenos, esteroides, quinonas, flavonoides, proteínas, aminoácidos,
saponinas, alcaloides sustancias que tienen relación con la actividad
fotoprotectora.
3. En el control de calidad del extracto hidroalcohólico de hojas de Passiflora
edulis “maracuyá” se evaluaron las características organolépticas: color, olor,
sensación al tacto y homogeneidad, permaneciendo constantes en el tiempo;
además se evaluó sus características fisicoquímicas obteniendo un pH de 5,76
y una densidad de 0,962 g/mL.
4. El extracto hidroalcohólico de hojas de Passiflora edulis “maracuyá” presentó
un efecto fotoprotector alto FPS de 14,598 según COLIPA.
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VI. RECOMENDACIONES
El extracto hidroalcohólico obtenido de las hojas de Passiflora edulis “maracuyá”
recolectadas del sector Chumpón, Distrito de Paiján, Provincia de Ascope,
Departamento de La Libertad, por tener un factor de protección de 14,598 y clasificarse
dentro del grupo de factor de protección solar alto, se convierte en una opción que
puede incorporarse en una formulación cosmética fotoprotectora por lo cual se
recomienda continuar con los estudios de dicha especie, como es la evaluación de la
genotoxicidad del extracto para observar sus efectos en el material genético.
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ANEXOS
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ANEXO N° 1
Fig.1 Recolección, lavado y secado de las hojas de Passiflora edulis “maracuyá”
procedentes de Paiján.
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ANEXO N° 2
Fig.2 Identificación y depósito de en el Herbario Truxillense (HUT) de las hojas de
Passiflora edulis “maracuyá” procedentes de Paiján.
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ANEXO N°3
Fig. 3. Obtención de extracto hidroalcohólico de hojas de Passiflora edulis
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ANEXO N°4
Fig. 4. Identificación de metabolitos secundarios de hojas de Passiflora edulis (A:
Ensayo de gelatina, B: Ensayo de Shinoda, C: Ensayo de resinas, D: Ensayo de
Dragendorff, E: Ensayo de espuma, F: Ensayo de Catequinas, G: Ensayo de Bortranger,
H: Ensayo de Tricloruro férrico, I: Ensayo de Lieberman-Burchard, J: Ensayo de
Nihnhidrina, K: Ensayo de Fehling)
E
I
A B C D
E F G H
I KJ
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ANEXO N°5
Fig.5 Lectura de las absorbancias del extracto hidroalcohólico de hojas de Passiflora
edulis “maracuyá” procedentes de Paiján.
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ANEXO N°6
Cuadro 3. Cálculo del Factor de Protección Solar del extracto de hojas de Pasiflora edulis
EXTRACTO HIDROALCOHÓLICO (70°) DE Passiflora edulis 0.195 ML PROMEDIO EE x II x AA
ABSORBANCIAS M1 M2 M3 M4 M5
Abs<290nm> 1,5739 1,5941 1,5825 1,578 1,5868 1,58306 0,0237459
Abs<295nm> 1,4924 1,5104 1,4947 1,4976 1,5045 1,49992 0,12254346
Abs<300nm> 1,4405 1,4599 1,4435 1,4468 1,4543 1,449 0,4164426
Abs<305nm> 1,4274 1,4426 1,4311 1,4325 1,4391 1,43454 0,47024221
Abs<310nm> 1,4511 1,4665 1,4538 1,4546 1,4621 1,45762 0,27170037
Abs<315nm> 1,5028 1,5211 1,5073 1,5101 1,5164 1,51154 0,12681821
Abs<320nm> 1,5633 1,583 1,5638 1,568 1,5748 1,57058 0,02827044
FACTOR DE PROTECCIÓN SOLAR (FC x EE x II x AA) 14,598
Datos de Fórmula
Longitud EE x II
290 0,015
295 0,0817
300 0,2874
305 0,3278
310 0,1864
315 0,0839
320 0,018
Fig.6 Absorbancias del extracto hidroalcohólico de hojas de Passiflora edulis
“maracuyá” procedentes del sector de Chumpon, Paiján, en función a la longitud de
onda de 290-320 nm.
Factor de correlación (FC) 10
𝑭𝑷𝑺 𝑬𝒔𝒑𝒆𝒄𝒕𝒓𝒐𝒇𝒐𝒕𝒐𝒎𝒆𝒕𝒓𝒊𝒄𝒐
= 𝑭𝑪 𝒙∑(𝑬𝑬 (𝝀)𝒙 𝑰𝑰 (𝝀)𝒙 𝑨(𝝀))
𝟑𝟐𝟎
𝟐𝟗𝟎
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