The KRAS proto-onkogen kode untuk guanosin kecil trifosfat (GTP) binding protein yang terlibat dalam transmisi reseptor faktor pertumbuhan epidermal (EGFR) sinyal induksike sitoplasma dan nucleus.1 Onkogenik mutasi gen KRAS ditemukan pada 30-40% dari karsinoma kolorektal. 1,2 Sampai dengan 90% dari mutasi terjadi pada kodon 12 atau 13, yang mempengaruhi domain G-protein pengikatan protein terkemuka untuk aktivasi konstitutif intrinsiknya GTPase activity.

1 Identifikasi KRAS mutasi baru-baru ini mendapatkan daya tarik tinggi karena demonstrasi yang dalam beberapa tahap II dan uji klinis III, hanya pasien dengan metastasis kolorektal kanker dengan KRAS liar-ketik tumor mereka manfaat dari terapi antibodi berbasis terhadap reseptor EGFR, seperticetuximab atau panitumumab.3-7 Menurut hasil tersebut,European Medicines Agency (www.emea.europa.eu/) telah membatasi penggunaan cetuximab dan panitumumab kepada pasien dengan kanker kolorektal metastasis dengan KRAS wild typegen pada tumor mereka. Selain itu, American Society of Clinical Oncology klinis sementara pendapat baru-baru ini menyatakan, bahwa mutasi KRAS analisis tumor dari pasien yangkandidat untuk pengobatan antibodi anti-EGFR harus dilakukan dan hanya pasien dengan jenis liar harus KRAS menerima antibodi anti-EGFR therapy.

8Metode mutasi yang berbeda deteksi saat ini KRAS digunakan, dan sampai saat ini belum ada tes standar. Langsung sequencing memungkinkan deteksi dari semua mutasi dan dianggapsebagai standar emas untuk deteksi mutasi. Sejumlah teknik tambahan yang tersedia, yang telah dikembangkan didasarkan pada kenyataan bahwa jumlah mutasi KRAS adalahdiscrete.1, 9 Dalam serangkaian berturut-turut 111 spesimen, terdiri dari 75 karsinoma kolorektal primer dan 36 metastasis dianalisis Pengaturan diagnostik untuk mutasi KRAS pada tahun 2008 kami telah mengidentifikasi mutasi di 38 (34%) tumor oleh sequencing langsung ekson 2, meliputi kodon yang paling sering berubah 12 dan 13 gen KRAS. Dua puluh tiga (30%) mutasiditemukan pada tumor primer dan 15 (42%) pada metastasis. Dalam satu primer tumor dan dalam 3 metastasis (1 di paru-paru, 1 dihati dan 1 dalam kekambuhan lokal), kami mengidentifikasi mutasi ganda. Dua ganda ditemukan mutasi pada kodon 12 dan 2 ganda mutasi pada kodon 13, masing-masing hadir dalam heterozigot ini negara. Untuk menentukan apakah mutasi ganda adalah terletak di 1 alel yang mengarah ke pertukaran yang tidak biasa asam amino atau di kedua alel yang berbeda, kami subcloned produk PCR dari 4 sampel. Analisis sekuensing dari subclones 5-10 mengungkapkan urutan jenis liar di setiap sampel dan menunjukkan bahwa semua 4 mutasi ganda mempengaruhi 1 kodon pada 1 alel. Selain itu dalam 1subclone berasal dari metastasis paru dengan ganda mutasi pada kodon 13, mutasi tiga monoallelic termasukmutasi nukleotida jenis terakhir liar pada kodon ini diidentifikasi. Mutasi diringkas dalam Tabel I. Dalam kedua metastasis dimana primary yang sesuai yang tersedia, kami mendeteksi mutasi ganda identik dalam tumor primer jaringan. Terjadinya lebih dari 1 mutasi pada kodon 12 atau 13 kadang-kadang telah dilaporkan dalam literatur, tetapi monoor yang biallelic sifat mutasi ini jarang telah ditetapkan. 2,7,10-15 Mutasi data gen KRAS diperoleh dari Sanger Institute Katalog Mutasi somatik di Kanker (Http://www.sanger.ac.uk/cosmic) 16 meliputi substitusi G13E,15 yang kami juga diidentifikasi pada 1 pasien, meskipun zygosity yangdiindikasikan sebagai tidak diketahui. 4 lainnya substitusi asam aminopada kodon 12 dan 13, G12I, G12W, G13K dan G13F, telah tidak dilaporkan dalam database, yang saat ini terdiri dari lebih dari 12.200 KRAS mutasi dari berbagai tumor sehingga harus dianggap sebagai mutasi onkogenik novel. Kami percaya bahwa hasil kami penting dalam aspek

terkait dengan biologi tumor serta assay pertimbangan untukKRAS pengujian dalam pengaturan diagnostik.

1. Telah ditunjukkan bahwa mutasi tertentu KRAS berbeda dalam biologis mereka efek in vivo dan in vitro.2 ,17-20 Perbedaan dalam kegiatan GTPase telah dibuktikan untuk mutan spesifik dan telah menyarankan bahwa ada modifikasi juga berkaitan dengan interaksi dengan hilirsinyal molekul sebagai Raf-1 atau phosphatidylinositol 3-hydroxy-kinase.18 Asam amino yang dijelaskan sini, yang menggantikan glisin wild type relatif besar dan dapat menambahkan aspek baru ke mekanistik KRAS onkogenik kompleksitas fungsi.

2. Onkogenik aktivasi KRAS dianggap menjadi langkah awal dalam-adenoma karsinoma-urutan dari kolorektal karsinoma perkembangan dan penting untuk tumor development.21 pengamatan kami bahwa mutasi ganda yang kami pertama kali diidentifikasi di metastasis sudah hadir dalam 2 tumor primer, sejalan dengan ini. Di sisi lain, mutasi ganda monoallelic per se dan ditemukannya mutasi triple dalam 1 subclone dari metastasis paru berpendapat untuk seleksi yang sedang berlangsung proses yang berkaitan dengan mutasi KRAS dan mendukung pandangan bahwa aktivasi KRAS onkogenik juga penting untuk perkembangan tumor, sebagaimana telah disarankan oleh others.22, 23

3. Dari sudut pandang diagnostik, hasil penelitian kami mungkin relevansi tertentu. Saat ini tes yang berbeda digunakan untuk deteksi mutasi KRAS. Terjadinya beberapa mutasi monoallelic dapat mempengaruhi hasil atau interpretasi teknik deteksi mutasi berdasarkan Polimorfisme panjang fragmen restriksi (RFLP), teknik berdasarkan analisis kurva leleh, teknik berdasarkanpada hibridisasi mutasi probe khusus, atau teknik menggunakan sistem mutasi amplifikasi tahan api (ARMS), yang memungkinkan hanya amplifikasi mutan karena desain primer spesifik alel. Dalam seri kami Berturut-turut 111 sampel, beberapa mutasi terdiri 11% (4 / 38) dari mutasi terdeteksi dan berkirim surat ini untuk 4% (4 / 111) mutasi analisis hasil seri secara keseluruhan. Kami berpikir bahwa terjadinya monoallelic beberapa mutasi pada gen KRAS harusdipertimbangkan dalam interpretasi hasil dari pengujian saat ini digunakan juga untuk memilih dan mengembangkan metode baru diagnostik rutin untuk KRAS deteksi mutasi.

Hormat saya,Gisela Keller, Geist Birgit, Julia SLOTTA-HUSPENINA,Rupert Langer, Florian NAGL, Falko menangkis, Heinz H € oFLER, danAurel Perren